MDSCs诱导调节性T细胞改善CVB3诱导的病毒性心肌炎

目的探讨骨髓来源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)在CVB3诱导的病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)中的保护作用。方法通过流式细胞术分选获得足量MDSCs,体外证实具有免疫抑制功能后行体内转输实验,观察疗效及免疫机制。结果与对照PBS组相比,MDSCs处理组体质量呈上升趋势,肌酸激酶(CK)活性明显降低(P<0.001),心脏局部炎症浸润及坏死病灶显著减少,7天生存率高达70%(P<0.01),而心肌病毒滴度无明显改变,却上调了CD4+FoxP3+调节性T细胞比例。结论 MDSCs可显著改善CVB3诱导的病毒性心肌炎,有望成为心肌炎防治的新型策略和手段。

葛根素对CVB3病毒致心肌炎模型miRNA表达的影响

目的:研究葛根素对CVB3病毒所致小白鼠病毒性心肌炎模型中miRNA表达的影响。方法:选取昆明种小白鼠60只,随机分为空白对照组、葛根素低剂量组、葛根素中剂量组、葛根素高剂量组、阳性药物(黄芪注射液)对照组和模型对照组,每组10只。除空白对照组外,其余50只小白鼠腹腔注射CVB3标准病毒株建立小白鼠病毒性心肌炎模型。8d后,腹主动脉取血,测定血清中SOD酶活性和MDA含量。取心脏,沿冠状面纵切,前部分制组织匀浆,测定清液中SOD酶活性和MDA含量。后部分心房部分测定组织中CVB3 miRNA的表达;心室部分制作病理切片,观察结构。结果:葛根素三个剂量组对病毒性心肌炎模型血清和心肌组织匀浆中的SOD酶活性和MDA含量有不同程度的改善。同时,对CVB3 miRNA的表达都有一定的抑制作用。葛根素在影响模型血清中的SOD酶活性和MDA含量和CVB3 miRNA的表达过程中均呈现剂量依赖性,即高剂量组优于中剂量组优于低剂量组。结论:葛根素对CVB3所致小白鼠病毒性心肌炎模型中CVB3 miRNA的表达有较好的抑制作用。

心力衰竭合并cvb3感染病毒性心肌炎大鼠抗原特异性的自反应T细胞表达分析

目的 探究心力衰竭合并cvb3感染病毒性心肌炎大鼠抗原特异性的自反应T细胞表达特征。方法 研究对象选取A/J雄性大鼠合计30只,建立慢性心力衰竭模型后随机分为对照组及感染组,感染组使用CVB3菌株感染,比较两组大鼠心脏和胰腺病理学变化;获取大鼠淋巴细胞,使用IA k/IE k右旋聚体对细胞染色后进行流式细胞术检测,观察大鼠Myhc 334-352、ANT 21-40、BCKDk 111-130、SERCA2a 971-990和β1 AR 181-200/211-230特异性抗原T细胞表达。结果 感染组大鼠胰腺及心脏组织表现出心房炎症浸润,心肌浸润伴坏死和矿化,胰腺炎症浸润、萎缩和坏死/矿化,呈现炎症损伤;感染组淋巴结淋巴细胞Myhc 334-352、SERCA2a 971-990抗原特异性的自反应T细胞表达高于对照组(P<0.05),两组ANT 21-40、BCKDk 111-130、β1 AR 181-200/211-230抗原特异性的自反应T细胞表达差异无统计学意义(P>0.05);感染组肝脏淋巴细胞Myhc 334-352、SERCA2a 971-990、ANT 21-40抗原特异性的自反应T细胞表达高于对照组(P<0.05),两组BCKDk 111-130、β1 AR 181-200/211-230抗原特异性的自反应T细胞表达差异无统计学意义(P>0.05);感染组心脏淋巴细胞Myhc 334-352、SERCA2a 971-990抗原特异性的自反应T细胞表达高于对照组(P<0.05),两组ANT 21-40、BCKDk 111-130、β1 AR 181-200/211-230抗原特异性的自反应T细胞表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 心力衰竭合并cvb3感染病毒性心肌炎大鼠表现出心脏及胰腺炎性损伤,CVB3感染可能导致具有多种抗原特异性的致病性自身反应性T细胞的产生,其中以Myhc 334-352、SERCA2a 971-990为主,T细胞可能是CVB3感染中心脏自身免疫的主要介质。

黄芪甲甙对小鼠柯萨奇B3病毒性心肌炎的抗氧化作用

目的观察黄芪甲甙对小鼠柯萨奇B3病毒性心肌炎的抗氧化作用。方法Balb/c小鼠50只随机分5组(每组10只),空白对照组腹腔无菌注射不含病毒的Eagle’s培养基0.1 mL,在腹腔注射病毒培养基30 min后,以生理盐水0.1 mL灌胃,共7d;病毒性心肌炎对照组小鼠每只腹腔注射0.1 mL内含1×102TCID50柯萨奇B3病毒的Eagle’s培养基,在腹腔注射含病毒的Eagle’s培养基30 min后,以生理盐水0.1 mL灌胃,共7 d;黄芪甲甙低、中、高剂量干预组在腹腔注射病毒30 min后,用黄芪甲甙剂量分别为0.07、0.2、0.6 g/(kg.d)0.1 mL灌胃,共7 d。观察小鼠生存数;心肌病变积分;心肌谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶活力及逆转录聚合酶链反应检测铜锌超氧化物歧化酶-mRNA水平表达。结果(1)与空白对照组比较,病毒性心肌炎对照组小鼠的生存数明显下降,心肌病变积分明显升高(3.23±0.83,P<0.01);与病毒性心肌炎对照组比较,黄芪甲甙高剂量干预组可明显提高小鼠的生存数(P<0.01),心肌病变积分明显下降(1.86±0.59比3.23±0.83,P<0.01);(2)与病毒性心肌炎对照组比较,黄芪甲甙高剂量干预组心肌组织谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶活力呈增高趋势,心肌组织谷胱甘肽过氧化物酶(39.73±8.02比9.99±2.71,P<0.05)、过氧化氢酶(6.35±2.33比1.36±0.87,P<0.05)、超氧化物歧化酶(65.71±4.93比40.15±6.03,P<0.01)活力明显增强,铜—锌超氧化物歧化酶-mRNA水平表达明显增高(0.43±0.11比0.32±0.01,P<0.01)。但黄芪甲甙低、中剂量干预组,虽然也在一定程度使心肌组织谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶活力及逆转录聚合酶链反应检测铜—锌超氧化物歧化酶-mRNA表达水平增加,有一定的量效关系,但与病毒性心肌炎对照组比较无统计学意义(P>0.05)。结论黄芪甲甙通过增加心肌抗氧化酶活力,对小鼠柯萨奇B3病毒性心肌炎具有明显的保护作用。

桂皮醛对小鼠柯萨奇病毒诱发病毒性心肌炎的作用(英文)

已知Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)及其下游信号组分在柯萨奇病毒(CoxsackievirusB,CVB)诱发的病毒性心肌炎中扮演重要的角色,其在治疗中的作用仍不明确。桂皮醛具有抗病毒以及成剂量依赖性抑制由TLR4诱导的核因子活性的作用,而其对病毒性心肌炎的作用机制尚不明确。我们的实验结果显示:在体外,桂皮醛对正常心肌细胞的IC50为15μM;100-1000μM桂皮醛能显著抑制心肌细胞中的病毒滴度(P<0.01),而细胞存活率与CVB组无统计学差异(P>0.01)。而在病毒性心肌炎小鼠体内,与模型组比较,20和40mg/kg桂皮醛i.p.使第7 d血清中NO的含量以及心肌中诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS),肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF-α),核因子κB P65(nuclear factor-κB P65,NF-κB P65)和TLR4蛋白质表达显著降低(P<0.05)。降低第21 d心脏体重比(Heat Weight/Body Weight,Hw/Bw)比值,提高小鼠生存率,减轻病理损伤的作用。这些结果显示桂皮醛虽在体外无抗病毒活性,但其在体内具有降低病毒滴度和抑制TLR-4-NF-κB信号传导的作用,对病毒性心肌炎小鼠具有治疗作用。桂皮醛可能通过对TLR-4-NF-κB信号传导抑制作用,作为一种新的方法治疗病毒性心肌炎。

小鼠柯萨奇B3病毒性心肌炎心脏炎症细胞因子基因和蛋白表达及黄芪甲甙干预研究

目的探讨黄芪甲甙对小鼠柯萨奇B3病毒性心肌炎心脏炎症细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6和白细胞介素10mRNA表达和蛋白质产生的影响。方法Balb/c小鼠50只随机分为5组,空白对照组,腹腔无菌注射不含病毒的Eagle’s培养基0.1mL,在腹腔注射病毒培养基30min后,以生理盐水0.1mL灌胃,共7d;病毒性心肌炎对照组,小鼠每只腹腔注射0.1mL内含1×105TCID50柯萨奇B3病毒的Eagle’s培养基,在腹腔注射含病毒的Eagle’s培养基30min后,以生理盐水0.1mL灌胃,共7d;黄芪甲甙低、中、高剂量干预组,在腹腔注射病毒30min后,用黄芪甲甙剂量分别为0.07、0.2和0.6mg/(kg·d)0.1mL灌胃,共7d。14d后处死全部小鼠并取其心脏。心脏组织一半用于逆转录聚合酶链反应法测定心脏细胞因子mRNA表达,另一半用Westernblot测定细胞因子蛋白质生成量。结果空白对照组上述细胞因子均无明显表达,心肌炎对照组肿瘤坏死因子α,白细胞介素1β,白细胞介素6和白细胞介素10mRNA和蛋白产生均显著高于空白对照组;同心肌炎对照组比较,高剂量黄芪甲甙组的肿瘤坏死因子α,白细胞介素1β,白细胞介素6mRNA和蛋白生成均显著下降,而白细胞介素10mRNA和蛋白明显升高。结论黄芪甲甙明显降低小鼠柯萨奇B3病毒性心肌炎心脏的致炎症细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6,而升高炎症保护因子白细胞介素10。

苏木乙酸乙酯提取物对急性病毒性心肌炎小鼠模型心肌组织IFN-γ的影响

目的:通过观察苏木乙酸乙酯提取物对急性病毒性心肌炎小鼠模型心肌组织中干扰素-γ(Interferon gamma,IFN-γ)水平及其心肌组织病理形态学改变的影响,探讨苏木对病毒性心肌炎的治疗机制。方法:选用清洁级、4周龄近交系纯种健康雄性Balb/c小鼠50只,随机分为3组,苏木乙酸乙酯提取物组20只,模型对照组20只,空白对照组10只,苏木乙酸乙酯提取物组、模型对照组小鼠给予腹腔注射接种半数组织培养感染剂量为10-7/m L的柯萨奇病毒B3(CVB3)Nancy株病毒稀释液0.3 m L。空白对照组小鼠注射同体积的RM1640溶液;接种病毒0.5 h后,苏木乙酸乙酯提取物组小鼠给药苏木乙酸乙酯提取物溶液0.2 m L;模型对照组及空白对照组按体质量计算等容量0.2%羧甲基纤维素钠溶液给药,每日1次,连续给药14 d后,小鼠断颈处死并取出心脏,常规石蜡包埋,采用免疫组化法测定小鼠心肌组织IFN-γ的含量,光镜下观察心肌病理形态学改变。结果:与模型对照组比较,苏木乙酸乙酯提取物组小鼠心肌组织IFN-γ的表达水平明显降低(P<0.05)。结论:苏木乙酸乙酯提取物能够显著降低CVB3感染小鼠心肌组织中IFN-γ表达水平,从而发挥治疗病毒性心肌炎的作用。

人源抗菌肽LL-37对柯萨奇B3病毒诱导的病毒性心肌炎小鼠病毒复制及炎症反应的影响

目的探讨人源抗菌肽LL-37对病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)小鼠病毒复制和炎症反应的影响及其可能的分子机制。方法将48只BALB/c小鼠随机分成4组:正常对照组(Blank)、模型组(VMC)、LL-37低剂量组(LL-37-L)和LL-37高剂量组(LL-37-H),每组12只。除Blank组外,其他组均采用腹腔注射柯萨奇B3病毒(Coxsackie virus B3,CVB3)病毒液构建VMC模型小鼠。于抗菌肽LL-37干预第7天后将小鼠处死并取材。采用苏木素伊红染色观察心肌组织病理学变化;全自动生化仪检测血清心肌损伤标志物心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌红蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)浓度;50%终点法测定心肌组织CVB3病毒滴度;实时定量聚合酶链反应法检测心肌组织中CVB3 RNA表达水平;酶联免疫吸附试验法检测心肌组织炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)浓度;Western blot法检测心肌组织TLR-4、MyD88和p-NF-κB p65蛋白表达水平。结果与Blank组比较,VMC组小鼠心肌组织出现明显炎性损伤,且心肌病理积分显著增加[(3.18±0.33)分vs(0.00±0.00)分,P<0.05];血清中心肌肌钙蛋白I、肌酸激酶同工酶和肌红蛋白浓度显著上升;心肌组织中CVB3病毒滴度,CVB3 RNA及IL-1β、IL-6和TNF-α浓度,以及心肌组织中TLR-4、MyD88和p-NF-κB p65等蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。与VMC组比较,LL-37-H组小鼠心肌病理积分显著降低[(1.56±0.27)分vs(3.18±0.33)分,P<0.05],并且以上各检测指标均明显降低(P<0.05),而LL-37-L组小鼠以上各指标均无显著性变化(P>0.05)。结论人源抗菌肽LL-37可抑制VMC小鼠心肌组织中CVB3病毒复制和炎症反应,改善心肌损伤,其机制可能与TLR-4/NF-κB通路的抑制有关。

苦瓜蛋白对柯萨奇3型病毒感染大鼠心肌细胞的保护作用

目的在病毒性心肌炎心肌细胞模型上观察苦瓜蛋白对柯萨奇3型病毒(CVB3)感染SD大鼠心肌细胞的保护作用及其机制。方法体外原代培养SD大鼠心肌细胞,以CVB3感染培养大鼠心肌细胞,复制病毒性心肌炎心肌细胞模型,分别测定心肌细胞搏动百分比(PBC)、半数有效率(ED)、细胞病变(CPE)、心肌酶谱、半感染致死量(TC ID50),分析其对心肌细胞的保护作用。结果苦瓜蛋白的ED值为0.045 mg/mL,80、40、20、10μg/mL苦瓜蛋白可显著提高心肌细胞PBC、降低病毒的复制,80、40μg/mL苦瓜蛋白可减少CPE,降低心肌酶水平。结论苦瓜蛋白对感染CVB3的心肌细胞有较强的保护作用。

柯萨奇病毒心肌病动物模型研究

目的研究反复增量柯萨奇病毒B3m(CVB3m)感染对小鼠心肌的影响,建立病毒性心肌病动物模型。方法 80只3～4周龄雄性Balb/c小鼠,随机分为心肌病组、单次感染组和正常对照组,于首次感染病毒后第120 d处死小鼠,应用阻抗微分法测定心输出量,病理及组织化学技术分析心肌病理损伤和胶原系统改变,计算胶原容积分数。结果心肌病组小鼠死亡率增高,心脏重量增加,心功能下降,心肌胶原容积分数高于单次感染组和对照组(P<0.05),病理学特征为基质胶原明显增生重建。结论反复增量病毒感染产生了明显的心室重构,符合心肌病特点,可做为病毒性心肌病动物模型进一步研究。

虎杖苷单体对急性病毒性心肌炎的影响

目的探讨虎杖苷(PD)对柯萨奇病毒B3(CVB3)感染小鼠心肌微血管密度(MVD)的影响及对心肌的保护作用。方法120只Balb/c雄性小鼠随机分为4组:正常对照组、CVB3感染组、CVB3感染加PD治疗组和PD对照组,分别在实验的第3、7、10、14、21、30天处死动物,留取血清和心肌标本,PFU法测定心肌组织内感染性病毒颗粒,免疫组化检测心肌CD34表达,显微镜下计数心肌组织MVD。结果与正常对照组比较,感染组小鼠MVD计数增加(P<0.05);与感染组比较,PD治疗组小鼠心肌组织内病毒滴度明显低于感染组(P<0.05);MVD计数显著增高,死亡率显著降低(P<0.05)。结论PD可以明显减轻病毒性心肌炎时心肌病理损害,其保护作用可能与抗CVB3病毒和使心肌MVD增高有关。

CVB3诱导Th17/Treg失衡导致小鼠病毒性胰腺炎

目的构建CVB3诱导的小鼠胰腺炎模型,观察胰腺组织病理学损伤和浸润Th17/Treg细胞的占比变化。方法BALB/c小鼠腹腔注射CVB3构建急性病毒性胰腺炎模型,通过HE染色观察胰腺病理学改变;q-PCR检测胰腺组织病毒核酸载量和细胞因子(IFN-γ、IL-6和IL-17)mRNA的相对表达量;流式细胞术检测胰腺组织浸润细胞CD45+CD3+T细胞、CD4+和CD8+T细胞、Th17和Treg细胞占比。结果CVB3感染第3天胰腺组织病毒核酸载量为0.96±0.18,且随感染时间点推移而逐渐降低;与3dpi组相比,7dpi组胰腺组织病毒核酸载量有降低趋势(0.96±0.18 vs.0.62±0.14),但无统计学差异。胰腺组织炎症细胞浸润在7dpi后明显增加,损伤评分>2;浸润的Th17细胞(1.05±0.21 vs.22.13±5.79)和Treg细胞(3.11±0.78 vs.8.25±1.30)在CD4+T细胞中占比在感染后7天同时升高(P<0.05),且Th17/Treg比值也明显增高(P<0.01)。与对照组相比,CVB3感染第7天,胰腺组织IFN-γ(1.05±0.23 vs.672.6±47.67)、IL-6(1.00±0.38 vs.68.28±4.57)、IL-17(1.01±0.11 vs.54.15±7.94)的mRNA相对表达量明显升高(P<0.01)。结论CVB3诱导小鼠病毒性胰腺炎,胰腺组织浸润Th17/Treg及其相关细胞因子IL-6和IL-17上调,促进疾病进展。

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊对柯萨奇B_3病毒性心肌炎小鼠LDH、CK的影响

①目的探讨抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊(K-CoxB-JK复方)对实验性小鼠柯萨奇B3病毒(CVB3)性心肌炎的治疗作用。②方法采用雄性BALB/C小鼠腹腔注射CVB3,建立实验性小鼠病毒性心肌炎模型。将84只雄鼠随机分为正常对照组、模型组、病毒唑组、复方组,每组21只。模型组、病毒唑组和复方组小鼠腹腔接种CVB3稀释液半小时后即给药,正常对照组给予一定量生理盐水。将接种当天定为第1天,每日1次,连续给药18天,于第19天处死。观察小鼠精神状态,统计小鼠死亡率并检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)浓度。③结果复方组LDH、CK较模型组低,病毒唑组LDH、CK高于模型组、正常组。④结论 K-CoxB-JN复方对小鼠CVB3病毒性心肌炎的有治疗作用,且其治疗作用优于病毒唑。

牡荆素对CVB3诱导的病毒性心肌炎大鼠心肌损伤的保护作用及机制研究

目的:探究牡荆素(Vitexin)对大鼠心肌损伤的保护作用及机制。方法:选择Balb/c新生乳鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3(Coxsackie virus B3,CVB3)建立大鼠病毒性心肌炎模型,分别设置正常未感染组(对照组)、感染CVB3组(模型组)、CVB3+Vitexin (10 mg·kg^-1)组[简称Vitexin (10 mg·kg^-1)组]、CVB3+Vitexin (20 mg·kg^-1)组[简称Vitexin (20 mg·kg^-1)组]和CVB3+Vitexin (50 mg·kg^-1)组[简称Vitexin (50 mg·kg-1)组],连续腹腔注射给药1周。HE染色观察心肌细胞损伤水平, TUNEL染色检测肿瘤细胞凋亡。免疫组织化学法和酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测心肌炎标记分子和心肌损伤标记物。利用蛋白质免疫印迹(Western Blot)技术检测肿瘤凋亡及其下游靶基因等相关分子表达。结果:与对照组比较,模型组细胞受损严重,炎症因子、心肌损伤标志物及细胞凋亡因子显著升高(P<0.05), TGF-β1及TNF-α蛋白活性显著升高(P<0.05)。相较于模型组,Vitexin处理组心肌细胞形态正常,心肌纤维排列整齐;细胞凋亡显著减少;Vitexin处理组心肌炎症因子、心肌损伤标志物及细胞凋亡因子显著低于模型组(P<0.05)。TGF-β1及TNF-α蛋白活性显著降低(P<0.05);并且Vitexin高剂量优于低剂量组。结论:Vitexin可以减少细胞凋亡,降低炎症因子水平来保护心肌炎症细胞受到CVB3病毒诱导的损伤;Vitexin可能是通过抑制TGF-β1及TNF-α蛋白活性来发挥影响。

雷公藤多苷对CVB3诱导的小鼠病毒性心肌炎的作用研究

目的探讨雷公藤多苷对B组柯萨奇病毒3(Coxsackievirus B group 3,CVB3)诱导的病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)的治疗作用及相关机制。方法细胞学实验观察雷公藤多苷对CVB3感染HeLa细胞模型的影响;建立CVB3诱导的Balb/C小鼠VMC模型,根据雷公藤多苷灌胃给药剂量将小鼠随机分为4组[空白对照组、高剂量组(20 mg/kg)、中剂量组(10 mg/kg)、低剂量组(5 mg/kg)]。通过苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)检测不同剂量药物作用下,动物模型心肌组织的病变及免疫细胞浸润情况;利用酶联免疫试验检测不同药物剂量组外周血心肌酶表达水平,并利用流式细胞技术检测各组外周血中T细胞亚型的凋亡情况;利用实时定量PCR的方法检测不同剂量组心室肌组织内细胞因子的表达水平。结果成功构建Balb/C小鼠VMC模型,雷公藤多苷治疗显著缓解CVB3引起的小鼠心肌免疫浸润损伤。与对照组相比,低、中、高剂量雷公藤多苷显著增加VMC小鼠外周血CD4^(+)T淋巴凋亡比例,差异具有统计学意义[(12.26±1.92)%,(19.07±1.85)%,(20.92±3.30)%比(8.28±1.13)%,F值分别为19.06、148.64、78.46,Bonferroni校正P值均<0.05]。与对照组相比,高剂量雷公藤多苷对CD8^(+)T淋巴细胞凋亡比例也起到显著抑制作用[(16.65±2.30)%比(8.83±1.81)%,F=42.88,Bonferroni校正P<0.05],低、中剂量雷公藤多苷增加VMC小鼠外周血CD8^(+)T淋巴凋亡比例不明显(P>0.05)。中、高剂量药物组VMC小鼠脾脏淋巴细胞在ConA刺激下,淋巴细胞增殖率均低于对照组[(0.76±0.05),(0.75±0.04)比(0.87±0.07),F值分别为10.38、16.09,Bonferroni校正P值均<0.05]。此外,雷公藤多苷治疗在病毒感染第10天对VMC小鼠心肌组织肿瘤坏死因子a(tumor necrosis factor-a,TNF-a)、白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-12和IL-17等促炎因子表达产生抑制作用,20 mg/kg剂量雷公藤多苷组TNF-a、IL-6、IL-12、IL-17在VMC模型心室肌平均表达水平分别下降至对照组的20%、43%、27%、43%(t值分别为2.55、3.72、9.00、5.10,P值均<0.05)。结论雷公藤多苷对CVB3诱导的小鼠VMC心肌损伤具有一定的治疗保护作用;雷公藤多苷对VMC的治疗机制可能并不是抑制CVB3对宿主细胞的直接感染损伤,而是与改变机体免疫状态、抑制宿主T淋巴细胞介导的细胞免疫应答密切关联。

CVB3诱导的急性心肌炎C57BL/6小鼠模型转录组分析

研究柯萨奇病毒B3(CVB3)感染小鼠所引起的心肌组织转录组变化规律。C57BL/6小鼠腹腔接种浓度为104TCID50的CVB3,建立C57BL/6急性病毒性心肌炎小鼠模型,逐日测量体重。接种第3、6、9、11和14d分别取心脏,计算心脏指数,并取部分心肌组织进行HE染色分析病理学改变;病毒接种后的第3、第6和第9d,取部分组织匀浆进行转录组测序,分析三个时间点的共同差异表达基因,对其进行GO和KEGG信号通路的富集,并对其中12个基因进行了qRT-PCR的验证。在CVB3感染后,小鼠体重下降至对照组的80%,心脏指数在第3d明显升高,随后逐渐下降。通过转录组分析找到100个共同差异基因,从中选出的12个基因,经qRT-PCR验证与转录组表达趋势一致。GO和KEGG信号通路富集发现,CVB3感染后,小鼠心肌组织出现病毒性心肌炎、NK细胞通路,T、B细胞激活及先天性免疫反应通路的改变。差异基因的蛋白与蛋白互作网络分析显示,先天性免疫中MHC-Ⅰ型分子蛋白基因H2-Q7、H2-K1、H2-D1等,NK细胞毒作用通路中的Gzmb、Gzma,以及蛋白酶体信号通路基因Psmb8、Psmb9、Psmb10和lfit3位于相互作用中心。CVB3感染C57BL/6小鼠心肌组织的转录组变化涉及病毒性心肌炎、NK细胞和T、B细胞激活及先天性免疫反应等通路。CVB3感染引起的急性病毒性心肌炎是多通路和多基因综合作用的结果。

基于PI3K/PKB通路研究EGCG对CVB3感染致病毒性心肌炎小鼠细胞凋亡的影响

细胞凋亡是造成病毒性心肌炎(VMC)发病过程中心肌损伤的重要因素;表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对缺血再灌注引起的细胞凋亡具有抑制作用,但是否抑制VMC发病过程中的心肌细胞凋亡尚不明确。因此,本研究将分析EGCG对VMC小鼠细胞凋亡的影响及分子机制。BALB/c小鼠随机分为对照组、VMC组(腹腔注射CVB3悬液造模)、VMC+EGCG组(腹腔注射CVB3悬液造模后腹腔注射EGCG)、VMC+EGCG+LY组(腹腔注射CVB3悬液造模后腹腔注射EGCG及PI3K抑制剂LY294002)。检测血清心肌损伤标志物肌钙蛋白I(cTnI)及乳酸脱氢酶(LDH),心肌中CVB3滴度及RNA表达、HE染色、凋亡基因及p-PI3K、p-PKB表达。结果显示,与对照组比较,VMC组血清cTnI、LDH含量、心肌中CVB3滴度及RNA表达、细胞凋亡率、cleaved caspase-3表达升高,心肌中Survivin、p-PI3K、p-PKB表达降低(P<0.05);与VMC组比较,VMC+EGCG组血清cTnI、LDH含量及心肌中细胞凋亡率、cleaved caspase-3表达降低,心肌中Survivin、p-PI3K、p-PKB表达升高(P<0.05),心肌中CVB3滴度及RNA表达无明显变化(P>0.05);与VMC+EGCG组比较,VMC+EGCG+LY组血清cTnI、LDH含量、心肌中细胞凋亡率、cleaved caspase-3表达升高,心肌中Survivin、p-PI3K、p-PKB表达降低(P<0.05),心肌中CVB3滴度及RNA表达无明显变化(P>0.05)。以上结果表明EGCG对VMC小鼠心肌细胞凋亡具有抑制作用且该作用与激活PI3K/PKB通路有关。

细胞自噬促进柯萨奇病毒B3复制的研究

本研究探索柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus B3,CVB3)感染引起的自噬与病毒复制之间的关系。CVB3感染HeLa细胞,并在病毒感染后6 h、8 h和10 h时检测LC3-Ⅰ蛋白、LC3-Ⅱ蛋白和p62蛋白的表达水平。结果显示CVB3病毒感染促使LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高,同时降低p62蛋白的表达。分别将自噬诱导剂雷帕霉素(Rapamy-cin)、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3MA)或溶酶体抑制剂阿洛司他丁(Aloxistatin,E46D)预处理HeLa细胞2 h,CVB3感染药物处理细胞并在病毒感染6 h后收集细胞、检测CVB3病毒VP1蛋白的表达。结果显示雷帕霉素和E64D促使CVB3病毒VP1蛋白表达增加,而3MA降低CVB3病毒VP1蛋白的表达。本研究得出结论 CVB3病毒感染诱导自噬进而促进病毒复制。

氧化苦参碱对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡及相关因子的影响

目的探讨氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡及其凋亡相关因子蛋白表达的影响。方法 42只BALB/c小鼠随机分为正常对照组(NC)、病毒性心肌炎模型组(VM)、OMT高剂量组(OMT-H,25 mg·kg^(-1)·d^(-1))、OMT中剂量组(OMT-M,12.5 mg·kg^(-1)·d^(-1))、OMT低剂量组(OMT-L,6.25 mg·kg^(-1)·d^(-1))、OMT极低剂量组(OMT-EL,3.125 mg·kg^(-1)·d^(-1))、利巴韦林对照组(RB,100 mg·kg^(-1)·d^(-1))。病毒性心肌炎小鼠由柯萨奇病毒B3型腹腔注射感染所致,各治疗组从末次给予病毒24 h后开始,腹腔注射,每日1次。于治疗第12天,每组处死小鼠6只,留取心肌标本。TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况,免疫印迹法和免疫组织化学法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达情况。结果 OMT治疗显著降低了病毒性心肌炎小鼠凋亡心肌细胞的数量,与病毒性心肌炎模型组比较,OMT-L组效果最佳(P<0.01)。与病毒性心肌炎模型组小鼠比较,OMT治疗组的小鼠心肌组织中Bax蛋白表达降低,而Bcl-2蛋白表达没有明显改变。结论氧化苦参碱可减少病毒性心肌炎小鼠心肌细胞的凋亡,该作用与下调Bax蛋白表达有关。

生黄合剂对病毒性心肌炎小鼠脾脏T淋巴细胞影响的研究

研究中药生脉饮与黄芩茎叶总黄酮合剂(以下简称生黄合剂)对病毒性心肌炎(VMC)小鼠免疫调节机制的影响,探讨生黄合剂治疗VMC的免疫调节机制。用柯萨奇病毒B组3型(CVB3)感染BALB/c小鼠建立VMC模型,随机分为正常组、生黄合剂治疗组、生脉饮组、抗病毒口服液组、病毒对照组。药物治疗组均灌胃给药,0.2ml/10g,一日2次。感染病毒10d后,应用HE染色观察各组小鼠心肌损伤情况及小鼠的生存情况,应用流式细胞术检测各组小鼠脾脏CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞水平。应用生黄合剂治疗后小鼠各脏器出现的病理性损伤明显减轻,CD3+及CD4+T细胞数量增加(P<0.05),CD4+/CD8+比值明显高于模型组(P<0.05)。生黄合剂可通过调节机体的T淋巴细胞比例来发挥其有益的免疫调节作用。