人角质形成细胞Cx26-G12R突变可下调TLR2及下游炎症因子的表达

目的探讨人角质形成细胞Cx26发生G12R突变对TLR2及下游炎症因子表达的影响。方法将野生型Cx26(WT-Cx26)和G12R突变(G12R-Cx26)的人角质形成细胞(HaCaT)分别与红色毛癣菌孢子共培养。采用实时荧光定量PCR法检测TLR2及其下游效应分子的mRNA表达水平;Western blot法检测TLR2表达情况;ELISA法检测细胞因子的分泌;细胞免疫荧光检测Cx26和TLR2内化情况。结果与WT-Cx26细胞株相比,G12R-Cx26突变株中,TLR2的mRNA水平无明显变化(t=1.92,P=0.190),而细胞膜和胞质中的TLR2蛋白水平均下降(均P<0.01);TLR2通路下游炎症因子TNF(t=6.91,P<0.05)、IL-6(t=13.03,P<0.01)和抗菌肽LL-37(t=25.31,P<0.001)的表达下调。与空白对照组相比,添加内化抑制剂的G12R-Cx26 HaCaT细胞Cx26与TLR2在细胞膜上的共定位增加。结论人角质形成细胞中Cx26-G12R突变可下调TLR2及下游炎症因子TNF、IL-6和抗菌肽LL-37的表达。

皮肤瘢痕上皮及瘢痕癌癌巢中Cx26 Cx26 mRNA的表达及意义

目的探讨连接蛋白26在皮肤瘢痕上皮及瘢痕癌癌巢中的表达及其意义。方法对15例皮肤瘢痕和22例瘢痕癌,用免疫组织化学方法(SP法)检测Cx26蛋白,用原位杂交技术检测Cx26 mRNA。利用计算机图像分析系统采集、分析图像,并对数据进行统计学处理。结果 Cx26蛋白、Cx26 mRNA在正常皮肤表皮的表达呈阳性,在病理性皮肤瘢痕上皮呈强阳性表达,在瘢痕癌癌巢中呈弱阳性或阴性表达。正常皮肤组、皮肤瘢痕组及瘢痕癌组两两比较,其表达(阳性面积和平均光密度)差异均有统计学意义(P<0.05)。结论①Cx26蛋白及Cx26 mRNA的高表达,对皮肤瘢痕上皮增生具有促进作用;②Cx26蛋白及Cx26 mRNA的低表达,与皮肤瘢痕癌的发生相关。

皮肤瘢痕和瘢痕鳞状细胞癌中Cx26基因表达及突变的意义

目的探讨Cx26基因表达及突变在皮肤瘢痕及瘢痕鳞状细胞癌(以下简称瘢痕鳞癌)中的意义。方法采用免疫组织化学SP法及原位杂交技术检测15例皮肤瘢痕和22例瘢痕鳞癌中Cx26蛋白及mRNA的表达。分别从14例皮肤瘢痕和瘢痕鳞癌石蜡包埋组织中提取DNA,运用PCR扩增及测序的方法进行突变筛查。利用计算机图像分析系统采集、分析图像,并对数据进行统计学处理。结果 (1)Cx26蛋白、Cx26mRNA在正常皮肤表皮中阳性,在皮肤瘢痕上皮呈强阳性表达,在瘢痕鳞癌组织中呈弱阳性或阴性表达。正常皮肤组、皮肤瘢痕组及瘢痕鳞癌组两两比较,其表达(阳性面积和平均吸光度)差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)测序后未发现瘢痕鳞癌中有Cx26基因突变。结论 Cx26蛋白及其mRNA的高表达,对瘢痕上皮增生具有促进作用;其表达下降与瘢痕鳞癌的发生有关;基因突变位点有待进一步探讨。

缝隙连接蛋白Cx26/Cx32对依托泊苷抗肿瘤作用的影响

目的观察宫颈癌Hela细胞中缝隙连接蛋白Cx26/Cx32对依托泊苷抗肿瘤作用的影响。方法采用荧光示踪实验检测Hela细胞中由Cx26/Cx32形成的缝隙连接通讯功能,及药物(油酸酰胺,维甲酸)对其功能的影响;采用标准细胞集落形成分析法检测Hela细胞中由Cx26/Cx32形成的缝隙连接通讯功能改变后,依托泊苷对Hela细胞生长抑制作用的影响;采用Hoechst33258荧光染色检测缝隙连接通讯功能改变后,依托泊苷对Hela细胞诱导凋亡作用的影响。结果荧光示踪实验结果显示油酸酰胺可显著降低缝隙连接通讯功能,而维甲酸则可增强该功能;标准细胞集落形成实验结果表明,在缝隙连接形成的Hela细胞中,油酸酰胺显著降低依托泊苷对Hela细胞生长的抑制作用,而维甲酸则增强依托泊苷的细胞生长抑制作用;Hoechst 33258荧光染色结果显示,在缝隙连接形成的Hela细胞中,油酸酰胺显著降低依托泊苷对Hela细胞的诱导凋亡作用,而维甲酸则增强依托泊苷的诱导凋亡作用。结论宫颈癌Hela细胞中缝隙连接蛋白Cx26/Cx32形成的缝隙连接通讯功能降低,依托泊苷的抗肿瘤作用下降;而当通讯功能增强时,其抗肿瘤作用则增加。

乳腺癌中间隙连接蛋白Cx43和Cx26表达的意义

目的 研究间隙连接蛋白 Cx43和 Cx2 6在乳腺癌中的表达及其与乳腺癌生物学行为的关系。方法 应用 S- P免疫组化方法检测 Cx43和 Cx2 6在 5 0例乳腺癌组织中的表达。结果 间隙连接蛋白 Cx43和 Cx2 6蛋白阳性染色位于乳腺癌细胞的胞膜上和胞浆中 ,阳性表达率分别为 44 .0 %和 32 .0 % ,Cx43和 Cx2 6的阳性表达与乳腺癌恶性程度及转移呈密切相关 (P<0 .0 5 )。结论 间隙连接蛋白表达和细胞间隙连接通讯功能异常 ,可能是乳腺肿瘤发生、发展和恶性进程的一个重要事件 。

CX26/CX32缝隙连接蛋白的Tet-onHeLa细胞模型的建立及鉴定

目的体外建立一种特异性快速有效观察药物对细胞缝隙连接(GJ)作用的特异性细胞模型,为发现作用于GJ的药物以及GJ的特异性研究提供一种有力的技术手段。方法构建同时双向表达2种不同连接蛋白(CXs)的质粒;用表达CX26/CX32的质粒转染Tet-on HeLa细胞,建立稳定表达CX26/CX32并形成异质性GJ的HeLa细胞模型。设置多西环素(Dox)(1μg/mL)处理组和未处理组,分别用RT-PCR和Western blot法检测细胞CX26 mRNA和蛋白质表达;细胞接种荧光示踪法检测细胞GJ功能;丽丝胺罗丹明B(SRB)法检测细胞的增殖。在上述细胞模型上,用GJ抑制剂2-氨基乙酯二苯基硼酸(2-APB)和GJ激活剂维甲酸(RA)干预。结果 HeLa细胞无内源性CX的表达,Dox可诱导Tet-on HeLa细胞CX26 mRNA和蛋白质表达,并且被诱导表达的CX可形成有效的GJ。2-APB(50μmol/L)减少稳定表达CX26/CX32的HeLa细胞间的荧光传递数目,GJ抑制率为51.3%(P<0.01);RA(10μmol/L)增多细胞间的荧光传递数目,GJ增强率为60.3%(P<0.01)。结论成功建立Dox调控的、稳定表达CX26/CX32的Tet-on HeLa细胞模型,为寻找可调节GJ功能的药物、观察药物对GJ的特异性作用提供了有力的实验手段。

间隙连接蛋白CX26和CX43在食管鳞癌组织中的表达及意义

目的探讨间隙连接蛋白CX26和CX43在食管磷癌组织中的表达情况及意义。方法应用免疫组化S-P法检测食管鳞癌及相对应的正常食管黏膜组织42例、癌旁不典型增生组织17例中CX26和CX43蛋白水平表达。结果食管鳞癌组织中CX26、CX43阳性率分别为40.5%(17/42)和31.0%(13/42),均明显低于正常食管黏膜组织及癌旁不典型增生组织(P<0.05)。CX26、CX43蛋白水平表达与食管鳞癌的组织学分级、浸润深度以及淋巴结转移有关(P<0.05)。结论 CX26、CX43在食管鳞癌的发生、发展过程中存在表达缺失或减少,CX26、CX43异常表达与食管鳞癌的恶性程度有关。

CX26第86位氨基酸多态性与遗传性聋相关性分析

目的本研究在细胞生物学水平,对第86位氨基酸分别为Thr,Ser,Arg的CX26蛋白的膜定位生物学功能进行鉴定,进而结合临床数据分析该位点不同多态性突变的潜在致聋可能性。方法本研究借助GFP融合型慢病毒表达系统,分别将第86位氨基酸为Thr,Ser,Arg的CX26-GFP融合蛋白在小鼠螺旋神经节细胞中进行表达,并在荧光显微镜下观察融合蛋白的细胞膜定位现象。结果第86位氨基酸发生Ser突变后,CX26蛋白仍能够正常定位于细胞膜表面,并形成间隙链接结构,这一表型与(第86位氨基酸为Thr的)野生型CX26蛋白并无明显差异;只有当第86位氨基酸突变为Arg时,导致CX26蛋白功能丧失。结论这些现象表明CX26 T86R可能为潜在致聋突变,而CX26 T86S为不影响蛋白功能的氨基酸多态性突变。该结论与临床筛查经验性结果一致。

CX26不同结构域错义突变体的表达和定位

目的探讨CX26蛋白质的9个结构域上的不同错义突变体在细胞内的表达及功能改变的异同,初步研究CX26不同错义突变体的致聋机理。方法在CX26的9个结构域中各选择1个致聋的错义突变(p.S19T、p.R32H、p.E47K、p.V84L、p.V95M、p.R143W、p.R165W、p.S199F、p.L214P),应用重叠区扩增基因拼接法和长引物快速法,构建成与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合表达的载体,野生型CX26-EGFP作对照,脂质体转染HeLa细胞,Westernblot分析蛋白的表达,共聚焦显微镜下观察各突变体在细胞膜上有无间隙连接斑形成。结果 CX26的9个结构域上的各1个错义突变体在HeLa细胞中均有表达,其中p.S19T、p.E47K、p.V84L、p.V95M和p.vR165W突变体能在细胞膜上表达并形成间隙连接斑,p.R32H、p.R143W、p.S199F和p.L214P突变体在细胞浆中表达,在细胞膜无表达,无间隙连接斑形成。结论 CX26的p.S19T、p.E47K、p.V84L、p.V95M和p.R165W突变体在细胞内能被转运到细胞膜并形成间隙连接,而p.R32H、p.R143W、p.S199F和p.L214P突变体失去被转运到细胞膜的功能,不能形成间隙连接。CX26的不同错义突变的致聋机制可能不同,与突变点所在的结构域可能没有相关性。

乳腺癌中间隙连接蛋白Cx43、Cx26的表达及其预后意义

背景与目的:检测间隙连接蛋白Cx43(Connexin43,Cx43)、Cx26(Connexin26,Cx26)、血管内皮生长因子VEGF_C(Vascularendothelialgrowthfactor_C,VEGF_C)和雌激素受体(Estrogenreceptor,ER)、孕激素受体(Progesteronereceptor,PR)在乳腺癌中的表达及其与临床病理指标的关系。材料与方法:应用免疫组化S_P法检测乳腺癌、癌旁乳腺组织共125例石蜡包埋标本中各种蛋白的表达情况,并结合临床随访资料,用Cox比例风险模型分析其预后意义。结果:Cx43和Cx26在癌组织中的阳性表达率分别是38.74%、43.24%,低于癌旁正常组织的阳性表达率;VEGF_C蛋白在癌组织中的阳性表达率47.75%,显著高于癌旁正常组织的阳性表达率。53例VEGF_C阳性患者中,淋巴结转移阳性者37例(69.81%),高于无转移组。多因素Cox比例风险模型分析显示,VEGF_C、Cx26和淋巴结转移与预后密切相关,危险度分别为11.118、0.266和10.126。结论:间隙连接蛋白Cx43和Cx26的缺乏是人类乳腺癌的一个主要特点。随着Cx43和Cx26的阳性表达率降低,乳腺肿瘤的恶性程度增高。VEGF_C阳性表达、ER和PR阴性表达在淋巴结转移组明显高于无转移组。VEGF_C、Cx26和淋巴结转移均可能作为判断预后的独立因素。临床上联合检测这些基因产物的表达将有助于推测乳腺癌患者的预后和选择治疗方案。

Cx26在胃粘膜细胞不同病变中的表达及意义

目的探讨间隙连接蛋白26(Cx26)在胃粘膜细胞不同病变时期表达、变化特点及可能机制,以及Cx26蛋白在胃癌诊断、治疗及预后评估中的临床意义。方法应用免疫组化法检测Cx26蛋白在169例胃粘膜细胞(35例),轻中度(22例)和重度不典型增生细胞(30例),以及不同类型胃癌细胞(82例)间的表达情况,并将观察结果按照Shimizu标准评分法来进行评价和统计学分析。结果 Cx26蛋白随着胃粘膜细胞向胃癌进展,其阳性表达水平逐渐升高。正常胃粘膜组织及不典型增生组,Cx26蛋白阳性表达程度均远远低于胃癌组织中的阳性表达水准(P<0.05),而在分化相对较好的肠型胃癌中,Cx26蛋白的阳性表达明显高于弥漫型胃癌(P<0.05)。结论 Cx26蛋白可抑制胃癌的进展及侵犯转移,可能与其调控细胞通讯,进而促进细胞分化有关。

维甲酸提高膀胱癌细胞缝隙连接蛋白Cx26的表达

目的:体外观察全反式维甲酸(ATRA)对人源膀胱移行细胞癌BIU-87细胞的缝隙连接蛋白Cx26表达的影响。方法:分别用终浓度为0μmol/L、1μmol/L和10μmol/L的ATRA作用72h后免疫细胞化学法和半定量RT-PCR观察连接蛋白Cx26的表达情况及mRNA水平。结果:对照组细胞Cx26表达为阴性,mRNA水平低,几乎不表达,经过维甲酸刺激后表达显著增高,mRNA水平也显著提高。结论:ATRA可以促进Cx26基因转录,提高mRNA水平,增加Cx26连接蛋白的表达。

不同发育阶段大鼠膀胱组织结构及Cx26表达变化的观察

目的 观察不同发育阶段大鼠膀胱组织结构的变化 ,及连接蛋白connexin 2 6(Cx2 6)随组织发育的不同阶段而表达的变化。方法 分别取幼年、成年和老年三组大鼠膀胱 ,测量排空状态下膀胱壁厚度 ,用HE和PAS法染色观察膀胱壁组织结构变化 ,同时用免疫组织化学评价Cx2 6表达情况。结果 随着膀胱的发育成熟 ,膀胱壁组织显著增厚 ,逼尿肌肌纤维增粗 ,固有层结缔组织增加。早期Cx2 6在移行细胞层表达较弱 ,在成年期后稳定高表达。结论 在膀胱的发育过程中 ,组织结构发生显著变化 ,成年后移行细胞表达Cx2 6显著增强 ,与膀胱的发育和功能密切相关。

遗传性耳聋基因Cx26的研究现状及临床应用

现就非综合征性遗传性耳聋基因Cx26的研究现状及临床应用进行综述,分析了Cx26基因型与临床表型,简述了临床应用的进展。

过表达间隙连接蛋白CX26 Y155X突变体增加细胞对内质网应激的敏感性*

目的体外实验探讨间隙连接蛋白神经性耳聋相关突变CX26 Y155X突变体导致耳聋可能的致病机制。方法 HEK293细胞中过表达CX26 Y155X突变体质粒后,免疫印迹检测CX26的表达,流式细胞术检测细胞内活性氧物质的改变和内质网应激诱导剂诱导凋亡改变情况。结果过表达CX26 Y155X突变体能增加细胞内ROS的水平,同时能增加内质网应激诱导剂对细胞的促凋亡作用。结论 CX26Y155X突变体可能由于异常聚集于内质网,从而导致内质网应激,产生过多的ROS,增加细胞对内质网应激的敏感性,从而诱导细胞凋亡。

非综合征性耳聋(NSHL)患者Cx26基因突变分析及两种突变体的亚细胞定位

为分析中国人群非综合征性耳聋(Nonsyndromic hearing loss,NSHL)患者Cx26基因的突变情况和特性,研究其中两种突变的亚细胞定位情况,文章运用PCR直接测序的方法对139例无亲缘关系的NSHL患者进行突变筛查,将两种突变p.F115C和p.V37I构建到pEGFP表达载体,并转染Hela细胞,研究其细胞表达和定位情况。在139例无亲缘关系的NSHL患者中,31例患者检测到Cx26基因突变,检出率为22.3%。一共检测到10种不同类型的碱基变异,包括6种突变和4种多态,其中包括1种未见报道的新变异p.F115C。p.F115C和p.V37I两种突变体转染Hela细胞后,亚细胞定位情况与野生型无差异,初步研究表明这两种突变不影响该蛋白形成细胞间隙连接通道。

人类连接蛋白基因Cx26的上游调控部位

人类连接蛋白２６（Ｃｏｎｎｅｘｉｎ ２６，Ｃｘ２６）已被看作乳腺癌上皮细胞中的抑瘤基因候选者．为了阐明此基因的调控机理，对其转译起始点上游的一个具有启动功能的１．６ ｋｂ 片段采用ｅｘｏ Ⅲ构建１０个单向删除重组体后进行了ＣＡＴ报告基因分析．结果表明，此１．６ ｋｂ 片段其启动子功能部位位于５′端２００ ｂｐ 范围内．其中含有－ＴＧＴ盒（位于１８２～１８７ ｂｐ），一个ＴＴＡＡＡＡ 盒位于１５８～１６３ ｂｐ，这是人类Ｃｘ２６基因的又一启动区，这些发现无疑地对了解和阐明Ｃｘ２６基因在乳腺发育过程中及其病理生理作用的复杂调控具有特别重要的意义．

皮损组织Cx26蛋白及信使RNA表达与PV患者PASI评分的关联性

目的分析皮损组织Cx26蛋白含量及信使RNA表达与寻常型银屑病(PV)患者皮损面积和严重程度指数(psoriasis area and severity index,PASI)评分的关联性。方法2018年7月-2019年7月选取本院PV患者60例作为研究组,另选同期健康体检者32例作为对照组,分析皮损组织Cx26蛋白、信使RNA水平与PV患者PASI评分的关联性。结果研究组Cx26蛋白含量及信使RNA表达水平均高于对照组(P<0.05);研究组轻度患者Cx26蛋白含量及信使RNA表达水平低于中度,中度患者Cx26蛋白含量及信使RNA表达水平低于重度(P<0.05);经Spearman分析可知,PASI评分与Cx26蛋白含量(r=0.625)及信使RNA表达水平(r=0.541)存在明显正相关关系(P<0.05)。结论PV患者Cx26蛋白含量及信使RNA表达水平与PASI评分密切相关,可作为评判疾病进展、预后指标,为临床治疗提供指导依据。

Cx26基因重表达抑制人鼻咽癌细胞系HNE1的恶性增殖

间隙连接蛋白 (Cx)基因在胚胎发育、细胞生长、分化以及细胞内环境的稳定过程中起重要调节作用 .肿瘤发生与Cx基因的表达及功能异常密切相关 ,肿瘤细胞常存在Cx基因表达下调或缺失 .将人Cx2 6基因编码区cDNA序列 ,亚克隆于真核表达载体pcDNA3 1(+) ,采用脂质体转染 ,将重组表达载体pcDNA3 1(+) Cx2 6转入鼻咽癌细胞系HNE1,使Cx2 6基因在HNE1中重表达 ,探讨Cx2 6基因对鼻咽癌细胞系HNE1的生物学功能的影响 .研究结果表明 :Cx2 6基因的重表达 ,抑制HNE1细胞生长 ,细胞周期阻滞于G0 G1期 ,HNE1细胞的克隆形成能力下降 ,裸鼠致瘤能力减弱 .

Cx26在甲状腺乳头状癌中的异常表达及其临床意义

目的:探讨Cx26在甲状腺乳头状癌(PTC)中的异常表达与病理分期、淋巴结转移等临床病理学参数的关系。方法:采用免疫组织化学方法对116例PTC组织、33例癌旁组织的新鲜标本进行石蜡包埋,切片染色,检测Cx26的表达,并分析其在PTC中的表达与临床病理学参数的关系。结果:Cx26在PTC组织中的表达均显著高于癌旁组织(P<0.05),其表达与肿瘤大小、临床分期、病理分级、淋巴结转移等因素相关(P<0.05)。结论:Cx26的表达可有效地预测PTC的发生、早期转移以及预后。