华法林相关基因CYP2C9、VKORC1、CYP4F2的多态性分布

目的研究CYP2C9、VKORC1、CYP4F2基因多态性在陕西省宝鸡地区汉族人群中的分布情况,为华法林个体化用药提供遗传依据。方法选取2022年1月至2023年5月在宝鸡市中医医院心内科接受华法林治疗并进行相关基因检测的住院患者475例,采用飞行时间质谱仪对华法林药物相关基因CYP2C9、VKORC1、CYP4F2分别进行检测,然后对检测结果的基因多态性进行分析。结果华法林药物相关各基因分布频率符合Hardy-Weinberg equilibrium规律,475例患者VKORC1基因型分别是AA型、AG型、GG型,基因频率分别为83.79%,15.58%,0.63%;CYP2C9基因型分别是*1/*1型、*1/*3型、*1/*2型,基因频率分别为95.17%,4.74%,0.11%,未检出*2/*2、*2/*3、*3/*3基因型;CYP4F2基因型分别是*1/*1型、*1/*3型、*3/*3型,基因频率分别为52.40%,39.37%,8.21%。各基因型分布在患者不同性别、年龄之间无统计学差异。结论陕西宝鸡地区汉族人群华法林药物基因VKORC1(c.-1639G>A)以变异型为主,包括纯合变异和杂合变异,而CYP2C9(*1、*2、*3)和CYP4F2(*1,*3)以野生型为主。

五味子乙素预处理对过氧化氢诱导的H9c2细胞焦亡及TXNIP/NLRP3/Caspase-1通路的影响

目的基于硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)通路观察五味子乙素对过氧化氢(H 2O 2)诱导的大鼠H9c2心肌细胞氧化损伤及焦亡的影响,探讨五味子乙素的心肌保护作用机制。方法体外培养H9c2心肌细胞,实验设4组:正常组细胞常规孵育,五味子乙素组细胞加入40μmol/L五味子乙素孵育24 h,H 2O 2组细胞加入1000μmol/L的H 2O 2孵育30 min,H 2O 2+五味子乙素组细胞加入40μmol/L五味子乙素孵育24 h后再加入H 2O 2孵育30 min。CCK-8法检测细胞活力,DCFH-DA探针检测细胞中活性氧(ROS)含量,试剂盒检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)含量和细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,Western blot法检测细胞中TXNIP、硫氧还蛋白(Trx)、NLRP3、裂解的半胱氨酸蛋白酶-1(Cleaved Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)-N蛋白表达情况,ELISA法检测细胞培养上清中白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量。结果与正常组比较,H 2O 2组细胞活力明显下降(P<0.05),细胞中ROS、MDA含量和TXNIP、NLRP3、Cleaved Caspase-1、GSDMD-N蛋白相对表达量及细胞培养上清中LDH、IL-1β、IL-18含量均明显升高(P均<0.05),细胞中SOD、GSH-Px含量和Trx蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05);与H 2O 2组比较,H 2O 2+五味子乙素组的细胞活力明显升高(P<0.05),细胞中ROS、MDA含量和TXNIP、NLRP3、Cleaved Caspase-1、GSDMD-N蛋白相对表达量及细胞培养上清中LDH、IL-1β、IL-18含量均明显降低(P均<0.05),细胞中SOD、GSH-Px含量和Trx蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05)。结论五味子乙素可能通过影响TXNIP/NLRP3/Caspase-1通路,从而减轻H 2O 2诱导的H9c2细胞氧化损伤,抑制心肌细胞焦亡。

CYP2C9对肝细胞癌的迁移、侵袭和增殖的影响

目的探究CYP2C9是否参与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的发生发展及其对肝癌细胞迁移、侵袭和增殖的影响。方法从TCGA数据库中提取HCC的转录组数据,分析CYP2C9在HCC中的表达和预后相关性;构建HepG2和MHCC97H的CYP2C9稳定过表达细胞系,通过Transwell迁移实验、Transwell侵袭实验和Western Blot实验分别检测过表达CYP2C9对肝癌细胞系迁移、侵袭能力以及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程的影响;通过CCK-8实验、平板克隆形成实验和Western Blot实验检测过表达CYP2C9对肝癌细胞系增殖能力的影响。结果通过生信分析发现,CYP2C9在HCC中的表达显著下调,且CYP2C9的表达与HCC患者的临床预后呈正相关;细胞及分子实验结果显示,过表达CYP2C9显著抑制HepG2细胞和MHCC97H细胞的迁移、侵袭能力和EMT过程,而对细胞的增殖能力没有显著影响。结论CYP2C9可能通过抑制肝癌细胞的迁移、侵袭以及EMT过程,进而影响HCC的进展。

CYP2C9*3和VKORC1基因位点突变对华法林稳定剂量及PT-INR达标天数的影响

目的探讨CYP2C9*3和VKORC1基因位点突变对华法林稳定剂量及凝血酶原时间-国际标准化比值(PT-INR)达标天数的影响。方法收集应用华法林抗凝治疗住院患者69例,采用焦磷酸测序检测CYP2C9*3和VKORC1基因位点多态性,同步检测患者PT-INR,查阅并收集患者病历资料、用药剂量及实验室检验数据。结果VKORC1野生型占85.51%(59/69),突变型占14.49%(10/69)。CYP2C9*3野生型占89.86%(62/69),突变型占10.14%(7/69)。两种基因位点均为野生型占78.26%(54/69),一种基因位点突变占18.84%(13/69),两种基因位点均突变占2.90%(2/69)。VKORC1基因型AA+CYP2C9*3基因型AC的华法林稳定剂量均低于其他VKORC1+CYP2C9*3基因型组合,VKORC1基因型AG/GG+CYP2C9*3基因型AA的华法林稳定剂量高于其他VKORC1+CYP2C9*3基因型组合,差异有统计学意义(P<0.05)。VKORC1基因型AA+CYP2C9*3基因型AA的PT-INR达标天数少于其他VKORC1+CYP2C9*3基因型组合,差异有统计学意义(P<0.05)。结论VKORC1和CYP2C9*3两个基因位点突变影响华法林稳定剂量,并造成PT-INR达标天数延长。

miR-223-3p在高糖诱导的H9c2细胞损伤中的靶基因预测及相关通路分析

[目的]通过生物信息学途径探究miR-223-3p在高糖环境下对H9c2细胞的影响,并结合转录组测序结果,分析其在糖尿病心肌病发病机制中的作用,旨在分子层面上发掘新的治疗靶点,探究miR-223-3p的具体作用机制。[方法]在高糖培养的H9c2细胞中分别转染miR-223-3p的抑制物及对照物,RT-qPCR检测两组细胞中miR-223-3p的表达差异;通过高通量测序对差异mRNA进行检测;用TopGO软件进行GO功能富集分析;DESeq2软件(v1.16.1)筛选差异表达基因,对检测结果的差异基因与miR-223-3p靶基因数据库共分析,预测miR-223-3p靶基因,并用RT-qPCR检测验证其表达变化。[结果]高糖处理的H9c2细胞活性明显降低,转录组测序结果提示对照组和miR-223-3p抑制剂组间的基因表达存在较为明显的差异。GO功能富集分析显示,预测靶基因集显著富集于G蛋白偶联受体活性、甘油基乙醚单加氧酶活性、细胞阴离子稳态和氯离子稳态等方面。KEGG通路富集分析显示,这些基因主要涉及TNF信号通路和IL-17信号通路。此外,它们还与1型糖尿病、细胞色素P450对外源性药物的代谢作用等相关疾病和生理过程有关。靶基因预测提示miR-223-3p可能与Cxcl10、Creb3l3、Mmp3和Bcl3等的表达变化有关。[结论]在高糖诱导的H9c2细胞损伤中miR-223-3p及其下游靶基因的预测可能为糖尿病心肌病的治疗提供新的靶点,对于揭示糖尿病心肌病的发病机制以及开发新的治疗策略具有重要意义。

血清CTRP9、TGF-β2、ANGPTL3水平与糖尿病视网膜病变的相关性分析及临床意义

目的探讨血清C1q肿瘤坏死因子相关蛋白9(CTRP9)、转化生长因子-β2(TGF-β2)、血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)水平与糖尿病视网膜病变(DR)的相关性及临床意义。方法回顾性选取2021年9月至2023年9月医院收治的100例DR患者,其中增殖性视网膜病变(PDR)39例,非增殖性视网膜病变(NPDR)61例,分别纳入PDR组、NPDR组,另选取同期糖尿病不伴有视网膜病变患者50例,纳入对照组。比较3组血清CTRP9、TGF-β2、ANGPTL3水平,分析血清各指标与DR病情严重程度的相关性及联合检测诊断价值,并分析各指标不同水平患者发生DR的危险度。结果3组血清CTRP9、TGF-β2、ANGPTL3水平比较:PDR组>NPDR组>对照组,且各指标水平与DR病情严重程度均呈正相关(P<0.05)。入院时血清CTRP9、TGF-β2、ANGPTL3水平联合诊断DR的曲线下面积为0.899,最佳诊断敏感度为91.00%,最佳诊断特异度为88.00%,约登指数为0.790,且各指标高水平患者发生DR的危险度是低水平的1.419倍、1.239倍、1.381倍(P<0.05)。结论CTRP9、TGF-β2、ANGPTL3在DR患者血清中均呈异常高表达,各指标水平与病情严重程度均呈正相关,且联合检测对DR具有一定诊断价值,可作为临床诊断疾病、评估病情的辅助指标。

缺血性脑卒中合并2型糖尿病的危险因素及与CYP2C19*2、CYP2C19*3位点的关系分析

目的分析缺血性脑卒中合并2型糖尿病的危险因素及与CYP2C19*2、CYP2C19*3位点的关系。方法159例缺血性脑卒中患者,其中67例缺血性脑卒中合并2型糖尿病患者作为实验组,92例缺血性脑卒中不合并2型糖尿病患者作为对照组。用聚合酶链式反应(PCR)扩增和CYP2C19基因分型检测试剂盒检测CYP2C19*2和CYP2C19*3位点的基因型,进行CYP2C19*2、CYP2C19*3基因型Hardy-Weinberg遗传平衡检验,比较两组患者CYP2C19*2、CYP2C19*3基因分型频数分布情况,一般资料及生化资料[性别、年龄、合并高血压情况、合并高血脂症情况、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白A1(ApoA1)、载脂蛋白B(ApoB)、同型半胱氨酸(Hcy)],分析缺血性脑卒中合并2型糖尿病的危险因素。结果CYP2C19*2(681G>A)和CYP2C19*3(636G>A)的3种基因型分布频率经统计检验,患者所有基因型均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律,表明所选取样本具有群体代表性。两组患者CYP2C19*2(681G>A)、CYP2C19*3(636G>A)基因分型频数分布情况比较,差异无统计学意义(P>0.05)。实验组患者的TG 1.71(1.14,2.70)mmol/L、合并高脂血症占比37.3%(25/67)、ApoB 1.01(0.79,1.25)g/L高于对照组的1.27(0.90,1.67)mmol/L、21.7%(20/92)、0.91(0.77,1.14)g/L,HDL-C 1.00(0.91,1.15)mmol/L低于对照组的1.19(0.99,1.44)mmol/L,差异具有统计学意义(P<0.05)。而两组性别、年龄、合并高血压情况、TC、LDL-C、ApoA1、Hcy水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。多因素Logistic回归分析显示,合并高脂血症、高TG水平、高ApoB水平为缺血性脑卒中合并2型糖尿病的危险因素(P<0.05)。结论缺血性脑卒中合并2型糖尿病与CYP2C19*2、CYP2C19*3位点无直接关系,合并高脂血症、高TG水平、高ApoB水平是缺血性脑卒中合并2型糖尿病的危险因素。

中国南方地区客家人群CYP2C9和VKORC1-1639G>A基因的遗传多态性

目的 探讨华法林药物反应相关基因细胞色素氧化酶P4502C9(cytochrome P450 family 2 subfamily C polypeptide,CYP2C9)和维生素K环氧化物还原酶复合体亚基1(vitamin K epoxide reductase subunit 1,VKORC1)-1639G>A遗传多态性在中国南方客家人群中的分布。方法 本研究共纳入2015年7月至2019年1月来梅州市人民医院门诊及住院口服华法林抗凝治疗的患者1 330例,提取患者外周血基因组DNA,通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)和DNA微阵列芯片法检测CYP2C9和VKORC1-1639G>A基因多态性。将中国南方客家人群CYP2C9和VKORC1-1639G>A基因型和基因频率与文献已报道的不同地区人群和民族的频率进行比较。结果 经Hardy-Weinberg Equilibrium遗传平衡定律检验,所有基因型均符合遗传平衡定律(P>0.05),所选取的研究对象具有群体代表性。CYP2C9基因分型结果显示,野生型CYP2C9*1/*1占92.1%(1 225例),杂合突变型CYP2C9*1/*2占0.5%(6例),杂合突变型CYP2C9*1/*3占7.3%(97例)和杂合突变型CYP2C9*2/*3占0.1%(2例)。CYP2C9*1、CYP2C9*2和CYP2C9*3 3种等位基因的频率分别为96.0%、0.3%和3.7%。男性和女性之间CYP2C9基因型(P=0.94)和等位基因频率(P=0.28)分布比较,差异无统计学意义。VKORC1-1639G>A基因分型检测结果显示,野生型VKORC1-1639GG占1.7%(22例),杂合突变型VKORC1-1639GA占19.7%(262例)和纯合突变型VKORC1-1639AA占78.6%(1 046例)。VKORC1-1639G>A位点G和A 2种等位基因频率分别为11.5%和88.5%。男性和女性之间VKORC1-1639G>A基因型(P=0.63)和等位基因频率(P=0.34)分布比较,差异无统计学意义。结论 中国南方客家人群CYP2C9和VKORC1-1639G>A基因遗传多态性与中国不同地区汉族人群和少数民族之间存在差异。基因分型检测可为指导梅州地区客家人群华法林个体化用药治疗提供重要分子遗传依据。

滋膵通脉饮通过调节PI3K/Akt/mTOR信号通路减轻高糖诱导的H9c2心肌细胞损伤的实验研究

目的:通过对高糖诱导的H9c2心肌细胞自噬和凋亡可能涉及的信号通路(PI3K-Akt-mTOR)进行研究,探讨滋膵通脉饮抑制心肌细胞凋亡的作用机制。方法:SD大鼠随机分为空白血浆组、滋膵通脉饮组,每组10只。连续灌胃7d,制备相应的含药血浆。滋膵通脉饮组药物浓度为4.4g/mL,灌胃量为10mL·kg^(-1)·d^(-1);空白血浆组采用等剂量的灭菌超纯水灌胃(给药体积为10mL/kg)。把H9c2心肌细胞分为正常组、空白血浆组和含药血浆组,分别加入胎牛血清,空白血浆和含药血浆,每组均设置5%、10%、15%的浓度梯度。通过CCK-8法比较各组H9c2心肌细胞增殖情况,计算细胞存活率,筛选含药血浆。将高糖诱导的H9c2心肌细胞随机分成3组:模型组、滋膵通脉饮含药血浆组和恩格列净组,加上正常组,共4组,给药24h后,IF检测LC3B在H9c2心肌细胞的表达。Western blot法检测PI3K-Akt-mTOR信号通路蛋白和凋亡相关蛋白Caspase-3的表达。结果:含药血浆及空白血浆在10%的药物浓度水平对细胞增殖无明显影响,作为本次含药血浆实验干预的浓度。与正常组比较,模型组心肌细胞LC3BⅡ/LC3BⅠ表达明显降低,PI3K、P-Akt、mTOR和Caspase-3的蛋白表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,滋膵通脉饮含药血浆组与恩格列净组LC3BⅡ/LC3BⅠ表达明显升高,PI3K、P-Akt、mTOR和Caspase的蛋白表达明显降低(P<0.05);滋膵通脉饮含药血浆组与恩格列净组LC3BⅡ/LC3BⅠ表达、PI3K、P-Akt、mTOR和Caspase-3的蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:滋膵通脉饮可激活心肌细胞自噬而抑制心肌细胞凋亡,这可能与抑制PI3K/P-Akt/mTOR信号通路有关。

基于CaMKⅡδ-RIPK1/RIPK3-MLKL通路的黄芪-丹参配伍对缺氧/复氧诱导的H9C2细胞坏死性凋亡的影响

目的观察黄芪-丹参配伍对缺氧/复氧诱导的H9C2心肌细胞坏死性凋亡的影响,基于CaMKⅡδ-RIPK1/RIPK3-MLKL通路探讨其作用机制。方法体外培养H9C2细胞,建立缺氧/复氧模型。将细胞分为对照组、模型组、黄芪丹参+激活剂(油酸)组、黄芪丹参组和抑制剂(KN-93磷酸盐)组,分别于相应培养基培养。试剂盒检测细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)水平,流式细胞术检测细胞凋亡,RT-qPCR和Western blot检测钙调蛋白激酶(CaMK)Ⅱδ、受体相互作用蛋白激酶(RIPK)1、RIPK3、混合系激酶区域样蛋白(MLKL)mRNA和蛋白表达。结果与对照组比较,模型组细胞上清液LDH水平显著升高(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),CaMKⅡδ、RIPK1、RIPK3和MLKL mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,黄芪丹参组细胞上清液LDH水平显著降低(P<0.01),细胞凋亡率显著降低(P<0.01),CaMKⅡδ、RIPK1、RIPK3和MLKL mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。黄芪丹参作用与CaMKⅡδ抑制剂KN-93磷酸盐相当。结论黄芪-丹参配伍可减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤,抑制心肌细胞坏死性凋亡,其机制与下调CaMKⅡδ-RIPK1/RIPK3-MLKL通路有关。

黄芩苷对Chang Liver细胞CYP3A4、CYP2C9和CYP2C19表达的影响

目的在Chang Liver细胞中观察黄芩苷处理对CYP3A4、CYP2C9和CYP2C19表达的影响。方法在Chang Liver细胞中分别加入DMSO0.1%(v/v)(溶剂对照)和不同浓度的黄芩苷(0.01、0.1和1μM)24、36和48h后,用半定量RT-PCR的方法分别检测CYP3A4、CYP2C9和CYP2C19表达量的改变。结果用不同浓度黄芩苷分别处理Chang Liver细胞24和36h,CYP3A4、CYP2C9和CYP2C19的表达均呈现出增强的趋势;但是黄芩苷处理48h后各浓度对CYP3A4和CYP2C9的表达产生显著的抑制效应(P<0.01)。结论黄芩苷对细胞中CYP3A4、CYP2C9和CYP2C19的表达具有影响作用,这种影响作用随药物处理时间不同而表现出双向效应。

CYP2C9及CYP2C19基因多态性在非瓣膜性心房颤动患者抗凝治疗中指导作用分析

目的:探究CYP2C9,CYP2C19基因多态性在非瓣膜性心房颤动患者抗凝治疗中的指导作用。方法:收集我院于2021年11月至2022年11月收治的非瓣膜性心房颤动患者202例临床资料,按照基因多态性检测结果分组治疗,将CYP2C9*1*1合并CYP2C19*1*1常规治疗的患者作为对照组,CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3基因指导下的个体化治疗的患者为观察组。比较患者一般资料、华法林起效时间、起效剂量、平均剂量、INR达标时间、凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ活性、不良事件发生情况。多元线性回归分析抗凝剂量的影响因素。结果:CYP2C9*1*1、CYP2C9*3发生率分别为88.4%、11.6%,CYP2C19*1*1、CYP2C19*2、CYP2C19*3发生率分别为68.5%、23.8%、7.6%,CYP2C9*3合并CYP2C19*2/CYP2C19*3、CYP2C9*1*1合并CYP2C19*1*1发生率分别为1.3%、67.2%。其中对照组占比60.6%,观察组占比39.4%。两组年龄、性别、高血压、高血脂、糖尿病、冠心病、BMI、饮酒、吸烟比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组华法林起效时间、起效剂量、平均剂量、INR达标时间均显著低于对照组(P<0.05)。观察组凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ活性显著高于对照组(P<0.05)。两组不良事件发生情况比较,差异有统计学意义(P>0.05)。CYP2C9*1抗凝剂量显著高于CYP2C9*3,CYP2C19*1抗凝剂量显著高于CYP2C19*2/CYP2C19*3,≥70岁患者抗凝剂量显著低于<70岁患者,BMI≥25 kg/m2患者抗凝剂量显著高于BMI<25 kg/m2患者(P>0.05)。将抗凝剂量作为因变量,CYP2C9、CYP2C19基因分型、年龄、BMI作为自变量进行多元线性回归分析,结果显示,CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3、BMI≥25 kg/m2为华法林抗凝剂量的危险因素,年龄<70岁为保护因素,年龄与抗凝剂量呈负相关关系,BMI与抗凝剂量呈正相关关系。Log(P)=0.520×CYP2C9*3+0.225×CYP2C19*2+0.293×CYP2C19*3-0.160×年龄+0.394×BMI+4.522。结论:CYP2C9,CYP2C19基因多态性的检测能够对非瓣膜性心房颤动患者抗凝治疗具有良好的临床指导意义,CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3均为华法林抗凝剂量的危险因素,影响药物疗效。通过基因指导下的治疗能够降低华法林起效剂量,缩短起效天数,增加抗凝因子的活性,提高华法林的抗凝效果。

重庆地区人工机械瓣膜置换术后患者CYP2C9*1和*3变异与华法林剂量调整的研究

目的探讨重庆地区人工机械瓣膜置换术后华法林抗凝治疗患者CYP2C9*1和*3基因型与华法林口服剂量及稳定华法林血药浓度的关系。方法采用PCR-RFLP技术对100例重庆地区汉族人工机械瓣膜置换术后抗凝治疗患者CYP2C9*1和*3基因突变位点进行检测,计算其基因型和等位基因频率;采用高效液相色谱法(HPLC)测定患者血浆中华法林浓度,同时记录患者相关临床指标。结果 100例重庆地区汉族人工机械瓣膜置换术后抗凝治疗患者中筛选到2种基因型:CYP2C9*1/*1及CYP2C9*1/*3,基因型频率分别为95%和5%,未发现CYP2C9*2基因型及CYP2C9*3/*3型纯合子患者。在达到抗凝指标INR(1.5～2.0)后,CYP2C9*1/*3型患者需要的华法林维持剂量(2.67±0.95)mg与CYP2C9*3/*3型患者需要的华法林维持剂量(2.67±1.10)mg相比无明显差别(P>0.05),而前者稳定华法林血药浓度(1640.95±287.89)ng/ml与后者(805.50±329.77)ng/ml相比有明显差别(P<0.01)。结论 100例重庆地区汉族人工机械瓣膜置换术后抗凝治疗患者CYP2C9*1和*3基因型与相应的患者的华法林口服剂量个体差别无相关。CYP2C9*1和*3基因型与术后抗凝治疗患者达到抗凝稳定状态后的华法林血药浓度个体差异相关,CYP2C9*1和*3基因型筛查对监测华法林药物抗凝并发症有重要意义。

银杏叶提取物及其黄酮类单体对ChangLiver细胞中CYP3A4和CYP2C9的影响

目的研究银杏叶提取物(GBE)及其黄酮类单体槲皮素和山柰酚对Chang Liver细胞CYP3A4、CYP2C9表达的影响。方法 CCK-8法检测GBE、槲皮素、山柰酚对Chang Liver细胞增殖的抑制作用;RT-PCR方法检测其不同浓度对Chang Liver细胞中CYP3A4 mRNA、CYP2C9 mRNA表达的影响;Western blot方法测定CYP3A4、CYP2C9蛋白表达的相对含量。结果 GBE呈浓度依赖性地诱导CYP3A4 mRNA和蛋白的表达,对CYP2C9mRNA和蛋白的表达没有显著作用;槲皮素对CYP3A4 mRNA和蛋白的表达有较明显的诱导作用,呈浓度依赖性地抑制CYP2C9 mRNA和蛋白的表达;山柰酚呈浓度依赖性地抑制细胞中CYP3A4 mRNA和蛋白的表达,对CYP2C9 mRNA和蛋白的表达没有显著影响。结论 GBE、槲皮素、山柰酚对Chang Liver细胞中CYP3A4、CYP2C9的表达具有不同的影响作用,这些结果为GBE与其他药物相互作用提供理论基础,提高联合用药的有效性及安全性,为黄酮类单体新药开发提供参考信息和理论依据。

隐丹参酮对细胞色素P450酶CYP3A4和CYP2C9的影响

目的研究丹参中脂溶性成分隐丹参酮对Chang肝脏细胞细胞色素P450酶(CYP450)CYP3A4、CYP2C9表达的影响,明确丹参主要成分对CYP450酶的作用,以阐明基于CYP450酶隐丹参酮与其他药物间相互作用的分子基础,为临床合理使用含隐丹参酮的丹参制剂提供依据。方法采用CCK-8法考察隐丹参酮对Chang肝脏细胞活力的影响,以确定药物的给药剂量范围;通过Western bloting法考察隐丹参酮在给药后1、3和7 d对Chang肝脏细胞中CYP3A4和CYP2C9蛋白表达的影响;通过定量R T-PCR法考察隐丹参酮对Chang肝脏细胞中CYP3A4和CYP2C9 mRNA表达的影响。结果给药1 d,隐丹参酮对CYP3A4蛋白及mRNA表达无显著影响。但随时间延长,给药3 d和7 d,隐丹参酮可抑制CYP3A4蛋白及mRNA的表达(P<0.05)。给药1、3和7 d,隐丹参酮对CYP2C9蛋白及mRNA的表达均无显著影响。结论连续给予隐丹参酮可抑制CYP3A4 mRNA和蛋白的表达。提示临床在连续使用含隐丹参酮时,需要关注其与CYP3A4底物药物之间可能的相互作用。

Pyrosequencing检测CYP2C9^＊3基因多态性方法的建立及其可靠性研究

目的:建立基于焦磷酸测序技术(Pyrose-quencing)的高通量的CYP2C9*3突变检测方法。方法:应用带有生物素标记的扩增引物,经PCR扩增及Beads分离,制备该突变位点焦磷酸测序单链模板,并在PyroMark ID焦磷酸测序仪上进行焦磷酸测序,以经典ABI测序法测序结果作为标准对照,观察批量分析的可靠性并批量检测220例人DNA标本。结果:建立了基于焦磷酸测序技术的CYP2C9*3突变位点检测平台,实现了DNA标本的高通量检测。能一次获得96份DNA的CYP2C9*3突变位点检测结果。经重复性检测和标准的ABI测序可靠性检测,CYP2C9*3突变位点的突变检出率及重复率均达100%。结论:本方法可准确、高通量、快速检测CYP2C9*3突变,特别适宜该SNP位点批量检测需要。

细胞色素P450 CYP2C9＊3对格列本脲和氯诺昔康中国人体药代动力学的影响

目的研究人体内细胞色素P4502C9酶突变等位基因CYP2C93对格列本脲和氯诺昔康药代动力学的影响。方法采用PCRRFLP方法对83名无血源关系的受试者进行CYP2C93等位基因的筛查,基因型为CYP2C91/3(n=7)和1/1(n=11)的受试者分别参加了格列本脲和氯诺昔康的人体药代动力学试验。采用LC/MS/MS法分别测定受试者口服格列本脲(2.5mg)和氯诺昔康(8mg)后不同时刻血浆中格列本脲和氯诺昔康的浓度。结果两组受试者口服格列本脲后,CYP2C91/3组AUC0∞显著增加,为CYP2C91/1组的1.5倍,CL/F降低了40%;两组受试者口服氯诺昔康后,CYP2C91/3组AUC0∞亦显著增加,为CYP2C91/1组的2.2倍,CL/F降低了55%。结论CYP2C9酶的突变等位基因CYP2C93对格列本脲和氯诺昔康的药代动力学有显著性影响。

氯沙坦钾片的生物等效性及CYP2C9*3基因多态性对氯沙坦药代动力学的影响

目的:评价试验制剂氯沙坦钾片(杭州民生药业)与参比制剂氯沙坦钾片(杭州默沙东制药)的生物等效性及CYP2C9*3基因多态性对氯沙坦药代动力学的影响。方法:采用PCR测序法对健康中国汉族受试者CYP2C9*3(rs1057910A>C)位点进行基因分型,筛选36名受试者入组本试验,其中CYP2C9*1/*1(AA)基因型个体32例,CYP2C9*1/*3(AC)基因型个体4例。本研究为两制剂、两周期交叉设计,单次、开放口服给药的单中心试验,给药剂量为氯沙坦钾片(50mg/片)1片。通过液相色谱-串联质谱法同时测定人血浆中氯沙坦钾及其代谢产物E-3174的浓度,采用DAS3.2.2非房室模型药动学参数计算的方法求算药动学参数。结果:受试试剂对参比制剂的相对生物利用度分别为氯沙坦(101.5±20.2)%、E-3174(100.0±13.8)%;同CYP2C9*3为AA基因型受试者相比,AC基因型受试者中氯沙坦的药代动力学参数AUC0-12、AUCinf以及Cmax升高,其中AUC0-12、AUCinf差异有统计学意义;E-3174的药代动力学参数AUC0-48和AUCinf降低,不同基因型间差异无统计学意义。结论:两种制剂生物等效;CYP2C9基因1075A>C突变可导致氯沙坦代谢减慢,但氯沙坦临床剂量可能不需要根据CYP2C9基因型进行调整。

己烯雌酚对人肝微粒体内CYP3A4和CYP2C9酶的抑制作用

目的体外实验考察己烯雌酚(DES)对细胞色素P450 3A4(CYP3A4)和细胞色素P450 2C9(CYP2C9)活性的抑制作用,以评估DES通过抑制这两个重要的细胞色素P450(CYP)亚型而引发药物-药物相互作用的可能性。方法混合人肝微粒体与不同浓度的DES(或阳性抑制剂)、CYP3A4或CYP2C9的探针底物在37℃条件下孵育相应的反应时间后,用高效液相色谱-紫外吸收法观察探针底物的代谢产物的生成率,计算IC50值。选取不同的探针底物浓度(覆盖Km值)和DES浓度(覆盖IC50值)测定出相应的代谢速率,用Lineweaver-Burk作图和Dixon作图来判断可逆抑制类型,计算抑制动力学参数Ki。单点失活法测定DES对CYP3A4和CYP2C9是否有基于机制的抑制。结合Ki值和DES的最大血药浓度(cmax)预测体内产生的药物-药物相互作用。结果 DES对CYP3A4和CYP2C9体现出浓度依赖型的抑制,相应的IC50值分别为7.4±1.0和(3.8±0.1)μmol.L-1。DES对CYP3A4和CYP2C9抑制的Dixon作图的交点都在第二象限,而Lineweaver-Burk作图的交点都在纵轴上,这两方面证据共同证实DES对CYP3A4和CYP2C9抑制属于竞争型抑制。CYP3A4和CYP2C9的Ki值分别为4.4和3.0μmol.L-1。DES对CYP3A4和CYP2C9不存在基于机制的抑制。利用DES的cmax计算出对CYP3A4和CYP2C9代谢底物AUC变化倍数分别为4.3和6.2。结论 DES对CYP3A4和CYP2C9的活性有较强的抑制作用,在临床常用的剂量条件下,很容易诱导药物-药物相互作用。

宁夏回族高脂血症患者CYP2C9＊3、MSA2756G基因多态性的研究

目的研究高脂血症治疗的药物相关基因CYP2C9*3、甲硫氨酸合成酶(MSA2756G)在宁夏回族高脂血症患者中的分布及其与高脂血症的关系。方法通过扩增引进限制性酶切位点(ACRS)和应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对高脂血症患者进行基因型分析。结果 180名宁夏回族高脂血症患者中,CYP2C9*3等位基因频率为3.33%,突变频率男性(3.05%)高于女性(0.28%),差异有显著性(P<0.01),而与健康对照组(3.00%)比较,差异无显著性(P>0.05);MSA2756G等位基因频率为15.83%,显著高于健康对照组(10.25%)(P<0.05),未发现性别差异。结论宁夏回族人群携带CYP2C9*3基因型的男性患高脂血症风险更大;MSA2756G可能是高脂血症的危险因子。