HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因联合诱导人宫颈癌Ca Ski细胞的凋亡

目的:观察HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因体外共转染,联合诱导人宫颈癌Ca Ski细胞凋亡的效应。方法:HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因的质粒载体分别以单独或联合的方式转染人宫颈癌Ca Ski细胞,随后利用RT-PCR技术检测细胞中HPV-16 E6癌基因的mRNA水平变化;Western blot分析细胞中抑癌蛋白p53水平的变化;流式细胞技术分析细胞凋亡情况。结果:经HPV-16 E6 siRNA和hIL-24转染后细胞后HPV E6癌基因的mRNA水平均下降,其中联合转染组显著下降(P<0.05);抑癌蛋白p53水平均增高,其中联合转染组显著增高,细胞凋亡率均升高,其中联合转染组显著升高(P<0.05)。结论:HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因分别转染宫颈癌Ca Ski细胞后,均能抑制Ca Ski细胞中HPV-16 E6癌基因的表达,使抑癌蛋白p53恢复活性,诱导宫颈癌Ca Ski细胞凋亡;两者联合则具有协同效应,能显著提高肿瘤细胞凋亡率。

人白介素24基因诱导人宫颈癌Ca Ski细胞凋亡的实验研究

目的:研究人白介素24(hIL-24)在体外诱导宫颈癌CaSki细胞凋亡及其作用机制.方法:①以脂质体包裹重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-hIL-24转染Ca Ski细胞;②利用RT-PCR技术检测处理后Ca Ski细胞中HPV E6癌基因的mRNA水平变化;③Western Blot分析处理后Ca Ski细胞中抑癌蛋白P53水平的变化;④流式细胞仪分析处理后的Ca Ski细胞凋亡情况.结果:处理后Ca Ski细胞中HPV E6癌基因的mRNA水平下降,抑癌蛋白P53水平增加,细胞凋亡率升高.结论:真核表达载体介导的hIL-24基因体外转染宫颈癌Ca Ski细胞后,能抑制Ca Ski细胞中HPV E6癌基因的表达,使抑癌蛋白P53恢复活性,促使宫颈癌Ca Ski细胞凋亡.

Hsa-miR-6841-3p对宫颈癌细胞系Caski增殖及侵袭转移的影响

目的:探讨miRNA-6841-3p对宫颈癌细胞生物学行为的影响。方法:将miRNA-6841-3p模拟物、miRNA-6841-3p抑制物转染至宫颈癌细胞系Caski。实时荧光定量PCR检测宫颈癌细胞系Caski转染后miRNA-6841-3p mRNA以及其预测靶基因TFF3的转录表达。CCK-8法检测细胞增殖能力。Transwell小室检测细胞体外侵袭转移能力。划痕实验检测细胞迁移能力。结果:实时荧光定量PCR显示,miRNA-6841-3p模拟物转染组与miRNA-6841-3p模拟物对照组相比,miRNA-6841-3p mRNA表达明显上调(P<0.01),miRNA-6841-3p抑制物转染组miRNA-6841-3p mRNA转录表达明显受抑制,差异有统计学意义(P<0.01)。其预测靶基因TFF3 mRNA转录表达在miRNA-6841-3p模拟物转染组明显低于抑制物转染组(P<0.01)。与miRNA-6841-3p抑制物转染组比较,转染miRNA-6841-3p模拟物后,宫颈癌细胞系Caski细胞活性、迁移侵袭能力明显减弱(P<0.05)。结论:上调miRNA-6841-3p表达可明显抑制宫颈癌细胞系Caski增殖,抑制其迁移、侵袭能力,其作用机制可能通过抑制预测靶基因TFF3表达实现。

人宫颈癌Ca Ski细胞IL-24基因的克隆鉴定与真核表达

目的:克隆人IL-24基因并构建真核表达载体,转染Ca Ski细胞进行真核表达.方法:利用RT-PCR技术扩增出Ca Ski细胞中的IL-24基因.将IL-24基因克隆入pcDNA3.1(+)中,构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-hIL-24.将重组质粒转染入CaSki细胞,利用Western blot检测hIL-24的表达.结果:PCR及测序结果均证实成功克隆了人IL-24基因,构建了真核表达质粒pcDNA3.1(+)-hIL-24,该质粒被转染入Ca Ski细胞中能表达出hIL-24蛋白.结论:成功构建了hIL-24基因的真核表达载体.

miR-1-3p靶向TNKS2抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-1-3p靶向端锚聚合酶2(TNKS2)基因对宫颈癌Ca-Ski细胞增殖、迁移及侵袭的调控作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)检测正常宫颈鳞状细胞及不同宫颈癌细胞中miR-1-3p的表达情况,选取宫颈癌Ca-Ski细胞进行转染实验,利用脂质体转染法将miR-1-3p模拟物(miR-1-3p mimics)及模拟物对照(NC mimics)分别转染至Ca-Ski细胞,分别记为miR-1-3p mimics组和miR-NC组,将未经转染处理的Ca-Ski细胞记为Blank组(空白对照)。qRT-PCR检测各组Ca-Ski细胞中miR-1-3p的表达,噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,通过生物信息学软件分析和双荧光素酶报告基因实验验证miR-1-3p和TNKS2靶向关系,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中TNKS2蛋白表达。结果 miR-1-3p在宫颈癌细胞中的表达显著低于正常宫颈鳞状细胞(P<0.05)。转染miR-1-3p mimics 48 h后,Ca-Ski细胞中miR-1-3p的表达显著升高(P<0.05)。过表达miR-1-3p能够明显抑制Ca-Ski细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05)。生物信息学软件分析显示miR-1-3p和TNKS2 3’UTR存在结合位点,双荧光素酶报告基因实验显示TNKS2是miR-1-3p的靶基因,Western blot检测结果显示miR-1-3p可抑制TNKS2的表达。结论 miR-1-3p可靶向TNKS2基因抑制宫颈癌Ca-Ski细胞增殖、迁移及侵袭。