Ca^(2+)载体A23187对受精失败人类成熟卵母细胞的补救激活作用

目的 :观察Ca2 + 载体A2 31 87对受精失败人类成熟卵母细胞的补救激活及激活后的胚胎发育情况。方法 :收集常规体外受精 (IVF)及卵浆内单精子注射 (ICSI)后 2 4h仍无受精征象的成熟卵母细胞作为研究对象 ,5μmol/LCa2 + 载体A2 31 87中处理 5min,观察第二极体排出及原核形成情况 ,激活后卵母细胞在体外继续培养 2d。结果 :IVF组及ICSI组卵母细胞激活率分别为 64 9% (2 4 / 37)和 73 2 % (30 / 4 1 )。ICSI组受精失败卵母细胞激活后主要表现为二极体二原核 (2PB +2PN) (80 % ,2 4 / 30 ) ,而IVF组仅有 2 0 %的被激活卵母细胞表现为 2PB +2PN ,两组间差异具极显著 (P <0 0 1 )。 31个 2PN卵母细胞继续培养 ,2 5个发生分裂 ,1 1个发育到 2 - 4细胞 ,8个发育到 4 - 8细胞 ,6个发育到 8-细胞以上阶段。结论 :Ca2 + 载体A2 31 87能够有效地激活ICSI后受精失败卵母细胞恢复受精并继续发育成胚胎。

钙和钙离子载体A23187对水稻早期胚胎离体发育的影响

研究了不同浓度的钙(Ca2+)和钙离子载体A23187对水稻早期胚胎离体发育的影响。结果表明:(1)Ca2+对授粉后3～5d水稻胚胎离体发育的调控具有时间和浓度效应。培养基中不含Ca2+或Ca2+浓度较高(10-1mol/L)时,3d原胚离体分裂和生长完全受到抑制;4～5d早期分化胚受到一定程度的影响;而Ca2+浓度为10-3mol/L时,不同时期的水稻胚胎均表现出最佳的生长速度和最高的离体胚胎发生频率;在相同的钙浓度条件下,胚龄越大,胚胎发生频率及总诱导频率越大。(2)A23187影响水稻胚胎的离体生长和形态发生:胚胎越小,影响越大;浓度越高,抑制作用越强。

Ca^(2+)和cGMP介导的信号转导对大鼠成骨肉瘤细胞株UMR-106C/EBPβ表达的影响

目的:观察Ca2+和cGMP介导的信号转导对大鼠成骨肉瘤细胞株UMR-106的C/EBPβ表达的影响。方法:以Ca2+载体A23187、cGMP类似物CPT-cGMP及CaM阻断剂KN-62等药物作用UMR106细胞株,用WesternBlotting方法检测C/EBPβ的表达。结果:A23187作用后,C/EBPβp35和C/EBPβp20的表达量在一定时间内随着作用时间的延长而增多;CaM-PK抑制剂KN-62可明显抑制A23187的这一作用;且CPTcGMP可使A23187的这一效应增强。结论:Ca2+/CaMPK和cGMP/PKG介导的信号转导能促进UMR-106细胞C/EBPβp35和C/EBPβp20的表达,并呈一定的协同作用。

铁离子对Caco-2细胞内钙离子转运的影响及钙离子浓度变化与细胞凋亡关系的研究

目的 研究细胞外铁离子(Fe3+)浓度变化对钙离子(Caco 2)细胞内Ca2+转运的影响及细胞内钙离子 浓度升高与Caco 2细胞凋亡的关系。 方法 采用激光共聚焦扫描显微镜和流式细胞技术进行观察与检测。 结果 (1)利用激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察发现,随着Caco 2细胞外Fe3+浓度的减少(DFO终浓度为100～ 300μmol L),Ca2+向细胞内的转运量增加;而随着细胞外Fe3+浓度的增加(FAC终浓度为10～100μmol L),Ca2+向细 胞内的转运呈降低趋势;(2)经A23187和Fluo 3 AM处理后Caco 2细胞的存活率较高,达90%以上(用荧光素二醋酸 酯检测);(3)A23187升高Caco 2细胞的胞内Ca2+浓度,呈剂量依赖性;经流式细胞技术(FCM)检测发现胞内Ca2+浓度 增加具有诱导Caco 2细胞凋亡的作用。 结论 Caco 2细胞外Fe3+浓度的减少有促进Ca2+向细胞内转运的作用, 但胞外Fe3+浓度增加时有抑制Ca2+向胞内转运的作用;胞内Ca2+浓度增加对Caco 2细胞凋亡具有诱导作用。

A23187和EGTA对光周期诱导菊花成花及其过程中叶片Ca^(2+)分布和碳水化合物的影响

以切花菊品种‘神马’为试材,研究光周期诱导菊花成花过程中Ca2+载体A23187和Ca2+螯合剂EGTA处理对花芽分化及其过程中叶片Ca2+分布和蔗糖、可溶性糖及淀粉含量变化的影响.结果表明:对照叶片Ca2+含量在花芽未分化期(Ⅰ)处于较低水平,而在花芽分化启动期(Ⅱ)迅速增加并达到高峰,之后下降;Ca2+亚细胞定位表明,在未分化期(Ⅰ)Ca2+沉淀主要分布在液泡、细胞壁和细胞间隙中,细胞质内较少,而在花芽分化启动期(Ⅱ)细胞质内积累大量的Ca2+沉淀.A23187处理的菊花花芽分化开始和结束时间比对照分别提前2d和3d,叶片Ca2+含量比对照显著增加;EGTA处理的叶片Ca2+含量比对照显著减少,花芽分化开始和结束时间分别比对照推迟4d和8d;A23187和EGTA处理的叶片Ca2+在花芽分化启动期(Ⅱ)均向细胞质流入并密集.A23187处理的蔗糖和可溶性糖含量在处理2d时达到峰值,比对照达到峰值的时间提前2d,与Ca2+达到峰值的时间一致,而EGTA处理的蔗糖和可溶性糖含量在处理2d时没有明显变化,8d时才迅速增加达到峰值,即所有处理的蔗糖、可溶性总糖含量在花芽分化启动期(Ⅱ)均增加并达到高峰,之后有所减少,但其在整个花芽分化过程均高于光周期诱导前的含量;对照和A23187处理的淀粉含量在处理2d时开始减少,而EGTA则在处理8d后开始减少,至花芽分化结束所有处理的淀粉含量均保持较低水平(低于诱导前).表明Ca2+和碳水化合物参与了光周期诱导的菊花成花过程.

钙离子载体A23187激活卵母细胞在卵胞质内单精子注射中的应用

目的分析Ca^2+载体A23187对卵胞质内单精子注射(ICSI)受精失败或受精低下患者受精及胚胎发育的影响。方法回顾性自身对照研究分析2010年1月至2018年1月期间在中山大学附属第六医院生殖医学研究中心,因前次ICSI受精失败或低下[双原核(2PN)受精率≤30%],再次行ICSI助孕时采用Ca^2+载体A23187激活的43名患者资料。根据前次受精情况将患者分为受精失败和受精低下组、射出精子组和睾丸精子组,激活周期与既往ICSI周期自身对照。结果受精失败、受精低下、睾丸精子和射出精子各组激活周期的2PN受精率显著高于既往ICSI周期(分别为41.9%比0,P<0.001;44.3%比16.5%,P<0.001;36.5%比13.5%,P=0.004;43.1%比11.1%,P<0.001);受精低下组和射出精子组激活周期每周期可移植胚胎数和优质胚胎数较既往周期提高(P均<0.05);激活周期最终获得9例健康活产婴儿。结论Ca^2+载体A23187辅助激活能够提高既往ICSI受精失败或低下患者的受精率,并能改善使用射出精子ICSI患者的胚胎情况及临床结局。