水蛭对Ang-Ⅱ刺激鼠肝星状细胞活化Ca^(2+)效应的抑制作用

目的研究水蛭药物血清是否具有抑制肝星状细胞(HSCs)胞浆游离钙([Ca^(2+)]i)增高的作用。方法将32只健康SD大鼠按随机数字表随机分为4组肝纤维化模型水蛭组(8只)皮下注射用精制橄榄油配制的40%CCl4溶液9周,然后灌服水蛭6d;肝纤维化模型对照组(8只)皮下注射用精制橄榄油配制的40%CCl4溶液9周,然后灌服0.9%氯化钠溶液6d;正常大鼠水蛭组(8只)仅皮下注射等量的精制橄榄油9周,然后灌服水蛭6d;正常对照组(8只)仅皮下注射等量的精制橄榄油9周,然后灌服0.9%氯化钠溶液6d。结束后,经下腔静脉取血并分离血清。采用盲法用上述10%血清培养HSCs24h并负载好Fluo-3/AM后使用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测HSCs[Ca2+]i。结果(1)经正常大鼠水蛭组及肝纤维化模型水蛭组大鼠血清预处理的HSCs,其[Ca^(2+)]i荧光强度相对值均明显低于肝纤维化模型对照组(P<0.05);且两者与正常对照组间差别也均有显著性意义(P<0.05)。(2)经正常大鼠水蛭组及肝纤维化模型水蛭组大鼠血清预处理HSCs后加入Ang-Ⅱ(1.1×10-7mol/L),HSCs[Ca^(2+)]i荧光强度变化百分数显著低于肝纤维化模型对照组(P<0.01)。结论水蛭能抑制肝星状细胞活化[Ca^(2+)]i的升高,此可能是其发挥抗肝纤维化作用的重要途径之一。

ELF脉冲电磁场对肝癌细胞胞浆Ca^(2+)浓度的影响

研究不同频率和强度的ELF脉冲电磁场对肝癌细胞胞浆Ca2+浓度的影响。结果表明经不同频率和强度的ELF脉冲电磁场作用,有的参数电磁场可使细胞胞浆Ca2+浓度上升明显,有显著统计学意义,有的参数电磁场作用后细胞胞浆Ca2+浓度上升不明显,无统计学意义。经时—频域分析表明:细胞胞浆Ca2+浓度在时-频域内存在固有的连续谱、离散谱的频谱特征。只有频率和强度恰当组合的ELF脉冲电磁场能够对细胞胞浆Ca2+浓度产生影响并呈现出生物学窗效应。

灌注压力对肝移植物活性的影响

为观察灌注压力对肝移植物活性的影响，实验选择ＳＤ大鼠，经门静脉在不同压力下灌注４℃的Ｃｏｌｉｎ’ｓ液以保存肝脏，然后应用高效液相色谱仪检测各组的高能磷酸化合物，制备出肝细胞悬液后采用阳离子测定仪测定肝细胞内游离钙浓度，并同时观察了肝脏的超微结构变化及光镜病理改变。结果发现：随灌注压力的升高，肝脏的能量代谢、肝细胞内游离钙浓度以及超微结构均有明显改变。本实验结果提示：不适当的灌注压力可导致肝脏移植物的能量代谢的变化及肝细胞的钙超载，从而影响肝移植物的活力；为了取得高质量的供肝，应采用低温低压灌注。

过氧化氢对大鼠肝卵圆细胞内游离钙含量的影响

目的研究小剂量(800nmol/L)过氧化氢H2O2诱导培养的大鼠肝卵圆细胞(WB细胞)胞质内游离钙犤Ca2+犦i含量的变化及其机制。方法以800nmol/LH2O2刺激WB细胞,采用Fluo-3/AM作为荧光指示剂,以激光共聚焦扫描显微镜测定不同条件下犤Ca2+犦i荧光值的改变以反映犤Ca2+犦i含量的变化。结果(1)小剂量H2O2可引起犤Ca2+犦i升高,约300s后达到高峰,800s后恢复正常,过氧化氢酶(CAT)可抑制此变化;(2)细胞在无钙外环境下,相同浓度的H2O2不引起犤Ca2+犦i变化;(3)钙拮抗剂心痛定(nifedipine)不能抑制犤Ca2+犦i荧光值的升高,而蒽-9-羧酸(A9C)则可抑制此变化。结论小剂量H2O2刺激WB细胞可诱使犤Ca2+犦i含量升高,其机制可能是H2O2引起细胞膜上非选择性阳离子通道开放使胞外Ca2+进入胞内,造成胞浆内犤Ca2+犦i含量增高。

奥曲肽对大鼠肝星状细胞胞质内游离钙及细胞增殖的影响

目的:探讨在常氧和低氧条件下奥曲肽(octreotide)对大鼠肝星状细胞(HSC)胞内游离钙[Ca2+]i及增殖的调节.方法:采用钙荧光探针(Fura-2/AM)负载培养的大鼠HSC,观察常氧和低氧条件下培养48h后octreotide对HSC[Ca2+]i的调节,同时用四唑盐(MTT)比色法比较不同浓度的octreotide对大鼠HSC增殖的影响.环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)放免分析药盒测cAMP,cGMP浓度.结果:与常氧条件相比,低氧条件下HSC[Ca2+]i显著升高(293.2±12.4nmol/Lvs137.7±7.8nmol/L.P<0.01).500、800和1000μg/Loctreotide在常氧状态下可引起HSCs[Ca2+]i降低(P<0.05),其值分别为92.5±2.5、83.8±2.3和76.6±2.2nmol/L.低氧时500,800和1000gg/Loctreotide可引起HSCs[Ca2+],降低(P<0.01),其值分别为204.3±7.4、174.1±4.8和156.6±6.6nmol/L.常氧对照组A值(0.232±0.016)明显低于低氧对照组(0.533±0.036)(P<0.01);经500、800和1000μg/Loctreotide处理后,无论是常氧还是低氧状态下A值均明显降低(P<0.01).低氧条件下cAMP和cGMP含量不发生改变(P>0.05);无论是常氧还是低氧状态,经过octreotide500μg/L处理后,cAMP和cGMP含量与相应对照组相比增(cAMP:1.69±0.18pmol/mgvs1.10±0.32pmol/mg.1.87±0.30pmol/mgvs1.37±0.25pmol/mg,P<0.05;cGMP:1.08±0.24pmol/mgvs0.86±0.12pmol/mg.1.17±0.53pmol/mgvs0.89±0.20pmol/mg,P<0.05),而Octreotide800,1000μg/L组更高(cAMP:1.99±0.27,2.48±0.37pmol/mgvs1.10±0.32pmol/mg,P<0.01:2.09±0.35.2.24±0.15pmol/mgvs1.37±0.25pmol/mg,P<0.01:cGMp:1.24±0.17,1.31±0.29pmol/mgvs0.86±0.12pmol/mg,P<0.01;1.38±0.29,1.46±0.35pmol/mgvs0.89±0.20pmol/mg,P<0.01).结论:缺氧可通过第二信使系统促进HSC的增生,而Octreotide无论常氧还是低氧条件下剂量依赖性抑制HSCs增殖;cAMP,cGMP参与了对HSC的调节.

丹参对肝星状细胞胞浆游离钙的影响

目的 研究丹参药物血清对肝星状细胞 (HSCs)胞浆游离钙 ([Ca2 + ]i)的影响。方法 制备肝纤维化模型鼠。造模毕 ,药物组以每天 2 0 m l/ kg剂量分 2次灌服丹参 ,对照组灌以等量生理盐水。连续给药 6 d后经下腔静脉取血并分离血清。采用盲法 ,用上述 10 %药物血清培养 HSCs2 4 h,再将经药物血清预处理的细胞及对照组细胞负载 Fluo- 3/ AM后使用激光扫描共聚焦显微镜 (L SCM)检测 [Ca2 + ]i。结果 1正常丹参药物血清及肝纤维化药物血清预处理后均可明显减低活化的 HSCs的 [Ca2 + ]i,其荧光强度相对值与病理模型对照组的差异有统计学意义 (P<0 .0 5 ) ;且两者与正常对照组的差异也有统计学意义 (P<0 .0 5 )。 2正常丹参药物血清预处理后加入血管紧张素 (Ang- ) ,[Ca2 + ]i荧光强度变化百分数显著低于病理模型对照组 (P<0 .0 5 ) ;肝纤维化药物血清组荧光强度变化百分数也显著低于病理模型对照组 (P<0 .0 5 )。结论 丹参能抑制肝星状细胞 [Ca2 + ]i的升高 ,可能是其发挥抗肝纤维化作用的重要途径之一。

益肝康药物血清对大鼠肝星状细胞胞浆游离钙效应的抑制作用

目的研究益肝康药物血清是否具有抑制肝星状细胞(HSCs)胞浆游离钙([Ca2+]i)增高的作用。方法将32只健康雄性SD大鼠按随机数字表分为4组:肝纤维化模型益肝康组(8只)皮下注射用精制橄榄油配制的40%CCL4溶液9周,然后灌服益肝康6d;肝纤维化模型对照组(8只)皮下注射用精制橄榄油配制的40%CCL4溶液9周,然后灌服0·9%氯化钠溶液6d;正常大鼠益肝康组(8只)皮下注射等量精制橄榄油9周,然后灌服益肝康6d;正常对照组(8只)皮下注射等量精制橄榄油9周,然后灌服0·9%氯化钠溶液6d。结束后经下腔静脉取血并分离血清。用盲法,采用上述10%血清培养HSCs24h并负载好Fluo-3/AM后,使用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测HSCs[Ca2+]i。结果(1)经正常大鼠益肝康组及肝纤维化模型益肝康组大鼠血清预处理的HSCs,其[Ca2+]i荧光强度相对值均明显低于肝纤维化模型对照组(P<0·05);且两者与正常对照组间差别均有显著性意义(P<0·05)。结论益肝康能抑制肝星状细胞[Ca2+]i的升高,这可能是其发挥抗肝纤维化作用的重要途径之一。

去氧肾上腺素对肝细胞内游离钙分布的影响

目的 探讨去氧肾上腺素对肝细胞内游离钙分布的影响。方法 应用激光扫描共聚焦显微镜观察去氧肾上腺素单独或在酚妥拉明预处理后对肝细胞作用所引起的细胞内荧光强度的变化。结果 去氧肾上腺素对肝细胞作用后可引起细胞内荧光强度的迅速增强。而在酚妥拉明预处理肝细胞后细胞内荧光强度的变化不显著。同时肝细胞内荧光强度的不均匀分布亦表明游离钙的分布存在着亚分区现象。结论 去氧肾上腺素可通过α受体介导肝细胞内钙信号的变化 。

水飞蓟宾单用及合用肝龙含药血清对HSC的影响及机制研究

目的:研究水飞蓟宾单用及合用肝龙含药血清对大鼠肝星状细胞增殖活性的影响及机制。方法:通过血清药理学方法制备含药血清,采用MTT法检测水飞蓟宾单用及合用肝龙含药血清对肝星状细胞增殖的影响,并用激光共聚焦测定其细胞内钙离子浓度的变化。结果:与单用水飞蓟宾相比,水飞蓟宾合用肝龙含药血清作用肝星状细胞24、48、72 h能够显著抑制肝星状细胞的增殖(P<0.01);30%水飞蓟宾联合肝龙(7.5%、15%、30%)含药血清在一定程度上可使细胞内游离Ca^(2+)浓度降低。结论:肝龙能增强水飞蓟宾在体外对肝星状细胞的抑制作用,且其作用机制可能与降低细胞内Ca^(2+)浓度有关。