脾气虚大鼠肝组织三磷酸腺苷酶活性和CaMKⅡ通路CaM、CaMKⅡ蛋白表达的变化

目的观察脾气虚大鼠肝组织三磷酸腺苷酶活性和CaMKⅡ通路关键分子[Ca2+]i以及CaM、CaMKⅡ、p-Ca MKⅡ蛋白表达水平的变化。方法受试动物随机分为4组,即空白对照组,脾气虚模型7 d、14 d、21d组,每组12只。除空白对照组外,其余受试动物采用复合法(苦寒破气法、游泳力竭法及饥饱失常法)成功建立脾气虚证大鼠模型,在观测各组大鼠一般生存状态和肝组织ATP酶活性的基础上,采用激光共聚焦技术检测肝组织细胞内[Ca2+]i浓度,蛋白免疫印迹技术检测肝组织CaM、CaMKⅡ和p-CaMKⅡ的表达变化。结果与空白组比较,脾气虚大鼠随着造模时间的延长,一般生存状况渐差,肝组织Na+-K+-ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase活性均降低(P<0.05,P<0.01);肝组织[Ca2+]i浓度和CaM、CaMKⅡ、p-Ca MK Ⅱ蛋白表达量显著降低(P<0.01);且脾气虚模型7 d、14 d、21 d组之间比较,以脾气虚21 d组变化更为显著。结论脾气虚大鼠肝组织Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性和[Ca2+]i浓度降低,并且CaMKⅡ信号通路关键分子CaM、CaMKⅡ和p-CaMKⅡ蛋白表现为低表达。

枳实生品及麸炒品对脾虚大鼠肝组织物质能量代谢酶活性及CaMKⅡ通路CaM、CaMKⅡ蛋白表达的比较研究

目的:观察枳实生品及麸炒品提取液对脾虚大鼠肝组织能量代谢相关酶活性及对CaMKⅡ通路CaM、CaMKⅡ蛋白表达水平的影响。方法:SD大鼠随机分为7组,空白对照组,利血平模型组,阳性药组,枳实生品高、低剂量组及枳实麸炒品高、低剂量组。除空白对照组外,其余各组均采用利血平注射制成脾虚模型。测定各组大鼠肝匀浆中物质能量代谢相关指标的活性差异,采用蛋白免疫印迹法比较研究肝组织中CaM、CaMKⅡ及p-CaMKⅡ蛋白表达差异。结果:与模型组比较,枳实麸炒品高剂量组钠钾ATP酶(Na+-K+-ATPase)活性升高;枳实麸炒品高、低剂量组钙镁ATP酶(Ca 2+-Mg 2+-ATPase)活性升高;枳实麸炒品高剂量组柠檬酸合成酶(CS)及异柠檬酸脱氢酶(ICD)均升高;枳实生品低剂量组CaM蛋白表达量升高;枳实麸炒品高剂量组CaMKⅡ表达量升高;枳实生制品高、低剂量组p-CaMKⅡ蛋白表达量均升高。结论:枳实麸炒品不论在三磷酸腺苷酶活性或是CaMK II信号通路关键分子蛋白表达方面均较生品有显著提高,说明麸炒品能更好改善脾虚大鼠症状。

头穴丛刺结合康复训练对脑缺血再灌注大鼠肠道菌群及CaM/CaMKⅡ信号通路的影响

目的观察头穴丛刺结合康复训练对脑缺血再灌注大鼠肠道菌群及CaM/CaMKⅡ信号通路的影响。方法将大鼠随机分为假手术组(sham组)、脑缺血再灌注损伤模型组(CIRI组)、头穴丛刺组(SCA组)(头穴丛刺干预,1次/日,连续14 d)、康复训练组(RT组)(跑台训练,30 min/次/日,连续14 d)和头穴丛刺联合康复训练组(SCA+RT组)(头穴丛刺干预,同时进行跑台训练),每组12只。分别于造模成功后3、7、14 d对大鼠进行神经功能评分;干预14 d后采用TTC染色检测脑梗死面积,ELISA检测脑组织中COX2、NOS2水平,16S-rDNA测序检测结肠内容物肠道菌群变化,Western blot检测脑组织中CaM、CaMKⅡ蛋白表达情况。结果CIRI组大鼠神经功能评分,脑梗死面积,脑组织中COX2、NOS2含量,CaM、CaMKⅡ蛋白水平及OUT水平的Simpson指数均显著高于sham组,OUT水平的Shannon指数、Ace指数、Chao指数均显著低于sham组(均P<0.05);与CIRI组相比,SCA组、RT组和SCA+RT组大鼠神经功能评分,脑梗死面积,脑组织中COX2、NOS2含量,CaM、CaMKⅡ蛋白相对表达量,以及OUT水平的Simpson指数均显著降低,OUT水平的Shannon指数、Ace指数、Chao指数均显著升高(均P<0.05),且以SCA+RT组变化更显著。与sham组相比,CIRI组拟杆菌门、放线杆菌门、脱硫弧菌门、厚壁菌门、双歧杆菌属、norank-f-Muribaculaceae、杜氏杆菌属、拟普雷沃菌属、红蝽菌属_UCG-002、普雷沃菌属菌落相对丰度显著降低,变形菌门菌落、贺菌群属菌落对丰度显著升高(均P<0.05);与CIRI组相比,SCA组、RT组和SCA+RT组拟杆菌门、放线杆菌门、脱硫弧菌门、厚壁菌门、双歧杆菌属、norank-f-Muribaculaceae、杜氏杆菌属、拟普雷沃菌属、红蝽菌属_UCG-002、普雷沃菌属菌落相对丰度显著升高,变形菌门菌落、贺菌群属相对丰度显著降低(均P<0.05),且以SCA+RT组变化更显著。结论头穴丛刺结合康复训练可改善脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能,调节肠道菌群失调,抑制CaM/CaMKⅡ信号通路的活化,从而对脑组织发挥保护作用。

低浓度铅接触大鼠海马突触损伤和学习记忆能力改变及中药的干预作用

【目的】从海马突触损伤、CaMK Ⅱ表达等方面探讨低浓度铅接触行为记忆改变及中药的干预机制。【方法】40只大鼠随机分为4组:空白组饮双蒸水;其他3组饮水中均添加0.02%醋酸铅,中药高低剂量组分别按驱铅丸3.5 g/(kg.d)和2.0 g/(kg.d)的剂量2 ml/d灌服。60 d后,进行Morris水迷宫试验,检测全血、脑组织铅含量;海马组织电镜观察,RT-PCR法和免疫组织化学方法检测脑组织CaMK Ⅱ mRNA及其蛋白表达。【结果】与空白组比较,模型组血铅、脑铅含量显著增高(P<0.01),与模型组比较驱铅丸高剂量组脑铅、血铅含量显著降低(P<0.05);Morris水迷宫试验结果提示模型组大鼠空间定位航行能力下降(P<0.05),中药干预组定位能力较模型组明显提高(P<0.001);模型组CaMK Ⅱ mRNA及其蛋白表达显著降低(P<0.05),与模型组比较高剂量组CaMK Ⅱ mRNA及其蛋白表达显著增高(P<0.05);电镜结果显示驱铅丸能缓解铅导致的海马区神经细胞变性与凋亡。【结论】驱铅丸可以改善铅接触大鼠的记忆障碍,其机理与减缓神经细胞的炎性变及凋亡、增强海马区CaMK Ⅱ mRNA及其蛋白表达等有关。