柯里拉京体内外诱导口腔鳞癌CAL-27细胞凋亡及机制探讨

目的:观察柯里拉京(corilagin)对人舌鳞癌CAL-27细胞增殖和凋亡的作用,探讨诱导其凋亡的分子机制。方法:体外实验采用不同浓度的柯里拉京预处理CAL-27细胞,通过CCK-8法及平板克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;qRT-PCR和Western印迹法检测对细胞中Bax、Bcl-2、Caspase-3、Cleaved Caspase-3mRNA及蛋白表达水平的影响。通过CAL-27细胞构建裸鼠移植瘤模型,检测柯里拉京的体内抗肿瘤效果。采用GraphPad Prism 8.0软件包对数据进行统计学分析。结果:体外实验结果显示,柯里拉京以浓度依赖性方式抑制CAL-27细胞增殖,诱导细胞凋亡;在mRNA和蛋白水平上上调Bax、Caspase-3和Cleaved Caspase-3,下调Bcl-2,差异均有统计学意义(P<0.05)。体内实验表明,与对照组相比,柯里拉京组可显著减小裸鼠瘤体体积(P<0.05)。结论:柯里拉京在体内和体外均能显著抑制人舌鳞癌CAL-27细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与调控Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路有关。

miR-222-3p对口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的探讨微小RNA-222-3p(miR-222-3p)对口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法采用qRT-PCR检测口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞和正常口腔角质细胞株(hNOK)中miR-222-3p的表达,培养CAL-27细胞并分为对照组(NC组)、inhibitor NC组(转染阴性对照质粒)和miR-222-3p inhibitor组(转染miR-222-3p inhibitor)。分别采用MTT法、流式细胞术及Trasnwell法检测细胞增殖、凋亡及侵袭能力变化,蛋白质印迹法检测BAX、Bcl-2、MMP-2、N-cadherin及E-cadherin的表达。结果CAL-27细胞中miR-222-3p的表达水平显著高于hNOK细胞(P<0.05)。与inhibitor NC组和NC组相比,miR-222-3p inhibitor组CAL-27细胞的凋亡率显著升高,增殖、侵袭能力显著降低(P<0.05),且Bcl-2、MMP-2和N-cadherin蛋白表达水平显著降低,BAX和E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论miR-222-3p在CAL-27细胞中高表达,下调miR-222-3p可抑制CAL-27细胞的增殖和侵袭能力,并促进细胞凋亡。

红景天苷对人舌鳞状细胞癌CAL-27细胞增殖、凋亡、周期及迁移的影响

目的研究红景天苷对人舌鳞状细胞癌CAL-27细胞体外增殖及迁移的影响。方法用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞检测术、Western?blot、Transwell小室实验等探究红景天苷对人舌鳞状细胞癌CAL-27细胞增殖、凋亡、周期及迁移的影响。结果红景天苷对CAL-27细胞的增殖抑制作用与浓度-时间呈正相关(P<0.05);不同浓度红景天苷处理组凋亡发生率的差异均有意义(P<0.05),且与浓度呈正相关;红景天苷对CAL-27细胞周期产生显著影响,诱导其发生G_0/G_1期阻滞;随着红景天苷浓度的增加,CAL-27细胞迁移能力显著降低(P<0.05)。结论红景天苷对人舌鳞状细胞癌CAL-27细胞的增殖、凋亡、周期及迁移产生影响,具有显著的体外抑制作用。

FAK基因沉默对人舌鳞癌细胞CAL-27增殖与迁移能力的影响

目的探讨运用RNA干扰技术沉默FAK基因表达对人舌鳞癌细胞株CAL-27增殖与迁移能力的影响。方法使用si RNA干扰技术瞬时转染构建FAK si RNA。将实验细胞分为空白对照组、阴性对照组和实验组。运用q PCR和Western blotting法检测FAK m RNA和蛋白的表达情况,MTT法检测细胞的增殖情况,Transwell小室法研究细胞的迁移能力。结果 q PCR和Western blotting实验结果显示,实验组细胞FAK m RNA和蛋白表达量明显低于空白对照组和阴性对照组(Pm RNA<0.01,P蛋白<0.05);MTT实验结果显示在48和72 h时,空白对照组和阴性对照组的吸光度值均明显高于实验组(P<0.01);Transwell实验结果显示实验组穿膜迁移细胞数明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。结论沉默FAK基因表达可有效抑制人舌鳞癌CAL-27细胞的增殖和迁移能力。

人脐带间充质干细胞对舌鳞状细胞癌Cal-27细胞侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells,HUC-MSCs)对舌鳞状细胞癌Cal-27细胞侵袭和迁移能力的影响。方法:细胞划痕实验检测HUC-MSCs分泌的细胞因子对Cal-27细胞迁移能力的影响;Transwell小室比较共培养前后Cal-27细胞的侵袭和迁移能力;逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测共培养前后Cal-27细胞的侵袭、迁移相关基因的表达水平;Western blot技术检测肿瘤侵袭转移相关蛋白分子基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2和MMP-9的蛋白表达的情况。结果:条件培养基培养的Cal-27细胞的迁移距离短于对照组;共培养后Cal-27细胞的侵袭和迁移细胞数目减少;侵袭迁移相关基因、蛋白的表达水平下调。结论:HUC-MSCs与Cal-27细胞共培养可以抑制Cal-27细胞的侵袭和迁移。

三氧化二砷对人舌鳞癌细胞CAL-27侵袭能力的影响

目的检测三氧化二砷对人舌鳞癌细胞CAL-27体内、外侵袭能力的影响并探讨其相关作用机制。方法体外采用黏附实验、划痕实验、Transwell侵袭实验、免疫荧光染色和蛋白质印迹法检测三氧化二砷对CAL-27细胞黏附、迁移及侵袭能力的影响;体内采用免疫组织化学和蛋白质印迹法检测三氧化二砷对裸鼠移植瘤中CD44和基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9表达的影响。结果三氧化二砷作用后,实验组CAL-27细胞的黏附、迁移及侵袭能力明显低于对照组(P<0.05),细胞骨架微丝解聚,微管结构模糊、紊乱,MMP-2和MMP-9的表达下降;三氧化二砷降低了裸鼠移植瘤中CD44、MMP-2和MMP-9的表达。结论低浓度的三氧化二砷可降低人舌鳞癌细胞CAL-27细胞黏附能力,改变细胞骨架排列,下调CD44、MMP-2和MMP-9的表达,进而抑制癌细胞的侵袭能力。

miR-30a-5p对口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞的影响及分子机制

目的:探讨miR-30a-5p对人口腔鳞状细胞癌(OSCC) CAL-27细胞的增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化(EMT)的影响,并探讨其分子机制。方法:人OSCC CAL-27细胞转染后,设置为miR-30a-5p mimic组(miR-30a-5p的模拟物)、NC mimic组(阴性对照模拟物)、NC inhibitor组(阴性对照抑制剂)及miR-30a-5p inhibitor组(miR-30a-5p的抑制剂),同时设未转染CAL-27细胞为Control组;采用实时荧光定量PCR检测各组细胞miR-30a-5p基因表达,采用Western blot实验检测各组细胞EMT上皮标志物E-cadherin和间质标记物N-cadherin的蛋白表达,采用3-(4,5二甲基噻唑-2)-2,5二苯基四氮唑溴盐(MTT)法、划痕实验及Transwell实验分别检测各组细胞的细胞活力、迁移能力和侵袭能力。结果:miR-30a-5p mimic组CAL-27细胞miR-30a-5p表达较NC mimic组明显上调,miR-30a-5p inhibitor组较NC inhibitor组表达明显下降(P <0. 01);miR-30a-5p mimic组CAL-27细胞OD值较NC mimic组下降,miR-30a-5p inhibitor组较NC inhibitor组上调(P <0. 05);miR-30a-5p mimic组CAL-27细胞的迁移率较NC mimic组明显下降,miR-30a-5p inhibitor组较NC inhibitor组明显上调(P <0. 01);miR-30a-5p mimic组CAL-27细胞侵袭数较NC mimic组明显下降(P <0. 01),miR-30a-5p inhibitor组较NC inhibitor组上调(P <0. 05);miR-30a-5p mimic组CAL-27细胞EMT上皮标志物E-cadherin表达较NC mimic组明显上调、间质标志物N-cadherin的表达较NC mimic组明显下调(P <0. 01),miR-30a-5p inhibitor组E-cadherin表达较NC inhibitor组明显下调、N-cadherin表达较NC inhibitor组明显上调(P <0. 01)。结论:MiR-30a-5p可抑制OSCC CAL-27细胞增殖、迁移及侵袭能力,其机制可能与miR-30a-5p抑制CAL-27细胞EMT转化有关。

沉默Icmt基因对舌鳞癌CAL-27和SCC-4细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的 :探讨异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(isoprenylcysteine carboxyl methyltransferase,Icmt)对舌鳞癌CAL-27和SCC-4细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及其相关机制。方法:针对人Icmt基因序列设计并构建3条小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),采用脂质体载体瞬时转染Icmt-siRNA抑制舌鳞癌CAL-27和SCC-4细胞Icmt表达,将实验组分为Icmt-siRNA-1组、Icmt-siRNA-2组、Icmt-siRNA-3组;同时将脂质体转染NC-siRNA作为阴性对照组,只加转染试剂作为空白对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质免疫印记法(Western blot)检测转染后各组细胞Icmt、K-Ras的mRNA和蛋白表达及K-Ras膜蛋白的表达;Western免疫印迹检测Cyclin D1、p21、Akt、p-Akt蛋白表达;细胞增殖活性检测试剂盒和流式细胞术检测细胞的增殖活性、周期变化和凋亡能力。应用GraphPad Prism 8.2.1软件对实验数据进行统计学分析。结果:qRT-PCR和Western免疫印迹检测结果显示,与对照组相比,实验组Icmt mRNA和蛋白表达显著下降(P<0.05),K-Ras mRNA和蛋白表达无显著差异(P>0.05),K-Ras膜蛋白表达显著下降(P<0.05);周期相关蛋白Cyclin D1表达显著下调,p21表达显著上调(P<0.05);Ras/PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白Akt表达无统计学差异(P>0.05),但p-Akt表达显著下降(P<0.05)。细胞增殖活性检测结果表明,与对照组相比,实验组细胞增殖能力显著下降(P<0.05);流式细胞术检测结果表明,实验组细胞凋亡水平较对照组显著增加,细胞周期被阻滞在G1/S期(P<0.05)。结论:体外沉默Icmt基因可有效抑制CAL-27和SCC-4细胞增殖且诱导凋亡,其作用可能是通过影响K-Ras膜蛋白靶向膜定位,负性调控细胞周期和下调Ras/PI3K/Akt/mTOR信号通路而实现。

口腔鳞癌细胞CAL-27行SLC7A11-AS1调控miR-429对其细胞增殖、凋亡及迁移的影响

探讨通过 SLC7A11-AS1 对 miR-429 的调控对口腔鳞癌细胞 CAL-27 细胞增殖、凋亡与迁移的影响。 方法:选取 2020 年 1 月到 2020 年 12 月期间本院收治的 32 例口腔鳞癌患者,提取其口腔鳞癌与癌旁组织进行实施荧光定量实验、细胞凋亡与迁移实验,分析 SLC7A11-AS1 与 miR429 的关系。 结果:口腔鳞癌组织中 SLC7A11-AS1 表达水平高于癌旁组织,miR-429 表达水平低于癌旁组织;在不同分组中,SLC7A11-AS1 与 miR-429 的表达水平有显著的差异;si-SLC7A11-AS1 组别中 CAL-27 凋亡率显著高于 si-NC,迁移细胞数低于 si-NC;si-SLC7A11-AS1+anti-miR-429 组别中 CAL-27 凋亡率明显低于 si-SLC7A11-AS1+anti-miR-NC,迁移细胞数较高,P<0.05。 结论:通过 SLC7A11-AS1 调控 miR-429 能够影响到口腔鳞癌细胞 CAL-27 的增殖、凋亡与迁移。

电离辐射对人舌鳞癌CAL-27细胞影响的生物信息学分析

通过生物信息学方法分析不同辐射源照射对人舌鳞癌CAL-27细胞基因表达谱的影响,为临床筛选口腔肿瘤放射治疗相关分子标志物提供参考.利用X射线和重离子照射CAL-27细胞,运用克隆存活实验及流式细胞术检测细胞存活率及凋亡率;进一步应用高通量测序技术筛选受照射细胞差异表达的miRNAs,并对差异表达基因进行生物学功能及代谢通路富集分析,以探讨其分子损伤机理.结果表明,X射线及重离子照射CAL-27细胞后,细胞存活率分别为88%、71%,细胞凋亡率分别为13.9%、30.4%.通过高通量测序技术检测分析发现,与X射线辐照组相比,重离子辐照组共有33个miRNAs表达差异,其中有12个miRNAs表达上调,21个miRNAs表达下调;通过KEGG(Kyoto encyclopedia of genes and genomes)数据库在表达差异的miRNAs中筛选出了15条相关信号通路,如嗅觉传导通路、细胞因子受体交互通路、丝裂原活化蛋白激酶信号通路等.结果提示,在相同吸收剂量条件下,相比于X射线,重离子辐射对CAL-27细胞miRNA表达谱的影响较大,其变化机理可能与MAPK信号传导通路有关.

miRNA-32-5p对EZH2基因的靶向调控以及对口腔癌细胞CAL-27增殖的影响

目的:构建miR-32-5p慢病毒载体,研究其对EZH2基因的靶向调控作用以及对CAL-27细胞增殖作用的影响。方法:分别构建p Sico R-miR-32-5p及p MIR-Report-EZH2过表达载体,应用双荧光素酶报告基因系统、Western免疫印迹及实时定量荧光PCR方法验证miR-32-5p与EZH2的靶向调控关系,应用MTT法检测过表达miR-32-5p后对CAL-27细胞的增殖调节作用,采用SPSS20.0软件包对数据进行统计学分析。结果:成功构建了p Sico R-miR-32-5p及p MIR-Report-EZH2重组质粒,并证实miR-32-5p过表达可明显抑制EZH2的蛋白及m RNA的表达水平(P<0.05);抑制miR-32-5p的表达,则明显上调EZH2的蛋白及m RNA的表达水平(P<0.05);MTT结果显示,miR-32-5p可显著抑制CAL-27的增殖。结论 :miR-32-5p可通过靶向作用于EZH2-3’UTR的特异序列,直接抑制EZH2基因的表达并调控CAL-27细胞的增殖。

二烯丙基二硫对口腔鳞癌CAL-27细胞增殖及凋亡的研究

目的探讨二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对口腔鳞癌CAL-27细胞的增殖抑制及促进凋亡的作用。方法体外培养口腔鳞癌CAL-27细胞,采用不同浓度二烯丙基二硫对CAL-27细胞进行干预,并设立对照组,采用倒置显微镜观察细胞的形态学改变,MTT法检测细胞的增殖情况,Hoechst33342染色法检测细胞凋亡,用比色法检测caspase-3活性的改变。结果倒置相差显微镜下观察对照组的细胞贴壁,形态呈多边形,生长活跃;实验组细胞形态改变,细胞脱壁,变小、变圆,细胞膜皱缩。MTT结果显示,随着浓度的增加,时间的延长,二烯丙基二硫对CAL-27细胞的生长及增殖有显著的抑制作用,并且各实验组相比及实验组与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。荧光显微镜下观察到经Hoechst33342染色的凋亡细胞。实验组caspase-3活性较正常对照组明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论二烯丙基二硫体外能抑制CAL-27的细胞增殖,呈一定的时间及剂量依赖性,并且诱导细胞凋亡,caspase-3可能参与了细胞凋亡的调控。

具核梭杆菌感染的巨噬细胞对人舌鳞癌细胞系Cal-27细胞增殖与迁移的影响

目的:观察具核梭杆菌(F.nucleatum)诱导的巨噬细胞对人舌鳞癌细胞系Cal-27细胞增殖、迁移的影响。方法:F.nucleatum以感染复数(MOI)100∶1,刺激THP-1细胞来源的巨噬细胞,24 h后收集细胞条件培养液,以THP-1细胞及THP-1细胞来源巨噬细胞的条件培养液为对照。将获得的各组条件培养液与Cal-27细胞共培养,CCK-8法检测各组细胞增殖水平的变化,划痕实验检测Cal-27细胞迁移能力的变化。ELISA检测各组条件培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素(IL)-6表达水平。结果:与2个对照组相比,F.nucleatum诱导的巨噬细胞培养液上清使Cal-27细胞增殖减少(P<0.05),相对迁移率增高(P<0.05)。F.nucleatum刺激巨噬细胞后,条件培养液中TNF-α和IL-6水平均较刺激前明显增加(P<0.05)。结论:F.nucleatum感染能促进巨噬细胞分泌TNF-α和IL-6,进而可能促进Cal-27细胞迁移,抑制其增殖。

和厚朴酚对人舌癌CAL-27细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的探讨和厚朴酚(HNK)对人舌鳞癌CAL-27细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法采用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养CAL-27细胞。并将其分为对照组和3个实验组,实验组分别加入20、40、60μmol/L的HNK进行处理。用MTT法检测不同浓度和厚朴酚对CAL-27细胞增殖的影响;划痕实验观察CAL-27细胞迁移能力;Hoechst33342荧光染色法和Annexin VFITC/PI法检测CAL-27细胞凋亡数及凋亡率;Western blot检测CAL-27细胞内p-Pi3k、p-Fak、Fak、MMP2、MMP9、p-Akt、Akt、Bax、Bcl-2和Cleaved-Caspase-3的蛋白表达量。结果 HNK(0、20、40、60μmol/L)处理24 h后CAL-27细胞增殖、迁移能力减弱;且随HNK浓度增大细胞凋亡数升高,凋亡率分别为(6.53±1.80)%、(15.24±2.06)%、(35.03±2.42)%、(48.13±4.61)%,细胞内p-Pi3k、p-Fak、p-Akt、MMP2、MMP9和Bcl-2蛋白表达量减少而Bax、Cleaved-Caspase-3蛋白表达量增加(P<0.01)。结论 HNK能抑制CAL-27细胞体外增殖及迁移,同时还能诱导其凋亡,作用机制可能与调控细胞内p-Pi3k、p-Fak、p-Akt、MMP2、MMP9、Bax、Bcl-2和Cleaved-Caspase-3的蛋白表达量有关。

体外二维和三维立体培养的CAL-27差异表达蛋白的筛选

目的:比较体外二维和三维培养的CAL-27的蛋白表达,试图获得CAL-27立体培养和平面培养之间蛋白质表达的差异。方法:将CAL-27分别进行体外二维与三维培养,提取细胞总蛋白质,蛋白质样品通过双向电泳分离,扫描获得数字化的电泳凝胶图像并用PDquest图像分析软件比较分析,识别二维和三维培养CAL-27间的差异蛋白质点。实验在相同条件下重复3次。结果:二维和三维培养的CAL-27抽提的总蛋白质,经双向电泳、凝胶扫描、图像PDQuest软件分析、鉴定,发现蛋白质表达有差异,二维培养的口腔鳞状细胞癌细胞双向电泳凝胶图像上有1875个蛋白质点;三维培养的口腔鳞状细胞癌有1630个蛋白质点,重合的蛋白质点有867个,两者差异明显的蛋白质点38个。结论:三维立体培养与二维培养的CAL-27相比,存在明显的蛋白质表达差异,这些差异表达的蛋白质,值得深入研究。

新城疫病毒D90杀伤口腔鳞癌细胞系CAL-27机制的研究

目的探讨新城疫病毒(NDV)D90杀伤口腔鳞癌细胞系CAL-27的机制。方法 CAL-27细胞用稀释10倍的D90病毒作用0、12、24、36 h后用以Annexin V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(PI)双染色流式细胞术检测NDV D90对口腔鳞癌细胞系CAL-27细胞凋亡情况的影响,接种于24孔板中的CAL-27细胞用稀释10倍的D90病毒作用12 h,4',6-二脒基-2-苯基吲哚荧光染色检测NDV D90对CAL-27细胞作用前后细胞形态学的变化;用稀释10倍的病毒与细胞分别共同孵育12、24、36 h,同时设置对照组。使用BCA蛋白测定试剂盒的裂解物中的蛋白质含量进行测定。免疫蛋白印迹法检测NDV D90作用CAL-27细胞后对凋亡相关蛋白表达量的影响。结果 NDV D90能引起细胞CAL-27的凋亡,并且凋亡率随着病毒作用的时间增加而升高[0 h,12 h,24 h,36 h的凋亡率分别为(3.68±1.50)%、(19.22±0.99)%、(82.80±0.74)%、(99.69±0.13)%];D90作用于CAL-27后细胞核出现凋亡的相关形态改变,如核固缩以及核碎裂;随着病毒作用时间的增加,细胞色素C蛋白表达水平升高,胱天蛋白酶3前体蛋白(procaspase-3)以及procaspase-9蛋白表达水平降低,procaspase-8蛋白表达水平没有明显变化,同时未检测到肿瘤坏死因子α蛋白的表达。结论 NDV D90毒株能引起人口腔鳞癌细胞系CAL-27的凋亡,且凋亡率呈时间依赖性;NDV D90引起CAL-27细胞凋亡主要是通过线粒体途径,死亡受体途径没有被激活或者作用非常小。

塞莱昔布对舌鳞癌细胞Cal-27增殖的抑制作用

目的探讨塞莱昔布(celecoxib,CELE)对舌鳞癌细胞Cal-27增殖的抑制作用及其机制。方法CCK-8检测不同浓度(10、20、40、60、80、100μmol/L)CELE作用24 h、48 h后对舌鳞癌细胞Cal-27的细胞毒性,依据CELE的浓度,分为对照组(0μmol/L)与实验组(10、20、40μmol/L)。采用Transwell检测细胞侵袭性;荧光定量PCR(qPCR)检测c-Myc、细胞周期蛋白(Cyclin D1)的mRNA的表达水平;Western blot法检测经不同剂量(10、20、40μmol/L)CELE给药作用24 h后,以及经40μmol/L的CELE给药作用6、12、24 h后Cal-27细胞的蛋白酪氨酸磷酸酶(phosphate and tension homology deleted on chromsome ten,PTEN)、磷酸化蛋白激酶B(phos-pho-protein kinase B,p-AKT)(Thr308)、原癌基因蛋白c-Myc、G1/S-特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1)等蛋白的表达。结果不同浓度的CELE对舌鳞癌细胞Cal-27的增殖均具有抑制作用,CELE浓度越高对Cal-27增殖的抑制作用越显著,40μmol/L CELE作用24、48 h后细胞存活率分别为80%、75%。4组侵袭细胞数比较,对照组>10μmol/L CELE组>20μmol/L CELE组>40μmol/L CELE组;不同浓度的CELE给药作用后,舌鳞癌细胞Cal-27中c-Myc、Cyclin D1 mRNA的表达水平显著降低,p-AKT(Thr308)、c-Myc、Cyclin D1等蛋白表达降低,PTEN蛋白表达升高。结论CELE对舌鳞癌细胞Cal-27增殖具有抑制作用,其作用机制可能是通过激活PTEN信号通路抑制c-Myc、Cyclin D1等增殖信号因子的表达。

二甲双胍对于人口腔鳞癌SCC-4和CAL-27细胞株的抑制作用

目的:探讨二甲双胍对于人口腔鳞癌SCC-4和CAL-27细胞的抑制作用。方法:对口腔鳞癌SCC-4细胞株和CAL-27细胞株进行复苏、培养和传代处理,运用MTT检测法、流式细胞术检测法、Western blot检测法,观察二甲双胍对人口腔鳞癌SCC-4和CAL-27细胞的体外增殖能力、细胞活性、克隆形成以及生长周期的影响。结果:SCC-4和CAL-27在二甲双胍干预48 h后细胞活性降低,且呈现明显的浓度依赖性;SCC-4和CAL-27在5 mmol/L浓度的二甲双胍干预12、24、48 h后,G0/G1期所占比例随时间推移而逐渐增高(P<0.05),但S期和G2/M期所占的比例却减小(P<0.05);SCC-4和CAL-27经二甲双胍处理2周后,细胞的克隆数显著减少,且呈现明显的浓度依赖性(P<0.05);SCC-4和CAL-27经5 mmol/L二甲双胍干预后,AMPKa憐酸化水平(Thrl72)显著提升,mTOR及其下游直接作用分子p-m TOR(Ser2448)、p-S6Kl(Thr389)、p-4E-BPl(Thr37/46)表达量显著下降,且有时间依赖性。结论:二甲双胍主要通过激活AMPK信号通路而抑制m TOR信号通路,来抑制口腔鳞癌SCC-4和CAL-27细胞的细胞活性,细胞增殖和克隆形成,使口腔鳞癌SCC-4和CAL-27细胞生长阻滞在G0/G1期,从而达到治疗口腔鳞癌的目的。

β肾上腺素受体在舌癌CAL-27细胞系的表达及β受体阻滞剂对其增殖、迁移、侵袭的影响

目的:研究舌癌CAL-27细胞系中β-AR的表达及β受体阻滞剂对其增殖、迁移、侵袭的影响。方法:采用Pan CK抗体对培养的正常口腔上皮细胞进行鉴定;免疫组织化学法及qRT-PCR法检测β-AR在舌癌CAL-27细胞的表达;CCK-8法、细胞划痕实验、Transwell法分别检测普萘洛尔及美托洛尔对CAL-27细胞增殖、迁移、侵袭的影响。采用SPSS16.0软件包对数据进行统计学分析。结果:β1-AR、β2-AR在CAL-27细胞的表达均显著高于正常口腔上皮细胞(P<0.05);β2-AR在CAL-27细胞的mRNA水平表达低于正常口腔上皮细胞而β1-AR表达高于正常口腔上皮细胞;两种药物对CAL-27细胞增殖均有抑制作用,药物浓度>50μmol/L时,普萘洛尔抑制增殖的作用更强(P<0.05);2种药物浓度>2.5μmol/L,对CAL-27细胞迁移均有抑制作用,普萘洛尔的抑制作用更强;药物浓度>1.0μmol/L,2种药物对CAL-27细胞侵袭均有抑制作用(P<0.05),普萘洛尔对CAL-27细胞迁移抑制作用更强。结论 :在舌癌CAL-27细胞中,β1-AR在mRNA水平的表达高于正常口腔上皮细胞而β2-AR的表达低于正常口腔上皮细胞;低浓度普萘洛尔及美托洛尔对CAL-27细胞的增殖无明显抑制作用,但能抑制CAL-27的迁移和侵袭。

α桐酸对舌鳞状细胞癌CAL-27细胞的体外抑制作用

目的:探讨苦瓜籽油中的α桐酸(α-eleostearic acid,α-ESA)对舌鳞状细胞癌CAL-27细胞增殖、迁移、凋亡的影响。方法:将0、70、80、90、100、110、120μmol/L的α-ESA培养CAL-27细胞后,用CCK-8法和流式细胞术分别检测加药24、48、72 h后细胞增殖抑制率和加药48 h后细胞凋亡率。再分别以0、80、100μmol/L的α-ESA培养CAL-27细胞不同时间后,用细胞划痕实验检测加药24 h后细胞的迁移能力,Hoechst 33258染色在荧光显微镜下观察加药48 h后凋亡细胞形态。采用SPSS 21.0软件包对实验数据进行统计学分析。结果:α-ESA对CAL-27细胞的增殖抑制作用呈明显时间和浓度依赖性(P<0.05)。作用24、48、72 h后,半数抑制浓度(IC50)逐渐降低,分别为(123.48±1.00)、(80.22±0.03)和(69.27±80.34)μmol/L。流式细胞检测结果显示,细胞凋亡率随着α-ESA浓度的增加而大幅增高(P<0.05)。培养24 h后,加入80、100μmol/L的α-ESA的细胞划痕愈合率分别为(40.08±2.19)%、(22.06±2.04)%,显著低于对照组(74.74±2.17)%(P<0.01)。荧光显微镜下观察到致密浓染或碎块状亮蓝色荧光的细胞凋亡现象。结论:α-ESA能够抑制CAL-27细胞的体外增殖及迁移能力,并可诱导细胞凋亡,从而产生一定的抗肿瘤生长作用。