人巨细胞病毒体外感染SD乳鼠海马神经元细胞模型的建立及钙代谢的初步研究

目的探讨人巨细胞病毒（HCMV）感染对原代培养sD乳鼠海马神经元细胞内钙离子的影响及其机制。方法取24h内出生的SPF级SD乳鼠雌雄各10只，建立原代乳鼠海马神经元单层细胞；在体外培养的第8天将生长良好的单层神经元细胞随机分为HCMV感染组、HCMV＋MK-801组、MK-801组和对照组，每组设10个复孔；在处理后24h用Fluo-3AM钙离子探针进行荧光染色，在激光共聚焦显微镜下检测各组神经元游离钙离子的荧光强度值。结果接种HCMV24h后，神经元逐渐变圆、肿胀，4d后大部分细胞裂解消失；通过免疫组织化学在海马神经细胞的培养物中可见HCMV产生早期蛋白，呈棕黄色颗粒，苏木精复染后呈棕褐色。HCMV组神经元细胞内游离钙离子荧光强度值为215．5±14．9，高于对照组（116．4±5．9），差异有统计学意义（t=15．2，P〈0．01）；HCMV＋MK-801组神经元的荧光强度值（135．5±8．6）较HCMV组（215．5±14．9）明显下降，下降率为（37．0±3．4）％，差异有统计学意义（t=11．3，P〈0．01）；MK-801组的荧光强度值为88．1±4．5；较对照组（116．4±5．9）明显下降，下降率为（24．0±6．7）％，差异有统计学意义（t=-9．3，P〈0．01）。结论HCMVADl6株感染体外培养大鼠海马神经元可致细胞内的钙超载，N-甲基-D-天冬氨酸受体通道介导的钙离子内流可能是HCMV感染后神经元内钙超载的主要机制之一。