雌激素介导circZNF423作为ceRNA调控oar-miR-541-3p/CALM3通路促进绵羊成肌细胞增殖

【背景】雌激素是雌性哺乳动物卵巢组织分泌的主要激素,其对肌肉的生长发育起着重要的调控作用,circRNA已被发现参与多种与肌肉生长发育相关的信号通路。【目的】根据团队前期卵巢摘除苏尼特羊与假手术苏尼特羊全转录组整合分析发现circZNF423可作为内源性竞争RNA(ceRNA)调控oar-miR-541-3p/CALM3的表达。为进一步探究雌激素在绵羊肌肉生长中分子机制,通过体外培养绵羊原代成肌细胞,检测成肌细胞中外源添加雌激素介导circZNF423调控oar-miR-541-3p/CALM3对成肌细胞增殖的影响,为进一步研究雌激素及circRNA在绵羊生长发育性状中的作用机制提供理论依据,为绵羊分子设计育种提供新的研究思路。【方法】采集绵羊背最长肌组织,对绵羊原代成肌细胞进行体外分离培养,通过免疫荧光染色、RNA原位杂交(FISH)和核质分离试验确定circZNF423在成肌细胞中的表达位置;RNAhybrid在线软件预测circZNF423、oar-miR-541-3p和CALM3存在结合关系,通过双荧光素酶活性检测和生物素标记的miRNA下拉试验验证circZNF423和oar-miR-541-3p、oar-miR-541-3p和CALM3结合情况;体外构建合成circZNF423过表达或干扰载体、oar-miR-541-3p的模拟物(mimics)或抑制剂(inhibitor)、CALM3过表达或干扰载体,在绵羊原代成肌细胞中进行转染,利用RT-qPCR、Western blot、EdU和CCK-8检测绵羊成肌细胞增殖标志因子的表达和成肌细胞增殖情况;为进一步明确雌激素在绵羊肌肉生长发育中的作用,体外添加不同浓度的外源性雌二醇(E2),利用RT-qPCR、Western blot、CCK-8和EdU检测绵羊肌细胞增殖标志基因的表达变化。【结果】免疫荧光染色显示分离的原代细胞为绵羊成肌细胞,可用于后续功能验证;RNA原位杂交和核质分离试验表明,circZNF423主要在绵羊成肌细胞质中表达。RNAhybrid、双荧光素酶活性检测和生物素标记的miRNA下拉试验结果表明,circZNF423与oar-miR-541-3p、oar-miR-541-3p与CALM33’UTR之间均存在显著的结合关系;抑制circZNF423/CALM3表达或过表达oar-miR-541-3p后,绵羊成肌细胞增殖标志因子PCNA、CDK2和Pax7 mRNA与蛋白表达水平一致,均显著上调(P<0.05或P<0.01);EdU和CCK8结果表明,抑制circZNF423/CALM3表达或过表达oar-miR-541-3p后,绵羊成肌细胞增殖率显著上升(P<0.05);过表达circZNF423/CALM3或抑制oar-miR-541-3p后则相反。添加不同浓度外源雌二醇(E2)后,在浓度为10 nmol·L^(-1)时绵羊成肌细胞增殖标志因子表达最高,显著高于1和100 nmol·L^(-1)的添加浓度(P<0.05或P<0.01);绵羊肌细胞增殖标志因子PCNA、CDK2和Pax7mRNA和蛋白表达水平一致,均显著上调,circZNF423和CALM3的表达量显著降低,oar-miR-541-3p的表达量显著升高(P<0.05或P<0.01);EdU和CCK8结果显示,体外添加雌二醇后绵羊成肌细胞增殖率显著升高(P<0.05)。【结论】绵羊成肌细胞中circZNF423作为ceRNA调控oar-miR-541-3p和CALM3的结合及表达,添加外源雌激素可通过抑制circZNF423/oar-miR-541-3p/CALM3通路促进绵羊肌肉细胞的增殖。这些结果为揭示雌激素及circZNF423在绵羊骨骼肌发育性状中的分子机制提供理论基础。

CALM型单点系泊系统动态响应规律研究

以孟加拉海域单点系泊工程为依托,采用OrcaFlex水动力模拟软件,对初选的CALM型单点系泊方案进行关键参数敏感性分析。考察无油轮靠泊状态下各方案的系泊锚链张力、浮筒位移等参数是否满足系统安全性要求;将无油轮靠泊状态下的较优方案进行3 h有油轮靠泊时域分析,考察系泊锚链和系泊缆张力、浮筒和油轮运动以及锚链躺地段长度及变化规律,并选定最优系泊方案。

四川白鹅Calm1结构特征及其差异表达的研究

为阐明鹅Calm1基因结构特征及其表达规律。克隆四川白鹅Calm1基因编码区序列并进行生物信息学分析,应用实时荧光定量PCR技术检测鹅不同等级卵泡和不同组织中Calm1基因的相对表达量。鹅Calm1基因编码区序列全长为450 bp,编码149个氨基酸,其氨基酸序列与原鸡相似性为99%。鹅大脑中Calm1表达量显著高于其他组织(P<0.05)。Calm1在不同等级卵泡组织中均有表达,F2级卵泡中Calm1表达量是小白卵泡(Small white follicles,SWF)的1.76倍(P<0.05),且显著高于F5、F4、F3和F1级卵泡(P<0.05);在排卵后卵泡(Postovulatory follicle,POF)组织中,POF1级卵泡组织中Calm1表达量显著高于POF2、POF3和POF4级卵泡(P<0.05);卵巢组织中Calm1的表达量,是小白卵泡的1.75倍(P<0.05)。Calm1是高度保守、广泛表达的蛋白质,Calm1可能通过影响卵泡细胞增殖和类固醇激素合成来参与调控动物繁殖。

CALM单点管道应力分析基于CAESAR Ⅱ软件的优化设计

为了弥补国内CALM单点项目相关领域的空白,本文以CALM单点管道应力分析为例,结合某海上CALM单点项目,基于CAESAR Ⅱ软件的模拟计算,详细介绍了CALM单点上管道应力的计算方法,为今后CALM单点项目提供了工程参考。

XJRUC/CALMET及CALMET不同参数调整对达坂城—小草湖区风场预报影响

根据2009年12月、2010年1、4、7和10月00:00(世界时)的GFS预报场以及同期CMA9210下发的WMO各种常规观测资料,采用新疆气象局建立的WRF模式及其三维变分同化系统XJRUC耦合水平分辨率为1 km的CALMET诊断风场模块,对达坂城—小草湖风区70 m高度60 h以内的风场预报进行了检验。结果表明:(1)该系统在第37~60 h的风场预报水平略次于前24 h;(2)模式预报水平分辨率的提高不一定能提高风场预报水平,因地因时而异;(3)水平分辨率为3 km的XJRUC风场预报效果总体较好,其中春、秋季最佳或午后最佳;(4)水平分辨率为3 km的预报场耦合分辨率为1 km的CALMET诊断风场,对提高风场预报能力极其有限。对达坂城风区而言,只在冬季预报效果略增,其他月份两种水平分辨率几乎相当;(5)在地形陡峭和地貌复杂区域的春季大风时期,水平分辨率为9km的预报效果最佳,水平分辨率为3 km次之;(6)通过CALM ET诊断风场调整参数的几套控制性组合方案计算表明,动力学调整计算需慎用,它只在相对平坦区域的大风季节有正效应,而多数情况下为负效应;O’Brien垂直速度调整也仅在陡峭地带冬季有正效应。总体而言,在不确定天气背景对局地风特性影响条件下,CALMET诊断风场模块以不采取地形动力学调整和O’Brien垂直速度计算、只考虑地形斜坡流和FROUD数调整计算时,预报效果最佳。

含裙板之CALM浮筒辐射问题研究

水动力系数的计算是确定CALM浮筒运动响应的基础,采用特征函数展开及边界匹配的方法求解含裙板之CALM浮筒作纵荡,垂荡和纵摇运动引起的辐射载荷,得到相应的附加质量和辐射阻尼系数。在程序中令浮筒半径趋于零可处理圆形垂荡板辐射问题,令裙板半径等于浮筒半径可处理无裙板之浮筒或浮式直立圆柱体的辐射问题。边界积分法的缺点是在求解物体湿表面分布源积分方程时会出现不规则频率现象,而特征函数展开及匹配法则不存在这一问题。分析了裙板半径大小对CALM浮筒水动力系数的影响,裙板半径增大时由自身运动引起的垂荡和纵摇附加质量显著增加,而垂荡辐射阻尼则显著减小。

CALM单点管道设计综述

通过对CALM单点系泊系统上的管道设计思路及原则进行论述,介绍了管道设计中需要考虑的重要因素、设计原则、规范和工况设定等,归纳了整个设计流程中的关键点,为类似设计提供了指导和设计依据。

动力定位失效模式下FPSO-CALM系泊系统的动力学特性响应研究

动力定位FPSO侧推器失效后会对CALM系泊系统造成影响,需要对这种影响进行预测与评估。采用凝集质量法将系泊缆索离散为凝集质量模型并计算系泊缆的系泊张力,运用PID控制系统对船舶的侧推器进行推力分配,在波谱为JONSWAP的波浪作用下,研究FPSO的动力定位系统失效对CALM浮标水平三自由度运动的影响,以及对系泊缆、系船缆及输油软管有效张力的影响。结果表明:在JONSWAP波的作用下,动力定位系统的失效使得船舶水平三自由度的运动幅度高于CALM浮筒,并且输油软管会产生比系船缆更大的突变张力;失效后处于稳定阶段时,系船缆能够承担更多的有效张力分量;值得注意的是,在侧推器失效后系泊系统中的突变张力无法有效分散到每根系泊缆绳上。

CALM单点上膨胀节内压推力对设备管口影响分析

CALM式单点系泊系统主要用于系泊大型油轮,接卸中转油品,在国际上已得到广泛应用,但国内对CALM单点的研究刚刚起步。本文通过CALM单点局部细节的研究,依托CAESAR Ⅱ软件进行模拟,对CALM单点上膨胀节对设备管口荷载的影响进行了分析。

CALM单点系泊系统设计综述

介绍了悬链锚腿系泊(CALM)单点系泊系统设计中需要考虑的重要因素,如船型和货运量核算、单点选址原则、工况设定、设计衡准、鱼尾运动解决方案等。归纳了整个设计流程中的关键点,讨论了如何确保单点系泊设计的安全性。

CALM2基因多态性与青少年特发性脊柱侧凸遗传易感性的关联性研究

目的探讨钙调蛋白2基因(CALM2基因)与青少年特发性脊柱侧凸遗传易感性的相关性。方法采集北京协和医院骨科确诊的汉族青少年特发性脊柱侧凸患者107例,对照组107例,病例组按照PUMC分型进行分组。采外周血试剂盒提取DNA。根据国际人类基因组单倍体型图计划提供的基因型数据,选取CALM2基因的SNPs位点,应用VeraCode GoldenGate Genotyping Assay基因芯片进行SNPs基因型鉴定。用关联分析法探索CALM2基因与患者发病及临床表型之间的关系。结果 CALM2的rs10153674等位基因在病例组和对照组中的分布频率统计学上存在显著差异(P=0.003),rs10153674位点等位基因G与AIS的易感性升高有关。结合PUMC分型,rs10153674和rs1027478基因型在PUMCI型和对照组中的分布频率统计学上存在显著差异(P值分别为0.038,0.006),rs10153674基因型G/G、rs1027478基因型A/G与PUMCI型的发生有关。结论 CALM2基因遗传变异可能与青少年特发性脊柱侧凸发生相关,有可能是影响AIS易感性的重要因素。PUMCI型AIS的发生可能与rs10153674和rs1027478基因型多态性有关。

CALM单点系泊设施设计要点

本文归纳了在CALM单点系泊系统中,不同规范的设计要求,分析了系泊系统受力机制,介绍了系泊设备和系泊产品的功能特点,设计中须考虑的因素和方法等。对类似的系泊系统设计具有指导意义。

CALM式单点系泊系统完工调试与检查

依托海洋石油工程股份有限公司为恒逸公司在文莱海域全新设计、建造的一座CALM式单点系泊系统,对CALM式单点系泊系统的完工检查进行研究论述。

CALM单点系泊油船“鱼尾效应”

为充分认识和分析CALM(Catenary Anchor Leg Mooring)单点系泊油船可能存在的"鱼尾效应",应用数值分析方法对该现象进行模拟分析和研究,得出外部环境载荷对该效应的影响规律,并探讨控制该效应的方法,对于CALM单点系泊系统设计具有一定的指导意义。

CALM系统水下管汇整体结构有限元分析

为评估南海某海上单点卸油CALM系统水下管汇各部件强度,用ANSYS软件建立包含管汇结构及管道部件的水下管汇整体有限元模型,给出其有限元分析方法,得到水下管汇在操作工况和极端工况下各部件的应力分布,指出水下管汇强度最薄弱位置。校核结果表明,该水下管汇各部件强度均满足规范要求。

CALM/AF10反义核酸对原代CALM/AF10融合转录白血病细胞的体外作用分析

目的 :确定 CALM和 AF1 0融合转录在原发性 t( 1 0 ;1 1 )转换的白血病形成和治疗中的作用。方法 :检测 5例原发性 t( 1 0 ;1 1 )转换的白血病患者 CAL M- AF1 0融合转录 ,检测 CALM/AF1 0硫代反义核酸对其白血病细胞体外化疗敏感性和凋亡的作用。结果 :RT-PCR在 5例原发性 t( 1 0 ;1 1 )转换的白血病患者中检测到 5种分子量大小的 AF1 0 - CALM融合转录和 4种分子量大小的 CAL M- AF1 0融合转录。原代 t( 1 0 ;1 1 )转换的白血病细胞对体外化疗敏感性较非 t( 1 0 ;1 1 )转换的显著低 ,而 AS- PS- ODNs增加了其体外化疗敏感性和凋亡率。5μM AS- PS- ODNs处理时有 4例阳性 ,1 0μM和 2 0μM AS- PS- ODNs处理时 5例全阳性 ,而单纯化疗药组和化疗药 + 1 0μM正义硫代核酸 ( S- PS- ODNs)组分别只有 3例。化疗药+ 1 0μM AS- PS- ODNs处理 48h、72 h、96h后 ,细胞凋亡指数分别显著高于单纯化疗药组和化疗药 + 1 0μM S- PS- ODNs组。而单纯化疗药组和化疗药 + 1 0μM S- PS- ODNs组间凋亡指数在对应时间无差别。结论 :CALM- AF1 0与 t( 1 0 ;1 1 )转换白血病的发生密切相关 ,且 t( 1 0 ;1 1 )转换的白血病患者预后较差。

原发性t(10;11)易位白血病CALM和AF10融合转录检测及其体外化疗敏感性分析

为了研究CALM和AF10融合转录在原发性t( 10 ;11)易位白血病形成和治疗中的作用 ,采用RT PCR技术检测了 5例原发性t( 10 ;11)易位白血病患者CALM AF10融合转录 ,体外MTT法检测了其白血病细胞体外化疗敏感性。结果表明 :在 5例原发性t( 10 ;11)易位白血病患者中检测到 5种分子量的AF10 CALM融合转录和 4种分子量的CALM AF10融合转录 ;MTT法显示 5例原发性t( 10 ;11)易位白血病患者的白血病细胞有 2例对体外化疗敏感 ( 60 % ) ,3 6例非t( 10 ;11)易位白血病细胞有 3 1例对体外化疗敏感 ( 86% ) ,统计分析有显著差异 (P <0 0 1) ,与临床治疗结果一致。化疗药物处理 72小时 ,t( 10 ;11)白血病细胞的凋亡率为 ( 16.3 7± 2 .5 6) % ,而非t( 10 ;11)白血病细胞的为 ( 3 3 .75± 5 .5 9) % ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论 :CALM AF10是t( 10 ;11)易位白血病的常见特点之一 ,可能与该白血病发生密切相关 ,且t( 10 ;11)易位白血病患者预后较差。

CALM1基因rs314448799位点突变对广西麻鸡产蛋量的遗传效应分析

为研究CALM1基因rs314448799及其相邻位点在广西麻鸡中的遗传效应,试验比较不同基因型个体之间产蛋量差异,并采用RT-qPCR技术检测CALM1基因在不同基因型个体卵巢、子宫组织中的表达水平。结果显示,四个位点中只有rs314448799位点与产蛋量显著相关,其中CC基因型个体的产蛋量最高,CT基因型个体的产蛋量次之,且均显著高于TT型(P<0.05)。通过定量分析发现,在卵巢中,rs314448799位点CC型和TT型个体的CALM1基因表达量差异不显著(P>0.05);但在子宫中,CC型个体的CALM1基因表达量显著高于TT型(P<0.05)。研究结果表明,通过对rs314448799位点上CC、CT、TT三种基因型个体的鉴定可对广西麻鸡高低产蛋量个体的筛选提供参考,同时也为广西麻鸡高产蛋量分子标记的开发提供理论依据。

CALM1基因及钙调素与骨关节炎

骨关节炎(OA)以进行性关节软骨丢失、骨赘形成等退行性变为主要特征。多功能受体蛋白钙调素(CaM)在真核细胞Ca^(2+)信号转导通路中发挥重要作用。关节软骨内Ca^(2+)-CaM信号对软骨细胞的分化形成具有重要作用;给予关节软骨适当的压力负荷刺激能诱导软骨基质合成增加,而这一反应似乎必须依赖于Ca^(2+)-CaM信号通路。软骨细胞内Ca^(2+)-CaM信号通路一旦发生异常,可能会引起软骨细胞分化形成、软骨细胞粘附能力、关节软骨修复及对压力负荷刺激的反应性等方面的异常,进而促进OA的发生、发展。近期研究表明,编码CaM的CaM基因之一CALM1的单核苷酸多态性与OA易感性相关,这一发现从基因和分子转录水平提示CaM及Ca^(2+)-CaM信号通路异常在OA发病机制中的作用。

广西麻鸡CALM1基因的克隆、序列分析和组织表达谱研究

为分析广西麻鸡CALM1基因的编码区序列及其表达规律,克隆了广西麻鸡CALM1基因编码区序列并进行生物信息学分析,应用实时荧光定量PCR技术检测产蛋期麻鸡在不同组织中CALM1基因的相对表达量。结果表明:广西麻鸡CALM1基因的编码区长度为450 bp,共编码149个氨基酸。与参考序列相比,起始密码子和终止密码子略有差异,不影响表达,另外存在2处错义突变(组氨酸突变为精氨酸,苏氨酸突变成为丙氨酸);物种间的同源性分析显示,广西麻鸡基因与原鸡(Gallus gallus)、普通猪(Susscrofa)、奶牛(Bos taurus)、裸鼹鼠(Heterocephalus glaber)、人类(Homo sapiens)、小鼠(Mus musculus)、黑猩猩(Pan troglodytes)、苏门答腊猩猩(Pongo abelii)、褐家鼠(Rattus norvegicus)的序列同源性分别为98.7%、89.4%、84.3%、89.8%、90.0%、86.7%、89.8%、90.0%、86.7%;进化树分析显示,广西麻鸡与原鸡亲缘关系最近,与奶牛和小鼠的亲缘关系最远。产蛋期CALM1的表达谱显示,CALM1基因在脑、胸肌、脾脏中高表达,在输卵管漏斗部和膨大部、心脏、腿肌、肺、肠中中度表达,而在皮肤、肝脏、卵巢、输卵管的峡部、子宫、肾脏低表达。研究结果为进一步研究鸡CALM1基因调控广西麻鸡繁殖功能奠定理论基础。