金花茶Camellia chrysantha(Hu)Tuyama 小孢子囊、小孢子和雄配子体的发育

详细报导了金花茶小孢子囊、小孢子和雄配子体的发育过程。幼嫩花药的横切显示花药的外侧由一层表良、一层药室内壁、 1—2层中层和一层绒毡层细胞组成;内为5—8个由孢原细胞转化成的小孢子母细胞。小孢子的发育具双子叶植物的一般特征。绒毡层腺质;小孢子四分体四面体形;花粉粒在成熟时具二细胞。 在扫描电镜下观察、花粉粒为拟三孔沟的;小孢子壁形成时开始在绒毡层内切线壁出现的球状体到花粉粒成熟时仍有一部分附着于花粉粒表面。 由小孢子母细胞到小孢子的形成过程,在不同的花药,同一花药的不同花粉囊,甚至在同一个花粉囊内都显示不同步现象。 在偏光显微镜下证实小孢子形成后细胞内开始有淀粉累积,生殖细胞形成时累积最多。到生殖细胞向营养细胞内移动时逐渐消失而转化为其它的贮藏物。 染色体数目为n=x=15,

金花茶优良砧穗组合初选及嫁接亲和力研究

本研究采用7种不同山茶属植物作为砧木,与4种不同金花茶接穗,组成28个组合,进行砧穗组合筛选及嫁接亲和力研究,开展嫁接成活率、保存率、嫁接苗生长性状等嫁接试验指标测定分析,调查嫁接苗移栽18个月后的生长状况,评价嫁接口砧、穗可溶性糖含量与嫁接亲和性关系。结果表明:博白大果油茶与罗斯曼金花茶、中东金花茶接穗的嫁接成活率及存活率均达到90%以上,与普通金花茶接穗的嫁接成活率和存活率均达到80%以上,是嫁接亲和力最好的砧木;茶花黑牡丹仅与罗斯曼金花茶的嫁接苗有6.67%的保存率,与其他3种接穗保存率均为0,作为砧木亲和力最差。中东金花茶和罗斯曼金花茶2种接穗与不同砧木嫁接亲和性较好,中东金花茶与广宁红花油茶、多毛金花茶、黑牡丹、博白大果油茶嫁接成活率均达到90%以上,罗斯曼金花茶与博白大果油茶、越南抱茎茶嫁接成活率达到90%以上,与广宁红花油茶、宛田红花油茶嫁接成活率达到80%以上。嫁接亲和力与砧穗的可溶性糖含量有关,砧穗糖含量越接近,比值越接近1,嫁接成活率就越高。利用主成分分析法开展嫁接亲和力综合评价,根据得分值筛选出5个优良组合,分别为:博白大果油茶/中东金花茶、多毛金花茶/中东金花茶、越南抱茎茶/罗斯曼金花茶、博白大果油茶/罗斯曼金花茶、博白大果油茶/普通金花茶。

金花茶花化学成分的研究

采用反复硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20柱色谱法、ODS柱色谱法、反复重结晶等方法对金花茶花的化学成分进行分离纯化,并通过理化常数测定和波谱分析等方法进行结构鉴定。从金花茶花的乙醇提取物中分离得到13个化合物,分别鉴定为:槲皮素(1)、槲皮素-7-O-β-D-葡萄糖苷(2)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(3)、芦丁(4)、牡荆素(5)、山奈酚(6)、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(7)、羽扇豆醇(8)、齐墩果酸(9)、胡萝卜苷(10)、β-谷甾醇(11)、原儿茶酸(12)、香草醛(13)。除(1)、(6)、(9)外,其余化合物均首次从该植物中分离得到。

金花茶种子对激素相关性肿瘤体外抑制作用的实验研究

目的观察金花茶种子不同提取物对激素相关性肿瘤体外抑制作用。方法采用噻唑蓝比色法(MTT)检测金花茶种子不同提取物对人宫颈癌HeLa S3细胞和人前列腺癌PC3细胞增殖的影响。结果金花茶种子乙醇提取物、正丁醇部分和水溶部分都显示了较强的抑制人宫颈癌HeLa S3细胞和人前列腺癌PC3细胞增殖的作用,其IC50分别为85.88,67.62,55.71μg/ml和63.06,56.20,68.53μg/ml,且抑制作用和样品浓度呈量效关系。结论金花茶种子乙醇提取物的正丁醇部分和水溶部分在体外对激素相关性肿瘤具有抑制作用,为其抗癌活性的有效部位。

金花茶多糖单一成分的化学结构特征解析

目的:对金花茶粗多糖经过离子交换柱层析和凝胶柱层析法得到分子质量为4.15×106u的多糖单一成分(TPS3-1)的化学结构特征进行分析,旨为金花茶多糖的构效关系研究提供依据。方法:采用构成糖分析、红外光谱(IR)分析、核磁共振(NMR)分析以及阶梯式部分酸水解分析等手段对其毛发区域的化学结构特征进行解析。结果:构成糖分析结果显示,TPS3-1中中性糖约为半乳糖醛酸的2倍,其中鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖与葡萄糖质量比为1:4.2:3.0:0.4,另外,62.58%的半乳糖醛酸残基以甲酯化形式存在。阶梯式部分酸水解分析结果显示,约有73%的中性糖降解至0.01mol/L三氟乙酸溶液中,推测该分子片段主要由葡萄聚糖支链、阿拉伯聚糖支链和半乳聚糖支链组成。约5%的中性糖降解于0.05mol/L三氟乙酸溶液中,推测该分子片段主要由葡萄糖或半乳糖与阿拉伯糖交替连接的寡糖支链组成。约13%的中性糖降解于0.5mol/L三氟乙酸溶液中,该分子片段主要由半乳糖和阿拉伯糖交替连接的寡糖支链以及零散分散于聚半乳糖醛酸链上的阿拉伯糖残基组成。结论:TPS3-1由高度酯化的半乳糖醛酸平滑区域和3类不同化学结构特征的毛发区域片段组成。

金花茶叶多糖超声波辅助提取工艺优化和含量测定

采用超声波辅助提取金花茶叶多糖(PCCT),在单因素试验的基础上,采用响应面分析法对PCCT提取工艺进行优化研究,以多糖提取率为考察指标,使用苯酚-硫酸法测定PCCT含量。结果表明,最佳提取工艺条件为水料比46:1(mL/g)、温度87℃、提取时间54min、共提3次,测得PCCT的提取率4.39%,鲜叶PCCT含量66.8mg/g。

金花茶对二乙基亚硝胺致大鼠肝癌前病变及肝癌细胞株作用的影响

目的:观察不同浓度的金花茶对二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌前病变及对肝癌细胞株BEL-7404及正常人肝细胞株7702的作用。方法:实验动物按随机分组法分为7组,每组13只,分别连续给含有不同受试物的饲料及腹腔注射1剂DEN(150mg/kg.体重)处理,观察各组动物肝组织内γ-GT灶的数量(个/cm2)和大小(mm2/cm2);用RPMI1640培养基体外培养BEL-7404人肝癌细胞株和正常人肝细胞株7702,采用噻唑蓝(MTT)法半数抑制率测定(IC50),观察金花茶浓缩液及茶花浸泡液对肝癌细胞和正常人肝细胞有无抑制作用。结果:除茶叶渣组外,其它各实验组(包括茶花组,不同浓度浓缩液组)的γ-GT阳性灶的总面积、阳性灶的个数均少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。MTT法半数抑制率实验显示金花茶茶花、茶叶浸泡液及金花茶浓缩液对肝癌细胞株BEL-7404的细胞具有一定的抑制作用,对正常人肝细胞则无抑制作用。结论:金花茶对DEN诱发大鼠肝癌前病变有抑制作用,呈一定的剂量—效应反应趋势;金花茶对体外培养的BEL-7404人肝癌细胞株的生长繁殖具有抑制作用,可作为肝癌的预防剂。

金花茶种子诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡及其机制的研究

目的探讨金花茶种子诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡的机制。方法用不同浓度金花茶种子乙醇提取物的正丁醇萃取物(CCEB)干预人前列腺癌PC3细胞,分别采用流式细胞仪、Western印记法等检测其对细胞凋亡及Bax、Bcl-2等表达的影响。结果 CCEB作用于人前列腺癌PC3细胞后,引起PC3细胞DNA片段化率增大,线粒体膜电位下降,细胞内caspase-3活性增高,Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达减少,胞浆中细胞色素c含量增加。结论 CCEB诱导PC3细胞凋亡与caspase依赖性线粒体途径相关。

不同粒径金花茶茶花粉体物理特性

研究3种不同粒径范围金花茶茶花粉体的流动性、溶解性、功能成分皂苷溶出量等物理特性,并结合激光粒度分布仪和扫描电子显微镜进行直观分析。结果表明:普通粉(平均直径133.90μm)、超微粉(平均直径15.76μm)、纳米粉(平均直径201.50 nm)的粒径依次减小,细胞破碎程度、不规则度依次增加,差异显著;随粒径减小,粉体的流动性、松密度、润湿性、膨胀力先减小后增加,以普通粉最高;持水力普通粉最高,超微粉次之;水溶性、皂苷溶出量呈现先增大后略微减小的趋势。说明不同粒径金花茶茶花粉体特性各不相同,综合比较下,超微粉具有较高的溶解率、皂苷溶出量,更容易被人体吸收,生物利用度高,加工方便,具有较好的开发前景。

金花茶对二乙基亚硝胺致大鼠肝癌抑制作用研究

目的应用本研究室建立的二乙基亚硝胺(DEN)致大鼠作用的短期体内实验模型,研究了5%的金花茶叶和5%的金花茶浓缩液对DEN致肝癌作用的影响。方法实验用SPF级雄性Wistar大鼠,用DEN作为肝癌的启动剂(200μg/kg,ip,只用1次),然后喂食含0.015%的2-AAF(2-乙酰氨基芴)饲料2周,加大部分肝切除,作为选择性促进程序,使被DEN启动的肝细胞迅速增生成癌前病灶。各实验组大鼠从实验一开始即喂食含5%的金花茶叶和5%金花茶浓缩液饲料,对照组则喂食基础饲料。大鼠于停饲2-AAF饲料3天后处死。肝脏按规定部位取材,做γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)染色,用笔者设计的计算机软件计算肝癌前病变γ-GT阳性灶,算出平均每cm2肝面积中γ-GT阳性灶的数目、面积。结果实验组γ-GT阳性灶的数目、面积均明显少于和小于对照组。结论5%金花茶叶和5%的金花茶浓缩液有抑制DEN致大鼠肝癌作用。

山茶属金花茶组金花茶系的AFLP分析

应用扩增片段长度多态性(AFLP)分子标记方法,对分布于我国的金花茶组金花茶系的35个样品进行了分析,样品包括了《中国植物志》收录的该类群的15种2变种、2个未收录的种和4个已归并但在分类处理上存在分歧的种。4对引物组合:E-ACG/M-CAG,E-ACG/M-CTG,E-AGG/M-CTG,E-AGG/M-CAT用于选择性扩增,其中EcoR 引物的5`端用荧光染料进行标记。这4个引物组合共得到298条扩增带,其中278条带是多态性的。计算了样品间的Nei和Li(1979)相似性系数,基于这一相似性系数应用UPGMA法进行聚类分析,得到了树状分枝图。分析结果表明:(1)贵州金花茶是一个好种;(2)支持将毛籽金花茶、陇瑞金花茶、弄岗金花茶和大样弄岗金花茶归并到淡黄金花茶的观点;(3)薄叶金花茶、小花金花茶、夏石金花茶和小瓣金花茶之间的亲缘关系较近。

基于紫外分光光度法的金花茶叶中总黄酮含量的测定

[目的]建立金花茶材叶中总黄酮含量的测定方法。[方法]采用紫外分光光度法测定药材中总黄酮含量。[结果]采用紫外分光光度法测定总黄酮含量时,在0.00864～0.06912mg/ml浓度范围内线性关系良好(r=0.9999),平均回收率=100.4%,RSD=0.0180。[结论]所用方法简便、准确,可用于金花茶药材的质量控制。

金花茶种子诱导人子宫颈癌HelaS3细胞凋亡及其作用机理的研究

为探讨金花茶种子诱导人子宫颈癌HelaS3细胞凋亡的机制,以不同浓度金花茶种子乙醇提取物的正丁醇萃取物处理人子宫颈癌HelaS3细胞后,分别采用流式细胞仪、Western印记法等检测对细胞凋亡及Bax、Bcl-2、Bid等表达的影响。结果表明:金花茶种子乙醇提取物的正丁醇萃取物作用于人子宫颈癌HelaS3细胞后,细胞凋亡增加,Bax蛋白表达提高,Bcl-2蛋白表达降低,Bid蛋白活性减弱,线粒体膜电位下降及Caspase-8,Caspase-3活性增强。金花茶种子乙醇提取物的正丁醇萃取物为其重要的抗肿瘤活性有效部位,并可能通过激活Bax及Caspase-3,Caspase-8,抑制Bcl-2和Bid来诱导HelaS3细胞凋亡。

基于FTIR技术金花茶组植物物种鉴定研究

利用傅里叶变换红外光谱(FTIR)法获得16种金花茶组植物的FTIR光谱图,结合系统聚类和相关性系数法对所得光谱数据进行分析比较。结果表明:16种金花茶组植物可分为3个类群,第一类是:龙州金花茶等11种;第二类是中东金花茶、柠檬金花茶、平果金花茶及崇左金花茶;第三类仅小果金花茶一种。结合相关形态解剖学等方面的差异,该研究支持将弄岗金花茶与毛籽金花茶归并为一个种;直脉金花茶、弄岗金花茶、小瓣金花茶、东兴金花茶、柠檬金花茶、中东金花茶、小果金花茶、金花茶、顶生金花茶与平果金花茶各自划分为独立种。FTIR-聚类分析法可以作为金花茶组植物物种鉴定的一种可行性手段。

金花茶嫁接繁殖试验

以红皮糙果茶(Camellia crapnelliana)、宛田红花油茶(C.polyodonta)和油茶(C.oleifera)为砧木,采用切接法嫁接,设不同时间、不同砧木、接穗留叶与套袋、砧龄与穗龄、穗芽数量、砧木高度等处理进行金花茶(C.nitidissima)嫁接试验。结果表明,金花茶嫁接以2月和9月成活率较高;砧木亲和力红皮糙果茶高于宛田红花油茶和油茶,接穗留叶可显著提高嫁接成活率,秋季采用套袋的效果较好,而春季不宜套袋,砧龄1年、低砧,穗龄1年、单芽,其嫁接成活率较高。在秋季以1年生砧木采用留叶、套袋、低砧,1年生穗龄、单芽处理时,其嫁接成活率达95.57%。

山茶属金花茶组金花茶系的叶表皮特征及分类学意义

用扫描电镜观察了山茶属金花茶系 2 4个分类群叶片下表皮的特征 .结果表明叶下表面角质膜特征具有一定的分类学意义 ,毛瓣金花茶、簇蕊金花茶和贵州金花茶能明显地区别于其他种 .

金花茶组植物花粉扫描电镜研究(一)

植物花粉的形态特征具有种属特异性。本文用扫描电子显微镜报道了金花茶组８种植物花粉的形态特征。结果表明，８种金花茶组植物的花粉外壁纹饰可分为三大类型：疣状纹饰（块状纹饰）类型、脑纹状纹饰（蠕虫状纹饰）类型及拟网状纹饰类型。不同种植物花粉外壁纹饰存在一定差异，三大类型花粉外壁纹饰存在一定的演化关系，可为种间分类及演化关系提供依据。

金花茶大砧嫁接试验初报

采用3种10a以上的成年大树为砧木,以普通金花茶、凹脉金花茶、平果金花茶、细叶金花为接穗,研究比较了同种砧木、不同接穗,同种接穗、不同砧木在3个不同时期嫁接成活率。结果表明:普通金花茶嫁接的综合效果最好,其成活率、抽梢率、平均新梢长最大,分别为87.38%、84.09%、10.10cm,平果金花茶次之;凹脉金花茶嫁接效果最差;普通金花茶、平果金花茶、细叶金花茶在8月嫁接效果最好;不同砧木(大红牡丹、宛田红花油茶、博白大果油茶)对嫁接成活率、抽梢率无显著影响,3种砧木类型嫁接以8月份成活率和抽梢率最高。

金花茶茶花HPLC指纹图谱的研究

目的:以10批次的金花茶茶花为研究对象,建立金花茶茶花高效液相指纹图谱。方法:微波法提取金花茶茶花中的有效成分,采用高效液相色谱法建立金花茶茶花的指纹图谱。结果:建立了金花茶茶花HPLC特征指纹图谱共有模式,标定了34个共有峰,10批次金花茶茶花指纹图谱经国家药典委员会规定的相似度计算软件(2004A)计算,共有峰保留时间的相对偏差较小,相似度良好。结论:建立金花茶茶花高液相指纹图谱,建立共有模式,可作为科学评价金花茶茶花质量的检测方法。

丙酮沉淀法提取金花茶多糖的研究

[目的]确定丙酮沉淀法提取花金花茶(Camellia chrysantha(Hu)Tuyama)多糖的最佳工艺条件。[方法]以金花茶为研究对象,以水为溶剂,在一定的条件下提取金花茶多糖,提取液用丙酮进行沉淀,选取沉淀剂用量、沉淀时间和离心时间3个因素做单因素试验,然后以离心时间、丙酮加入量、沉淀时间作为因素,进行正交试验,来确定最佳提取条件。[结果]丙酮沉淀法的最佳工艺条件为:离心时间为15 min,丙酮加入量为20 ml、沉淀时间为12 h,在此条件下的所得粗茶多糖含量量为0.003 7 g。[结论]该研究建立的检测方法简便、快速,具有较强的实用性。