磷酸化蛋白EBP50通过降低ERK1/2活性抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖能力

目的探讨磷酸化蛋白EBP50对乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖的影响及其潜在机制研究。方法使用p GPU6/Neo载体构建稳定敲除EBP50表达的MCF-7细胞株,使用Western blot检测乳腺癌细胞中EBP50、c-myc、p-ERK1/2以及ERK1/2的表达,使用磺酰罗丹明B染色方法检测乳腺癌细胞增殖。结果使用p GPU6/Neo载体可以稳定地降低MCF-7细胞中EBP50的表达,敲除EBP50可以促进乳腺癌细胞增殖,同时促进c-myc的表达,上调ERK1/2的磷酸化水平,但不影响ERK1/2的表达。结论 EBP50可以通过抑制ERK1/2活性,抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖能力。

FW-04-806对HER2阳性胃癌细胞的抗肿瘤活性及其机制研究

目的研究大环双内酯类化合物FW-04-806对HER2阳性胃癌细胞的抗肿瘤活性及其机制,探讨其与拉帕替尼的联合作用。方法 MTT法检测FW-04-806对HER2阳性胃癌细胞增殖抑制作用;结晶紫染色法检测集落形成抑制能力;流式细胞术检测细胞蛋白表达、凋亡诱导和周期阻滞;免疫共沉淀法检测蛋白间相互作用;免疫组化法观察蛋白的表达变化;免疫印迹法检测细胞增殖和凋亡通路相关蛋白的表达;体内异种移植瘤模型检测抑瘤效果。结果 FW-04-806明显抑制HER2阳性胃癌细胞NCI-N87、OE19的增殖和集落形成能力,半数抑制率(IC50)分别为(24.17±0.02)、(29.61±0.03)μmol·L-1;剂量依赖性诱导阻滞细胞于G2-M期,并增加凋亡比例;200 mg·kg-1实验组对OE19瘤块的抑瘤率为48.0%(P<0.01);诱使Hsp90/CDC37复合物解离;降解HER2、Akt蛋白;抑制HER2、Akt和ERK的磷酸化,增加cleaved caspase-3、cleaved parp的表达;FW-04-806与拉帕替尼体外联用对NCI-N87胃癌细胞具有协同作用,能抑制增殖,提高凋亡比例。结论 FW-04-806对HER2阳性胃癌细胞具有良好的体内、外抗肿瘤活性;与拉帕替尼联合具有协同作用。

心力衰竭、脑卒中、肿瘤及骨伤病下肢深静脉血栓形成及肺栓塞发生率的临床流行病学调查

目的通过对四种病症的临床流行病学调查 ,初步了解该病症下肢深静脉血栓形成 (DVT )及肺栓塞(PE)的发生率。方法采用问卷、查体及多普勒超声技术 ,对骨伤病 (10 4例 )、肿瘤 (10 6例 )、心力衰竭 (10 0例 )及脑卒中 (12 0例 )四种病症共 430例 ,未服用阿司匹林等抗凝剂的患者进行了双下肢深静脉血栓形成检查。同时 ,对在DVT专业门诊就医并被诊断为下肢深静脉血栓形成的 36例患者 ,做了放射性核素肺灌注扫描检查 ,以发现肺栓塞。结果在 430例患者中 ,共发现 18例下肢深静脉血栓形成 ,发生率为 4.2 %。其中心力衰竭 5例 (5 % ) ;肿瘤 3例(2 .83% ) ;骨伤病 2例 (1.92 % ) ;脑卒中 8例 (6 .6 7% )。 36例 DVT患者中 ,共查出 4例肺栓塞 ,检出率为 11.11%。结论国人上述四种病症 DVT发生率明显低于西方人群。 DVT患者

筋膜内与筋膜间保留神经的腹膜外腹腔镜前列腺癌根治术临床效果的比较

目的比较筋膜内与筋膜间保留神经的腹膜外腹腔镜前列腺癌根治术的临床效果。方法选择2010年3月到2011年8月间65例行筋膜内保留神经的腹膜外腹腔镜前列腺癌根治术的局限性前列腺癌患者为筋膜内组。选择2008年1月到2011年8月间130例行筋膜间保留神经的腹膜外腹腔镜前列腺癌根治术的局限性前列腺癌患者为筋膜间组,进行2∶1配对比较。结果两组之间的围手术期数据、病理学分期及切缘阳性率无显著差异。筋膜内组有9例失访,筋膜间组有13例失访。术后3个月、6个月随访,筋膜内组较筋膜间组控尿功能恢复快。术后12个月随访两组控尿功能恢复比较差异无统计学意义。术后6个月、12个月随访发现筋膜内组患者总体及年轻患者(≤65岁)的勃起功能恢复好于筋膜间组。术后2年两组的无生化进展生存率相似。结论在严格按照适应证的前提下,筋膜内与筋膜间保留神经的腹膜外腹腔镜前列腺癌根治术比较,筋膜内组控尿功能恢复较快,勃起功能恢复较好,而手术效果、短期肿瘤学结果相似。对于临床分期为cT1-cT2a、术前勃起功能正常的年轻前列腺癌患者,推荐优先采用筋膜内保留神经的前列腺癌根治术。

麦冬皂苷B对A549细胞株体外黏附、侵袭及迁移的抑制作用及机制研究

目的探究麦冬皂苷B(ophiopogonin-B,OP-B)抑制非小细胞肺癌细胞株A549黏附、侵袭、迁移的作用及其机制。方法细胞黏附实验、Transwell小室实验分别检测细胞黏附、迁移和侵袭能力。通过荧光实时定量反转录PCR(qRT-PCR)检测OP-B对A549细胞中MMP-2/9 mRNA表达水平的调控,Western blot法检测细胞中MMP-2/9蛋白及其上游调控蛋白Akt及其磷酸化水平的变化。结果 10μmol·L-1浓度的OP-B能明显抑制A549细胞黏附、侵袭和迁移,同时能抑制其MMP-2/9 mRNA及蛋白水平的表达,并抑制其上游p-Akt的表达。结论 OP-B有效抑制A549细胞黏附、侵袭和迁移,其作用与下调MMP-2/9 mRNA和蛋白水平的表达及抑制其上游Akt的磷酸化有关。

桔梗皂苷-D抑制非小细胞肺癌H460和A549细胞黏附、侵袭和迁移的作用机制研究

目的探究桔梗皂苷-D(platycodin-D,PD)抑制非小细胞肺癌(NSCLC)H460和A549细胞黏附、侵袭和迁移的作用及其作用机制。方法细胞黏附实验、划痕实验、Transwell小室侵袭实验分别检测细胞黏附、迁移和侵袭能力。RT-PCR检测H460和A549细胞中MMP-2和MMP-9 mRNA的表达。同时,Western blot法检测MMP-2和MMP-9蛋白、其上游ERK信号通路相关蛋白和p-Akt的表达水平。结果PD有效抑制H460和A549细胞黏附、侵袭和迁移能力,并呈浓度依赖性(P<0.05)。PD降低H460和A549细胞中MMP-2和MMP-9 mRNA的表达(P<0.01);同时,PD下调H460和A549细胞中MMP-2和MMP-9蛋白的表达,并抑制其上游Ras、p-c-Raf、p-ERK 1/2和p-Akt的表达,并呈浓度和时间依赖性。结论 PD抑制NSCLC细胞黏附、侵袭和迁移,并且此作用与下调MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白的表达,抑制其上游ERK信号通路和p-Akt表达有关。

重组天花粉蛋白高表达对人宫颈癌Caski细胞p73基因甲基化影响的机制研究

目的探索重组天花粉蛋白(recombinant trichosanthin,rTCS)高表达对人宫颈癌Caski细胞p73基因甲基化影响的机制。方法 RT-PCR、QT-PCR、Western blot检测rTCS高表达后Caski细胞中DNA甲基化转移酶I(DNMT1)的表达变化,甲基化特异性PCR(MSP)法检测p73基因5'端启动子区CpG岛甲基化状态的改变。结果宫颈癌Caski细胞p73为低表达,其启动子呈部分甲基化状态。高表达rTCS的细胞株其DNMT1mRNA及蛋白水平的表达均降低,其中mRNA水平降低0.56倍(P<0.01),p73基因启动子甲基化程度亦有所降低,p73mRNA水平表达升高。结论高表达rTCS可能通过抑制DNMT1的表达,致使抑癌基因p73启动子去甲基化而重新表达,最终发挥抑癌基因功能抑制宫颈癌Caski细胞增殖。

阿司匹林对宫颈癌裸鼠移植瘤生长的影响及Bax与VEGF的表达变化

目的探讨阿司匹林对宫颈癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用及可能机制。方法选取裸鼠40只,随机分为空白对照组、阿司匹林组、顺铂(DDP)组及阿司匹林联合DDP组。各组裸鼠均在其背部皮下注射HeLa细胞,18d后处死,期间观察各组出瘤时间,分别检测移植瘤质量及体积并计算抑瘤率,免疫组化法检测移植瘤组织中Bax及血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果阿司匹林组与对照组比较,裸鼠出瘤时间延长,肿瘤体积及质量均减少(P<0.05);阿司匹林联合DDP组裸鼠肿瘤生长最慢,经两因素析因分析,P<0.05,两药联合应用具有交互效应;阿司匹林组Bax蛋白表达上调,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),阿司匹林联合DDP组对Bax上调的作用最强,与单用DDP组相比较,差异具有统计学意义(P<0.025);阿司匹林组VEGF表达量减少,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),阿司匹林联合DDP组VEGF下调最明显,与DDP单药干预组相比差异具有统计学意义(P<0.025)。结论阿司匹林可能通过上调Bax的表达,下调VEGF的表达,达到与DDP协同抗肿瘤的作用。

ns脉冲电场发生器的研制及应用

为了研究ns脉冲电场诱导肿瘤细胞的凋亡效应,结合开关电源技术和脉冲功率技术,研制了一套多参数大范围独立可调的ns脉冲电场发生器。该发生器由高压直流电源、脉冲形成电路和辅助电路3部分组成,输出的脉冲幅值0～1.2kV内连续可调,重复频率1Hz～10kHz内连续可调,脉冲宽度分100、200、600和1000ns4级可调,脉冲个数可以任意预置,上升时间<30ns,并具有显示和保护功能。实验室调试和医学细胞实验结果表明,该发生器调节方便、性能稳定,能够有效诱导人肝癌细胞凋亡,为ns脉冲电场诱导肿瘤细胞凋亡的机理和阈值参数选择规律的深入研究奠定了基础。

BDNF/TrkB在口腔鳞癌浸润和淋巴结转移中的功能

目的:观察口腔鳞癌(oral squamous-cell carcinoma,OSCC)与口腔正常黏膜中脑源性神经生长因子(brain-derivedneurotrophic factor,BDNF)及其酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase B,TrkB)和生存基因蛋白Survivin的表达与口腔鳞癌临床病理参数之间的关系以及它们之间的相互关系。方法:人正常口腔黏膜组织10例,OSCC标本57例,采用免疫组化SP方法检测BDNF、TrkB和Survivin的表达。结果:BDNF、TrkB和Survivin在口腔鳞癌中的阳性表达率显著高于在正常口腔黏膜组织中的表达(P<0.05)。有淋巴结转移组和肌层浸润组的OSCC组织中TrkB、BDNF和Survivin的阳性表达显著高于无淋巴结转移组和黏膜下层浸润组(P<0.05)。TrkB与BDNF高度相关且分别与Survivin高度相关(均P<0.01)。结论:BDNF/TrkB在OSCC中呈高表达,并与Survivin联合表达,可能对OSCC的浸润和转移有促进作用。

吉西他滨超液化碘油乳剂治疗晚期肝肿瘤初步研究

目的:探讨吉西他滨超液化碘油乳剂治疗晚期肝肿瘤的可行性及毒副反应。方法: 31例肝晚期肿瘤,用吉西他滨超液化碘油乳剂栓塞治疗,部分直接灌注化疗,首次治疗后初步评估早期疗效及毒性反应。结果:31例中, 4例肺癌肝转移, 8例胰腺癌肝转移, 7例结肠癌肝转移, 12例巨块型肝癌。首次治疗后,腹痛症状及食欲情况明显好转,而且其毒副作用不明显。结论:吉西他滨超液化碘油乳剂栓塞、灌注治疗肝肿瘤,是安全的,而且能改善病人的生活质量,并且未见不可耐受副反应。

端粒酶活性在哺乳动物细胞中的表达

为研究端粒酶活性在哺乳动物细胞中的激活 ,构建了端粒酶催化亚基 (human telomerase reverse transcriptase,h TERT)和端粒酶 RNA组分 (h TR)基因的真核表达载体 ,分别在无端粒酶活性的 DK细胞株和人肝癌细胞中进行表达 ,以 TRAP-银染和 TRAP- EL ISA定量方法测定转染细胞。结果显示 ,在人肝癌细胞株中仅 h TERT表达即可使端粒酶活性显著增加 ,而 DK细胞中 h TERT必须和 h TR同时转染才有端粒酶活性表达。这一结果表明 ,端粒酶活性表达主要和 h TERT/ h TR有关 ,采用人的端粒酶 h TERT/ h TR在其他哺乳动物细胞中表达端粒酶活性是可行的。

17-DMAG对鼻咽癌细胞株HNE1增殖与凋亡的影响

目的:探讨17-DMAG对鼻咽癌HNE1细胞增殖与凋亡的影响。方法:MTT比色法测定17-DMAG对HNE1细胞活性的影响;溴化丙啶(PI)染色法测定HNE1细胞凋亡;JC-1染色法测定17-DMAG对线粒体膜电位的影响;Western blot测定细胞Bcl-2/Bax的表达水平。结果:17-DMAG可抑制鼻咽癌HNE1细胞的增殖,且该抑制作用随作用时间的延长和剂量增加而增强;PI染色显示17-DMAG具有诱导HNE1细胞凋亡作用(P<0.01);JC-1染色显示17-DMAG可诱导HNE1细胞线粒体膜电位降低;Western blot显示17-DMAG作用HNE1细胞24 h,Bcl-2表达显著降低(P<0.01),Bax表达明显增加,尤其在中、高剂量组(P<0.01)。结论:17-DMAG具有抑制鼻咽癌细胞HNE1细胞增殖的作用,该抑制作用与浓度和时间成正相关。该作用主要通过诱导HNE1细胞凋亡实现,诱导凋亡的机制可能与其下调细胞线粒体膜电位,降低Bcl-2表达,增加Bax水平有关。

过继免疫联合化疗对晚期非小细胞肺癌的疗效及免疫功能的影响

目的探讨过继免疫联合化疗治疗非小细胞肺癌的疗效和对免疫功能的影响。方法选择NSCLC患者112例按治疗方式分为观察组和对照组。观察组42患者采用紫杉醇加奈达铂(TP方案)化疗,21 d为1个治疗周期,第1个周期治疗结束后10 d开始回输DC-CIK细胞,1次/d,输注4次为1个疗程,每次回输前给予苯海拉明20 mg肌注防止过敏反应的发生,然后再进行2个周期的化疗。对照组70例患者仅给予TP方案化疗3个周期。结果观察组患者DCR为66.7%,对照组患者DCR为52.9%,差异有统计学意义,P<0.05。观察组患者治疗后外周血CD3+、D8+、D56+细胞比值的升高有统计学意义,P<0.05,CD4+/CD8+的比值降低,与治疗前相比差异显著,P<0.05。对照组患者治疗后外周血CD3+、D8+、D56+细胞比值的降低有统计学意义,P<0.05,CD4+/CD8+的比值升高,与治疗前相比差异显著,P<0.05。观察组患者治疗后外周血IL-2、IL-12、IFN-γ和TNF-α水平升高显著,P<0.05。对照组患者治疗后外周血IL-12、IFN-γ和TNF-α降低显著,P<0.05。结论过继免疫治疗联合化疗治疗NSCLC,可提高患者的疾病控制率,改善患者的免疫功能。

丝氨酸/苏氨酸激酶15和信号转导转录激活因子3在结肠癌中的表达及相关性研究

目的探讨结肠癌中丝氨酸/苏氨酸激酶15和信号转导转录激活因子3表达及其相关性研究。方法结肠癌病例样本共计48例,采用逆转录实时定量聚合酶链反应RT-PCR的方法,检测其中丝氨酸/苏氨酸激酶15和信号转导转录激活因子3的相对表达量,同时分析结肠癌与其表达量的关系。结果结肠癌中丝氨酸/苏氨酸激酶15和信号转导转录激活因子3的相对表达量与结肠癌存在相关性(P<0.05);丝氨酸/苏氨酸激酶15和信号转导转录激活因子3与结肠癌转移显著相关(P<0.05);丝氨酸/苏氨酸激酶15表达信号转导转录激活因子3表达与结肠癌发病及淋巴转移的具有相关性。结论丝氨酸/苏氨酸激酶15与信号转导转录激活因子3表达量在结肠癌中具有相关性,丝氨酸/苏氨酸激酶15和信号转导转录激活因子3相对表达量与结肠癌的预后显著相关。

MiR-193b体外协同增强顺铂对宫颈癌细胞的抗肿瘤效应

目的:研究microRNA-193b(miR-193b)是否能增强顺铂对宫颈癌细胞的杀伤活性并探讨其机制。方法:用RT-q PCR方法检测宫颈癌患者及健康对照者病理组织标本的miR-193b表达水平。MTT法检测miR-193b联合顺铂对宫颈癌细胞系Hela的杀伤活性。利用生物信息学、定量PCR及Western blot方法验证miR-193b是否调节宫颈癌细胞Mcl-1的表达。构建Mcl-1真核表达载体,MTT法检测Mcl-1表达载体转染对miR-193b联合顺铂治疗宫颈癌疗效的影响。结果:宫颈癌患者病理组织miR-193b表达水平显著低于对照组病理组织。miR-193b联合顺铂治疗组对Hela细胞的杀伤活性显著高于顺铂单治疗组。miR-193b转染后,Hela细胞Mcl-1的mRNA表达水平及蛋白表达水平均下降。miR-193b联合顺铂在Mcl-1表达载体转染后对Hela细胞的杀伤活性显著低于未转染Mcl-1表达载体的miR-193b联合顺铂组。结论:MiR-193b可能通过靶向于Mcl-1增强顺铂对宫颈癌细胞的杀伤活性。

替吉奥联合奥沙利铂治疗老年晚期结肠癌的疗效评价

目的:研究用替吉奥联合奥沙利铂对老年晚期结肠癌患者进行治疗的临床效果。方法:选择广西壮族自治区人民医院2015年6月至2019年6月收治的71例老年晚期结肠癌患者作为研究对象。采用掷硬币的方式将其分为分析组(36例)与比较组(35例)。为比较组患者采用替吉奥进行治疗,为分析组患者采用替吉奥联合奥沙利铂进行治疗。然后比较两组患者的治疗效果。结果:治疗后,分析组患者中治疗效果为部分缓解者有29例(占80.55%),为无变化者有6例(占16.67%),为进展者有1例(占2.77%);比较组患者中治疗效果为部分缓解者有17例(占48.57%),为无变化者有13例(占37.14%),为进展者有5例(占14.28%)。分析组患者治疗的总有效率(80.55%)高于比较组患者治疗的总有效率(48.57%),P<0.05。结论:对老年晚期结肠癌患者采用替吉奥联合奥沙利铂进行治疗的效果较好。

射频治疗在局部晚期非小细胞肺癌综合治疗中的作用分析

目的比较射频治疗和传统放化疗在改善局部晚期非小细胞肺癌患者生存质量方面的作用,明确其在治疗方面的安全性和有效性。比较射频治疗和传统放化疗在肿瘤局部控制、中位生存时间和1、2a生存率方面与传统放化疗的区别。方法采用密封随机化分组的信封将病人分别纳入综合组和常规组。两组均先给予2疗程化疗,2疗程化疗后评价降期可切除转手术治疗,终止本研究方案治疗;其余病人,常规组原发灶放疗(普通放疗或X刀治疗剂量共60GY);综合组原发灶行经皮肺穿射频治疗,如肺门、纵膈淋巴结有转移者加肺门和纵膈放疗。结果综合组和常规组比较,疼痛缓解程度、KPS评分、体重评分、及生存质量评分均有明显增高,经统计学处理有非常显著性差异(P<0.05),治疗后的3、6个月生存质量评分也明显高于常规组(P<0.05)。中位生存期和1、2a生存率两组比较无显著性差异。结论射频毁损治疗能有效控制癌性疼痛,能明显增加患者体重,提高患者的生存质量,优于单纯放化疗。射频毁损治疗不能提高局部晚期非小细胞肺癌患者的中位生存时间和1、2a生存率;远处亚临床转移是局部晚期非小细胞肺癌死亡的主要原因。

Anti-EGFR耦联中空金纳米球对人宫颈癌细胞放射敏感性影响的研究

目的:证实抗表皮生长因子受体单克隆抗体耦联中空金纳米球(anti-EGFR/HGNs)增加宫颈癌细胞对HGNs的选择性摄取,并增强宫颈癌细胞的放射敏感性。方法:电化学置换法制备HGNs,透射电子显微镜(TEM)观察HGNs的尺寸和形态,电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)检测细胞内HGNs摄取量,CCK-8法进行细胞毒性检测,流式细胞术(FCM)检测细胞周期,Western blot法检测Bcl-2、Bax、Bad、active caspase-3等凋亡相关蛋白的表达。结果:HGNs平均直径(54.6±7.11)nm,壁厚(5.01±2.23)nm。Anti-EGFR/HGNs与细胞共同孵育可致细胞内HGNs摄取量显著增加,anti-EGFR/HGNs联合照射亦表现出显著细胞毒性。Anti-EGFR/HGNs使处于G2/M期的宫颈癌细胞比率增加,并通过下调Bcl-2表达及上调Bax、Bad、caspase-3表达促进细胞凋亡。结论:anti-EGFR/HGNs能增加宫颈癌细胞对HGNs的摄取,并增强兆伏高能照射对细胞的毒性,提高细胞的放射敏感性。

盐酸美沙酮片与硫酸吗啡缓释片治疗73例晚期癌症患者疗效比较

目的:比较盐酸美沙酮片与硫酸吗啡缓释片在治疗晚期重度癌痛患者的疗效和不良反应。方法:对73例晚期癌症伴重度疼痛患者随机分为2组,其中A组(36例)采用盐酸美沙酮片治疗,B组(37例)采用硫酸吗啡缓释片治疗,观察镇痛效果和不良反应。结果:镇痛效果A组患者总体缓解率为90.3%,B组患者总体缓解率为90.5%(P>0.05);不良反应主要包括恶心呕吐、便秘、头昏、嗜睡,不良反应的严重程度、发生率相似(P>0.05)。结论:盐酸美沙酮片与硫酸吗啡缓释片用于治疗晚期癌症重度癌痛疗效接近。对于吗啡耐受晚期重度癌痛患者,推荐使用盐酸美沙酮片。