红鲫(Carassius auratus red variety)染色体组型的研究

采用肾细胞染色体直接制片法及Levan提出的标准,研究了红鲫的染色体组型。红鲫肾细胞染色体数目2n=100,核型公式为22m+30 sm+24 st+24t。尚未发现雌雄间有异型性染色体及特殊标志染色体。

缩骨鲫(Carassius auratus sogu var.)MC4R克隆、组织分布以及与生长相关SNPs的筛选

黑色素皮质素受体-4(Melanocortin reporter-4,MC4R)是G蛋白偶联受体超家族成员,在能量调控中发挥重要作用。本实验采用同源克隆以及染色体步移对缩骨鲫(Carassius auratus sogu var.)MC4R基因进行克隆,对其核苷酸序列和推测的氨基酸序列进行生物信息学分析,通过Real-time PCR对其m RNA组织分布进行研究,并对缩骨鲫MC4R编码区潜在的与生长相关的SNPs进行筛选。本实验克隆MC4R基因组基因长度为2854bp,只包含一个外显子,长度为981bp,共编码326个氨基酸,MC4R共有七个跨膜结构,是较为稳定的疏水蛋白。缩骨鲫MC4R与鲫鱼的MC4R氨基酸序列的同源度最高达到99.3%,与MC3R和MC5R同源度相对其他MCRs成员较高。缩骨鲫MC4R m RNA在脑中表达量最为显著,眼中次之,肌肉,卵巢和肾脏中表达较少,在鳃、肠、心脏和肝胰腺中微量表达。在MC4R的CDs区内检测到6个与生长潜在相关的SNPs:两个错义突变(A199G和A881C),4个同义突变(A123G,C231T,A444G和C480T)。本实验可为缩骨鲫生长和发育的分子机制研究以及遗传育种提供基础资料。

丁香酚慢性麻醉对红鲫血液生理及肝脏hsp70和hsp90mRNA表达量的影响

为研究丁香酚慢性麻醉对红鲫(Carassius auratus)血液生理及肝脏中应激基因hsp70和hsp90mRNA相对表达量的影响,试验设置丁香酚处理组和对照组,用15 mg/L丁香酚处理平均体质量(61.9±3.66)g红鲫12 h。试验结果表明,经12 h麻醉后,试验组红鲫除游动变缓外,其它行为表现正常,未出现死亡现象;麻醉组红鲫血液中皮质醇含量、乳酸脱氢酶活力显著下降,而血糖和K^(+)、Na^(+)浓度却显著上升。基因定量结果显示,麻醉组红鲫肝脏中hsp70和hsp90mRNA相对表达量显著高于对照组。综上所述,15 mg/L丁香酚处理12 h内对红鲫未造成明显损伤,可用于其保活运输。

芙蓉鲤鲫仔稚鱼的异速生长模式及饥饿不可逆点研究

【目的】探究芙蓉鲤鲫(Carassius auratus Furong carp♀×Cyprinus carpio red crucian carp♂)仔稚鱼的异速生长模式和饥饿耐受力,为芙蓉鲤鲫鱼苗培育提供参考依据。【方法】持续测定芙蓉鲤鲫仔稚鱼各功能器官[全长、眼径、吻、头、体高、躯干、背鳍、臀鳍和尾鳍]的长度,探究其异速生长模型,并观察分析其饥饿状态下的初次摄食率。【结果】芙蓉鲤鲫仔鱼3日龄开口摄食,9日龄卵黄囊完全消失,仔鱼的相对混合营养期比率为2.0,表明其耐饥饿能力较强。芙蓉鲤鲫仔稚鱼优先发育体高、吻、头、背鳍和臀鳍等与消化、摄食、呼吸和游泳平衡相关的器官来适应早期人工培育环境,异速生长模式中各器官的生长拐点主要集中在弯曲期和后弯曲期,眼径、吻、头、体高、躯干、背鳍、臀鳍和尾鳍分别在16日龄(全长为14.00 mm)、12日龄(全长为11.42 mm)、14日龄(全长为11.96 mm)、12日龄(全长为11.38 mm)、16日龄(全长为13.96 mm)、14日龄(全长为12.10 mm)、15日龄(全长为13.20 mm)和23日龄(全长为17.21 mm)出现生长拐点。相对于全长,体高在拐点前为正异速生长,在拐点后为等速生长;吻、背鳍和臀鳍在拐点前后均为正异速生长;躯干在拐点前后均为负异速生长;头和眼径则由等速生长转变为正异速生长;胸鳍、体长和尾长未观察到生长拐点。仔鱼饥饿试验结果表明,3日龄仔鱼初次摄食率为10.0%,8日龄初次摄食率达最高(90.0%)后迅速下降,10日龄降至45.0%,达饥饿不可逆点(PNR)。【结论】芙蓉鲤鲫仔鱼各器官生长拐点主要集中于12~16日龄,优先发育体高、吻、头、背鳍和臀鳍等与摄食、消化、呼吸系统建立和游泳平衡相关的器官。芙蓉鲤鲫仔鱼3日龄即开口摄食,PNR为10日龄,相对混合营养期比率为2.0,耐受饥饿能力较强。在水温为(19.90±2.83)℃条件下,芙蓉鲤鲫脱膜后3~4日龄为下塘培育最佳时间点,下塘时间最迟不宜晚于9日龄。

饲料中组合色素对红草金鱼体色的影响

为研究组合色素对红草金鱼(red Carassius auratus)的增色效果,在基础饲料中分别添加红辣椒粉、螺旋藻、玉米蛋白粉3种着色剂,制成粗蛋白质含量均为33.6%饲料,投喂初始均重(18.5±1.2)g的红草金鱼。每种着色剂设5个水平(5%、8%、11%、13%、16%),每水平30尾鱼×3重复,日投喂率4%,试验期45 d。分别于第0、15、30、45天在各重复内随机抽样2尾鱼,测定同部位鳞片与尾鳍混合样总类胡萝卜素平均吸光度,确立上列三种着色剂的最适添加量分别为:8%、5%、16%。根据单因素试验中不同着色剂在着色速度、体表沉积效果及其成本高低,确立由8%辣椒红、5%螺旋藻、5%玉米蛋白粉各三分之一水平合剂为组合着色剂。在相同饲养条件下,将组合着色剂饲料与各单一着色剂饲料分别投喂红草金鱼,45 d时均在波长470 nm获色素扫描图谱。结果显示,组合色素色谱的峰值面积显著大于各单组(P<0.05),其着色效果显著优于各最佳单组。

红鲫(♀)×湘江野鲤(♂)F_2和F_3的染色体研究

采用血细胞培养制片法和肾脏细胞直接制片法对红鲫 (♀ )×湘江野鲤 (♂ )杂交种F2 和F3 代的染色体数目和核型进行了比较分析 ,得出F2 代染色体数目为 10 0条 ,染色体组型为 :2 2m +34sm +2 2st +2 2t ,NF =156;F3代染色体数目为 4n =2 0 0 ,染色体组型为 :4 4m +68sm +44st +44t ,NF =312。为证明红鲫×湘江野鲤杂交后代由异源二倍体转变为异源四倍体发生于F2 与F3代之间提供了直接证据。

盐度对异育银鲫血红蛋白和肌肉蛋白含量的影响

以血红蛋白含量和肌肉蛋白含量为指标,研究了养殖异育银鲫(Carassius auratus gibeliovar.E′erqisi)对水环境盐度的适宜性。结果显示:1.5‰和3‰的水环境盐度可以显著提高异育银鲫血红蛋白含量(P<0.05),并可略微提高异育银鲫肌肉蛋白的含量(P>0.05);而6‰、9‰和12‰的水环境盐度则会使异育银鲫血红蛋白含量显著下降(P<0.05),且盐度愈高,血红蛋白含量下降幅度愈大;此外,6‰、9‰和12‰的水环境盐度还会引起异育银鲫肌肉蛋白含量发生不同程度的下降,其中6‰盐度只引起异育银鲫肌肉蛋白含量轻微下降(P>0.05),而9‰和12‰盐度则会引起异育银鲫肌肉蛋白含量发生显著下降(P<0.05)。结论:3‰以下的水环境盐度适宜异育银鲫的健康养殖,而6‰以上的水环境盐度则不利于异育银鲫的健康养殖。

芙蓉鲤鲫(芙蓉鲤♀×红鲫♂)的性腺组织学及繁殖性能研究

采用解剖观察、组织切片及人工催情等方法,研究芙蓉鲤鲫(Cyprinus capiofurong.♀×Carassius auratus red var.♂)的性腺发育及繁殖性能。结果显示:解剖观察,芙蓉鲤鲫性腺发育异常的个体占83.64%,性腺外观基本正常的个体占16.36%。组织学观察,芙蓉鲤鲫性腺可分三类:两性嵌合体占21.13%,其中以精巢为主的16.90%,以卵巢为主的4.23%,它们性腺发育迟缓,在繁殖季节成熟系数也没有明显变化,性腺多为一侧发育或两侧不对称,两种性腺细胞均不能成熟;雌性个体占40.84%,在生殖季节卵巢可发育到第IV时相,但未见其细胞核发生偏移;雄性个体,占38.03%,在生殖季节只能发育到精子细胞阶段,不能产生成熟的精子。经人工催产,芙蓉鲤鲫少部分个体有发情产卵行为但不能正常受精。结果表明芙蓉鲤鲫为两性败育类型。

澎泽鲫幼鱼对盐度和碱度耐受性的研究

试验研究了盐度和碱度对澎泽鲫幼鱼的急性毒性,结果为24,48,72,96 h其盐度的半致死浓度分别是9.996,7.871,6.879,6.676 g·L-1,碱度的半致死浓度分别是71.71,69.85,60.81,59.87mmol·L-1.盐碱混合毒性试验中的AI指数表明盐度和碱度在一定程度上存在着协同作用.

异育银鲫鳃出血病流行病学调查和研究

2011—2013年,江苏省局部地区发生新型异育银鲫鳃出血病,给养殖业造成较大经济损失。为查明病因,了解发病历史、发病季节、发病症状及危害对象,通过在江苏省宝应县开展水产流行病学调查,结合组织病理学、回归感染试验、分子生物学诊断等研究方法,证实异育银鲫鳃出血病病原为鲤科疱疹病毒-Ⅱ型,由于该病害会导致异育银鲫养殖重大损失,因此需要引起国内相关养殖业主、科研工作者更多关注。

彭泽鲫的分子遗传分析及其与方正银鲫A系的比较

Genetic homogeneity between Pengze crucian carp and strain A of silver crucian carp was studied by using transferrin, isozyme and RAPD markers. The studied individuals of Pengze crucian carp showed transferring patterns were the same of silver crucian carp A strain while distinct from those of other crucian carp populations. As far as isozyme is concerned, the MDH, LDH and EST are all of the same with only slight differences in SOD between them. The RPAD patterns clearly indicated high homogeneity among 16 individuals(6 sampled from individuals of two years old and the others aged one) from crucian carp of Pengze and 5 individuals from strain A of silver crucain carp. Nearly indentical banding patterns were observed among all individuals. Average genetic distance within all the individuals is only 0.011, suggesting crucian carp of Pengze might possess indentical genetic background with strain A of silver crucian carp.

金鱼线粒体DNA Cytb基因序列分析及与鲫鱼亲缘关系探讨

通过对金鱼(Carassius auratus var.)的5个代表品种草金(grass goldfish)、红龙睛(red dragoneye goldfish)、鹤顶红(red-head wen goldfish)、水泡(blisters-eyegoldfish)、黑寿(white-head oval goldfish)线粒体DNA细胞色素b基因全序列进行测定,结果发现金鱼Cytb基因全序列1141bp,其中T、C、A、G4种碱基含量分别为29.1%,27.8%,28.4%,14.5%,A+T的含量(57.8%)高于C+G的含量(42.2%)。草金、红龙睛、鹤顶红、水泡、黑寿Cytb基因全序列一样。结果表明,细胞色素b基因在金鱼种内是相当保守的,草金、红龙睛、鹤顶红、水泡、黑寿起源于同一祖先。将鲫鱼和金鱼线粒体Cytb基因序列比较分析,同源性达97.9%,应该还在同一种的水平上。

长尾琉金金鱼形态性状的相关与通径分析

测定了637尾1龄长尾琉金金鱼体重、体长、体高、头长、尾柄长、尾柄高、胸鳍长、腹鳍长、背鳍高、臀鳍长、尾鳍长等11个性状,计算性状间的相关系数,同时采用通径分析方法计算以形态性状为自变量对尾鳍长作依变量的通径系数、决定系数,对各性状的影响大小进行剖分。结果显示,尾柄高对尾鳍长的直接影响最大,胸鳍长和尾柄长对尾鳍长的直接影响较小。利用逐步回归分析方法建立了以尾柄长、尾柄高、胸鳍长为自变量估计尾鳍长的多元回归方程为y=-2.573+4.200x1+0.647x2+2.410x3。

洞庭青鲫等5个鲫品系线粒体ATPase基因序列的比较分析

运用PCR扩增、克隆、测序等技术对洞庭青鲫(Carassius auratus var.Dongtingking)、彭泽鲫(C.auratusvar.Pengze)、普通鲫(C.auratus)、红鲫(C.auratus var.red)、日本白鲫(C.auratus cuvieri)等5个鲫品系线粒体DNA ATPase8和ATPase6基因序列的碱基组成、变异情况和分子系统进化进行了比较分析。结果显示:5个鲫品系线粒体DNA ATPase8/6基因序列碱基的平均组成为A:32.6%,C:25.5%,G:12.6%,T:29.4%,序列分歧率为0.5%～4.0%,其中普通鲫和日本白鲫的分歧率最大(4.0%),洞庭青鲫与彭泽鲫的分歧率最小(0.5%)。在5个鲫品系中,红鲫和普通鲫的亲缘关系较近,洞庭青鲫与彭泽鲫亲缘关系较近,而它们与白鲫的亲缘关系则较远,推测红鲫、洞庭青鲫和彭泽鲫均起源于普通鲫。5个鲫品系在线粒体DNA ATPase8/6基因序列碱基位点上的差异可以作为区分不同鲫品系的分子遗传标记。

白金丰产鲫含肉率及肌肉营养成分分析

为评价新品种白金丰产鲫Carassius auratus Var.Pengzenensis♀×Cyprinus acutidorsalis Wan♂的含肉率和肌肉营养成分,选取体质量为(580.33±198.02)g的1龄白金丰产鲫进行分析,测定其含肉率、一般营养成分、氨基酸组成和脂肪酸组成。结果表明:白金丰产鲫含肉率为66.22%,肌肉中水分含量为79.90%,粗蛋白质含量为17.61%,粗脂肪含量为1.71%,灰分含量为1.13%;采用酸水解法共检测出17种氨基酸,其中必需氨基酸占氨基酸总量的39.50%,呈味氨基酸占总氨基酸含量的37.12%;必需氨基酸评价显示,白金丰产鲫的必需氨基酸评分均大于1,必需氨基酸组成符合FAO/WHO模式标准;共检测到23种脂肪酸,其中饱和脂肪酸(SFA)7种,不饱和脂肪酸(UFA)16种,不饱和脂肪酸(UFA)含量为70.09%,其中的多不饱和脂肪酸(PUFAs)含量为42.48%。研究表明,白金丰产鲫含肉率高,必需氨基酸含量丰富、组成合理,脂肪酸种类丰富,不饱和脂肪酸特别是高度不饱和脂肪酸含量高。

饲料糖对彭泽鲫生长和生理机能的影响

用分别含20%(低)、40%(高)葡萄糖和糊精的等氮(粗蛋白为35%风干物质)等能(16.4kJ/g)饲料饲养平均尾重为(2.40±0.16)g澎泽鲫Carassius auratus var. Pengze 16周,研究饲料糖种类和水平对鲫鱼生长、抗氧化力、非特异性免疫力和镉耐受性的影响,探讨鲫鱼对糖的利用能力及糖的生理功效。另用相同的饲料在相似的条件下饲养初重为(7.14±0.85)g的鲫鱼8周后胸腔注射12.5mg/kg体重的氯化镉溶液,观察其24h的存活率。实验结果表明饲料糖种类和水平都没有对鲫鱼的生长、脾指数和肝指数造成显著影响。高糖组糖化血红蛋白GHb值较高(P<0.05)。肝胰脏超氧化物歧化酶SOD活性、血浆SOD活性和总抗氧化力T-AOC各组差异不显著,肝胰脏的T-AOC为葡萄糖组显著高于糊精组(P<0.05)。补体溶血活性、血浆溶菌酶活性各组差异不显著。红细胞脆性高糖组显著低于低糖组(P<0.05)。镉染毒存活率各组差异不显著。上述结果提示40%饲料糖对鲫鱼生理功能没有不良影响,一定量的饲料糖有利于提高鲫鱼的抗氧化力。

江苏盐城地区异育银鲫大红鳃疾病病原学研究及病理学观察

为鉴定近期江苏盐城地区养殖异育银鲫"大红鳃"疾病病原,研究从患病濒死鱼中分离到两株致病菌并对其理化特性、分子生物学、感染病理学进行了研究,同时开展了鉴别诊断和回归试验以及药敏检测。结果显示,两分离株理化特性与温和气单胞菌(A.sobria)特征相符,与Gen Bank中A.sobria的gyr B基因同源性达99%以上,在系统发育树上均与A.sobria聚为一族。同时与鲤科疱疹病毒2型(Cy HV-2)鉴别诊断结果表明,患病鱼组织中Cy HV-2检测为阴性。组织学上,鳃和肾组织具有典型病理变化。人工感染两株A.sobria后,鱼体出现与自然发病相似的"大红鳃"症状,并能从发病鱼组织中再分离到相同病原菌;而人工感染Cy HV-2组织匀浆后的鲫虽然出现死亡,但无"大红鳃"症状出现。综上,确认此次"大红鳃"疾病的病原为A.sobria。药敏实验表明,分离菌株对诺氟沙星、氧氟沙星、氯霉素三种药物敏感。研究为临床上更好的预防异育银鲫"大红鳃"疾病奠定了基础。

野生鲫鱼和五个金鱼代表品种的肌肉蛋白电泳分析

本工作用琼脂糖等电聚焦（Ａｇａｒｏｓｅ－ＩＥＦ）、ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）以及将两者结合起来的双向电泳技术，对野生鲫鱼（Ｃａｒａｓｓｉｕｓａｕｒａｔｕｓ）和５个金鱼品种（Ｃａｒａｓｓｉｕｓａｕｒａｔｕｓｖａｒ．）的亲缘关系进行了种内分化的比较研究。其结果是：（１）鲫鱼和金鱼各品种的肌肉蛋白的大量组分是相似的，验证了金鱼由野生鲫鱼演化而来的推断；（２）在鲫鱼演化到金鱼的过程中，出现了一些新的蛋白质成分，但也有些蛋白组分消失了，并且有从野生鲫鱼经过金鲫鱼这个中间环节演化到各品种金鱼的趋势；（３）从３种电泳结果的聚类分析和电泳图谱上可以看出，野生鲫鱼首先演化为金鲫，再演化为草金鱼，通过金鲫、草金鱼两个环节后发展为文种鱼，最后演化成龙种鱼（如红龙睛）和蛋种鱼（如红头蛋鱼）两个关系很近的类型。

野生鲫和五个金鱼品种的判别分析和聚类分析

对野生鲫鱼（Ｃａｒａｓｓｉｕｓ ａｕｒａｔｕｓ）和五个金鱼品种（Ｃａｒａｓｉｕｓ ａｕｒａｔｕｓ ｖａｒ．）的亲缘关系进行了比较研究。（１）两组判别分析表明，以１７个形态变异性状的指标衡量野生鲫鱼和金鱼以及金鱼各品种之间的差异，说明金鱼的种下分化是明显的（Ｆ〉〉Ｆ０．０１）。（２）对６个品种（包括鲫鱼）各２０尾鱼（计１２０个个体）进行１７个指标的聚类分析，结果大部分个体（占各品种的５０￣１００％）

投喂LHRH-A粗品对雌性金鲫促性腺激素分泌和卵巢发育的作用

研究投喂不同剂量LHRH-A粗品对雌性金鲫GtH分泌和卵巢发育的作用。以LHRH-A粗品0.01 mg/g饲料和0.1 mg/g饲料的剂量投喂6周后,与对照组相比,金鲫血清的GtH水平显著升高;部分卵母细胞已发育至Ⅳ+++时相,GSI明显增长。这些结果表明将LHRH-A粗制品拌入饲料长期投喂金鲫后,能使血清GtH水平明显提高,进而促进性腺的发育成熟。