用碳-铂复型与免疫电镜技术对人脑胶质瘤细胞系BT_(325)整装细胞骨架的研究

人脑胶质瘤细胞系BT_(325)细胞用含Triton X-100的缓冲液处理后,用针对波形纤维蛋白(vimentin)的单克隆抗体,与胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗血清进行间接免疫荧光染色。在荧光显微镜下观察后,将细胞用酒精逐级脱水,然后进行临界点干燥。将干燥后的细胞进行碳-铂喷镀,所得到的碳-铂复型用透射电镜观察。用本法可清晰地观察到完整的细胞骨架,以及微管、微丝与中间丝的形态与分布。在经vimentin单克隆抗体免疫染色的细胞内,中间丝直径较粗;在用GFAP抗血清染色后,只有部分细胞内中间丝直径较粗。如将Triten处理的细胞先用甲醛固定后,再进行免疫染色,中间丝直径增加较少;但如果先进行免疫染色后再用甲醛固定,中间丝直径显著增加。这与免疫荧光观察结果相一致,说明甲醛固定对中间丝分子上的抗原位点起破坏或遮蔽作用。