氟喹诺酮类药物对嗜麦芽窄食单胞菌主动外排泵表型特征研究

目的 研究氟喹诺酮类药物(FQNS)对嗜麦芽窄食单胞菌的抗菌活性及氰氯苯腙(CCCP)对其主动外排泵表型特征的影响。方法 用琼脂二倍稀释法测定FQNS的最低抑菌浓度(MIC),测定CCCP对FQNS的MIC值的影响。结果 111株嗜麦芽窄食单胞菌对FQNS耐药率较低,尤以新型FQNS抗菌活性较高,其中抗菌活性由高到低依次是加替沙星、司帕沙星、左氧氟沙星和环丙沙星。主动外排泵抑制剂CCCP在体外能增强FQNS抗菌活性,主动外排机制即存在于FQNS耐药菌株,也存在于FQNS敏感菌株。但是CCCP对4种FQNS耐药菌株影响更大。结论 主动外排泵抑制剂在体外能降低FQNS对嗜麦芽窄食单胞菌的MIC,若能保证安全性,可能成为临床克服细菌耐药性的一种方法。

氟喹诺酮类药物对嗜麦芽寡养单胞菌的抗菌活性及羰基氰氯苯腙对其的影响

目的 了解氟喹诺酮类药物 (FQNs)对嗜麦芽寡养单胞菌的抗菌活性及羰基羟基氰氯苯腙(CCCP)对其抗菌活性的影响。方法 采用琼脂二倍稀释法测定抗菌药物的最低抑菌浓度 (MIC) ,同时测定CCCP对 FQNs的 MIC值的影响。结果 14 4株嗜麦芽寡养单胞菌对多种常用抗生素呈现多重耐药 ,但对SMZ/ TMP、替卡西林 /克拉维酸以及 FQNs的耐药率较低 ,尤其是新型 FQNs具有很高的抗菌活性 ,其中抗菌活性由高到低依次是加替沙星、司帕沙星、左氧氟沙星和环丙沙星。主动外排泵抑制剂 CCCP在体外能增强 FQNs的抗菌活性 ,主动外排机制不仅存在于 FQNs耐药菌株 ,而且也存在于 FQNs敏感菌株 ,但是CCCP对 4种 FQNs耐药菌株的影响更大。结论 嗜麦芽寡养单胞菌的感染经验上可选用 SMZ/ TMP或 FQNs治疗 ,对于严重感染可采用 SMZ/ TMP和替卡西林 /克拉维酸联合或用新型 FQNs治疗。主动外排泵抑制剂在体外的确能降低 FQNs对嗜麦芽寡养单胞菌的 MIC,若能保证安全性 ,可望用于临床克服细菌的耐药性。

HCN、COS和CS_2催化水解及其水解产物协同净化的研究进展

氰化氢(HCN)、羰基硫(COS)、二硫化碳(CS_2)广泛共存于黄磷尾气、焦炉煤气、碳一化工等化工行业废气中,目前大多数研究局限于3种气体的单独脱除,3种气体同时脱除的研究鲜有报道,而3种气体的协同脱除势在必行。催化水解法能够将HCN转化成NH_3,COS和CS_2水解成H_2S。NH_3和H_2S可以分别被催化氧化为N2及S,S可以回收利用。一步法实现HCN、COS和CS_2的水解及水解产物NH_3和H_2S的催化氧化的催化剂开发是该技术的核心问题,本文针对近几年3种气体水解催化剂的相关研究成果进行了综述,包括负载型催化剂和非负载型催化剂,与此同时,针对水解产物NH_3和H_2S的催化氧化的协同净化技术进行了分析,旨在为后续3种气体同时催化水解及协同净化其水解产物催化剂的开发提供理论指导,为低温环境下协同催化水解HCN、COS和CS_2,并利用原料气中的氧一步法净化水解产物技术的未来发展及应用提供参考。

miR-137对Parkin诱导的线粒体自噬的影响

目的探讨miR-137对Parkin诱导的线粒体自噬的影响。方法将miR-137 mimics和miR-137 inhibitor分别转染进He La细胞8 h后,再转染p EGEPC1-Parkin,24 h之后加羰基-氰-对-三氟甲氧基本腙(FCCP)处理4 h或者不加FCCP,利用免疫荧光和蛋白免疫印迹技术分析miR-137对线粒体自噬的影响。用实时定量PCR方法检测帕金森病患者与健康对照者血液样本中miRNAs的表达情况。结果在FCCP作用下,Parkin的表达促进细胞自噬分子LC3由LC3Ⅰ型变为LC3Ⅱ型,Parkin蛋白从胞浆转位至线粒体。而细胞先经外源过表达miR-137处理之后,Parkin引起的细胞自噬受到显著抑制(P=0.003)。miR-137在帕金森病患者血液中的表达水平显著高于健康对照组(P<0.001)。结论在FCCP作用下,miR-137抑制Parkin介导的线粒体自噬。miR-137在帕金森病患者血液样本中高表达,提示miR-137可能通过调控Parkin介导的线粒体自噬,参与帕金森病的发生。

碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外排泵和外膜孔蛋白表达水平的研究

目的探讨我国临床分离的碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外排泵MexAB-OprM和外膜孔蛋白OprD2表达水平及其与碳青霉烯类抗生素耐药性之间的关系。方法收集我国15个省市28所医院临床分离的铜绿假单胞菌655株,琼脂稀释法测定该菌加入外排泵抑制剂羟基氰氯苯腙(CCCP)前后对亚胺培南和美罗培南的MIC;RT-PCR检测外排泵MexAB-OprM和孔蛋白OprD2的表达水平;十二烷基硫酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹(Western-blot)检测外膜孔蛋白OprD2。结果收集到的655株铜绿假单胞菌菌株对亚胺培南和美罗培南敏感率分别为52.5%和59.2%,加入CCCP前后其对亚胺培南和美罗培南的敏感率无明显变化;52.0%(51/98)美罗培南耐药株MexAB-OprM显著高表达(P<0.05),43.7%(59/135)亚胺培南耐药株OprD2显著低表达(P<0.05),14.8%(20/135)亚胺培南耐药株OprD2表达缺失;SDS-PAGE和Western-blot显示与标准菌株PAO1相比,OprD2表达水平减低菌株ZZ20显影减低,表达缺失菌株BJ1不显影。结论MexAB-OprM表达升高和OprD2表达降低甚至缺失是我国铜绿假单胞菌对美罗培南和亚胺培南耐药的重要机制。

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药机制研究

目的探讨2014年该院收集的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药机制。方法采用纸片扩散法或者Vitek 2Compact全自动药敏分析系统初筛亚胺培南非敏感菌株,琼脂稀释法确证亚胺培南非敏感肺炎克雷伯菌;通过Carba NP确证试验检测碳青霉烯酶表型;通过PCR扩增及测序检测碳青霉烯酶基因、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因、质粒携带的AmpC基因在菌株中携带情况;外膜蛋白SDS-PAGE分析菌株外膜蛋白的改变;外排泵抑制剂羰酰氰氯苯腙(CCCP)抑制试验检测不产碳青霉烯酶基因的肺炎克雷伯菌中是否存在针对碳青霉烯类抗菌药物的外排泵。结果琼脂稀释法验证30株为碳青霉烯非敏感菌株,其中19株为Carba NP表型试验阳性,其中18株产KPC-2,1株产NDM-1。11株Carba NP表型试验阴性的不产碳青霉烯酶基因的肺炎克雷伯菌的ESBLs、AmpC酶的携带率为blaCTX-M 72.7%,blaSHV 27.3%,blaTEM 72.7%,blaDHA 27.3%。SDS-PAGE结果显示编号2368、2875、3050的菌株OmpK36缺失,其余菌株未发现外膜蛋白缺失。CCCP存在时,11株不产碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌对亚胺培南、美罗培南和厄他培南的最小抑菌浓度值均明显降低。结论碳青霉烯酶产生,尤其是产KPC-2是该院CRKP的主要耐药机制,外排泵的高表达,外膜蛋白的缺失合并产AmpC酶也发挥了重要作用。

原釜羰基合成丙二酸二乙酯

在反应釜中,加入铁锰合金粉、氯化钴、硫代硫酸钠、乙醇及通入CO气体,制备四羰基钴钠。接着在同一反应釜中,加入氯乙酸乙酯及溶剂,合成了丙二酸二乙酯。该法极大地简化了生产工艺。

多重耐药鲍曼不动杆菌主动外排系统adeA的分布

目的探讨主动外排系统adeA与鲍曼不动杆菌多重耐药的关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)筛选鲍曼不动杆菌的主动外排基因adeA,应用琼脂稀释法检测主动外排抑制剂碳酰氰间氯苯腙(CCCP)联合抗菌药物对多重耐药鲍曼不动杆菌生长的影响。结果收集的60株鲍曼不动杆菌临床分离株对亚胺培南、美罗培南耐药率分别80.0%和81.7%,对其它大多数抗菌药物的耐药率为90%以上;60株临床分离株检测出adeA主动外排基因52株,检出率为86.7%;CCCP可减少多重耐药鲍曼不动杆菌对抗菌药物的外排作用,增加抗生素对多重耐药鲍曼不动杆菌的抑制率。结论鲍曼不动杆菌是医院感染重要的多重耐药病原菌,adeA主动外排作用可能在本地区鲍曼不动杆菌多重耐药中发挥非常重要的作用。

具有直线结构的三原子分子振动模型

给出了直线结构的三原子分子振动的一个模型,该模型通过角簧实现弯曲振动模式.建立了该模型的振动微分方程组.求解方程组得到了3个本征振动频率和对应的振动模式.就二氧化碳、羰基硫和氰化氢3个三原子分子,使用文献数据验证了所给出的模型.结果表明按该模型的3个振动频率与文献结果吻合良好.

主动外排抑制剂对环丙沙星抗金黄色葡萄球菌活性的影响

目的研究主动外排抑制剂对喹诺酮类药物抗金黄色葡萄球菌活性的影响,并了解本院主动外排介导的金黄色葡萄球菌流行情况。方法应用琼脂稀释法检测喹诺酮类药物环丙沙星对40株金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC),同时分别检测在加入主动外排抑制剂利血平和碳酰氰间氯苯腙(CCCP)后,环丙沙星MIC的变化情况。结果利血平可减少菌体对环丙沙星的外排作用,降低环丙沙星对金黄色葡萄球菌的MIC,而加入CCCP后金黄色葡萄球菌不生长。结论利血平可抑制金黄色葡萄球菌的主动外排,降低耐药菌株的MIC,是一种好的主动外排抑制剂。

非多重耐药及多重耐药鲍曼不动杆菌外排泵及其表达

目的 探讨多重耐药鲍曼不动杆菌（multidrug resistant Acinetobacter baumannii,MDRAB）及非多重耐药鲍曼不动杆菌（non-multidrug resistant Acinetobacter baumannii,N-MDRAB）的外排泵表型、基因型和外排泵基因表达情况。方法 应用K-B法将120株临床分离的鲍曼不动杆菌,分成MDRAB 96株和N-MDRAB 24株两组;参照Sylvia Valdezate方法检测鲍曼不动杆菌的外排泵表型,即采用微量肉汤稀释法,观察加入泵抑制剂羰基氰氯苯腙（CCCP）前后其MIC值的变化,筛选出加入泵抑制剂后MIC值比原值降低1/4倍或以上的菌株为AB外排泵表型阳性;PCR法扩增外排泵蛋白基因并测序进行序列分析。结果 96株MDRAB对β-内酰胺类、头孢菌素类、碳青霉烯类、氨基糖苷类、喹诺酮类、四环素类、磺胺类、多黏菌素类抗菌药物的耐药率分别为76.04%-92.71%、73.96%-97.92%、40.63%-42.71%、92.71%-98.96%、93.75%-98.96%、98.96%、79.17%、0。24株N-MDRAB对头孢菌素类、β-内酰胺类、碳青霉烯类、氨基糖苷类、喹诺酮类、四环素类、磺胺类、多黏菌素类抗菌药物的耐药率分别为16.52%-20.43%、11.22%-15.65%、0、17.83%-18.26%、20.43%-23.39%、14.78%、19.57%、0。外排泵抑制检测结果显示,96株MDRAB有34株外排泵阳性,外排泵基因检测有33株adeB、32株adeR、33株adeS、33株adeJ、0株adeE和33株abeM,检出阳性率分别为97.06%、94.12%、97.06%、97.06%、0、97.06%;24株N-MDRAB未检测到外排泵阳性菌株,但外排泵基因检测有12株adeB、20株adeR、16株adeS、18株adeJ、0株adeE和16株abeM,检出阳性率分别为50%、83.33%、66.67%、75%、0、66.67%。对adeB、adeR、adeS、adeJ、abeM基因进行测序,经比对,所测序列与GenBank中序列同源性为100%。结论 外排泵基因广泛存在于MDRAB中,但在N-MDRAB中亦可以发现主动外排泵基因的存在。

羰酰氰间氯苯腙对检测恩诺沙星药物残留的增敏研究

为了探讨羰酰氰间氯苯腙(CCCP)对恩诺沙星药物残留检测的影响,试验采用大肠杆菌ATCC 8739为测试菌,用琼脂平板法测定抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)值,同法测定恩诺沙星应用CCCP增敏后对大肠杆菌MIC值的影响。结果表明:加入CCCP后恩诺沙星对大肠杆菌的灵敏度由25μg/kg提高到10μg/kg。说明CCCP可有效增强恩诺沙星的抗菌活性,增大了恩诺沙星抑制大肠杆菌的抑菌圈直径,提高了恩诺沙星对大肠杆菌的灵敏度。

丙二酸二甲酯的合成研究进展

综述了丙二酸二甲酯的合成工艺研究,分别按照不同的合成方法进行了阐述,包括氰化钠法、羰基化法和克莱森酯缩合法,并对每种反应机理的研究现状进行了讨论。

多重耐药铜绿假单胞菌的耐药表型与外排泵MexAB-OprM表达的关系

目的了解多重耐药铜绿假单胞菌(multidrug resistance Pseudomonas aeruginosaPa)临床菌株外排泵抑制剂对抗生素活性的影响;探讨多重耐药铜绿假单胞菌的耐药机制及其耐药性与外排泵表达水平关系。方法PCR法对30株铜绿假单胞菌进行MexB基因检测;采用实时荧光定量PCR的方法检测MexAB-OprM的mRNA相对表达水平;对多重耐药铜绿假单胞菌采用琼脂对倍稀释法进行外排泵抑制剂的抑制试验,观察抗生素的MIC变化。结果联合外排泵抑制剂后,庆大霉素和环丙沙星MIC值与之前相比大部分有2个折点的变化,有4株Pa的MIC值有4个折点以上的变化,但总体耐药率差异无统计学意义(P】0.05);30株多重耐药Pa株中,均存在外排泵MexAB-OprM的高表达,多重耐药菌株外排泵表达量达敏感株的60倍之多。结论外排泵MexAB-OprM在多重耐药铜绿假单胞菌临床分离株中起着十分重要的作用,当外排泵抑制剂CCCP浓度为7.5μg/ml对头孢噻肟等抗Pa活性影响较小,不能明显增强其对耐药菌的抗菌活性;而对庆大霉素、环丙沙星等抗Pa活性影响较大,能较为明显增强其对耐药菌的抗菌活性。MexAB-OprM的高表达与多重耐药菌的耐药性有着密切关系,可能起着基础性耐药作用,具体机制有待进一步的研究。

鲍曼不动杆菌adeB基因检测及外排泵抑制剂对其药物敏感性的影响

目的了解该院临床分离的鲍曼不动杆菌外排泵基因adeB表达情况。探讨外排泵抑制剂羰基氰化氯苯腙(CCCP)对鲍曼不动杆菌药物敏感性的影响。方法收集、分离及鉴定鲍曼不动杆菌68株,应用聚合酶链反应方法对外排泵基因adeB进行检测,采用琼脂稀释法检测加入CCCP前后adeB阳性鲍曼不动杆菌对头孢曲松、环丙沙星、亚胺培南、阿米卡星和阿奇霉素敏感性的变化。结果 68株鲍曼不动杆菌中,其中有57株adeB基因阳性,阳性率为83.8%,且adeB阳性组的耐药率和50%最低抑菌浓度均高于adeB阴性组。在CCCP干预实验中,利用上述5种抗菌药物为底物,57株adeB阳性鲍曼不动杆菌中,分别有31、34、38、35和30株在10μg/mL CCCP条件下最低抑菌浓度值降低4倍或4倍以上。结论外排泵基因adeB广泛存在于临床分离鲍曼不动杆菌中,外排泵过度表达与细菌多重耐药机制关系密切,CCCP干预能恢复细菌对抗菌药物的敏感性。

固定化亚心形扁藻光解水产氢研究

对固定化亚心形扁藻(Platymonas subcordiformis)在CCCP(羰基氰化物间氯苯腙)胁迫条件下两段法光解水产氢进行了研究,比较5种不同金属离子海藻酸盐固定化扁藻产氢,其中海藻酸钙固定化能够很好地的保持扁藻产氢活性。海藻酸钙固定化扁藻产氢条件优化表明:固定化细胞适宜暗诱导时间为24 h;产氢适宜粒径为1mm;细胞密度在很宽负载量范围内表现为很好的产氢活性。固定化细胞产氢最佳pH值向酸性方向移动0.5～1个单位,适宜pH值范围变宽;最佳产氢光强为4000 lx,最佳温度为25℃。优化条件下固定化细胞能够更高效稳定产氢。产氢后固定化细胞重培养产氢实验表明:产氢后重培养的细胞可恢复生长并有相近的产氢活性,实现了产氢扁藻的再利用。

双羰基氰吡咯化合物的电子吸收光谱及其溶剂效应的理论研究

采用密度泛函理论(DFT),在B3LYP/6-31G(d,p)水平下研究了双羰基氰吡咯化合物在苯、甲苯、氯仿、四氢呋喃和乙醇等溶剂中的几何结构和电子结构,并在此基础上进行了垂直激发的含时密度泛函(TD-DFT)计算,得到了不同溶剂中的电子吸收光谱,考察了溶剂的极性对分子结构、前线分子轨道及电子光谱的影响。研究结果表明:分子中的芳环和吡咯环形成较大的共轭π键体系;分子结构和电子吸收光谱都不同程度地呈现溶剂效应,溶剂对分子构型的影响主要集中在吡咯环和杂原子上,N10-C17键长由1.474 0增加到1.476 3,C11-C12键长由1.498 3减小至1.495 5,键角C12-C11=O14由127.920 0减小为127.506 7;双羰基氰吡咯化合物的最大吸收波长在溶剂作用下发生红移,且吸收强度明显增加,红移的程度随溶剂极性的增加而增大。

铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药表型与外排泵表达水平的关系

目的了解铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa，Pa）临床菌株外排泵抑制剂对碳青霉烯类抗生素活性的影响；探索铜绿假单胞菌对亚胺培南（IMP）和美罗培南（MEP）的耐药性与其外排泵表达水平关系。方法对IMP耐药的Pa采用琼脂对倍稀释法进行外排泵抑制剂carbonylcyanide m-chlomphenylhydrazone（CCCP，107株）与Phe-Arg-p-naphthylamide（PAβN，71株）的抑制试验，观察IMP和MEP的MIC变化；对32株对IMP和MEP不同耐药表型的Pa，采用实时荧光定量PCR法检测3种外排泵基因（mexA、mexD、mexF）的表达量。结果联合外排泵抑制剂后，IMP、MEP耐药率与之前相比差异均无统计学意义，其中IMP联合CCCP、PAβN前后耐药率，值分别为0．338和0．086，P〉0．05；MEP联合CCCP、PAβN前后耐药率χ^2值分别为1．065和1．458，P〉0．05。MIC值没有变化的菌株占50％以上；仅8株Pa的MIC值降至原MIC值的1／4。在27株碳青霉烯类耐药Pa株中，24株（88．9％）存在外排泵高表达；其中3种外排泵（MexAB—OprM、MexCD—OprJ、MexEF—OprN）均高表达的菌株数量最多，13株，占54．2％。MexAB—OprM和MexCD—OprJ同时高表达以及MexAB—OprM和MexEF—OprN同时高表达菌株分别有3株，各占12．5％。仅MexEF—OprN高表达及仅MexAB—OprM高表达的菌株分别为2株，各占8．3％；未见仅MexCD—OprJ高表达者。3种外排泵基因mexA、mexD、mexF在对IMP及MEP均敏感的菌株中表达水平分别为0．48±0．48、0．48±0．53和0．30±0．41，与碳青霉烯类耐药组之间差异均有统计学意义（P〈0．05），碳青霉烯类耐药组的表达水平高于对IMP及MEP均敏感组的表达水平。MexA的表达水平在IMP、MEP均耐药组和IMP耐药、MEP敏感组间差别有统计学意义，前者高于后者。结论当外排泵抑制剂CCCP和PAβN浓度分别为5μg/ml和20μg/ml时，对碳青霉烯类抗Pa活性影响较小，不能明显增强其对耐药菌的抗菌活性。MexAB—OprM的高表达与MEP耐药性有关，而MexCD—OprJ和MexEF—OprN的高表达与IMP耐药性有关，与MEP耐药性的关系尚有待进一步研究；

多重耐药鲍曼不动杆菌外排泵表型和基因型的研究

目的：探讨多重耐药鲍曼不动杆菌外排泵表型和外排泵基因表达情况在耐药方面的作用。方法应用K-B法检测河北医科大学第一医院96株多重耐药鲍曼不动杆菌对15种抗菌药物的耐药情况，应用微量肉汤稀释法通过加入羰基氰氯苯腙（ CCCP）泵抑制剂检测多重耐药鲍曼不动杆菌外排泵表型，并用PCR扩增进行外排泵蛋白基因的检测和测序。结果96株多重耐药鲍曼不动杆菌对喹诺酮类、头孢菌素类、氨基糖苷类、四环素类抗菌药物的耐药率为70．8%-94．8%。其中有34株外排泵表型阳性；外排泵表型阳性的34株鲍曼不动杆菌检测到 adeB、adeR、adeS、adeJ、adeE、adeM 基因分别有33株、32株、33株、33株、0株、33株，检出阳性率分别为97．06%、94．12%、97．06%、97．06%、0、97．06%；对adeB、adeR、adeS基因进行测序，经比对，所测序列与GenBank中序列同源性为100%。结论主动外排泵基因是鲍曼不动杆菌发生多重耐药的重要因素之一。

CCCP泵抑制剂对多重耐药及泛耐药鲍曼不动杆菌作用的研究

目的观察外排泵抑制剂改变鲍曼不动杆菌耐药的情况,提高泛耐药鲍曼不动杆菌的治疗效果。方法通过微量肉汤稀释法测定四环素、诺氟沙星、庆大霉素、头孢噻肟抗菌药物的最低抑菌浓度,比较加入羰基氰氯苯腙(CCCP)泵抑制剂前后96株鲍曼不动杆菌对抗菌药物MIC的变化,以加入泵抑制剂后MIC值比不加泵抑制剂降低4倍或以上作为外排泵表型阳性的判定标准。结果 96株多重耐药及泛耐药鲍曼不动杆菌在加入CCCP前后,庆大霉素耐药率降低65.63%,耐药菌株数减少63株,其余四环素、诺氟沙星、头孢噻肟MIC值降低4倍及以上的分别有32株、41株、29株。最终进一步筛选出34株对4种抗生素MIC值均降低4倍及以上的菌株(35.42%)。结论泵抑制剂CCCP对于逆转鲍曼不动杆菌对四环素、诺氟沙星、庆大霉素、头孢噻肟等4种抗菌药物的耐药性起到重要作用。