热疗对舌鳞癌Tca8113细胞及其耐药细胞株耐药性的影响

目的探讨热疗对舌鳞癌Tca8113细胞和耐药的Tca8113/CBDEA细胞耐药性的影响。方法采用实时定量逆转录PC(RRT-PCR)检测42℃,0.5h热疗对Tca8113细胞和耐药的Tca8113/CBDEA细胞多药耐药基因(1MDR1)、多药耐药相关蛋白1基因(MRP1)和谷胱甘肽硫-转移酶π基因(GST-π)表达的影响以及检测热疗对细胞内阿霉素浓度的影响。结果Tca8113/CBDEA细胞在热疗后4h和24hMDR1、MRP1、GST-π耐药基因表达量明显下降(P<0.01),Tca8113细胞的MDR1、MRP1耐药基因表达在4h和24h时亦有明显下降(P<0.05),GST-π在24h有明显下降(P<0.01)。热疗以后肿瘤细胞内阿霉素(ADM)浓度有明显上升(P<0.01)。结论热疗抑制了耐药基因的表达,增加了细胞内的药物浓度,热疗可能是逆转肿瘤细胞耐药,提高化疗效果的一种有效手段。

EGCG对人耐药口腔表皮样癌细胞株耐药逆转的实验

目的研究EGCG对人多药耐药口腔癌细胞KBV200的细胞毒增敏作用及裸鼠移植瘤的抑瘤作用。方法MTT法检测药物对细胞的毒性作用,流式细胞术分别检测细胞P糖蛋白的表达,HPLC检测细胞内VCR浓度,采用KB和KBV200细胞分别种植同一裸鼠左、右腋下,观察用药后体重、抑瘤率的改变。RT-PCR检测瘤组织mdr1的表达。结果EGCG在100mg·L-1以下剂量对两株肿瘤细胞的抑制率均小于10%,EGCG与VCR联合应用可明显提高VCR的细胞毒作用;EGCG联合VCR作用后KBV200细胞内VCR浓度升高,P糖蛋白的表达下降;EGCG可增加VCR对KBV200的抑瘤作用,可降低瘤组织MDR1的表达量。结论EGCG可增强VCR对多药耐药肿瘤细胞KBV200的细胞毒作用,机制可能与降低MDR1-mRNA、P-gp表达,提高细胞内药物浓度有关。

110例肺癌疗前MRP检测的临床意义

目的：检测１１０ 例疗前肺癌标本多药耐药相关蛋白（ ＭＲＰ） 的表达与预后的关系。方法：采用免疫组化法。结果：ＭＲＰ 总检出率６３ ．６ ％ （７０／１１０） ，ＳＣＬＣ、ＮＳＣＬＣ 分别为４６ ．７ ％ （７／８） 和６５ ．３ ％ （６２／９５） 。尽管鳞癌ＭＲＰ 的表达（７２ ．４ ％ ） 略高于腺癌（５８ ．３ ％ ） ， 但ＭＲＰ 的表达与病理类型、ＴＮＭ 分期及鳞癌、腺癌的分化程度无关。９０ 例接受化疗，７３ 例ＮＳＣＬＣ 中ＭＲＰ（ － ） 者及ＭＲＰ（ ＋ ～＋ ＋ ） 者中位生存期分别为１８ ．９ 个月和１２ ．６ 个月，Ｌｏｇ － Ｒａｎｋ ｔｅｓｔ 及Ｋａｐｌａｎ － Ｍｅｉｅｒ 生存曲线均示ＭＲＰ（ － ） 者较ＭＲＰ（ ＋ ～＋ ＋ ） 者有生存期优势（ Ｐ＜ ０ ．０２） ；３４ 例鳞癌中，ＭＲＰ（ － ）者生存率明显高于ＭＲＰ（ ＋ ～＋ ＋ ） 者。但ＭＲＰ 表达与腺癌预后无关。结论：ＭＲＰ 可能为鳞癌的负性预后因子。

放疗对舌鳞癌Tca8113细胞及其耐药细胞株耐药性的影响

目的:探讨舌鳞癌Tca 8113细胞和耐药的Tca 8113/CBDEA细胞对放疗的敏感性及放疗对其耐药性的影响。方法:应用MTT法测定Tca 8113和Tca 8113/CBDEA细胞的放疗成活曲线,实时定量逆转录PCR(real-time quantitative PCR,RT-PCR)检测放疗对多药耐药基因1(mdr1)、多药耐药相关蛋白1基因(mrp1)和谷胱甘肽硫-转移酶π基因(gst-π)表达的影响和对细胞内阿霉素浓度的影响。结果:Tca 8113/CBDEA对放疗的ID50是Tca 8113的1.24倍(P<0.01)。Tca 8113/CBDEA细胞在放疗后4 hmdr1,mrp1,gst-π耐药基因表达无明显上升,24 h耐药基因的表达明显升高(P<0.01),Tca 8113细胞的耐药基因表达在4 h和24 h时均有明显上升(P<0.01)。放疗以后肿瘤细胞内阿霉素(ADM)浓度有明显下降。结论:耐药的舌鳞癌细胞表现放疗耐受性,放疗可引起舌鳞癌细胞的耐药。对舌癌患者进行放疗和化疗的方案设计时应考虑此点。

口腔鳞癌化疗前后多药耐药基因表达变化的分析研究

目的 :探讨化疗药物对口腔癌多药耐药基因表达的影响。方法 :2 1位口腔癌患者 ,给予联合或单一的药物进行化疗 ,用斑点杂交法检测其化疗前后mdr1mRNA的表达。结果 :化疗后患者的平均mdr1mRNA拷贝较化疗前明显增加 (P <0 .0 5 ) ,联合化疗组增加明显 (P <0 .0 1) ,单一化疗组无增加。结论 :化疗药物可诱导口腔癌细胞产生多药耐药性 。

放疗对舌鳞癌Tca 8113细胞多药耐药蛋白及耐药性的影响

目的:探讨放疗对舌鳞癌Tca 8113细胞和耐药的Tca 8113/CBDEA细胞耐药性的影响。方法:应用免疫组化SP法检测放疗对P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance associate pro-tein 1,MRP1)和谷胱甘肽硫-转移酶π(glutathione S-tranferaseπ,GST-π)表达的影响和检测放疗对细胞内阿霉素浓度的影响。结果:Tca 8113/CBDEA细胞在放疗后4 h P-gp,MRP1,GST-π耐药蛋白表达无明显上升,24 h耐药蛋白的表达明显升高(P<0.01),Tca 8113细胞的耐药蛋白表达在4 h和24 h时均有明显上升(P<0.01)。放疗以后肿瘤细胞内阿霉素(ADM)浓度有明显下降。结论:放疗可引起舌鳞癌细胞的耐药。提醒我们对舌癌患者进行放疗和化疗的方案设计时应考虑此点。

喉癌中p53与MDR1及MRP表达的相关性研究

目的探讨p53与多药耐药基因(multi-drug resistance genes,MDR1)、多药耐药相关蛋白基因(multi-drug resistance-associated protein,MRP)在喉癌、喉咽癌中的表达的相关性。方法采用免疫组化从蛋白水平上检测了67例喉癌、喉咽癌组织中p53、MDR1、MRP的表达情况,对其中30例病例,应用半定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)从mRNA水平上检测了MDR1、MRP的表达情况。结果67例标本中,MDR1阳性率为56.7%(38/67),MRP阳性率为28.4%(19/67)。MDR1表达与肿瘤的分化程度有相关性。p53阳性组MDR1mRNA相对表达量(0.547±0.203)较p53阴性组(0.312±0.192)高。结论在喉鳞状细胞癌中p53的表达与MDR1的表达存在相关性。

热疗对舌鳞癌Tca8113细胞多药耐药蛋白及耐药性的影响

目的探讨热疗对舌鳞癌Tca 8113细胞和耐药的Tca 8113/CBDEA细胞多药耐药蛋白表达和耐药性的影响。方法应用免疫组化SP法检测热疗对P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance associate protein 1,MRP1)和谷胱甘肽硫-转移酶π(glutathione S-tranferaseπ,GST-π)表达的影响和检测放疗对细胞内阿霉素浓度的影响。结果Tca 8113/CBDEA细胞在热疗后4 h和24 hMDR1、MRP1、GST-π耐药蛋白表达量明显下降(P<0.01),Tca 8113细胞的耐药基因表达在4 h和24 h时亦有明显下降。热疗以后肿瘤细胞内阿霉素(ADM)浓度有明显上升。结论热疗抑制了耐药蛋白的表达,增加了细胞内的药物浓度,,热疗可能是逆转其耐药提高化疗效果的一种有效手段。

肺腺癌及肺鳞癌MRP-mRNA的表达及临床意义

目的 :观察 3 0例肺癌组织及癌旁肺组织 MRP的表达。方法 :RT- PCR方法。结果 :4 3 .3 3 %的肺癌组织表达 MRP,且 MRP的表达与细胞分化程度有关 ,低分化者 MRP的表达明显高于中高分化者 ( P<0 .0 5 )。腺癌的表达 ( 62 .5 % )高于鳞癌 ( 2 1.4 3 % ,P=0 .0 5 8)。MRP的表达与临床分期无关 ( P=0 .5 11)。结论 :4 3 .3 3 %的肺癌组织表达 MRP。

食管鳞癌多药耐药相关蛋白表达的研究

目的:观察24例食管癌组织及食道正常组织MRP的表达.方法:采用RT-PCR方法.结果:75. 0%的食管癌组织表达MRP,29.2%的食管正常组织表达MRP,两者有明显差异(P=0.0039),分析24例食管癌MRP的表达情况,可以看到:MRP的表达与临床分期、癌细胞的分化程度无明显关系.结论:大多数食管癌组织表达MRP,MRP的表达可能与食管癌的先天耐药有关.

平阳霉素化疗与口腔鳞癌多药耐药基因表达的关系及其临床意义

目的通过对口腔鳞癌组织（OSCC）化疗前后，多药耐药基因mdrl的表达进行检测，观察化疗药物平阳霉素对口腔鳞癌mdr1表达的影响。方法口腔鳞癌31例，术前诱导化疗。停药1周后手术治疗，切除肿物。化疗前后分别取标本。用RT—PCR法分别检测mdr1mRNA的表达。结合临床病理分级，对实验结果进行统计学分析。结果口腔正常粘膜存在原发性mdr1mRNA表达，阳性率22．2％（2／9）。化疗前高分化鳞癌mdrlmRNA表达阳性率38．9％（7／18），化疗后高分化鳞癌表达阳性率44．4％（8／18），二者相比差异无显著性（P〉0．05）（表1）。化疗前中低分化鳞癌mdr1mRNA表达阳性率30．8％（4／13），化疗后中低分化鳞癌表达阳性率38．5％（5／13），二者相比差异无显著性（P＞0．05）（表2）。结论口腔正常粘膜部分存在原发性mdrl表达。平阳霉素单一化疗，可能不诱导口腔鳞癌组织mdr1表达的增高，即不会产生获得性耐药，平阳霉素对口腔鳞癌化疗有效。

siRNA抑制人Tca8113/CDDP细胞多药耐药相关蛋白表达的研究

目的:利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制人舌癌耐药细胞多药耐药相关蛋白(muhidrugresistance associated protein,MRP)的表达,观察其对培养细胞耐药性的干扰情况。方法:设计针对MRP基因的siRNA,转染人舌癌多药耐药细胞Tca8113/CDDP,用RT-PCR分析MRP mRNA的表达;免疫细胞化学技术检测MRP蛋白表达量;MTT法检测MRP siRNA的细胞毒作用。结果:Tca8113/CDDP细胞转染MRP siRNA后,MRPmRNA表达较对照组明显降低,降低率为61.3%;转染36 h后MRP siRNA组的MRP蛋白表达阳性率较对照组明显减低;MRP siRNA组中顺铂对Tca8113/CDDP细胞生长的抑制作用明显强于对照组,且抑制作用随时间的延长而增强。结论:MRP siRNA可以明显抑制口腔癌耐药细胞的多药耐药。

TACSTD2调控食管鳞癌细胞对顺铂的敏感性

目的:观察干扰肿瘤关联钙信号转导因子2(tumor-associated calcium signal transducer 2,TACSTD2)表达对食管鳞癌细胞顺铂敏感性的影响及机制。方法:通过组织芯片检测食管鳞癌及癌旁组织中TACSTD2表达;选用人食管鳞癌细胞ECA 109、KYSE 30及其分别对应的顺铂(cisplatin,DDP)耐药株ECA 109/DDP、KYSE 30/DDP细胞,结合TACSTD2干扰技术,通过荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测TACSTD2 mRNA和蛋白表达;CCK8实验和流式细胞术检测顺铂半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)以及细胞凋亡变化;蛋白质印迹法分析4种细胞中TACSTD2、多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance protein 1,MDR1)、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)及p-MAPK蛋白表达。结果:食管鳞癌中TACSTD2表达强度高于癌旁组织(P <0. 01);食管鳞癌顺铂耐药株中TACSTD2表达水平高于对应的食管鳞癌细胞表达(P均<0. 01);干扰TACSTD2后可以显著下调4种细胞中TACSTD2表达及IC50值(P均<0. 01);结合1μg/m L顺铂处理,TACSTD2干扰后4种细胞凋亡率明显增加(P均<0. 01);靶向下调TACSTD2后可见4种细胞中MAPK信号通路的活化抑制及MDR1表达显著降低。结论:靶向干预TACSTD2可提高食管鳞癌的顺铂敏感性,其作用机制可能与MAPK信号活化以及MDR1表达抑制有关。

miR-214在舌鳞癌组织中的表达及其对癌细胞顺铂敏感性的影响

目的观察miR-214在舌鳞癌组织中的表达情况及其对舌鳞癌细胞系顺铂敏感性的影响,并探讨其可能机制。方法采用实时荧光定量PCR检测50例份舌鳞癌组织、20例份癌旁组织、10例份正常舌黏膜组织及顺铂耐药舌鳞癌细胞系TCA8113/DDP、亲本舌鳞癌细胞系TCA8113中的miR-214。将miR-214模拟物及其阴性对照转染TCA8113,将miR-214阻遏物及其阴性对照转染TCA8113/DDP,采用实时荧光定量PCR检测细胞中的miR-214,CCK-8实验检测顺铂对细胞的半数抑制浓度(IC50),Western blot检测细胞中的β-catenin、MDR1蛋白。结果舌鳞癌组织中miR-214的相对表达量高于癌旁组织、正常舌黏膜组织(P均<0.01)。TCA8113/DDP中miR-214相对表达量高于TCA8113细胞(P<0.01)。转染miR-214模拟物TCA8113细胞中的miR-214、β-catenin蛋白、MDR1蛋白表达水平及顺铂对其的IC50均高于阴性对照细胞(P均<0.05)。转染miR-214阻遏物TCA8113/DDP细胞中的miR-214、β-catenin蛋白、MDR1蛋白表达水平及顺铂对其的IC50均低于阴性对照细胞(P均<0.05)。结论miR-214在舌鳞癌组织中高表达,下调(上调)miR-214的表达能够提高(降低)人舌鳞癌细胞对顺铂药物的敏感性,其机制可能与对Wnt/β-catenin信号通路的调控有关。

双氢青蒿素对人口腔鳞癌细胞KBV200多药耐药的影响

目的:检测双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对人口腔鳞癌细胞KBV200多药耐药的作用,并探讨其与ROS-MAPK通路的关系。方法:利用MTT法检测不同浓度DHA对KB、KBV200细胞增殖的影响,顺铂(cisplatin,DDP)、长春新碱(vincristine,VCR)、阿霉素(adriamycin,ADM)、依托泊苷(etoposide,VP-16)对KB、KBV200细胞的增殖抑制率及加入DHA后的变化;分别联合ROS诱导剂3-AT、ERK抑制剂UO126、JNK抑制剂SP600125、p38MAPK抑制剂SB203580,观察干预前、后的逆转差异。利用流式细胞术检测各组细胞内ROS的荧光强度,采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析。结果:与KB细胞相比,KBV200细胞对VCR、VP-16、ADM药物的耐药性显著提高(P<0.05),10、20、30μg/mL DHA作用后,KBV200细胞对VCR、VP-16、ADM的IC50显著降低,呈浓度依赖性(P<0.05)。与KB组细胞相比,KBV200组细胞ROS荧光强度显著降低(P<0.05);DHA处理后,ROS荧光强度显著增高,VCR、VP-16、ADM IC50显著降低(P<0.05),与ROS促进剂效果一致。与KB细胞相比,KBV200细胞p-ERK/ERK、p-JNK/JNK、p-p38MAPK/p38MAPK水平显著升高(P<0.05);DHA处理后,p-ERK/ERK、p-JNK/JNK、p-p38MAPK/p38MAPK水平显著降低,VCR、VP-16、ADM IC50显著增高(P<0.05);加入ERK抑制剂UO126、JNK抑制剂SP600125、p38MAPK抑制剂SB203580后,KBV200细胞VCR、VP-16、ADM IC50进一步降低。结论:双氢青蒿素可能通过促进ROS生成、抑制MAPK通路而逆转KBV2001细胞的多药耐药性。

人舌癌耐药细胞株OSC-19/CDDP的多药耐药性检测及差异性表达microRNAs的筛选

目的:检测人舌鳞癌耐药细胞株OSC-19/CDDP是否具有多药耐药的生物特性,并筛选出与亲本细胞(OSC-19)显著差异表达的microRNAs(miRNAs),探讨其在舌癌耐药中的作用。方法:对前期实验建立的耐顺铂(cisplatin,CDDP)细胞株OSC-19/CDDP,采用CCK-8法检测其对不同化疗药物的耐药性;RT-PCR检测亲代与耐药株的多药耐药基因1(multidrug resistance 1,MDR1)表达。通过微阵列芯片筛查在OSC-19/CDDP与亲本细胞OSC-19中差异性表达的miRNAs,并通过RT-PCR进一步验证基因芯片的结果。结果:人舌癌多药耐药细胞株OSC-19/CDDP对CDDP的耐药指数为16.7,交叉耐药的紫杉醇(PTX)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、平阳霉素(PYM)耐药指数分别为7.93、5.31和3.01;RT-PCR结果显示OSC-19/CDDP细胞中MDR1的表达是OSC-19的15.23倍。微阵列芯片结果显示:OSC-19/CDDP与OSC-19比较,分别有17个miRNAs的表达增高程度和12个miRNAs的表达降低程度超过10倍。结论:人舌鳞癌耐药细胞株OSC-19/CDDP具有多药耐药的生物学特性,可作为舌鳞癌的顺铂耐药机制及多药耐药机制研究的理想细胞模型。显著差异表达的miRNAs可能在舌鳞癌耐药的发生、发展中发挥重要作用。

HIF-1与MRP2在舌鳞癌组织中的表达和意义

目的检测缺氧诱导因子-1α(ypoxia inducer factor,HIF-1α)与多药耐药相关蛋白2(multidrug iated protein2,MRP2)在舌鳞癌组织中的表达,研究其与病理分化程度及临床分期之间的关系。方法应用免疫组织化学方法检测57例舌鳞癌患者中HIF-1α和MRP2的表达。结果舌鳞癌组织HIF-1α和MRP2表达的总阳性率分别为73.7%、68.4%。HIF-1α和MRP2表达水平与病理分级及临床分期有关:分化程度越差,两者阳性表达率越高;病情越晚,阳性表达也越高(P<0.05);HIF-1α、MRP2的阳性表达与年龄、性别等无相关性;HIF-1α和MRP2表达之间具有良好的相关性(r=0.319,p=0.007)。结论HIF-1α和MRP2在舌鳞癌组织中高表达,并与其病理分级及临床分期有关,二者之间表达具有相关性,预示其与舌鳞癌的预后相关。

口腔鳞癌亲本细胞株与耐药细胞株蛋白谱差异

目的探讨人口腔鳞癌体外培养亲本细胞株KB与耐药细胞株KBV200的蛋白质表达差异。方法在体外培养KB及KBV200细胞株,采用表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术(SELDI)及蛋白质芯片技术检测KB及KBV200蛋白质谱。结果体外培养的口腔鳞癌亲本细胞株与耐药细胞株的蛋白质存在差异表达,CM-10芯片共捕获102个蛋白,发现差异峰19个,其中15个差异蛋白在KBV200细胞中高表达,4个差异蛋白在KBV200细胞中低表达。结论SELDI蛋白芯片技术检测口腔鳞癌亲本细胞株与耐药细胞株蛋白质的差异表达方法简便、敏感、重复性好。

MRP2蛋白在食管鳞癌中的表达及其与化疗耐药的相关性

目的:探讨MRP2蛋白在食管鳞癌组织中的表达及其与食管癌化疗耐药的关系。方法:收集原发性食管鳞癌手术标本70例,采用免疫组织化学Envision法检测食管鳞癌组织及其癌旁组织中MRP2蛋白的表达情况,并采用MTT法检测食管鳞癌组织对临床常用化疗药物的敏感性,分析其表达与食管癌化疗耐药的关系。结果:70例食管鳞癌组织及其癌旁正常组织中的阳性表达率分别为58.6%及5.0%。MRP2蛋白在食管鳞癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常食管组织(P<0.01)。食管鳞癌组织对环磷酰胺、5-氟尿嘧啶、吉西他滨、顺铂、卡铂、阿霉素、长春瑞滨、羟喜树碱等化疗药物的敏感性与其相应癌组织中MRP2表达明显相关(P<0.01)。结论:MRP2的表达与食管鳞癌对多种化疗药物耐药有较好的相关性,推测食管鳞癌组织中MRP2的高表达可能对化疗耐药性的发生发展具有促进作用。

EGFR抑制剂对舌鳞癌多药耐药细胞Tca8113/CBP耐药蛋白的影响

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂在舌鳞癌多药耐药中的作用。方法:免疫细胞化学技术和Western blot方法检测舌癌细胞系Tca8113及多药耐药细胞系Tca8113/CBP EGFR的表达,Western blot检测EGFR受到抑制后舌癌多药耐药细胞Tca8113/CBP耐药蛋白MRP,GTS-π的表达。结果:细胞系Tca8113和Tca8113/CBP均有EGFR的表达(P>0.05),EGFR受到抑制后细胞Tca8113/CBP的多药耐药蛋白MRP,GST-π的表达均下降(P<0.05)。结论:抑制EGFR可下调舌癌多药耐药细胞耐药蛋白的表达。