豆蔻明对慢性热应激儋州鸡脏器系数、血清生化指标、抗氧化能力及炎性因子的影响

【目的】研究旨在探讨豆蔻明(CDN)对慢性热应激儋州鸡脏器系数、血清生化指标、抗氧化能力及炎性因子的影响。【方法】试验选取200只1日龄儋州鸡母鸡,随机分为5组,分别为对照组(CON),热应激组(HS),豆蔻明低(L-CDN)、中(M-CDN)和高剂量组(H-CDN),每组4个重复,每个重复10只鸡。CON和HS组饲喂基础饲粮,L-CDN、M-CDN、H-CDN分别在基础饲粮中添加50、100、200 mg/kg豆蔻明。试验期42 d,预试期21 d,正试期21 d。正试期间,HS、L-CDN、M-CDN、H-CDN组每天09:00~16:00饲养温度为(36±2)℃,其余时间饲养温度维持在(25±2)℃,CON组饲养全天温度维持在(25±2)℃。42 d时从每个重复选取2只体重接近的儋州鸡屠宰。采集血液制备血清,检测生化指标、抗氧化指标和血清炎性因子指标;采集肝脏、脾脏、胸腺及法氏囊等器官,计算脏器系数。【结果】(1)M-CDN、H-CDN组儋州鸡血清中谷丙转氨酶(ALT)显著低于HS组(P<0.05),L-CDN、M-CDN、H-CDN组鸡血清中谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量显著低于HS组(P<0.05),且除H-CDN组TG含量显著低于CON组外(P<0.05),其余均与CON组无显著差异(P>0.05)。(2)与HS组相比,M-CDN和H-CDN组儋州鸡法氏囊指数显著上升(P<0.05),H-CDN组儋州鸡脾脏指数显著上升(P<0.05),3个试验组肝脏指数均显著降低(P<0.05),且均与CON组无显著差异(P>0.05)。其中,M-CDN、H-CDN组的法氏囊指数显著高于L-CDN组(P<0.05),H-CDN组的脾脏指数显著高于L-CDN、H-CDN组(P<0.05)。(3)与HS组相比,3个试验组儋州鸡血清丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.05),M-CDN组儋州鸡血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和H-CDN组儋州鸡血清SOD、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性均显著提高(P<0.05),且均与CON组无显著差异(P>0.05);3个试验组儋州鸡血清总抗氧化能力(T-AOC)显著升高(P<0.05),但仍显著低于CON组(P<0.05)。M-CDN、H-CDN组的SOD活性显著高于L-CDN组(P<0.05),H-CDN组的CAT、GSH-Px活性显著高于L-CDN、M-CDN组(P<0.05)。(4)与HS组相比,3个试验组儋州鸡血清白细胞介素-1β(IL-1β)含量均显著降低(P<0.05);M-CDN、H-CDN组儋州鸡血清IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量均显著降低,IL-10含量显著升高(P<0.05),且均与CON组无显著差异(P>0.05),3个试验组间差异均不显著(P>0.05)。【结论】饲料中添加豆蔻明可以对热应激儋州鸡部分血清生化指标起到调节的作用,促进免疫器官的发育,增强机体免疫能力,缓解热应激带来的肝脏损伤,提高机体抗氧化能力,改善热应激诱导的免疫应激及炎症,儋州鸡慢性热应激豆蔻明推荐添加剂量为200 mg/kg。

豆蔻明通过激活芳香烃受体/核因子红系2相关因子2/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3信号通路减轻脂多糖诱导的猪小肠上皮细胞的氧化应激和炎症反应

本试验旨在研究豆蔻明(CDN)在猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)中通过芳香烃受体/核因子红系2相关因子2/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(AhR/Nrf2/NLRP3)信号通路对抗氧化应激和抗炎的作用机制。用分别含有0、1、3、10、30、60、100μmol/L CDN的培养液处理IPEC-J2细胞2 h,通过CCK-8法检测细胞活力,确定最佳浓度。将IPEC-J2细胞分为对照组(CON组)、CDN组、脂多糖组(LPS组)、LPS+CDN组(L+C组),每组3个重复。CON组细胞不做任何处理,LPS组添加1μg/mL LPS,L+C组添加1μg/mL LPS和最佳浓度CDN一同处理,之后收集细胞和上清。利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞因子含量,实时荧光定量PCR检测相关基因mRNA相对表达量及试剂盒检测抗氧化能力。结果表明:当CDN浓度为60μmol/L时,IPEC-J2细胞活力与CON组无显著差异(P>0.05),表明该CDN浓度对IPEC-J2细胞是安全的,因此,后续选用60μmol/L CDN处理IPEC-J2细胞。与CON组相比,LPS组IPEC-J2细胞中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)的含量显著升高(P<0.05),白细胞介素-10(IL-10)的含量显著减少(P<0.05);丙二醛(MDA)含量显著升高(P<0.05),谷胱甘肽(GSH)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和总抗氧化能力(T-AOC)显著降低(P<0.05);Nrf2、醌氧化还原酶1(NQO1)和细胞色素P4501A1(CYP1A1)mRNA相对表达量显著降低(P<0.05),Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)与半胱天冬酶-1(Caspase-1)mRNA相对表达量显著升高(P<0.05);与LPS组相比,L+C组IPEC-J2细胞中IL-10的含量显著升高(P<0.05),IL-1β的含量显著减少(P<0.05);MDA含量显著降低(P<0.05),GSH含量以及SOD、CAT、GSH-Px活性和T-AOC显著升高(P<0.05);Nrf2、NQO1、血红素加氧酶-1(HO-1)及CYP1A1 mRNA相对表达量显著升高(P<0.05),Keap1、NLRP3、ASC与Caspase-1 mRNA相对表达量显著降低(P<0.05)。综上所述,CDN在IPEC-J2细胞中通过激活AhR/Nrf2/NLRP3信号通路提高抗氧化酶活性并启动下游靶基因表达来发挥抗炎和抗氧化应激的作用。

芳香烃受体(AhR)活化对免疫应激仔猪肠道菌群及短链脂肪酸含量的影响

试验旨在探究芳香烃受体(AhR)活化对免疫应激仔猪结肠菌群及短链脂肪酸含量的影响。选择21日龄健康状态良好、体重相近的断奶仔猪24头,随机分为4组,每组6个重复,每个重复1头猪。对照组(CON)仔猪饲喂基础日粮,LPS应激组(LPS)仔猪屠宰前腹腔注射100μg/kg BW脂多糖(LPS)。FICZ组(FICZ)仔猪腹腔注射250μg/kg 6-甲酰基吲哚并[3,2-B]咔唑(FICZ)+屠宰前注射LPS,CDN组(CDN)仔猪腹腔注射6 mg/kg豆蔻明(CDN)+屠宰前注射LPS。试验期15 d。结果显示,与LPS组相比,FICZ组丙酸、丁酸和戊酸含量显著增加(P<0.05);CDN组仔猪结肠Chao1、Observed species指数显著增加(P<0.05),戊酸含量增加。与LPS组相比,在门水平上,FICZ和CDN组仔猪结肠蓝藻门相对丰度明显增加,厚壁菌门相对丰度明显降低;在属水平上,FICZ和CDN组仔猪结肠Anaerotruncus、梭状芽孢杆菌属、阿利斯佩斯菌属、盐单胞菌属、气微菌属、Sediminispirochaeta、帕拉普菌属、粪球菌属、副萨特菌属、Intestinimonas、互养菌属、柯林斯氏菌属、Barnesiella和Odoribacter相对丰度明显提高。研究表明,AhR活化可调控仔猪结肠肠道菌群组成及短链脂肪酸的合成,缓解LPS诱导的肠道微生物屏障损伤。

草豆蔻中黄酮和双苯庚酮的抑菌活性

以两倍稀释法测定了草豆蔻（Alpinia katsumadai Hayata）种子中4种黄酮和双苯庚酮类化合物的抑菌效果。结果表明，反，反-1，7-二苯基-4，6-庚二烯-3一酮和山姜素对幽门螺杆菌（Helicobacter pylori）的最低抑菌浓度（MIC）达到1．25μg·mL^-1，与阳性药相比对幽门螺杆菌具有较强的抑菌活性；豆蔻明和乔松素对幽门螺杆菌的MIC分别为2．56和0．32mg·mL^-1。反，反-1，7-二苯基-4，6-庚二烯-3-酮和豆蔻明对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus Rosenbach）、表皮葡萄球菌[S．epidermidis（Winslow et Winshlow）Evans]、大肠杆菌[Escherichia coli（Migula）Castellani et Chalmers]等菌株的MIC分别为0．208～1．667和0．122—1．955mg·mL^-1，与阳性药相比具有较强的抑菌活性。乔松素和山姜素对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌等菌株的MIC分别为1．275～2．550和1．925—3.850mg·mL^-1，也有一定的抑菌作用。豆蔻明、乔松素、反，反-1，7-二苯基-4，6-庚二烯-3-酮和山姜素是草豆蔻的抑菌活性成分。

海南草豆蔻及其主要活性组分、金属元素含量的谱学测定

采用红外光谱、紫外光谱、荧光光谱及微波消解电感耦合等离子体质谱法对海南白沙和霸王岭两个产地的草豆蔻进行了分析。其乙醇提取物的红外光谱都具有1 051,1 390,2 976及3 300cm^(-1)左右表征黄酮类成分的特征吸收峰,二阶红外导数谱图显示了在2 977.72及2 899.94有相似吸收峰,在1 922.36及1 650.87cm^(-1)有显著差异吸收峰,可以鉴定区分海南不同产地的草豆蔻。利用紫外光谱法表征了两个不同产地草豆蔻的特征谱图,并根据有关的吸收原理,建立了测定草豆蔻植物中主要组分山姜素与豆蔻明含量的方法,获得了良好的分析精密度(0.42%~0.29%)和回收率(84.28%~117.41%)。测得白沙草豆蔻中山姜素和豆蔻明的含量分别为4.23%和3.83%,而霸王岭的分别为3.72%和3.34%。荧光测定结果表明,不同产地的草豆蔻乙醇提取物具有相似的荧光发射及激发光谱谱图,荧光强度的差别也再次证明白沙草豆蔻乙醇提取物的浓度大于霸王岭的。利用微波消解电感耦合等离子体质谱法分析了草豆蔻中的K,Ca,Mg,Na,Al,Fe,Mn,Cu,Zn等十七种金属元素及其含量。该研究为定性、定量地鉴定区别不同产地或不同种植批次的草豆蔻及测定其中主要活性组分的含量建立了简单可行的方法;根据实验测得的金属元素种类及含量的结果,可为进一步开发利用草豆蔻及提高食品安全意识提供更好的理论依据。

小豆蔻明对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响及其机制

目的:探讨小豆蔻明(CAR)对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:宫颈癌HeLa细胞分为对照组(不进行任何处理)和不同浓度(10、20和40μmol∙L-1)CAR组(给予10、20和40μmol∙L-1CAR)。CCK-8法检测处理24、48和72 h后各组宫颈癌HeLa细胞活性,菌落形成实验检测各组宫颈癌HeLa细胞克隆形成数,Hoechst33258染色观察各组宫颈癌HeLa细胞凋亡形态表现,Western blotting法检测各组宫颈癌HeLa细胞中B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,各时间点不同浓度CAR组HeLa细胞活性明显降低(24 h:P=0.0118;48 h:P=0.0004;72 h:P=0.0022);与对照组比较,不同浓度CAR组HeLa细胞克隆形成数均明显降低(P<0.01);与对照组比较,不同浓度CAR组HeLa细胞出现明显核聚集、皱缩或碎裂的凋亡形态;与对照组比较,不同浓度CAR组HeLa细胞中Bcl-2、p-PI3K(P=0.0118)和p-AKT(P=0.0349)蛋白表达水平明显降低,Bax蛋白表达水平明显升高,Bcl-2/Bax比值明显降低(P<0.01)。结论:CAR通过调控PI3K/AKT信号通路诱导凋亡并抑制HeLa细胞增殖。

HPLC法测定不同产地草豆蔻中山姜素与小豆蔻明的含量

目的测定不同产地草豆蔻中主要有效成分山姜素与小豆蔻明的含量。方法采用HPLC测定山姜素与小豆蔻明的含量。色谱条件:Kromasil C18(5μm,250mm×4.60mm)色谱柱;以甲醇-水为流动相(70:30),流速为1mL.min-1,检测波长为300nm。结果山姜素与小豆蔻明的线性范围分别为0.058～0.406μg(r=1),0.064～0.448μg(r=0.9999);平均加样回收率(n=6)分别为96.41%,99.18%,RSD分别为0.81%,0.64%。结论不同产地草豆蔻中山姜素与小豆蔻明的含量存在显著性差异。

HPLC测定草豆蔻中山姜素、小豆蔻明的含量

目的：为评价草豆蔻的质量，建立其中山姜素和小豆蔻明的含量测定方法。方法：高效液相色谱法，用ＳｈｉｍＰａｃｋＣＬＣＯＤＳ柱（５μｍ，１５０ｍｍ×６ｍｍ）以甲醇水（８０∶２０）作流动相，流速１ｍｌ·ｍｉｎ－１，检测波长为３００ｎｍ，外标法定量。结果：山姜素、小豆蔻明进样量在００５μｇ～０２６μｇ范围内，进样量与峰高呈线性关系（ｒ分别为０９９９６，０９９９８）。山姜素平均加样回收率为１０１９％，ＲＳＤ＝０１８％；小豆蔻明平均加样回收率为１０００％，ＲＳＤ＝３６％，ｎ＝５。测定５批草豆蔻样品，山姜素含量０５０％～１４５％，小豆蔻明含量００７％～０７２％；草豆蔻果皮、茎叶、根茎中此２种成分的含量均在０２％以下。结论：方法简便、可靠。

小豆蔻明联合吉非替尼抑制非小细胞肺癌PC9/GR细胞增殖及其作用机制研究

目的探讨小豆蔻明联合吉非替尼对人非小细胞肺癌PC9/GR细胞增殖调亡的影响。方法CCK-8检测吉非替尼和小豆蔻明对PC9/GR增殖抑制作用,同时,分别以IC15浓度的小豆蔻明、IC50浓度的吉非替尼和两药联用(小豆蔻明+吉非替尼)处理细胞,利用划痕实验检测两药单独及联合对PC9/GR细胞转移的影响;流式细胞术检测两药单独及联合对PC9/GR细胞凋亡和周期的影响;Western-blot检测NF-κB和mTOR信号通路相关蛋白及凋亡周期相关蛋白。结果小豆蔻明联合吉非替尼能够显著抑制PC9/GR细胞的增殖,其抑制效率明显高于吉非替尼单独用药,小豆蔻明和吉非替尼联合用药能诱导PC9/GR细胞G2/M期阻滞和凋亡,同时抑制NF-κB和mTOR信号通路。结论小豆蔻明和吉非替尼具有协同抑制PC9/GR细胞增殖作用,其机制可能与小豆蔻明抑制mTOR及NF-κB信号通路导致肿瘤细胞凋亡密切相关。

豆蔻素抗炎作用研究进展

豆蔻素是一种从姜科植物草豆蔻和其他植物中提取的天然查耳酮化合物。现代药理学研究证明豆蔻素具有强大的抗炎作用,广泛用于各种炎症性疾病的治疗。此外,豆蔻素还具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗原虫等作用。豆蔻素通过调节转录因子、细胞因子、酶和其他蛋白质等信号分子的表达,在人体炎症性疾病中发挥广泛的抗炎作用。因此,全面了解豆蔻素的抗炎作用及具体机制,可以为豆蔻素的开发利用提供更多依据,为临床抗炎治疗提供更多选择。

JQ-1联合小豆蔻明对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响

目的探讨JQ-1与小豆蔻明(CAR)联用对乳腺癌细胞MCF-7增殖和细胞凋亡的影响。方法将MCF-7细胞实验分为空白组(不给药)、对照组(10.00μmol·L^(-1)CAR)、实验组(25.00μmol·L^(-1)JQ-1)及联合组(10.00μmol·L^(-1)CAR+25.00μmol·L^(-1)JQ-1)。4组细胞均培养48 h。用CCK-8法检测细胞的增殖能力,用Annexin-V FITC/PI双染法检测细胞的凋亡情况,用蛋白质印迹法检测磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和活化后胱天蛋白酶7(Cleaved Caspase7)的表达水平。结果联合组、实验组、对照组和空白组的增殖率分别为(47.79±11.27)%、(66.75±26.56)%、(74.57±13.59)%和(100.00±0)%,细胞晚期凋亡率分别为(24.17±1.27)%、(7.07±0.80)%、(14.70±3.12)%和(4.98±2.98)%,p-PI3K蛋白相对表达水平分别为0.87±0.02、1.11±0.06、1.09±0.03和1.00±0.00,p-AKT蛋白相对表达水平分别为0.31±0.05、0.96±0.06、0.96±0.16和1.00±0.00,Cleaved Caspase7蛋白相对表达水平分别为2.70±0.04、1.51±0.03、1.28±0.01和1.00±0.00。联合组的上述指标与空白组、对照组、实验组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论JQ-1与CAR联用对乳腺癌细胞MCF-7具有增强抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的作用,其作用机制可能与调控PI3K/AKT通路相关。

高速逆流色谱分离纯化草豆蔻中山姜素和小豆蔻明

目的建立高速逆流色谱分离纯化草豆蔻中山姜素和小豆蔻明的方法。方法使用正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水(5∶5∶7∶3)为两相溶剂系统,上相为固定相,下相为流动相,体积流量2.0 mL/min,转速800 r/min,温度25℃,固定相的保留率为50%,检测波长300 nm,对草豆蔻粗提物进行分离。结果从100 mg草豆蔻粗提物中一步分离纯化得到17.2 mg山姜素和25.1 mg小豆蔻明。经HPLC分析,质量分数分别为98.1%、99.2%,其化学结构由1H-NMR和13C-NMR鉴定。结论与传统的、存在不可逆吸附现象的柱色谱法相比,高速逆流色谱分离纯化草豆蔻中山姜素和小豆蔻明的方法具有简单、高效、回收率高等优点。

高效液相色谱法测定山核桃叶中5个黄酮苷元含量

目的:采用反相高效液相色谱法同时测定山核桃叶中汉黄芩素、白杨素、小豆蔻明、球松素查尔酮、松属素的含量。方法:采用戴安Ultimate 3000系统,使用戴安Acclaim 120 C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-0.1%乙酸水溶液(70∶30)为流动相,流速1.0 mL.min-1,柱温为30℃,检测器为戴安Ultimate 3000 DAD,以对应化合物最大吸收波长(汉黄芩素272nm、白杨素262 nm、小豆蔻明342 nm、球松素查尔酮342 nm、松属素284 nm)为检测波长,同时对山核桃叶中5个黄酮苷元进行含量测定。结果:在上述条件下,汉黄芩素、白杨素、小豆蔻明、球松素查尔酮、松属素浓度分别在1.27～25.3、2.56～51.2、1.29～25.6、5.01～100.2和5.06～101.2μg.mL-1范围内线性关系良好,平均加样回收率(n=9)分别为98.83%、99.27%、101.1%、98.70%和99.54%;测得山核桃叶中上述的5个化合物平均含量(n=3)分别为0.0183%、0.1142%、0.0618%、0.7934%和0.3368%。结论:本法同时测定山核桃叶中汉黄芩素、白杨素、小豆蔻明、球松素查尔酮、松属素5个黄酮苷元,为评价和监控山核桃叶质量及其深入研究与开发奠定了良好基础。

微波辅助提取草豆蔻中山姜素和小豆蔻明工艺研究

利用微波辅助提取法,采用单因素和正交试验对草豆蔻中山姜素和小豆蔻明的提取工艺进行优化,确定最佳工艺条件为:100%乙醇、12倍溶剂用量、提取时间12 min、微波功率800 W,提取2次,山姜素和小豆蔻明的提取率分别为8.73 mg/g和0.99 mg/g。所选取的提取工艺提取效率高、稳定,为草豆蔻的药物综合利用提供了依据。