α-细辛醚上调细胞色素C及Caspase-3表达影响食管癌Eca-109细胞的生物学行为

目的:分析α-细辛醚上调细胞色素C(cytochrome C,cytC)及Caspase-3表达对食管癌Eca-109细胞生物学行为的影响。方法:将食管癌Eca-109细胞随机等量分为4组,即低、中及高剂量(分别给予25、50及100 mg/L的α-细辛醚),另随机取等量细胞加入等体积培养液作为空白组,培养48 h后通过平板克隆实验检测4组细胞增殖情况,Annexin V/PI法检测细胞凋亡情况,RT-qPCR及Western Blot法检测细胞中cytC及Caspase-3 mRNA及蛋白表达。结果:(1)细胞克隆数在空白组最高,低剂量组显著高于高剂量组;凋亡率在空白组最低,低剂量组显著低于高剂量组。(2)4组细胞迁移至小室下的细胞数空白组>低剂量组>中剂量组>高剂量组。(3)CytC及Caspase-3蛋白在高剂量组表达显著高于空白组及低剂量组,且中剂量组表达高于空白组。(4)CytC及Caspase-3 mRNA的表达:高剂量组>中剂量组>低剂量组>空白组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:α-细辛醚抑制Eca-109细胞增殖及侵袭,并且可能通过上调cytC及Caspase-3表达促进调亡。

苦参碱改构体X调控Caspase-3,Caspase-8和Caspase-9蛋白表达诱导人鼻咽癌CNE1凋亡的研究

目的研究苦参碱改构体X体外诱导人鼻咽癌CNE1细胞凋亡的机制。方法用不同剂量改构体X处理CNE1细胞48h,透射电镜观察CNE1细胞超微结构变化;Westernblot检测改构体X对CNE1细胞内Caspase-3,-8,-9蛋白表达的影响。结果苦参碱改构体X作用CNE1 48 h后,细胞出现皱缩,核内异染色质明显增多,核周隙增大,凋亡小体形成等细胞凋亡特征形态,高剂量组较低剂量组细胞凋亡程度更加明显;Western blot检测显示,与阴性对照组相比,除低剂量改构体X对Caspase-8无上调作用外,其他剂量组可上调凋亡相关蛋白Caspase-3,-8,-9的表达(P<0.01),且具有剂量依赖性。结论苦参碱改构体X可通过上调促凋亡蛋白Caspase-3,-8,-9的表达诱导CNE1细胞凋亡。

四君子丸含药血清对人肺腺癌SPCA1细胞凋亡及Caspase-3/8/9表达的影响

目的探讨四君子丸含药血清对人肺腺癌SPCA1细胞凋亡及Caspase3/8/9 mRNA表达的影响。方法 30只SPF级雄性大鼠随机分为对照组(n=20)、四君子丸组(n=10)。对照组每日给予1ml/100g生理盐水灌胃,四君子丸组按照每日0.648g/100g灌胃,每天1次,共7d,第7天灌胃给药1.5h后腹主动脉取血分离出血清;采用含10%对照组血清以及10%四君子丸组血清的DMEM培养基分别培养SPCA1细胞;加药处理48h后采用流式细胞仪检测分析SPCA1细胞凋亡率的改变;同时采用Real-time PCR的方法检测SPCA1细胞中Caspase-3/8/9 mRNA表达水平的改变。结果与10%对照血清组相比较,10%四君子丸血清组SPCA1细胞的凋亡率显著增加[(2.33±0.31)%vs(6.13±0.51)%(P<0.01)],细胞中Caspase-3/8/9 mRNA含量均显著上调(P<0.01)。结论四君子丸含药血清可以促进人肺腺癌SPCA1细胞的凋亡,促凋亡可能是四君子丸治疗肺癌的潜在机制。

吉西他滨作用于肝癌HepG2细胞后对DR5、caspase-8、caspase-9和caspase-3表达的影响

目的研究吉西他滨作用于HepG2细胞后DR5、caspase-8、caspase-9、caspase-3的表达,以期探讨吉西他滨诱导HepG2细胞凋亡的机制。方法应用MTT法和流式细胞仪体外研究吉西他滨对HepG2细胞增殖的影响;采用免疫细胞化学及Western blot法,观察吉西他滨作用于HepG2细胞24h后DR5、caspase-8、caspase-9、caspase-3的表达情况。结果吉西他滨对肝癌HepG2细胞的抑制作用呈时间和浓度依赖性;吉西他滨作用于HepG2细胞24h后,细胞表面DR5及caspase-8、caspase-9、caspase-3的表达均增强。结论吉西他滨诱导肝癌HepG2细胞凋亡的机制可能与其能够上调DR5及caspase-8、caspase-9、caspase-3的表达有关。

大黄素对人宫颈癌Hela细胞Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9表达的影响

1材料大黄素：美国Sigma公司。人宫颈癌细胞Hela：ATCC。Caspase-9、Caspase-8、Caspase-3和β-actin一抗：美国CellSig-naling Technology公司;荧光标记的二抗：Invitrogen公司。电泳仪和电转仪：美国Bio-Rad公司;扫膜仪：购自美国LI-COR公司。2方法人宫颈癌细胞Hela培养和传代：于含10%胎牛血清、100μg/ml链霉素和100U/ml青霉素的DMEM中培养,细胞在相对湿度为95%、

黄芪-当归对新鲜同种异体骨软骨移植术后兔软骨细胞凋亡及Bax、caspase-3/9表达的影响

目的 通过观察黄芪-当归对软骨细胞凋亡的干预作用,探讨黄芪-当归对新鲜同种异体骨软骨移植成活的影响。方法 4月龄新西兰白兔48只,雌雄各半,随机分为假手术组、模型组、阳性组、黄芪当归5:1组。除假手术组外,其余组雌雄互为供体与受体,进行膝关节骨软骨交叉移植造模。药物干预8周后取材,进行大体观察、HE染色、番红-O染色、免疫组化染色、qPCR及Western blot检测。结果 与模型组相比,黄芪当归5:1组、阳性组移植修复部位愈合较好,软骨细胞形态趋于正常,分裂增殖明显;蛋白多糖沉积增多,Ⅱ型胶原含量较高,差异均有统计学意义(P<0.05);qPCR及Western blot结果显示,与模型组相比,其余组Bax、caspase-3、caspase-9 mRNA及蛋白表达量均明显降低(P <0.05)。结论 黄芪-当归可促进新鲜同种异体骨软骨移植成活,其机制可能与促进胶原蛋白的产生、促进软骨细胞增殖与抑制软骨细胞凋亡有关。

FGF-1对TGF-β_1诱导的H9c2心肌细胞凋亡与Caspase-3,Caspase-8和Caspase-9表达的关系研究

目的观察酸性成纤维细胞生长因子(FGF-1)对转化生长因子-β_1(TGF-β_1)诱导的H9c2心肌细胞凋亡作用及对半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),半胱氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)和半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)表达的影响,并探讨可能机制。方法体外培养H9c2细胞,随机分为5组:模型组,肝素(Heparin)组、FGF-1组、FGF-1/Heparin组和正常对照组。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色分析检测H9c2细胞的存活率,TUNEL染色检测H9c2细胞凋亡指数和Western blot分析检测H9c2细胞Caspase-3,Caspase-8和Caspase-9的表达。结果模型组H9c2细胞存活率与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),模型组降低;FGF-1组和FGF-1/Heparin组H9c2细胞存活率与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05),FGF-1组和FGF-1/Heparin组均升高。模型组H9c2细胞凋亡指数,Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),模型组升高;FGF-1组和FGF-1/Heparin组H9c2细胞凋亡指数,Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05),FGF-1组和FGF-1/Heparin组降低。结论FGF-1对TGF-β_1诱导的H9c2心肌细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与抑制Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达有关。

Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9在胎膜早破中的作用

目的:通过检测自发性胎膜早破患者、正常分娩产妇和择期剖宫产产妇胎膜中凋亡因子Caspase-3,-8,-9蛋白的表达及定位,探讨凋亡因子Caspase-3-、8-、9在自发性胎膜早破中的作用。方法:取自发性胎膜早破未发动分娩行剖宫产的患者的胎膜(即胎膜早破组)8例,正常经阴道分娩产妇的胎膜(即阴道分娩组)8例以及无产科并发症择期剖宫产的产妇的胎膜(即剖宫产组)8例,其中,阴道分娩组和剖宫产组均作为对照组。应用免疫组化方法(SP法)对三组胎膜中Caspase-3,-8,-9蛋白的表达及定位进行检测,同时在光学显微镜下观察胎膜组织形态学的改变,在透射电镜下观察胎膜细胞超微结构的变化。结果:Caspase-3,-9蛋白在3组胎膜中均表达,Caspase-3,-9蛋白主要表达在羊膜上皮细胞、绒毛膜滋养层细胞,少数表达于网状细胞和间叶细胞,均为胞浆表达,胎膜早破组Caspase-3蛋白表达量(OD)为[(62.86±3.83)×10-2],高于阴道分娩组[(42.33±2.99)×10-2]和剖宫产组[(20.97±2.94)×10-2],在阴道分娩组的表达高于剖宫产组,两两比较,差异有统计学意义(P<0.05);胎膜早破组Caspase-9蛋白表达量为[(52.20±3.28)×10-2],高于阴道分娩组[(25.87±5.52)×10-2]和剖宫产组[(17.65±1.78)×10-2],在阴道分娩组的表达高于剖宫产组,两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Caspase-8在3组几乎不表达。胎膜早破组胎膜在光镜下观察发现组织形态学发生明显改变,电镜下可观察到大量凋亡细胞。结论:Caspase-9和Caspase-3分别作为凋亡的线粒体途径的启动因子和效应因子,在胎膜早破中表达明显增高,超微结构也观察到大量凋亡细胞。因此推测线粒体途径的凋亡在胎膜早破发病机制中可能起到一定的作用。

筋脉通含药血清对高糖培养施万细胞8-羟基脱氧鸟苷和活化的caspase-3表达的影响

目的探讨筋脉通含药血清对高糖培养施万细胞8-羟基脱氧鸟苷(8-hydoxydeoxyguanosine,8-OHdG)水平及活化的半胱氨酸天冬氨酸酶3(cysteine aspartase-3,caspase-3,)(17kDa)蛋白及mRNA表达的影响。方法将体外培养的施万细胞分为高糖组、筋脉通组(加入筋脉通含药血清)、维生素C组(加入维生素C含药血清)及正常对照组,采用酶联免疫吸附法检测施万细胞上清液中8-OHdG的分泌量,免疫荧光法检测活化的caspase-3(17kDa)蛋白表达,实时荧光定量PCR法检测活化的caspase-3(17kDa)mRNA的表达。结果与正常对照组比较,高糖培养施万细胞上清液中8-OHdG的分泌量及细胞内活化的caspase-3(17kDa)蛋白和mRNA表达均明显升高(P<0.01);与高糖组比较,筋脉通组细胞上清液中8-OHdG的分泌量及细胞内活化的caspase-3(17kDa)蛋白和mRNA表达明显降低(P<0.01)。结论筋脉通含药血清可改善高糖导致的施万细胞DNA氧化损伤和细胞凋亡,提示筋脉通可能改善糖尿病神经病变之氧化损伤及细胞凋亡。

α-细辛醚对Eca-109细胞凋亡及XIAP、caspase-3表达的影响

目的:观察α-细辛醚对人食管癌Eca-109细胞凋亡的影响及XIAP、caspase-3表达的变化,探讨α-细辛醚的可能作用机制。方法:Eca-109细胞分为5组,分别给予5-氟尿嘧啶(阳性对照组),25、50、100 mg/Lα-细辛醚(α-细辛醚低、中、高剂量组)处理,或仅给予等体积的培养液(空白对照组)。培养48 h后,行AO/EB染色,荧光倒置显微镜下观察细胞形态,用MTT法、Annexin-V-PI法分别检测细胞增殖和凋亡,用Western blot、实时荧光定量PCR分别检测空白对照组、α-细辛醚中剂量组及高剂量组XIAP、caspase-3 mRNA及蛋白的表达水平。结果:与空白对照组比较,α-细辛醚低、中、高剂量组及阳性对照组细胞的增殖率降低、凋亡率升高(P均<0.05)。与空白对照组比较,α-细辛醚中、高剂量组XIAP mRNA及蛋白的表达均降低,caspase-3 mRNA及蛋白的表达均升高(P均<0.05)。结论:α-细辛醚可下调XIAP的表达、上调caspase-3的表达,从而抑制Eca-109细胞增殖、促进其凋亡。

高磷通过SET8-shRNA调控AKT/Caspase-3通路促进血管平滑肌细胞凋亡

目的探讨高磷通过SET8-shRNA调控AKT/Caspase-3通路促进大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)发生钙化的机制。方法将血管平滑肌细胞随机分为两组:正常组和高磷组(10 mmol/Lβ-甘油磷酸)。采用茜素红染色及钙含量检测血管平滑肌细胞钙化,采用实时荧光定量及Western blot检测SET8、AKT、Caspase-3 mRAN和蛋白表达情况。为验证SET8在细胞钙化中的作用,将大鼠VSMCs分为6组:正常组、空质粒组、SET8低表达组(转染SET8-shRNA质粒)、高磷组(10 mmol/Lβ-甘油磷酸)、空质粒+高磷组(高磷基础上转染SET8过表达的对照质粒)、SET8过表达+高磷组(高磷基础上转染SET8过表达质粒)。检测各组血管平滑肌细胞的钙化、凋亡及AKT、Caspase-3表达情况。为进一步验证AKT在VSMCs钙化中的作用,将血管平滑肌细胞分为3组:AKT抑制剂组(1μl DMSO+AKT抑制剂LY294002)、对照组(1μl DMSO)和正常组,检测AKT、Caspase-3 mRAN和蛋白表达。结果与正常组比较,高磷组细胞钙化结节增多,钙含量增加(P<0.05),STE8和AKT表达降低,Caspase-3表达升高(P<0.05)。与正常组和空质粒组比较,SET8-shRNA组细胞钙化和凋亡增多,AKT表达降低,Caspase-3表达升高(P<0.05);与高磷组和空质粒+高磷组比较,SET8过表达+高磷组细胞钙化和凋亡减少,AKT表达升高,Caspase-3表达降低(P<0.05)。与正常组和对照组比较,AKT抑制剂组AKT表达显著降低,Caspase-3表达显著升高(P<0.05)。结论高磷通过SET8-shRNA抑制AKT活化,进而促进Caspase-3表达,增加VSMCs凋亡,从而影响细胞钙化的发生。

胰岛素样生长因子-1对大鼠缺血后caspase-3和caspase-9 mRNA及蛋白表达的影响

目的探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对大鼠局灶性脑缺血再灌注(I/R)后caspase-3和-9 mRNA及蛋白表达的影响。方法30只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、缺血组及IGF-1治疗组。应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,应用免疫组化方法检测caspase-3及-9的蛋白表达,应用RT-PCR方法检测caspase-3及-9 mRNA的表达。结果IGF-1治疗组与缺血组相比,caspase-3和-9蛋白及mRNA表达显著减少(P<0.01)。结论IGF-1能显著减少脑I/R后caspase-3和-9蛋白及mRNA表达,对脑I/R损伤发挥保护作用。

P38/caspase-3介导的MEF2C信号通路参与大鼠脑缺血再灌注损伤

目的观察大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区肌细胞促进因子(MEF)2C磷酸化(激活)和蛋白水平的变化规律,并探讨其可能的分子机制。方法采用SD大鼠四动脉结扎模型,用免疫印迹法检测蛋白表达,给药组大鼠在缺血前20min脑室给药。结果脑缺血再灌注可诱导MEF2C激活,6h达高峰;其蛋白表达在再灌后期(3～5d)明显下降。Caspase-3蛋白和激活的caspase-3(17ku)水平在再灌后期均显著增加;Caspase-3特异性抑制剂Ac-DEVD-CHO可明显阻止再灌3d的MEF2C蛋白表达降低。P38激酶抑制剂SB202190不但抑制再灌注6h的MEF2C激活,而且也降低了再灌注3d的caspase-3激活;但胞外信号调节激酶(ERK)5的反义寡核苷酸未显著影响MEF2C的磷酸化水平。结论P38/caspase-3依赖的MEF2C信号通路可能参与了大鼠脑缺血再灌注诱发的神经元凋亡过程。

JNK抑制剂对D-氨基葡萄糖衍生物诱导Eca-109细胞Caspase-3活化的影响

目的:观察特异性c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125对D-氨基葡萄糖衍生物(COPADG)诱导的Eca-109细胞Caspase-3激活及细胞凋亡的影响,并探讨COPADG诱导Eca-109细胞凋亡的潜在分子机制。方法:体外培养Eca-109细胞,以COPADG及SP600125与细胞作用,细胞间接免疫荧光染色观察P-JNK蛋白表达的改变,流式细胞术检测细胞凋亡率及Caspase-3活性的变化。结果:经SP600125处理后,COPADG诱导的Eca-109细胞P-JNK蛋白表达明显减弱,凋亡率明显减低,Caspase-3活性显著下调,与COPADG单作用组之间有显著性差异。结论:SP600125能够显著抑制COPADG诱导Eca-109细胞Caspase-3激活以及COPADG诱导Eca-109细胞凋亡,并间接证明JNK信号转导通路在COPADG诱导Eca-109细胞凋亡过程中发挥着重要作用。

清鼻丸对鼻—鼻窦炎家兔鼻黏膜组织Caspase-3和p38MAPK的影响

目的探讨清鼻丸对鼻—鼻窦炎家兔鼻黏膜组织Caspase-3和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的影响。方法将48只实验家兔随机分为正常组、假手术组、模型组、清鼻丸组,每组12只。采用窦口不完全堵塞加金黄色葡萄球菌诱导的兔慢性鼻—鼻窦炎模型。正常组不造模,不灌胃,常规喂养。假手术组造模,但窦腔内不填塞棉絮,不注入金黄色葡萄球菌悬浊液,模型组造模,两组自造模后第43天开始,每日以等量生理盐水灌胃。清鼻丸组自造模后第43天开始,给予清鼻丸14 g生药/(kg·d)灌胃。免疫组化法检测兔鼻窦黏膜组织Caspase-3蛋白表达,反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测p38MAPK mRNA表达。结果与正常组比较,模型组Caspase-3阳性细胞表达数目相对较多,p38MAPK mRNA表达显著增加,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,清鼻丸组Caspase-3阳性细胞和p38MAPK mRNA表达显著下调,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论清鼻丸具有改善鼻—鼻窦炎病理作用,其作用机制可能与其抑制Caspase-3和p38MAPK表达有关。

β-淀粉样蛋白_(25-35)杏仁核注射对大鼠海马Caspase-3及P38MAPK mRNA表达的影响

目的观察β-淀粉样蛋白(Aβ)_(25-35)对大鼠海马Caspase-3及P38MAPK mRNA表达的影响。方法雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠24只,随机分为正常对照、假手术、类阿尔茨海默病(AD)模型组,每组8只。类AD模型采用Aβ_(25-35)片段单侧杏仁核注射建立。采用免疫组织化学法检测Caspase-3蛋白的表达,原位杂交法检测P38MAPK mRNA的表达。结果类AD模型组大鼠的海马及额叶皮层Caspase-3及P38MAPKmRNA表达的阳性细胞数均显著高于正常对照及假手术组(P值均<0.01),光密度值亦均显著高于正常对照及假手术组(P值均<0.05)。结论 Aβ_(25-35)杏仁核单侧注射可诱导大鼠P38MAPK活性增加,并进一步促进Caspase-3等凋亡蛋白的过度表达,促使神经细胞凋亡的发生。

miR-378负性调节caspase-3蛋白表达减轻氧-糖剥夺致小鼠N2A细胞缺血损伤

目的探讨miR-378在氧-糖剥夺(OGD)致小鼠成神经瘤N2A细胞缺血损伤中的作用及其可能分子机制研究。方法离体培养N2A细胞,采用3 h OGD/24 h复糖复氧模拟缺血/再灌细胞模型,3-(4,5-二甲基噻唑)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法检测N2A细胞生存率,蛋白印迹(Western blot)检测caspase-3蛋白表达,实时定量RT-PCR检测miR-378和caspase-3 mRNA表达,荧光素酶报告基因验证miR-378对caspase-3 mRNA 3'非翻译区(UTR)的直接调控作用。结果 miR-378在N2A细胞内表达水平,随着3 h OGD复糖复氧时间的增加,而显著降低(P<0.05,n=5);在3 h OGD/24 h复糖复氧致N2A细胞缺血损伤中,上调或下调miR-378的表达水平可显著提高或降低N2A细胞生存率(P<0.05,n=6);而在非OGD条件下,miR-378表达水平改变对N2A细胞生存率则无明显影响;同样,在3 h OGD/24 h复糖复氧条件下,miR-378表达水平的改变可显著影响caspase-3蛋白表达(P<0.05,n=3)而非caspase-3 mRNA表达水平;共转染pri-miR-378可显著抑制含caspase-3 mRNA 3'-UTR的荧光素酶报告基因的表达(P<0.05,n=6)。结论 miR-378可通过负性调节caspase-3蛋白表达水平,来减轻OGD致N2A细胞缺血损伤,所获实验结果有助于从miRNAs水平为缺血性脑卒中提供潜在的治疗靶点。

血清Bax、Caspase-3、MDA、8-OHdG水平与癫痫发作及认知损害的关系

目的探讨血清BaxmRNA、Caspase-3mRNA、丙二醛(MDA)、8-羟基脱氧尿苷酸(8-OHdG)与癫痫发作、病情及认知损害的关系。方法选取我院收治的确诊的癫痫患者90例(病例组)、同期健康体检对象60例(对照组),收集时间2015年1月至2017年6月,采用实时荧光定量PCR技术检测两组外周血中BaxmRNA、Caspase-3mRNA,检测两组血清MDA、8-OHdG水平,按照患者癫痫发作情况、病情程度进行亚组分析。结果研究组患者的BaxmRNA、Caspase-3mRNA、MDA、8-OHdG水平、MoCA评分均显著的高于对照组(P<0.05);发作组患者的BaxmRNA、Caspase-3mRNA、MDA、8-OHdG水平、MoCA评分均显著的高于非发作组(P<0.05);癫痫发作组患者的BaxmRNA、Caspase-3mRNA、MDA、8-OHdG水平与NHS3评分均呈显著的正相关关系(P<0.05);90例癫痫患者的BaxmRNA、Caspase-3mRNA、MDA、8-OHdG水平与MoCA评分均呈显著的负相关关系(P<0.05)。结论癫痫患者的BaxmRNA、Caspase-3mRNA、MDA、8-OHdG水平较正常人群显著的升高,并且与患者病情严重程度、认知损害具有显著的相关性。

澳洲茄碱通过调控Bcl-2/Bax/caspase-3信号通路促进非小细胞肺癌发生凋亡

目的 探讨龙葵活性成分澳洲茄碱对非小细胞肺癌细胞PC9增殖、凋亡的影响。方法 体外培养PC9细胞,设对照组(0μmol/L)及澳洲茄碱不同剂量组(0、2、5、10、15、20、25μmol/L),CCK-8试剂盒检测澳洲茄碱对PC9细胞的增殖抑制作用;TMRE检测线粒膜电位;caspase3/7活性试剂盒联合GreenNuc?Caspase-3/Annexin V-mCherry染色检测caspase-3活性;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;给药处理或者使用PTEN抑制剂后,Western blot检测细胞中相关蛋白的表达量。结果 与对照组相比,经澳洲茄碱干预24、48、72 h后,PC9细胞的活力均明显降低(P<0.05);经澳洲茄碱干预24 h后,细胞线粒体膜电位明显降低,而细胞凋亡比例明显升高(P<0.05);caspase-3/7活力、活细胞Caspase-3活性及cleaved caspase-3蛋白表达均显著升高(P<0.01);PI3K和Akt磷酸化水平降低(P<0.05);而PTEN、Bax蛋白表达上调(P<0.05);抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白的表达下调(P<0.05)。结论 澳洲茄碱可通过调控Bcl-2/Bax/caspase-3通路及其上游蛋白活性而抑制PC9细胞增殖,促进其凋亡。

β-紫罗兰酮通过Caspase-3信号通路对乳腺癌细胞生物学行为的调控作用

目的研究β-紫罗兰酮通过Caspase-3信号对乳腺癌细胞生物学行为的调控作用。方法将人乳腺癌MCF-7细胞分为空白对照组与实验组,实验组按照β-紫罗兰酮的不同浓度,又分为25μmol/L组、50μmol/L组、100μmol/L组及200μmol/L组。分别采用CCK-8及台盼蓝计数法检测β-紫罗兰酮对MCF-7细胞增殖及生长曲线的影响,Hoechst 33258荧光染色法观察β-紫罗兰酮对MCF-7细胞凋亡形态的影响,RT-PCR及Western Blot法检测β-紫罗兰酮对Caspase-3 mRNA及蛋白表达的影响。结果与空白对照组相比,经不同浓度β-紫罗兰酮处理后的乳腺癌MCF-7细胞OD值均显著下降(P<0.05),实验组中经β-紫罗兰酮浓度25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L及200μmol/L处理后的MCF-7细胞增殖抑制率分别为7.92%、28.96%、45.22%和56.83%。不同浓度β-紫罗兰酮处理过的MCF-7细胞从第2天开始,较空白对照组的细胞计数显著降低(P<0.05),空白组对照组及β-紫罗兰酮浓度为25μmol/L组MCF-7细胞计数在7 d内随时间迁移呈上升趋势,经β-紫罗兰酮浓度为50、100及200μmol/L处理后的MCF-7细胞7 d内细胞计数呈下降趋势。Hoechst 33258荧光染色法检测发现,与空白对照组相比,给予β-紫罗兰酮处理过的人乳腺癌MCF-7细胞伴有不同程度的凋亡现象,而经β-紫罗兰酮浓度为200μmol/L处理后的细胞凋亡现象最明显。与空白对照组相比,经不同浓度β-紫罗兰酮处理过的MCF-7细胞Caspase-3 mRNA及蛋白表达水平均显著上升(P<0.05),且随β-紫罗兰酮浓度的升高,其Caspase-3 mRNA及蛋白表达呈上升趋势(P<0.05)。结论β-紫罗兰酮可能通过激活Caspase-3信号通路,抑制乳腺癌细胞增殖与生长,促进其凋亡,发挥抑癌作用。