顺铂对结肠癌细胞株Caco-2增殖凋亡和Bcl-2、Caspase3、Caspase9蛋白表达的影响

目的:探讨顺铂(顺式二氨二氯铂)(c i sdichlorodiamineplatinum,DDP)对人结肠癌Caco-2细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Caspase9、Caspase3表达的影响.方法:体外培养结肠癌Caco-2细胞;检测不同浓度DDP干预下MTT染色的A值,判定其对人结肠癌细胞恶性增殖的影响;不同浓度D D P对人结肠癌细胞凋亡的影响使用流式细胞仪进行检测,Western blot检测不同浓度DDP对人结肠癌细胞内Bcl-2蛋白的表达;应用分光光度法检测不同浓度DDP对人结肠癌细胞内Caspase9、Caspase3蛋白活性的影响.结果:(1)癌细胞增殖结果显示,在一定的作用时间范围内,Caco-2细胞存活率与DDP浓度呈负相关,具有剂量依赖性,其中4.000、2.000μg/m L干预的各组细胞抑制率最显著,差异均有统计学意义(P<0.05).而低剂量组0.250、0.125μg/m L及对照DMSO干预组细胞存活率比较差异均无统计学意义(P>0.05),其细胞存活率明显高于其他各浓度组,差异有统计学意义(P<0.01);(2)流式细胞仪检测结果显示:DDP能诱导Caco-2细胞的凋亡,其诱导凋亡的效果呈时间和剂量性依赖;(3)Western blot检测结果显示:Bcl-2蛋白在结肠癌Caco-2细胞中低表达,DDP干预Caco-2细胞72 h后,与对照组比较,Bcl-2蛋白表达明显下降(P<0.05).Caspase9、Caspase3在Caco-2细胞中低表达,DDP干预Caco-2细胞48、72 h后,与对照组比较,Caspase9、Caspase3表达明显升高(P<0.01).结论:顺铂可以抑制Caco-2细胞增殖、诱导Caco-2细胞凋亡,其机制可能与活化Caco-2细胞中Caspase9、Caspase3蛋白以及抑制Bcl-2蛋白表达有关.

雷公藤内酯对海人酸致痫大鼠神经元caspase3和caspase9蛋白表达的影响

目的 :通过检测海马神经元caspase3和caspase9蛋白表达,探讨雷公藤内酯抑制神经元凋亡的机制。方法 :结晶紫染色观察海马神经元形态,免疫组化法检测海马神经元caspase3和caspase9蛋白表达水平。结果 :结晶紫染色结果显示,海人酸组中,海马神经元变性或丢失,胞体皱缩,形态不规则。雷公藤内酯干预组中海马神经元的数量和形态与对照组相似,胞浆清晰淡染,核仁清楚。免疫组化染色显示,与对照组比较,海人酸组海马神经元caspase3和caspase9蛋白表达水平显著增高(P<0.05);与海人酸组相比,雷公藤内酯干预组神经元caspase3和caspase9蛋白表达水平显著减少(P<0.05)。结论 :雷公藤内酯可下调海人酸致痫大鼠海马神经元caspase3和caspase9蛋白表达,从而抑制神经元凋亡。

输尿管结石并发感染患者血清HMGB1、Caspase9及IL-10水平变化意义

目的探究输尿管结石并发感染患者血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase9)、白细胞介素-10(IL-10)水平变化意义。方法选取河北医科大学第一医院泌尿外科2019年1月至2022年1月收治的108例输尿管结石并发感染患者作为观察组,另选取同期50例单纯输尿管结石未并发感染患者作为对照组。比较两组血清HMGB1、Caspase9、IL-10水平;以观察组与对照组血清HMGB1、Caspase9、IL-10水平平均值为界分为低水平与高水平患者,分析血清HMGB1、Caspase9、IL-10水平对输尿管结石患者并发感染危险度的影响;根据患者住院期间是否发生尿源性脓毒症分组,比较发生与未发生尿源性脓毒症患者术前、术后1 d、7 d血清HMGB1、Caspase9、IL-10水平;并评价血清HMGB1、Caspase9、IL-10对输尿管结石并发感染患者尿源性脓毒症的预测价值。结果观察组血清HMGB1、Caspase9、IL-10水平较对照组高,差异均有统计学意义(P<0.05)。血清HMGB1、Caspase9、IL-10高水平者并发感染风险是低水平者的4.124倍、3.277倍、4.001倍(P<0.05)。术后7 d,发生尿源性脓毒症患者血清HMGB1、Caspase9、IL-10水平较未发生患者高,差异均有统计学意义(P<0.05)。绘制术后7 d血清HMGB1、Caspase9、IL-10水平预测输尿管结石并发感染患者预后的ROC曲线,各指标联合预测AUC为0.916,较单独预测价值更大(P<0.05)。结论输尿管结石并发感染患者血清HMGB1、Caspase9、IL-10水平升高,且随感染加剧、病情恶化其水平呈渐进性升高趋势,临床检测其水平,有助于预测感染及尿源性脓毒症风险,为临床工作提供依据。

夹脊电针对兔退变腰椎间盘组织中caspase3、caspase9表达的影响

目的:观察夹脊电针对兔退变腰椎间盘组织中caspase-3、caspase-9表达的影响。方法:将20只新西兰兔随机分为正常组(n=5)、假模型组(n=5)、模型组(n=5)、电针组(n=5)。正常组给予正常喂养,不予特殊处理;假模型组实验兔在L 4、L 5椎体间穿入克氏针,不予椎体间加压,不做治疗;模型组在L 4、L 5椎体间穿入两根平行的克氏针,然后在克氏针两端连接加压装置,不做治疗;电针组在成功造模的基础上,施以电针治疗。在造模后第28d各组实验兔取出腰椎间盘组织,并通过免疫组化检测其中caspase3、caspase9表达情况。结果:干预28d后,与正常组同期相比较,假模型组的caspase-3、caspase-9表达差异无统计学意义,模型组caspase-3、caspase-9表达水平均显著升高(均P<0.05);与模型组同期比较,电针组caspase-3、caspase-9表达均显著降低(均P<0.05)。结论:夹脊电针通过下调腰椎间盘组织中caspase-3、caspase-9表达,减少细胞凋亡,从而延缓腰椎间盘退变。

结肠癌中caspase9表达程度与癌周炎症程度关系的研究

目的:探讨原发性结肠癌中caspase9表达程度与肿瘤周围炎症程度的关系。方法:用免疫组化法检测138例结肠癌中caspase9蛋白的表达,用HE染色法检测肿瘤周围炎症程度,分析caspase9表达程度与炎症程度的关系。结果:caspase9的阳性程度与肿瘤周围炎症程度表达呈正相关,spearman秩相关系数rs=0.364,P=0.000。结论:结肠癌组织中caspase9的表达可能因肿瘤周围炎细胞的浸润而异常升高,但需进一步实验证实。

康肺扶正方对肺癌荷瘤鼠Caspase3、Caspase9、Smac及IL-2的影响

目的:观察康肺扶正方对肺癌荷瘤小鼠凋亡相关蛋白半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3、9(Caspase3、Caspase9)、线粒体蛋白(Smac)及对白介素2(IL-2)、白介素2受体(CD25)的影响。方法:以人肺癌细胞的荷瘤鼠模型作为研究对象,24只裸鼠荷瘤鼠随机分成4组,分别为模型组,环磷酰胺(CTX)对照组,康肺扶正方小、大剂量组。模型组给予生理盐水0.4ml/d灌胃;环磷酰胺组予环磷酰胺(CTX)(20mg·kg-1·d-1)腹腔注射,1次/d;康复扶正方小、大剂量组分别给予14g·kg-1·d-1、56g·kg-1·d-1灌胃,均1次/d,连续4周。检测各组裸鼠肿瘤体积、抑瘤率;且用免疫组织化学方法检测Caspase3、Caspase9、Smac表达;用酶联免疫吸附试验盒(ELISA)检测IL-2;流式方法检测CD25。结果:与生理盐水对照组相比,康肺扶正方小剂量组的瘤体积有所缩小,差异未达到统计学意义(P>0.05);康肺扶正方大剂量组的瘤体积缩小,且差异有统计学意义(P<0.05)。康复扶正方大剂量组Caspase3、Caspase9、Smac阳性表达率明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。康肺扶正方大剂量组小鼠血清中IL-2、CD25较对照组升高(P<0.05)。结论:康肺扶正方的体内抗癌机制可能通过增加肺癌凋亡及增强免疫功能而实现。

基于网络药理学及实验验证探讨仙茅对非小细胞肺癌顺铂增敏作用机制

目的:探讨中药仙茅对肺癌细胞顺铂化疗的增敏作用机制。方法:运用网络药理学和分子对接技术筛选仙茅对非小细胞肺癌的主要凋亡蛋白;CCK-8法检测细胞增殖率;蛋白印迹法检测仙茅、顺铂单用及联用后肺癌细胞(A549)中Caspase3和Caspase9蛋白表达量;流式细胞术检测细胞总凋亡率;细胞划痕和细胞侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果:100~1500μg/mL剂量浓度的仙茅水提液对A549细胞增殖率无明显抑制作用,联用组较顺铂单用组对A549细胞的抑制作用显著增强;与对照组相比,仙茅组、联用组Caspase3和Caspase9蛋白表达量、细胞总凋亡率以及细胞迁移侵袭抑制率显著升高,顺铂组Caspase3、Caspase9蛋白表达量、细胞总凋亡率显著升高;与顺铂单用组相比,仙茅组、仙茅联用顺铂组Caspase3和Caspase9蛋白表达、细胞总凋亡率以及细胞迁移侵袭抑制率显著升高。结论:仙茅、顺铂、仙茅联用顺铂可以诱导A549细胞凋亡,与仙茅联用增强了顺铂对A549细胞凋亡的诱导作用,其作用机制与凋亡相关蛋白Caspase3、Caspase9有关。同时,联用仙茅后顺铂对A549细胞增殖率及迁移侵袭能力的抑制作用也更加显著。

基于凋亡可控上皮组织的凋亡力产生及其作用机制研究

目的探究细胞凋亡对上皮细胞层的影响以及在细胞凋亡后上皮细胞层如何保持结构完整的机制。方法通过Caspase9对MCF10A细胞系进行修饰得到可以在诱导下发生凋亡的ind-MCF10A细胞。按照1∶3的比例接种ind-MCF10A细胞和MCF10A细胞,加入凋亡诱导剂诱导凋亡后对上皮细胞层完整性、剩余上皮细胞迁移速度、细胞形态进行观察,并探究了细胞凋亡对上皮细胞单层牵引力动力学的影响。结果诱导MCF10A细胞凋亡1200 min内上皮细胞层的透过率增加,2400 min时透过率恢复至正常水平,但细胞密度没有随恢复过程增加。诱导凋亡后1200 min内细胞迁移速度显著增加,细胞形状由圆形变为细长型,2400 min时恢复至凋亡前水平。通过TFM对细胞凋亡前后细胞牵引力进行测量,发现凋亡前变形场相对均匀,诱导细胞凋亡100 min后局部变形突然增加,随后转变为整体变形,最终稳定在相对均匀的状态。结论诱导MCF10A细胞凋亡会破坏上皮完整性,随着周围细胞扩散和迁移,上皮细胞层重组并完整恢复。上皮细胞层完整性被破坏后细胞与细胞之间的机械相互作用发生了变化,细胞凋亡打破了上皮细胞层的力平衡,活细胞承受增加的牵引力而发生迁移,维持上皮完整性。

胃癌组织中Caspase 3、Caspase 9的表达及其临床意义

目的探讨胃癌组织中Caspase 3和Caspase 9蛋白的表达及其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测50例胃癌组织和40例癌旁正常胃黏膜组织中Caspase 3、Caspase9蛋白表达水平,并分析两者表达与胃癌临床病理特征和预后的关系及两者之间的相关性。结果胃癌组织中Caspase3、Caspase 9蛋白表达均低于癌旁正常胃黏膜组织,差异有统计学意义(P<0.05);Caspase 3和Caspase 9蛋白表达水平与胃癌组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移相关(P<0.05),而与浸润深度无相关性(P>0.05)。两者在胃癌组织中的表达呈正相关(rs=0.636,P<0.05)。结论 Caspase3、Caspase 9的异常表达参与胃癌的发生、发展,两者起正协同作用。Caspase 3、Caspase 9与胃癌临床病理特征密切相关,可作为判断胃癌患者病情进展及预后的生物学标志物,有望成为胃癌未来治疗的新靶点。

当归多糖、黄芪多糖及其配伍对化疗性骨髓抑制小鼠骨髓干细胞凋亡和脱核因子的影响

目的:通过实验研究当归多糖、黄芪多糖及其配伍对化疗性骨髓抑制小鼠骨髓干细胞细胞凋亡因子BCL-2、Caspase9、Bax,脱核因子C-myc、HDAC2的影响。方法:C57BL/6小鼠20只,雌雄各半,28~32g。给模型组小鼠每日腹腔注射一次环磷酰胺380mg·kg^-1,正常小鼠腹腔注射等量生理盐水,连续3d。造模后,以脱颈椎法处死各组小鼠,取出股骨,剔除肌肉和结缔组织,剪开股骨两端,用6号针头以生理盐水反复冲洗骨髓腔,并将冲出的骨髓打碎,再用4号针头过滤制成单个细胞悬液,在离心机上2000r/min,离心10min,去上清液,加入4mL冷70%乙醇固定,上振荡器摇匀制成骨髓干细胞样本。细胞实验分为6组,包括正常组、模型组、“EPO”组、“EPO+(G-CSF)”组、当归多糖组、黄芪多糖组、两药配伍组。直接给药当归多糖0.2mg/mL,黄芪多糖0.2mg/mL,EPO50U/mL,G-CSF50U/mL于骨髓干细胞体外培养体系中,培养3d,室内18~20℃,20%相对湿度,5%CO2,37℃孵育箱。采用RT-qPCR法检测骨髓干细胞中BCL-2、Caspase9、Bax、C-myc、HDAC2的mRNA表达。结果:(1)造模后模型组小鼠骨髓干细胞BCL-2mRNA表达下降,Caspase9、BaxmRNA表达升高,与正常组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。①各给药组与模型组BCL-2mRNA均有明显差异,当归多糖有提升BCL-2mRNA作用,黄芪多糖作用不明显,两药间有交互作用,合用不如单一用药。②各给药组与模型组Caspase9mRNA均有明显差异,当归多糖与黄芪多糖均有降低Caspase9mRNA作用,两药交互作用明显,合用不如单用黄芪多糖。③各给药组与模型组BaxmRNA均有明显差异,黄芪多糖有降低BaxmRNA作用,当归糖作用不明显,两药交互作用无统计学意义。(2)造模后模型组小鼠骨髓干细胞C-myc、HDAC2mRNA表达升高,与正常组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。①各给药组与模型组C-mycmRNA均有明显差异,当归多糖与黄芪多糖均有降低C-mycmRNA作用,两药交互作用明显,合用不如单一用药;②各给药组与模型组HDAC2mRNA均有明显差异,当归多糖与黄芪多糖均有降HDAC2mRNA作用,两药交互作用明显,合用不如单一用药。结论:当归多糖、黄芪多糖及其配伍对化疗性骨髓抑制小鼠骨髓干细胞能促进BCL-2mRNA表达、降低Bax、Caspase9mRNA表达,同时也能降低C-myc、HDAC2mRNA表达,对细胞凋亡因子和细胞脱核因子具有一定的调控作用。并且当归多糖、黄芪多糖两药交互作用明显,合用不如单一用药。

长春新碱通过下调SODD蛋白表达诱导白血病细胞凋亡新机制研究

目的研究死亡结构域沉默子(silencer of death domains,SODD)、caspase3、caspase8及caspase9在长春新碱诱导Jurkat白血病细胞凋亡过程中的变化,探讨长春新碱诱导肿瘤细胞凋亡的新机制。方法采用Annexin V/PI双标记流式细胞术检测长春新碱(VCR)作用后Jurkat细胞凋亡发生率;采用免疫印迹法分析SODD、caspase3、caspase8及caspase9蛋白表达的变化;ELISA酶联免疫吸附技术检测VCR作用Jurkat细胞后TNF-α分泌的变化;采用RT-PCR检测VCR对细胞,TNFR1mRNA表达的调节。结果Jurkat白血病细胞SODD蛋白高表达且高表达的SODD蛋白抑制肿瘤细胞凋亡,VCR能特异下调SODD蛋白的表达,有效诱导Jurkat细胞凋亡,但并不影响细胞TNF-α的分泌及TNFR1的表达;VCR诱导细胞凋亡过程中caspase3、caspase8酶原呈时间依赖性逐渐被水解剪切,而caspase9在该凋亡过程中无明显变化趋势。结论VCR下调SODD蛋白表达并启动外源性凋亡途径caspases级联(caspase8、caspase3),最终诱导Jurkat细胞凋亡,且VCR下调SODD蛋白的表达无需激活TNF/TNFR1信号途径即可导致凋亡的发生。

细胞色素C及相关细胞凋亡蛋白、基因在原发性肝癌组织表达的临床意义

目的观察外源性凋亡通路中Caspase8和Bid及内源性凋亡通路中Bcl-2、Bax、细胞色素C(Cyt-C)和Cas-pase9在50例原发性肝细胞癌(肝癌组)及30例正常肝组织(对照组)中的表达,并分析其与病理分期、肿瘤分化程度和淋巴结转移的关系。方法应用免疫组织化学方法检测Bax表达,应用核酸原位分子杂交方法检测Caspase8、Bid、Bcl-2、Cyt-C和Caspase9表达。结果 Caspase8表达强度与对照组比较呈升高趋势(P<0.05),阳性表达率组间差异未见统计学意义(P>0.05)。Bid阳性表达率与对照组比较呈下降趋势(P<0.01),表达强度两组间差异未见统计学意义(P>0.05)。Bcl-2阳性表达率和表达强度较对照组均明显下降(P<0.01),Bax阳性表达率和表达强度较对照组均下降(P<0.05和P<0.01)。Cyt-C和Caspase9的阳性表达率和表达强度两组间比较差异均未见统计学意义(P>0.05)。高、中分化肝癌组Cyt-C阳性表达率均明显高于低分化肝癌组(P<0.05和P<0.01),但其与病理分级和淋巴结转移未见相关性(P>0.05)。Caspase8、Bid、Bcl-2、Bax和Caspase9在不同病理分级、肿瘤分化程度和淋巴结转移组中表达差异均未见统计学意义(P>0.05)。结论在肝癌发生发展过程中,早期外源性凋亡通路发挥促凋亡活性,而随着肿瘤分化程度的降低,内源性凋亡通路发挥抗凋亡活性,且Cyt-C的表达调节应该是一晚期事件。

胃癌组织中caspase 9的表达及其多态性变化

目的:探讨胃癌中caspase 9基因的表达及其单核苷酸多态位点的分布.方法:应用Western-blot方法检测70例胃癌患者及对应癌旁正常组织中caspase 9的表达情况.应用限制性片段长度多态性技术结合测序,分析70例胃患者及100例正常人caspase 9基因rs1052576位点基因型.应用列联表法统计分析患者组和对照组SNP位点基因型及等位基因频率.结果:51.4%(36/70)的胃癌组织caspase 9基因表达明显下调,与癌旁正常组织相比差异有统计学意义(P<0.05).位于caspase 9基因第5外显子的SNP位点rs1052576的基因型频率和等位基因频率在两组人群中的分布差异有统计学意义.患者组G等位基因频率明显高于对照组(22.9% vs 13.0%,P<0.05),AG基因型频率在有淋巴结转移的患者中明显高于无淋巴结转移的患者(P<0.05).结论:caspase 9基因在胃癌中低表达,rs1052576多态位点G等位基因和胃癌的发生相关,AG基因型和淋巴结转移有关.

补阳还五汤对Aβ诱导大鼠微血管内皮细胞凋亡保护作用

目的:研究补阳还五汤对Aβ诱导的大鼠微血管内皮细胞(PMVEC)凋亡的影响。方法:建立Aβ损伤大鼠微血管内皮细胞模型,不同浓度(0.1、1、10μg/ml)补阳还五汤干预,MTT法检测大鼠微血管内皮细胞活力;western-blot法检测大鼠微血管内皮细胞中凋亡蛋白bax和caspase9表达水平。结果:补阳还五汤在浓度(0.1、1、10μg/ml)能够抑制Aβ诱导的大鼠微血管内皮细胞bax和caspase9蛋白的表达并呈浓度依赖性。结论:补阳还五汤能够通过抑制凋亡蛋白bax和caspase9的表达而具有保护大鼠微血管内皮细胞的作用,可能成为是一种有效的抗脑血管系统疾病治疗剂。

白花蛇舌草诱导白血病CEM细胞凋亡的分子机制

目的探讨白花蛇舌草通过调控细胞凋亡信号通络-死亡受体途径相关信号分子的表达诱导白血病CEM细胞凋亡的研究。方法分光光度法测定CEM细胞内凋亡酶半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(caspase)3、caspase8、caspase9的活性;免疫印迹实验测定caspase3、caspase8凋亡酶蛋白的表达。结果白花蛇舌草水提物浓度为6.64、33.20、166.0μg/ml分别作用于CEM细胞12、24、36h,细胞内凋亡酶caspase3、8的活性表达高于对照组(P<0.05),细胞内凋亡酶caspase9的活性表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。白花蛇舌草水提物不同浓度(6.64、33.20、166.00μg/ml)分别作用于CEM细胞不同时间(6、12、24h),凋亡酶蛋白caspase3、8的表达随白花蛇舌草作用浓度的增加和时间的延长呈上升趋势,且与对照组比较差异有显著意义(P<0.05)。结论白花蛇舌草水提物可通过上调细胞凋亡信号通路-死亡受体途径信号分子中caspase3、8的表达而达到诱导白血病CEM细胞凋亡。

苦参碱对骨肉瘤MG63细胞凋亡及Caspase蛋白表达的影响

目的:研究不同浓度苦参碱单独或联合顺铂对骨肉瘤细胞MG63细胞增殖的影响以及作用机制。方法:不同浓度苦参碱与顺铂作用于骨肉瘤MG63细胞,用MTT法检测其对MG63细胞增殖抑制的作用;流式细胞仪检测其作用于MG63细胞后细胞的周期改变以及凋亡情况;Western blot法检测其对MG63细胞中Caspase3,8,9等蛋白表达的影响。结果:苦参碱与顺铂均能够抑制MG63细胞增殖,呈时间-剂量依赖性。苦参碱能使细胞在G2期的阻滞增加,促进细胞凋亡,降低Caspase3,8,9等蛋白表达量,有剂量依赖性。结论:苦参碱不仅能直接杀伤细胞,而且能抑制Caspase信号通路,从而抑制肿瘤细胞的增殖。

骨形态发生蛋白7通过PI3K/Akt通路可抑制人髓核细胞的凋亡

背景:骨形态发生蛋白7可促进人髓核细胞的细胞外基质合成,减缓椎间盘退变。近年来,有学者提出其可能通过对抗髓核细胞凋亡从而发挥上述作用,但其进一步的分子机制一直未被详细阐明。目的:观察骨形态发生蛋白7对无血清诱导下发生凋亡的人髓核细胞产生的作用及其对PI3K/Akt通路的影响,分析并探讨骨形态发生蛋白7抑制人髓核细胞凋亡的分子机制。方法:通过改良Pfirrmann分级及相关条件选取12例患者获取椎间盘组织,采用酶消化法获取人髓核细胞后分组实验,以含体积分数15%胎牛血清的培养基正常培养的髓核细胞设为空白组;使用无血清培养基培养48 h诱导凋亡作为阳性对照组;在无血清条件下,通过加入不同剂量的骨形态发生蛋白7以及同时添加PI3K/Akt通路拮抗剂LY294002形成处理组和拮抗组。使用流式细胞术检测各组细胞凋亡率;免疫荧光观察p-Akt表达;蛋白印迹法检测Akt,p-Akt,BAD和Caspase 9等通路蛋白的表达变化。结果与结论:无血清凋亡诱导下,流式细胞术结果显示,随着骨形态发生蛋白7处理浓度上升,髓核细胞凋亡率明显下降,加入LY294002共同作用后细胞凋亡率再次升高(P<0.05)。p-Akt免疫荧光和蛋白印迹法检测结果进一步表明,与凋亡阳性对照组相比,加入骨形态发生蛋白7的实验组中,p-Akt表达明显增加,其下游凋亡相关蛋白BAD、Caspase 9蛋白表达减少(P<0.05),而在同时加入Akt通路拮抗剂LY294002后,p-Akt蛋白表达下降而凋亡相关蛋白的表达又恢复到相对较高的水平(P<0.05)。结果证明,骨形态发生蛋白7在无血清诱导的人类髓核细胞凋亡中通过激活PI3K/Akt通路,拮抗了BAD-Caspase 9相关的细胞凋亡过程,抑制了髓核细胞的退变。

PH Ⅱ-7作用于慢性粒细胞白血病细胞k562的机制研究

目的 PH Ⅱ-7是以靛玉红为模板合成的一种抗肿瘤药物,并有显著逆转耐药作用。实验室前期研究发现在人慢性粒细胞白血病k562细胞中,PH Ⅱ-7可与烯醇化酶ENO1相结合。本研究旨在探究PH Ⅱ-7通过ENO1对k562细胞体外抑癌作用机制。方法构建ENO1表达稳定干扰细胞株k562-shENO1和对照细胞株k562-shCON。通过MTT法检测PH Ⅱ-7对k562-shCON和k562-shENO1细胞株的生长抑制作用;通过细胞计数法检测k562-shCON和k562-shENO1细胞株生长差异;采用流式细胞仪测定细胞凋亡水平。采用逆转录PCR,实时荧光定量PCR和免疫印迹技术检测相关基因表达水平。结果通过real-time-PCR和免疫印迹实验验证k562-shCON和k562-shENO1干扰细胞株成功建立。k562-shENO1和k562-shCON细胞株体外生长无显著差异,PH Ⅱ-7对k562-shENO1和k562-shCON细胞株IC50无显著性差异。PH Ⅱ-7可诱导k562-shENO1和k562-shCON细胞株凋亡,并可激活caspase3、caspase9和PARP等凋亡相关蛋白。与k562-shCON相比较,k562-shENO1细胞对高浓度PH Ⅱ-7诱导凋亡作用更敏感。结论烯醇化酶ENO1与PH Ⅱ-7在人慢性粒白血病k562细胞中作用密切相关,干扰ENO1表达能在一定程度上增强PH Ⅱ-7的抑癌作用。

干扰素-α联合姜黄素对B-NHL淋巴瘤Raji细胞的增生抑制作用

背景与目的:姜黄素(curcumin)是中药姜黄的主要成分,其选择性的抑制肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡。干扰素-α是目前用于临床治疗最重要的细胞因子之一。本研究旨在探讨干扰素-α联合姜黄素对B-NHL淋巴瘤Raji细胞的诱导凋亡作用及其作用机制。方法:以浓度2000u/L干扰素-α分别与6.25、12.5、25μmol/L浓度的姜黄素作用于体外培养的Raji细胞,观察细胞生长状态变化。MTT法检测细胞生长的抑制率,应用流式细胞仪法观察细胞凋亡,Western blot法检测24h,姜黄素(IC5025μmol/L)以及联合干扰素-α(2000u/L)对caspase6、caspase8、caspase9蛋白的影响。结果:干扰素-α与姜黄素联合应用可显著抑制Raji细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,两者具有协同效应。凋亡蛋白caspase6、caspase8、caspase9表达显著增高,其作用呈现出明显的量效与时效关系。结论:干扰素-α与姜黄素联合应用对B-NHL淋巴瘤Raji细胞具有明显的增生抑制作用;促进凋亡蛋白的表达及诱导细胞凋亡,可能是其重要作用机制之一。