精索静脉曲张病人精子特异性钙通道CatSper1 mRNA表达

目的探讨精索静脉曲张病人精子中精子特异性钙通道CatSper1mRNA的表达,及其与精索静脉曲张的关系。方法采用计算机辅助精液分析(CASA)系统,对77例精索静脉曲张病人的精液进行分析,根据WHO标准分为精索静脉曲张精液正常组(B组)28例,精索静脉曲张精液异常组(C组)49例;健康体检精液正常20例为A组,采用90/40Percoll非连续梯度离心法分离各组精液,半定量逆转录-聚合酶链反应技术检测3组精子CatSper1mRNA的表达。结果 C组CatSper1mRNA的表达与A、B组比较,差异有显著性(F=7.20,q=5.18、4.75,P<0.01);B组CatSper1mRNA的表达与A组比较,差异无显著性(P>0.05)。结论 CatSper1mRNA表达异常可能是导致精索静脉曲张病人精液质量下降从而不育的原因之一,此为精索静脉曲张病人不育的病因及治疗提供了新的研究方向。

真核表达CatSper1用于筛选有效siRNA的体外实验研究

目的构建pEGFP-N1-CatSper1重组质粒,在真核细胞中表达CatSper1,利用化学合成siRNA抑制小鼠CatSper1基因的表达,并筛选抑制效果最佳的siRNA序列。方法利用重组PCR克隆小鼠CatSper1全长cDNA,构建到真核表达载体中。生物信息分析软件校正结果,获得三条针对雄性小鼠CatSper1的siRNA序列,合成后分别与重组质粒pEGFP-N1-CatSper1共转染到小鼠成神经瘤N2a细胞株中,通过观察EGFP荧光强度、实时定量聚合酶链反应和WesternBlot等方法,分析干扰效果,筛选能显著降低N2a细胞中外源性CatSper1表达量的siRNA序列。结果成功克隆小鼠CatSper1基因的全长cDNA片段(2,061 bp),并构建到pEGFP-N1表达载体中。三个siRNA干扰组的CatSper1 mRNA和蛋白表达与空白对照组相比均下降,其中以靠近3′端的siRNA干扰作用更为明显,阴性对照siRNA组未引起CatSper1 mRNA和CatSper1蛋白表达明显变化。结论在小鼠神经瘤N2a细胞株中成功表达外源性CatSper1蛋白,并筛选出有效的siRNA,为深入研究CatSper1功能及用于避孕提供参考。