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清解扶正颗粒调控Cathepsin B/NLRP3通路减轻大肠癌小鼠5-FU化疗性肠黏膜炎的机制研究
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作者 袁颖绯 林久茂 +4 位作者 林明和 赵锦燕 陈旭征 刘锦洪 朱晓勤 《康复学报》 CSCD 2024年第5期473-482,489,共11页
目的基于Cathepsin B/NLRP3通路探讨清解扶正颗粒对大肠癌小鼠经5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗后所致的肠黏膜炎的治疗作用及作用机制。方法24只雄性BALB/c小鼠采取右前肢腋部皮下接种CT26细胞的方法构建大肠癌皮下移植瘤小鼠模型,待瘤体生长至1... 目的基于Cathepsin B/NLRP3通路探讨清解扶正颗粒对大肠癌小鼠经5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗后所致的肠黏膜炎的治疗作用及作用机制。方法24只雄性BALB/c小鼠采取右前肢腋部皮下接种CT26细胞的方法构建大肠癌皮下移植瘤小鼠模型,待瘤体生长至100~300 mm3时,按照瘤体体积大小将小鼠随机分为对照组、5-FU组、5-FU+清解扶正颗粒组(5-FU+QFG组),每组8只。对照组给予生理盐水灌胃和腹腔注射,其他2组小鼠腹腔注射5-FU[50 mg/(kg·d^(-1))],每日1次,连续5 d;5-FU+QFG组在化疗的同时灌胃给予清解扶正颗粒(1.0 g/kg·d^(-1)),每日1次,连续7 d。每天观察小鼠的腹泻情况,记录体质量及瘤体积等情况。第7天末次给药后禁食12 h,动物取材,进行实验检测。采用苏木精-伊红染色(HE)法观察小鼠空肠组织病理变化;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测3组小鼠血清中二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸(DLA)、内毒素(ET)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)表达水平;采用免疫组织化学法检测空肠组织中组织蛋白酶B(Cathepsin B)的阳性表达;采用实时定量聚合酶链式反应(qPCR)检测空肠组织中紧密连接蛋白ZO-1、Occludin mRNA的相对表达水平,采用Western blot法检测空肠组织中ZO-1、Occludin、Cathepsin B、NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1蛋白的相对表达量。结果①小鼠一般情况:在实验周期内,清解扶正颗粒能够显著减轻5-FU化疗引起的腹泻症状(P<0.05),对5-FU化疗引起的体质量下降无显著改善(P>0.05),对5-FU抑制瘤体生长没有显著的协同效应(P>0.05)。②空肠组织病理变化:清解扶正颗粒可显著改善5-FU化疗引起的肠黏膜绒毛变短、隐窝变深、炎性细胞浸润等肠黏膜损伤症状。③血清DAO、D-LA、ET以及TNF-α、IL-1β、IL-6含量:与5-FU组比较,清解扶正颗粒可以显著降低大肠癌小鼠血清中DAO、D-LA、ET以及促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的含量(P<0.05)。④空肠组织Cathepsin B、NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1蛋白相对表达量:与5-FU组比较,清解扶正颗粒显著降低空肠组织中Cathepsin B、NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1蛋白相对表达量(P<0.05)。⑤空肠组织ZO-1、Occludin mRNA转录水平和蛋白表达水平:与5-FU组比较,清解扶正颗粒显著增加空肠组织中紧密连接蛋白ZO-1、Occludin mRNA和蛋白相对表达量(P<0.05)。结论清解扶正颗粒通过调控Cathep⁃sin B/NLRP3信号通路,减少促炎细胞因子释放,抑制肠黏膜炎症反应,修复肠黏膜屏障损伤,从而减轻5-FU引起的化疗性肠黏膜炎。 展开更多
关键词 大肠癌 cathepsin b/NLRP3通路 肠黏膜炎 5-氟尿嘧啶 清解扶正颗粒
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Icariin plus curcumol enhances autophagy through the mTOR pathway and promotes cathepsin B-mediated pyroptosis of prostate cancer cells
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作者 Xu-Yun Wang Wen-Jing Xu +2 位作者 Bo-Nan Li Tian-Song Sun Wen Sheng 《Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine》 SCIE CAS 2024年第2期55-64,共10页
Objective:To examine the effect of icariin plus curcumol on prostate cancer cells PC3 and elucidate the underlying mechanisms.Methods:We employed the Cell Counting Kit 8 assay and colony formation assay to assess cell... Objective:To examine the effect of icariin plus curcumol on prostate cancer cells PC3 and elucidate the underlying mechanisms.Methods:We employed the Cell Counting Kit 8 assay and colony formation assay to assess cell viability and proliferation.Autophagy expression was analyzed using monodansylcadaverine staining.Immunofluorescence and Western blot analyses were used to evaluate protein expressions related to autophagy,pyroptosis,and the mTOR pathway.Cellular damage was examined using the lactate dehydrogenase assay.Moreover,cathepsin B and NLRP3 were detected by co-immunoprecipitation.Results:Icariin plus curcumol led to a decrease in PC3 cell proliferation and an enhancement of autophagy.The levels of LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰand beclin-1 were increased,while the levels of p62 and mTOR were decreased after treatment with icariin plus curcumol.These changes were reversed upon overexpression of mTOR.Furthermore,3-methyladenine resulted in a decrease in inflammatory cytokines,pyroptosis-related protein levels,and lactate dehydrogenase concentration,compared to the icariin plus curcumol group.Inhibiting cathepsin B reversed the regulatory effects of icariin plus curcumol.Conclusions:Icariin plus curcumol demonstrates great potential as a therapeutic agent for castration-resistant prostate cancer by enhancing autophagy via the mTOR pathway and promoting pyroptosis mediated by cathepsin B.These findings provide valuable insights into the molecular mechanisms underlying the therapeutic potential of icariin and curcumol for prostate cancer treatment. 展开更多
关键词 ICARIIN CURCUMOL AUTOPHAGY MTOR cathepsin b PYROPTOSIS Prostate cancer
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斑马鱼Ctsba在脂肪细胞分化中的功能
3
作者 风英 邢泽宇 +2 位作者 李欣怡 王鑫媛 刘振辉 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期88-97,共10页
为了探究斑马鱼(Danio rerio)组织蛋白酶B(Cathepsin B,Ctsb)在脂肪细胞分化中的功能,本文利用基因过表达和敲降技术研究了Ctsb对小鼠脂肪前体细胞(3T3-L1)分化的影响。生物信息学分析显示,斑马鱼基因组中存在2个组织蛋白酶B基因(ctsb):... 为了探究斑马鱼(Danio rerio)组织蛋白酶B(Cathepsin B,Ctsb)在脂肪细胞分化中的功能,本文利用基因过表达和敲降技术研究了Ctsb对小鼠脂肪前体细胞(3T3-L1)分化的影响。生物信息学分析显示,斑马鱼基因组中存在2个组织蛋白酶B基因(ctsb):cathepsin ba(ctsba)和cathepsin bb(ctsbb)。其中斑马鱼ctsba编码的氨基酸序列同哺乳动物CTSB的氨基酸序列相似性更高一些,它们的二级结构和三级结构也十分相似。在成体斑马鱼中,ctsba基因在卵巢、脂肪组织、精巢、肌肉、脾、肠、心、肾脏、鳃、脑和肝脏等不同组织中都有表达,其中在卵巢、脂肪组织和精巢中表达较高。通过慢病毒表达载体在3T3-L1细胞中过表达斑马鱼ctsba,可显著增加脂滴的形成;而敲降内源性的ctsb基因则显著减少了脂滴的形成,表明ctsba可促进3T3-L1脂肪前体细胞向脂肪细胞分化。另外,实时定量PCR技术检测显示,斑马鱼ctsba过表达可上调PPARγ、C/EBPα、FAS、ACC1和FABP4等成脂基因的表达,敲降ctsb基因则相反。总之,本研究揭示了斑马鱼Ctsba调控脂肪细胞分化的功能。 展开更多
关键词 斑马鱼 组织蛋白酶b 脂肪细胞分化 肥胖 小鼠脂肪前体细胞
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血清CTSB、lncRNA MALAT1水平与脓毒症相关急性肾损伤严重程度的关系及预后预测价值
4
作者 廖春燕 王海容 刘毅 《国际检验医学杂志》 CAS 2024年第20期2485-2490,2495,共7页
目的探讨脓毒症相关急性肾损伤(SA-AKI)患者血清组织蛋白酶B(CTSB)、长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1(lncRNA MALAT1)水平与病情严重程度的关系及其对预后的预测价值。方法选取2021年1月至2023年1月德阳市人民医院收治的80例SA-AKI... 目的探讨脓毒症相关急性肾损伤(SA-AKI)患者血清组织蛋白酶B(CTSB)、长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1(lncRNA MALAT1)水平与病情严重程度的关系及其对预后的预测价值。方法选取2021年1月至2023年1月德阳市人民医院收治的80例SA-AKI患者为SA-AKI组,另选取同期80例单纯脓毒症患者为单纯脓毒症组,根据病情严重程度将SA-AKI患者分为1期(22例)、2期(27例)、3期(31例),并根据28 d临床结局分为死亡组(35例)和存活组(45例)。采用酶联免疫吸附试验和实时荧光定量PCR检测血清CTSB与lncRNA MALAT1水平,多因素Logistic回归分析SA-AKI患者预后不良的影响因素,受试者工作特征曲线分析血清CTSB、lncRNA MALAT1水平对SA-AKI患者死亡的预测价值。结果与单纯脓毒症组比较,SA-AKI组血清CTSB、lncRNA MALAT1水平升高(P<0.05)。1期、2期、3期SA-AKI患者血清CTSB、lncRNA MALAT1水平依次升高(P<0.05)。80例SA-AKI患者28 d病死率为43.75%。AKI分期3期、急性生理学和慢性健康状况评价Ⅱ评分、序贯器官衰竭评估评分、血乳酸、CTSB、lncRNA MALAT1升高为SA-AKI患者死亡的独立危险因素(P<0.05)。血清CTSB联合lncRNA MALAT1水平预测SA-AKI患者死亡的曲线下面积为0.894,大于血清CTSB、lncRNA MALAT1水平单独预测的0.797、0.793(P<0.05)。结论SA-AKI患者血清CTSB、lncRNA MALAT1水平升高与病情加重和预后不良密切相关,血清CTSB联合lncRNA MALAT1水平对SA-AKI患者预后的预测价值较高。 展开更多
关键词 脓毒症相关急性肾损伤 组织蛋白酶b 长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1 病情严重程度 预后
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大鼠急性脊髓损伤后Caspase-3、Cathepsin B的表达 被引量:15
5
作者 崔开 韩亚新 +4 位作者 孔冉冉 董君博 张国栋 梁栋 屠冠军 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第18期1400-1403,共4页
[目的]研究大鼠急性脊髓损伤后Caspase-3、Cathepsin B的表达,并初步探讨Caspase-3、Cathepsin B在脊髓损伤后表达的意义。[方法]将78只成年健康SD大鼠按Nystrom法建立大鼠脊髓(T8、T9)急性压迫损伤模型,HE染色观察脊髓组织病理学变化,... [目的]研究大鼠急性脊髓损伤后Caspase-3、Cathepsin B的表达,并初步探讨Caspase-3、Cathepsin B在脊髓损伤后表达的意义。[方法]将78只成年健康SD大鼠按Nystrom法建立大鼠脊髓(T8、T9)急性压迫损伤模型,HE染色观察脊髓组织病理学变化,免疫组化测定各时间点Cathepsin B、Caspase-3的表达变化,原位末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸(dUTP)标记法(TUNEL法)检测神经细胞的凋亡水平。[结果]免疫组化结果显示正常及假手术组大鼠脊髓神经细胞中Caspase-3,Cathepsin B,TUNEL阳性细胞较少;在脊髓损伤后3dCathepsin B阳性细胞数明显增多,5d达高峰,7d未见明显衰减。Caspase-3阳性细胞数在脊髓损伤后8h明显增多,3d达高峰,7d表达减弱。TUNEL阳性细胞数也在8h明显增多,3d达高峰,7d表达减弱。Cathepsin B阳性细胞形态及表达的部位均与Caspase-3阳性细胞、TUNEL阳性细胞差别较大。[结论]Caspase-3参与了脊髓损伤细胞凋亡的调节, 展开更多
关键词 脊髓损伤 细胞凋亡 cathepsin b CASPASE-3
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黄芪甲甙对实验性肺纤维化大鼠Cathepsin B表达的影响 被引量:15
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作者 张平 李杰平 +2 位作者 于小华 何平平 张书杰 《现代生物医学进展》 CAS 2007年第6期860-862,共3页
目的:探讨黄芪甲甙时实验性肺纤维化大鼠肺组织中组织蛋白酶B(Cathepsin B,CB)表达的影响。方法:36只SD大鼠,随机分为对照组、模型组和干预组。模型组和干预组气管内注射博来霉素(BLM,5mg/kg)诱导肺纤维化,对照组在相同条件下给予生理... 目的:探讨黄芪甲甙时实验性肺纤维化大鼠肺组织中组织蛋白酶B(Cathepsin B,CB)表达的影响。方法:36只SD大鼠,随机分为对照组、模型组和干预组。模型组和干预组气管内注射博来霉素(BLM,5mg/kg)诱导肺纤维化,对照组在相同条件下给予生理盐水。第二天起干预组大鼠每天经胃管灌服0.1g/L黄芪甲甙2ml,其余两组相同条件下给予助溶剂羧甲基纤维素钠。治疗的第7d和28d,处死动物取出肺组织,进行病理学观察;测定28d肺组织中羟脯氨酸含量;用免疫组化和RT-PCR观察各组鼠肺组织CB蛋白及mRNA表达的水平。结果:病理学观察显示:与模型组比较,干预组肺泡炎和纤维化程度均减轻;模型组羟脯氨酸含量显著增高,而干预组与模型组比较羟脯氨酸含量明显降低;与模型组比较,干预组CB蛋白及mRNA表达显著降低。结论:黄芪甲甙可能通过押制CB的过度表达,对实验性大鼠肺纤维化具有良好的治疗作用。 展开更多
关键词 肺纤维化 cathepsin b 黄芪甲甙
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大鼠脑外伤后溶酶体酶Cathepsin-B和D的表达 被引量:10
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作者 张延波 陈溪萍 +6 位作者 陶陆阳 秦正红 李生兴 杨丽 杨菊 张运阁 刘冉 《法医学杂志》 CAS CSCD 2006年第6期404-406,410,F0002,共5页
目的研究大鼠脑外伤后溶酶体酶cathepsin-B和-D是否被激活及其不同时段表达变化,阐述其与凋亡执行因子caspase-3表达的关系,并探讨对脑外伤诊断及形成时间的意义。方法采用自由落体打击法建立脑外伤动物模型,并对模型及对照样本进行免... 目的研究大鼠脑外伤后溶酶体酶cathepsin-B和-D是否被激活及其不同时段表达变化,阐述其与凋亡执行因子caspase-3表达的关系,并探讨对脑外伤诊断及形成时间的意义。方法采用自由落体打击法建立脑外伤动物模型,并对模型及对照样本进行免疫荧光、双标和激光共聚焦检测,结果用SPSS10.0软件处理。结果脑外伤后1hcathepsin-B表达即增加,4~8d达高峰,脑外伤后32d仍处于高表达水平;cathepsin-D的表达于脑外伤后12h增加,4~8d达高峰,32d的表达仍然高于12h的表达水平。脑外伤初期,cathepsin-B和-D阳性细胞与caspase-3阳性细胞重叠较少,脑外伤后6h开始增加,32d仍然有很多阳性细胞重叠。结论脑外伤后cathepsin-B和-D被激活,其激活在脑外伤早期可能抑制细胞凋亡执行因子caspase-3的激活,之后(6h后)则与caspase-3起协同作用,共同促进细胞死亡;cathepsin-B和-D表达的时程变化对于脑外伤的法医学诊断和中晚期的时间推断有参考意义。 展开更多
关键词 脑外伤 溶酶体 cathepsinb cathepsin—D caspase-3
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实验性肺纤维化大鼠肺组织Cathepsin B表达的动态变化 被引量:9
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作者 李杰平 张平 +2 位作者 张书杰 于小华 何平平 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期65-68,共4页
目的探讨溶酶体组织蛋白酶B(cathepsinb,CB)在肺纤维化发病中的作用。方法应用博莱霉素(5mg/kg)气管内注入建立实验性大鼠肺纤维化模型,采用HE染色、Masson三联染色、免疫组织化学染色、RT-PCR等方法,观察实验性大鼠肺纤维化的发病过程... 目的探讨溶酶体组织蛋白酶B(cathepsinb,CB)在肺纤维化发病中的作用。方法应用博莱霉素(5mg/kg)气管内注入建立实验性大鼠肺纤维化模型,采用HE染色、Masson三联染色、免疫组织化学染色、RT-PCR等方法,观察实验性大鼠肺纤维化的发病过程及其肺组织中CathepsinB蛋白及mRNA表达水平的动态变化。结果实验性大鼠肺纤维化发病过程中,呈现典型的肺泡炎(7d)、纤维组织增生(14d)及稳定的肺纤维化(28~35d)等表现;CathepsinB在正常肺组织表达较弱,在肺纤维化组7d时表达增强,14d进一步增强,28d明显增强,35d时较28d开始减弱,但仍强于正常组;CathepsinBmRNA在正常肺组织中表达较弱,在肺纤维化组7d时表达增强,14d进一步增强,28d明显增强,35d时较28d开始减弱,但仍强于正常组。结论CathepsinB在实验性大鼠肺纤维化发病过程中起重要作用,其过度表达可能参与了肺纤维化的发生发展过程。 展开更多
关键词 肺纤维化 cathepsin b 大鼠
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溶酶体cathepsin B参与大黄素诱导HK-2细胞凋亡 被引量:9
9
作者 王翠芬 陈敏 +3 位作者 吴旭东 孙立新 严明 张陆勇 《东南大学学报(医学版)》 CAS 2008年第6期404-408,共5页
目的:研究大黄素对人肾小管上皮HK-2细胞的细胞毒性及其机制。方法:用MTT法检测经0~100μmol·L-1浓度大黄素作用后HK-2细胞的活力,透射电镜观察细胞核形态的改变,流式细胞仪检测亚二倍体细胞比例,用特异性的底物分别测定caspase 3... 目的:研究大黄素对人肾小管上皮HK-2细胞的细胞毒性及其机制。方法:用MTT法检测经0~100μmol·L-1浓度大黄素作用后HK-2细胞的活力,透射电镜观察细胞核形态的改变,流式细胞仪检测亚二倍体细胞比例,用特异性的底物分别测定caspase 3和cathepsin B的活性。结果:大黄素可引起HK-2细胞死亡,并伴有亚二倍体细胞比例的增加和核浓缩、染色体边集等形态的改变,在引起HK-2细胞凋亡的浓度下caspase 3活性增加,而用caspase 3特异性抑制剂Ac-DEVD-CHO可抑制上述改变。在诱导HK-2细胞凋亡的剂量下大黄素使cathepsin B表达及其活性升高,cathepsin B特异性抑制剂CA-074能拮抗大黄素诱导的caspase 3活性升高,恢复HK-2的细胞活力。结论:大黄素在体外主要以caspase 3依赖方式引起HK-2细胞凋亡,cathepsin B参与了此过程。 展开更多
关键词 大黄素 HK-2细胞 凋亡 CASPASE 3 cathepsin b
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CTSB超表达促进体外培养的猪前体脂肪细胞分化 被引量:2
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作者 张振宇 麦茵 +3 位作者 董培越 杨浩 郑雪莉 杨公社 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期678-684,共7页
为研究溶酶体组织蛋白酶B(cathepsin B,CTSB)对脂肪细胞分化的影响,本实验构建了Ctsb重组腺病毒超表达载体,包装并侵染体外培养的猪前体脂肪细胞,采用油红O染色,油红O提取比色法检测猪前体脂肪细胞分化的情况,并通过real-time PCR法检... 为研究溶酶体组织蛋白酶B(cathepsin B,CTSB)对脂肪细胞分化的影响,本实验构建了Ctsb重组腺病毒超表达载体,包装并侵染体外培养的猪前体脂肪细胞,采用油红O染色,油红O提取比色法检测猪前体脂肪细胞分化的情况,并通过real-time PCR法检测成脂关键基因mRNA水平的变化.结果显示,重组腺病毒Ctsb载体构建成功,转染猪前体脂肪细胞后,使Ctsb的mRNA和蛋白质表达量分别提高了约16倍和12倍.CTSB超表达能促进脂肪细胞的分化和脂质积累,成脂关键基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)、脂肪酸结合蛋白2(adipocyte protein 2,aP2)的表达量均有显著升高.研究表明,提高Ctsb的表达能促进猪前体脂肪细胞分化,揭示了Ctsb在猪前体脂肪细胞分化过程中可能发挥关键作用.研究结果为进一步研究其作用机制奠定了基础. 展开更多
关键词 溶酶体组织蛋白酶b 重组腺病毒 前体脂肪细胞
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Cathepsin B反义RNA抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移 被引量:2
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作者 王海燕 张和军 +3 位作者 葛爱敏 黄扬 陈水平 万榕 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期161-167,共7页
目的:探讨人cathepsin B(CatB)反义RNA在乳腺癌细胞侵袭与迁移中的作用。方法:构建携CatB反义RNA的重组质粒pBudCE4.1-antiCatB,采用脂质体法将重组质粒瞬时转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231。Western blotting法检测MDA-MB-231细胞中CatB蛋... 目的:探讨人cathepsin B(CatB)反义RNA在乳腺癌细胞侵袭与迁移中的作用。方法:构建携CatB反义RNA的重组质粒pBudCE4.1-antiCatB,采用脂质体法将重组质粒瞬时转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231。Western blotting法检测MDA-MB-231细胞中CatB蛋白的表达,MTT法检测MDA-MB-231细胞的增殖,细胞-基质黏附实验检测反义CatB对MDA-MB-231细胞黏附能力的影响,体外侵袭、迁移实验分析反义CatB表达对MDA-MB-231细胞体外侵袭和迁移能力的影响。结果:成功构建pBudCE4.1-antiCatB表达载体。转染MDA-MB-231细胞后,与未转染组细胞和转染空载体组细胞相比,转染组MDA-MB-231细胞的CatB蛋白表达水平明显降低[(0.96±0.02)vs(1.98±0.23),(1.84±0.08),P<0.05];转染组细胞的增殖受到明显抑制[(0.255±0.017)vs(0.458±0.033),(0.421±0.022),P<0.01];转染组细胞的黏附(基质胶或纤维黏连蛋白)能力明显下降[(0.054±0.017)vs(0.111±0.018),(0.107±0.017),P<0.01;或(0.052±0.008)vs(0.120±0.014),(0.113±0.009),P<0.01];转染组细胞的侵袭和迁移能力也明显降低[(52.80±7.76)vs(124.00±44.54),(116.80±32.87),P<0.01;(60.25±8.73)vs(132.50±12.15),(119.20±25.13),P<0.01]。结论:CatB反义RNA可抑制乳腺癌细胞体外生长、黏附、迁移和侵袭能力。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 cathepsin b基因 反义RNA 转染 黏附 侵袭
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猪Cathepsin B基因和Cystatin B基因mRNA表达的发育性变化及组织差异 被引量:2
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作者 陈磊 王金勇 +1 位作者 李学伟 刘良 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期4341-4348,共8页
【目的】研究猪肉嫩度性状候选基因-组织蛋白酶B(cathepsin B,CTSB)和半胱氨酸蛋白酶抑制素B(cystatin B,CSTB)在体内不同组织、不同发育阶段的表达变化规律,为研究嫩度性状的遗传调控机理提供依据。【方法】采用荧光探针RT-PCR,定量分... 【目的】研究猪肉嫩度性状候选基因-组织蛋白酶B(cathepsin B,CTSB)和半胱氨酸蛋白酶抑制素B(cystatin B,CSTB)在体内不同组织、不同发育阶段的表达变化规律,为研究嫩度性状的遗传调控机理提供依据。【方法】采用荧光探针RT-PCR,定量分析CTSB和CSTB mRNA在两个品种猪的多个组织、多个发育时间点的表达量。【结果】RT-PCR结果表明,CTSB和CSTB mRNA表达量最高的组织为肾脏,心肌和骨骼肌中表达丰度低,股四头肌CSTB mRNA表达量极显著高于背最长肌。CTSB mRNA表达量在0~5月龄长白猪和梅山猪背最长肌中表现出先升高后降低的变化趋势,梅山猪峰值出现较早,并在4月龄后再次出现急剧上升。CSTB mRNA表达量在梅山猪中表现出生初期较高,随后逐渐降低的表达模式,长白猪的表达模式则为出生后表达量急剧升高,2月龄达到峰值,随后逐渐降低。2品种猪背最长肌组织CTSB和CSTB mRNA表达量表现出显著正相关。【结论】CTSB和CSTB mRNA表达量受到组织、发育阶段和品种影响,2基因mRNA表达量呈显著正相关。 展开更多
关键词 组织蛋白酶b基因(ctsb) 胱抑素b基因(CSTb) 表达量 嫩度
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三七总皂苷对肺心病兔肺纤维化组织Cathepsin B表达的影响 被引量:4
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作者 张济周 李青 +2 位作者 林萍 杨梁梓 宋精玲 《昆明医学院学报》 2011年第1期36-40,54,共6页
目的从病理学角度研究三七总皂苷对肺心病兔肺纤维化Cathepsin B表达的调控.方法健康日本大耳兔40只,随机分为五组,每组8只,分别为正常对照组、肺心病模型组、三七总皂苷预防组、治疗组及西药治疗组.观察光镜下五组动物CB蛋白的表达及... 目的从病理学角度研究三七总皂苷对肺心病兔肺纤维化Cathepsin B表达的调控.方法健康日本大耳兔40只,随机分为五组,每组8只,分别为正常对照组、肺心病模型组、三七总皂苷预防组、治疗组及西药治疗组.观察光镜下五组动物CB蛋白的表达及肺组织的病理结构变化.结果与模型组相比,三七总皂苷预防组能明显减轻肺泡水肿,减轻肺间质、肺细小动脉及肺泡壁纤维化,明显减少肺泡水肿液及炎细胞渗出,降低CB蛋白在肺组织中的表达;三七总皂苷治疗组及西药治疗组也有上述作用,但不及三七总皂苷预防组明显.结论三七总皂苷能明显改善肺心病兔肺纤维化的程度,显降低CB蛋白在支气管上皮细胞和肺泡上皮细胞的表达,减轻致纤维化因素对肺间质、肺部细小动脉及肺泡壁的病理损伤,对肺心病肺脏损伤具有保护作用. 展开更多
关键词 三七总皂苷 肺心病 肺纤维化 cathepsin b 表达调控 病理学
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猪Cathepsin B基因cDNA分子克隆、序列分析及遗传多态性分析 被引量:4
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作者 陈磊 李学伟 +2 位作者 朱砺 李强 李明洲 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期385-392,共8页
采用RT-PCR结合克隆测序的方法,从猪肌肉组织总RNA中克隆出了猪组织蛋白酶B(Cathepsin B,CTSB)基因的cDNA序列,并推导出其编码的氨基酸序列。猪CTSB基因开放阅读框(ORF)全长1008 bp,编码335个氨基酸。同源性分析结果表明,猪与人、鼠、牛... 采用RT-PCR结合克隆测序的方法,从猪肌肉组织总RNA中克隆出了猪组织蛋白酶B(Cathepsin B,CTSB)基因的cDNA序列,并推导出其编码的氨基酸序列。猪CTSB基因开放阅读框(ORF)全长1008 bp,编码335个氨基酸。同源性分析结果表明,猪与人、鼠、牛的CTSB基因cDNA编码区(CDS)同源性分别为85%、81%、90%,推测的氨基酸序列同源性分别为81%、79%、91%。利用同源性结合序列特征预测表明该蛋白具有信号肽和前肽序列。蛋白质结构同源建模分析表明,该蛋白具有木瓜蛋白酶家族的典型空间结构,包括1个底物结合凹槽和3个相互靠近的活性位点。另外采用PCR-SSCP方法,在147头个体中分析了CTSB基因第6内含子内的SS-CP位点多态性,检测到3个等位基因6种基因型。FF基因型个体的各项嫩度指标最高,其最大剪切力与硬度值分别为6.56 kg和23.55 kg.s,极显著地高于EE和EF基因型个体(P<0.01),平均剪切力为4.85 kg,显著地高于EF基因型个体(P<0.05)。 展开更多
关键词 ctsb基因 基因克隆 嫩度
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大鼠肺纤维化细胞凋亡及Cathepsin B基因变化的关系 被引量:3
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作者 李杰平 何平平 +2 位作者 于小华 张书杰 张平 《现代生物医学进展》 CAS 2007年第5期696-698,共3页
目的:检测大鼠肺纤维化时细胞凋亡及组织蛋白酶B(Cathepsin B,CB)基因的变化,探讨细胞凋亡和CB基因变化在肺间质纤维化中的意义。方法:将20只大鼠分为正常对照组及模型组,每组10只,应用末端原位杂交(TUNEL)、RT-PCR、免疫组化技术检测... 目的:检测大鼠肺纤维化时细胞凋亡及组织蛋白酶B(Cathepsin B,CB)基因的变化,探讨细胞凋亡和CB基因变化在肺间质纤维化中的意义。方法:将20只大鼠分为正常对照组及模型组,每组10只,应用末端原位杂交(TUNEL)、RT-PCR、免疫组化技术检测博莱霉素致肺间质纤维化大鼠肺组织细胞凋亡、CB mRNA水平及蛋白表达的变化。结果:模型组大鼠肺组织中细胞凋亡指数为(13.7±3.4)%,对照组为(1.9±0.3)%,两组比较差异有统计学意义(t=-11.03,P<0.01);模型组CB蛋白表达为29.76±4.62,正常对照组为78.48±5.36,两组比较差异有统计学意义(t=23 713;P<0.01);CB mRNA在模型组为0.9413±0.0592,正常对照组为0.4280±0.0161,两组比较差异有统计学意义(t为—26.447,P<0.01)。结论:博莱霉素致大鼠肺间质纤维化时引起肺组织CB表达上调,启动肺组织细胞凋亡程序,在肺纤维化发生、发展中起到重要的作用。 展开更多
关键词 肺纤维化 凋亡 Cathepssin b
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cathepsin B与cystatin C在食管癌中的表达及意义 被引量:4
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作者 何琳莉 高驰丹 文彬 《广东医学》 CAS 北大核心 2017年第9期1402-1405,共4页
目的探讨在食管癌(EC)发生、发展中,组织蛋白酶B(cathepsin B)与半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatin C)的表达及意义,并研究其在EC中的作用。方法选取EC切除术患者120例、癌旁组织120例与食管高级别上皮内瘤变患者54例,取其病理标本及临床... 目的探讨在食管癌(EC)发生、发展中,组织蛋白酶B(cathepsin B)与半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatin C)的表达及意义,并研究其在EC中的作用。方法选取EC切除术患者120例、癌旁组织120例与食管高级别上皮内瘤变患者54例,取其病理标本及临床病理资料,采取免疫组化法检测cathepsin B、cystatin C表达,观测其阳性率及与5年生存率的关系。结果 EC组织、癌旁正常组织与食管高级别上皮内瘤变组织中,cystatin C阳性率分别为37.50%、86.67%、66.67%,cathepsin B阳性率分别为47.50%、0.00%、7.41%,差异均有统计学意义(P<0.05);cystatin C及cathepsin B表达呈负相关(P<0.05);cathepsin B蛋白表达与EC分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移有相关性(P<0.05);cystatin C蛋白表达与临床分期有相关性(P<0.05);cystatin C阳性组与cystatin C阴性组5年生存率差异无统计学意义(P>0.05);cathepsin B阳性组5年生存率显著低于阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 cathepsin B可作为EC诊断的有效指标,但cathepsin B与患者5年生存率显著相关,而cystatin C不能作为独立提示预后的因素。 展开更多
关键词 食管癌 cathepsin b CYSTATIN C 免疫组化学法 病理因素
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柔嫩艾美耳球虫Cathepsin B基因的克隆表达及活性研究 被引量:2
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作者 刘任强 蔡建平 汪明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1838-1843,共6页
旨在利用同源克隆法从柔嫩艾美尔球虫(Eimeria tenella)中克隆组织蛋白酶B基因(Etcat B),为进一步研究其基因表达和基因功能奠定基础。选用未孢子化的柔嫩艾美耳球虫Houghton株,通过对已公布的柔嫩艾美尔球虫序列进行分析,利用RT-PCR的... 旨在利用同源克隆法从柔嫩艾美尔球虫(Eimeria tenella)中克隆组织蛋白酶B基因(Etcat B),为进一步研究其基因表达和基因功能奠定基础。选用未孢子化的柔嫩艾美耳球虫Houghton株,通过对已公布的柔嫩艾美尔球虫序列进行分析,利用RT-PCR的方法克隆EtcatB基因的cDNA序列,并将其重组于transE1原核表达载体中,鉴定后,重组质粒转入大肠杆菌Rosetta进行诱导表达。利用纯化所得Etcat B蛋白制备兔抗多抗,同时利用明胶酶谱法初步验证其活性。利用Real-time PCR和Western blot的方法检测Etcat B在球虫发育不同阶段和孢子化不同阶段的表达水平。成功克隆得到一个长度为1 539bp的Etcat B基因,并重组表达了球虫的组织蛋白酶B。SDS-PAGE电泳结果显示,在1mmol·L-1 IPTG 37℃诱导4h下,主要以包涵体的形式表达;4℃过夜诱导可以使之转为可溶性表达。表达产物在低pH、有还原剂存在的环境中,可以降解明胶,初步证明重组表达的酶具有一定的活性,Etcat B在配子体和裂子体时期表达较高,未孢子化和子孢子阶段表达相对较低,孢子化过程中表达逐步增加。Etcat B基因的克隆和表达研究,为进一步探究该基因在鸡球虫入侵及其他生物学功能中所起的作用提供了理论基础。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 组织蛋白酶b 克隆 表达
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喉癌患者外周血Cathepsin B、L及Stefin A水平检测的意义 被引量:2
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作者 陈立伟 刘明波 +2 位作者 王嘉陵 赵建东 田军 《军医进修学院学报》 CAS 2011年第6期620-621,628,共3页
目的探讨喉癌患者外周血组织蛋白酶B(Cathepsin B)、组织蛋白酶L(Cathepsin L)及内源性抑制剂(Stefin A)表达水平的变化与临床诊断和预后的关系。方法收集我院确诊的喉癌患者及正常对照者血清,酶联免疫吸附测定法(Elisa)检测60例喉癌患... 目的探讨喉癌患者外周血组织蛋白酶B(Cathepsin B)、组织蛋白酶L(Cathepsin L)及内源性抑制剂(Stefin A)表达水平的变化与临床诊断和预后的关系。方法收集我院确诊的喉癌患者及正常对照者血清,酶联免疫吸附测定法(Elisa)检测60例喉癌患者及30位正常对照者血清中Cathepsin B、L及Stefin A水平。结果喉癌患者血清中CathepsinB、L水平显著高于正常对照者(P<0.01),二者表达水平呈显著正相关(r=0.434 1,P<0.05);Stefin A水平显著低于正常对照者(P<0.01),但与Cathepsin B、L无显著相关性。结论喉癌患者血清中存在高水平的Cathepsin B、L及低水平的Stefin A,提示检测血清中Cathepsin B、L及Stefin A含量可协助诊断及判断预后。 展开更多
关键词 cathepsin-b cathepsin-L Stefin-A 喉癌
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Cathepsin B-RNAi-lentivirus新生血管形成的研究抑制小鼠视网膜 被引量:3
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作者 周国宏 孔丽 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期452-455,共4页
背景 视网膜新生血管性疾病是一种严重影响视力的眼病.研究表明,cathepsin B参与新生血管的生成,寻找抑制视网膜新生血管形成的药物可为此类疾病的分子机制研究提供依据. 目的 研究cathepsin B-RNAi-lentivirus对小鼠视网膜新生血管的... 背景 视网膜新生血管性疾病是一种严重影响视力的眼病.研究表明,cathepsin B参与新生血管的生成,寻找抑制视网膜新生血管形成的药物可为此类疾病的分子机制研究提供依据. 目的 研究cathepsin B-RNAi-lentivirus对小鼠视网膜新生血管的抑制作用. 方法 将7日龄清洁级C57BL/6J小鼠与其母鼠共同置于氧体积分数为(75±2)%的密闭氧箱内5d,制作视网膜新生血管模型,5d后返回正常环境.应用随机数字表法将60只小鼠随机分为模型对照组、阴性对照组和基因治疗组,每组20只.模型对照组小鼠不给予任何药物干预,阴性对照组小鼠玻璃体腔内注射空载体与辅助载体包装成的无目的基因的空病毒颗粒(NC-GFP-LV)1 μl,基因治疗组以同样的方法注射eathepsin B-RNAi-lentivirus 1μl.注射5d后各组分别应用随机数字表法随机处死7只小鼠,获取14只眼的视网膜,采用real-time PCR法检测小鼠视网膜中cathepsin BmRNA的表达量(2△△Ct),另外同时间点同法分别处死8只小鼠,获取16只眼球的视网膜,采用Western blot法检测各组小鼠视网膜中cathepsin B蛋白的相对表达量(cathepsin B/β-actin).注射5d后各组分别取剩余5只小鼠行异硫氰酸葡聚醛荧光素(FITC-dextran)心脏灌注,并处死动物,制备10只眼的视网膜铺片,荧光显微镜下观察和比较各组小鼠视网膜新生血管的形态和数量. 结果 基因治疗组小鼠视网膜中cathepsin B mRNA的表达水平(2-△△Ct)为0.740.12,明显低于模型对照组及阴性对照组的1.66±0.17和1.58±0.29,差异均有统计学意义(q=0.746、1.588,P<0.01).基因治疗组小鼠视网膜中cathepsin B蛋白的表达水平(cathepsin B/β-actin)为0.64±0.06,明显低于模型对照组及阴性对照组的0.93±0.09和0.96±0.09,差异均有统计学意义(q=0.637、0.894,P<0.01).小鼠视网膜荧光染色结果显示,模型对照组和阴性对照组小鼠视网膜新生血管分层及分支多,血管走形扭曲,部分血管可见荧光素渗漏;基因治疗组小鼠血管走形较直,血管分支少,新生血管数量少. 结论 Cathepsin B-RNAi-lentivirus转染能有效抑制小鼠视网膜新生血管的形成. 展开更多
关键词 慢病毒 组织蛋白酶b 新生血管
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小麦颖果与根部Cathepsin B-like蛋白的初步研究 被引量:2
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作者 刘阳 周竹青 +4 位作者 梅方竹 周广生 蔡静桐 杨文丽 张智慧 《湖北农业科学》 北大核心 2013年第17期4044-4047,共4页
利用免疫组织化学技术观察了小麦(Triticum aestivum L.)灌浆时期颖果内以及苗期根部原生韧皮部Cathepsin B-like蛋白的分布以及活性变化。结果表明,在开花后1~9 d的小麦颖果内,Cathepsin Blike蛋白主要分布在内果皮细胞以及灌浆池两侧... 利用免疫组织化学技术观察了小麦(Triticum aestivum L.)灌浆时期颖果内以及苗期根部原生韧皮部Cathepsin B-like蛋白的分布以及活性变化。结果表明,在开花后1~9 d的小麦颖果内,Cathepsin Blike蛋白主要分布在内果皮细胞以及灌浆池两侧的维管束中;在开花后12~24 d的颖果中,糊粉层内的Cathepsin B-like蛋白含量逐渐增加,两侧维管束细胞中的Cathepsin B-like蛋白消失,颖果背部内果皮细胞的Cathepsin B-like蛋白含量减少并在细胞边缘出现聚集现象;在小麦苗期根部的原生韧皮部中,随着韧皮部筛分子的成熟,筛分子内的Cathepsin B-like蛋白含量逐渐下降直至消失。 展开更多
关键词 cathepsin b-like蛋白 小麦(Triticum AESTIVUM L.) 颖果 根部 发育
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