以组织蛋白酶L为靶位的骨质疏松新药筛选模型的研究

对骨质疏松症分子水平上的研究发现 ,破骨细胞溶酶体向骨小腔分泌组织蛋白酶L ,进而造成以I 胶原为主要成分的骨支持蛋白分解亢进 ,成为导致骨质疏松症形成的重要因素之一。因此 ,寻找一种针对组织蛋白酶L的专一性抑制剂尤为重要。我们以组织蛋白酶L为靶位建立了寻找专一性抑制剂筛选模型。初筛模型 :以木瓜蛋白酶为靶酶筛选出半胱胺酸蛋白酶B、L的半数抑制浓度 (IC50 )之比 (B/L)为参照系数 ,以Chymostatin为强选择性对照 (B/L >30 ) ,以Leupeptin为弱选择性对照 (B/L <10 ) ,筛选出组织蛋白酶L的专一性抑制剂。应用此模型筛选得到JF 2 6 2、JF 2 87两株阳性菌。其发酵液对L型组织蛋白酶有强烈的选择性抑制活性。经初步鉴定 ,其产生菌培养特征及生理生化特性与文献报道的几株组织蛋白酶L抑制剂产生菌不同。

高温通过上调组织蛋白酶L表达加重局灶性脑缺血再灌注大鼠脑损伤

目的研究高温对局灶性脑缺血组织蛋白酶L（CTSL）表达的影响，探讨高温加重缺血性脑损伤的机制。方法100只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为假手术组（n=20）、常温组（n=40）和高温组（n=40）。常温组和高温组参照Longa等方法制作大鼠大脑中动脉闭塞（MCAo）缺血1h再灌注模型。高温组保持肛温39．0℃（瑞沃德恒温加热装置），共3h。假手术组和常温缺血组保持肛温37．5℃。假手术组只分离血管，不结扎，不插线。测定再灌注24h后3组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积及脑含水量。Western blotting和免疫组化法检测再灌注3h、6h和24h后大鼠缺血脑组织CTSL表达。结果（1）高温组大鼠再灌注24h后神经功能缺损评分、脑梗死体积百分比及手术侧脑含水量均高于常温组大鼠再灌注24h后结果（3．37±0．48 vs．2．20±0．42、59．08％±0．98％vs．37．96％±0．16％、84．82％±1．79％强82．18％±0．45％），差异均有统计学意义（P〈0.05）。（2）Western blotting检测结果显示,常温组大鼠各时间点CTSL表达无明显变化；而高温组大鼠CTSL表达于再灌注后3h即开始增加，24h仍未恢复正常，各时间点均高于常温组，差异有统计学意义（P〈0．05）。（3）免疫组化法显示神经元与神经胶质细胞均可表达CTSL，以神经胶质细胞为主。再灌注后3h、6h、24h。高温组大鼠CTSL阳性表达神经元中CTSL平均密度值均明显高于常温组及假手术组大鼠。差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论脑缺血再灌注时。高温可能通过上调CTSL的表达加重缺血性脑损伤。