高山离子芥CbMAPK3基因克隆与原核表达

促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)在信号传导过程中发挥着重要的作用。以高山离子芥叶片为材料,利用RT-PCR法克隆到全长CbMAPK3基因cDNA,将其与大肠杆菌表达载体pET-30a连接,构建原核表达载体pET-30a-CbMAPK3,并转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE以及Western blot检测结果表明该基因表达了1个约46kD的蛋白,为进一步研究目的蛋白的结构和功能提供了实验基础。

高山离子芥CbMAPK3基因功能分析

将高山离子芥丝裂原活化蛋白(MAP)激酶基因CbMAPK3编码区连接到表达载体pET-30a中,转化大肠杆菌JJ001(srl::Tn10),在1 mol·L^(-1)山梨醇的渗透胁迫及IPTG的诱导下,转化pET-30a-CbMAPK3的大肠杆菌JJ001(srl::Tn10)生长情况比转化pET-30a的好。免疫分析表明,在0℃下处理时,高山离子芥CbMAPK3激酶蛋白质水平没有明显的变化;在4℃处理下,高山离子芥CbMAPK3激酶蛋白质水平在处理前3 h明显增加,并在3 h后达到最高值。高山离子芥CbMAPK3在响应环境胁迫的过程中起作用。