Cbfαl对釉原蛋白转录调控作用的初步分析

目的:研究Cbfαl对釉原蛋白启动子转录活性的影响。方法:利用生物信息学的方法分析釉原蛋白启动子区域的序列,确定可能存在的结合位点,将利用PCR及酶切的方法从小鼠C57BL/6J基因组上扩增的、不同长度的釉原蛋白启动子构建的虫荧光素酶报告载体与Cbfαl共转Hela细胞,分析Cbfαl对不同长度的启动子转录活性的影响,将包含整个启动子区域的报告载体与Cbfαl共转Hela、CHO、UMR-106细胞,分析在不同细胞中Cbfαl对全长启动子转录活性的影响。结果:在Hela细胞中,Cbfαl对各段启动子都有激活作用,且该作用不随着启动子长度的变化而变化,在CHO、UMR-106细胞中,Cbfαl对启动子转录活性的影响很弱。结论:在Hela细胞中,Cbfαl对釉原蛋白启动子的转录活性有明显的增强作用,而且在对逐步缩短的启动子表现出一致的增强效能。结合生物信息学对Cbfαl结合位点的分析,可以初步判断在启动子下游,第一个内含子中存在Cbfαl的作用位点。另外,这种增强作用表现出明显的上皮细胞特异性,表明Cbfαl对釉原蛋白启动子的增强作用是有组织特异性的。

Cbfαl对小鼠牙本质涎磷蛋白基因启动子转录调控作用的研究

目的研究Cbfαl对牙本质涎磷蛋白基因启动子转录活性的影响。方法确定Cbfa1瞬时转染的最高表达时间点后,将含牙本质涎磷蛋白基因上游启动子的真核表达载体与PCMV5-Cbfαl共转染MDPC-23细胞,分析Cbfαl对牙本质涎磷蛋白基因启动子的转录调控作用。结果MDPC-23细胞转染PCMV5-Cbfαl后,Cbfαl在48h时表达量最高。Cbfa1表达对各段启动子都有激活作用。结论Cbfαl对牙本质涎磷蛋白基因启动子有转录激活的调控作用。

Satb2和Cbfα1基因在人牙龈成纤维细胞中的表达

目的:观察Satb2和Cbfα1在人牙龈成纤维细胞(HGFs)中的表达,为进一步研究二者在牙周组织再生中的作用奠定基础。方法:体外组织块法培养HGFs,并观察其形态和生长方式;同时采用RT-PCR和Western blot方法检测HGFs中Satb2和Cbfα1的表达。结果:体外培养的HGFs中hSatb2和hCbfα1 mRNA均呈阳性表达,但在蛋白质水平只检测到hSatb2蛋白的表达。结论:Satb2和Cbfα1在HGFs中有不同程度的表达,但能否作为刺激HGFs骨向分化的有效生长因子尚需进一步研究。

牙周再生后正畸牙移动过程中成骨三种因子的表达

目的研究以骨髓基质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)作为种子细胞,改良的双相磷酸钙(biaphasic calcium phosphate,BCP)作为支架材料,应用组织工程学方法再生的牙周组织在施以正畸力后发生骨改建的变化过程中成长因子的表达情况。方法选用雄性成年比格犬6只,体外培养其BMSCs并接种于改良的BCP,随后拔除其双侧上下颌第一前磨牙,实验组于第二前磨牙近中根颊侧制造牙周组织缺损,将体外共培物植入缺损部位,以自身为对照组,不予任何手术处理。牙周再生20周后施以正畸力,以尖牙为支抗,拉第二前磨牙向近中移动,控制正畸力为150 g,于加力后1、2、4周分别处死2只犬,取材。Real-Time PCR及Western印迹法检测再生的牙周组织中CbFα1、Osterix及Smad4的表达。结果实验组与对照组Cbfα1、Osterix及Smad4表达趋势相同,程度相似:加力1周时呈阳性表达,2周时达高峰,第4周时阳性表达均减弱但仍高于1周时的表达量,Cbfα1、Osterix及Smad4的阳性表达情况与正常牙周组织相比,差异无统计学意义。结论应用改良的BCP再生的牙周组织在被施以正畸力后发生牙周组织改建,其变化过程与趋势与正常牙周组织相似。