Cbfa1/Runt2在牙髓组织和牙髓干细胞中的表达研究

目的:检测Cbfa1/Runt2在成人牙髓组织及牙髓细胞的表达,以便进一步探讨其在成牙本质细胞分化过程中所起的作用。方法:选取因正畸拔除的第一前磨牙牙髓,一部分用于免疫酶标检测,一部分用酶消化法进行细胞培养。取第4代细胞进行Cbfa1/Runt2的免疫荧光检测。选取牙龈组织和牙龈成纤维细胞作为对照。结果:Cbfa1/Runt2在牙髓组织的表达集中在成牙本质细胞下层和血管周围。在牙髓细胞的表达集中在细胞核。结论:Cbfa1/Runt2可能参与成牙本质细胞分化的调控,但其在成牙本质细胞分化过程中所起的作用还需进一步研究。

miR-192-5p靶向CKIP-1促进骨质疏松患者骨髓间充质干细胞成骨分化

背景:酪蛋白激酶2结合蛋白1(casein kinase 2-interaction protein-1,CKIP-1)是一种重要的骨形成负调控基因,其敲除鼠骨质显著增强、骨形成和骨密度也显著提高。而miRNA作为较早发现的小分子调控物,对大多数编码基因具有调控作用,在成骨分化中发挥重要作用。目的:探讨miRNA/CKIP-1对骨质疏松患者骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及其分子机制。方法:采用miRNA-Seq技术检测2022年3-6月在开封市中心医院骨外科就诊32例骨质疏松患者及同期体检中心健康人群骨髓间充质干细胞中miRNA的变化情况;利用Targetscan网站预测靶向调控CKIP-1的miRNA,利用荧光素酶报告基因实验检测miRNA与CKIP-1启动子区DNA的结合;在骨髓间充质干细胞中转染miR-192-5p类似物(miR-192-5p mimics)/阴性对照(NC mimics)或miR-192-5p抑制剂(miR-192-5p inhibitor)/阴性对照(NC inhibitor),成骨诱导后第7,14天,通过实时荧光定量PCR技术及茜素红染色检测成骨标志基因Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素、抗骨桥蛋白、骨唾液蛋白及CKIP-1的表达水平和骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的情况;采用蛋白质免疫印迹实验及茜素红染色检测miR-192-5p/CKIP-1/轴对细胞成骨分化的的调控作用。结果与结论:与健康组相比,骨质疏松组有16个miRNA表达明显升高,53个miRNA表达明显降低(P<0.05);利用Targetscan网站预测,并通过荧光素酶报告基因实验验证,发现miR-192-5p与CKIP-1有互补的核苷酸序列(P<0.05);过表达miR-192-5p,Runx2、骨钙素、骨桥素和骨唾液蛋白的表达水平显著升高(P<0.05),抑制miR-192-5p,Runx2、骨钙素、骨桥素和骨唾液蛋白的表达水平显著降低(P<0.05),而沉默CKIP-1的表达后,Runx2、骨钙素及骨桥素的蛋白水平增加(P<0.05),逆转了敲低miR-192-5p对细胞成骨分化的抑制作用。上述结果证实,miR-192-5p在骨质疏松症中表达降低;miR-192-5p通过靶向抑制CKIP-1的表达,促进骨髓间充质干细胞成骨分化。

血栓心脉宁片通过调控TGF-β_(1)和Runx2表达抑制血管平滑肌细胞钙化的研究

目的探讨血栓心脉宁片是否可通过调控转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))和Runt相关转录因子2(Runx2)表达抑制血管平滑肌细胞的钙化。方法取对数生长期大鼠血管平滑肌细胞,实验分为5组:阴性组细胞加入DMEM培养液培养;钙化组加入β-磷酸甘油(β-GP)作用24 h诱导血管平滑肌细胞钙化;血栓心脉宁低、中、高剂量组先分别加入125 mg/L、250 mg/L、500 mg/L的血栓心脉宁片培养24 h后再给予β-GP作用24 h。采用CCK-8法检测各组细胞活力,酶标仪检测各组细胞中钙含量、碱性磷酸酶(ALP)活性及TGF-β_(1)含量,Western blot法检测细胞中Runx2蛋白表达情况。结果与阴性组比较,钙化组细胞活力明显下降(P<0.05),细胞中钙含量、ALP活性、TGF-β_(1)含量及Runx2蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05);与钙化组比较,血栓心脉宁各组细胞活力均明显提高(P均<0.05),细胞中钙含量、ALP活性、TGF-β_(1)含量及Runx2蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05),且各指标均呈浓度依赖性变化。结论血栓心脉宁片可能通过调控TGF-β_(1)和Runx2的表达,抑制大鼠血管平滑肌细胞的钙化。

孕鼠维生素D缺乏对子鼠骨发育相关基因BMP-2、Cbfal、Dmp1表达的影响

目的:研究大鼠孕期维生素D缺乏对其子鼠骨发育相关基因BMP-2、Cbfa1、Dmp1表达的影响。方法:成熟雌性SD大鼠36只随机分为模型组和对照组各18只,模型组以不含维生素D的大鼠饲料避光喂养,对照组以标准饲料正常光照喂养。两周后与成熟SD雄性大鼠交配,分别取孕20天(E20d)、生后1天(B1d)和生后7天(B7d)子鼠左侧股骨。通过Real-TimePCR方法分别比较模型组和对照组胚胎和新生鼠长骨中BMP-2、Cbfa1、Dmp1基因在3个时间点表达的差异。结果:BMP-2mRNA、Cbfa1mRNA及Dmp1mRNA在E20d、B1d和B7d的表达,模型组均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:BMP-2、Cbfa1、Dmp1均为骨发育相关基因,孕鼠维生素D缺乏可下调子鼠长骨中BMP-2、Cbfa1、Dmp1的表达水平,从而可能影响子鼠骨骼的发育。

Runt相关基因2/核心结合因子a1在小鼠牙周组织发育中的免疫组化定位研究

目的探讨Runt相关基因2/核心结合因子a1(Runx2/Cbfa1)在小鼠牙周组织发育过程中的时空表达及意义。方法建立BALB/c小鼠牙周发育动物模型,采用免疫组化方法检测Runx2/Cbfa1在小鼠出生后各期牙周组织发育中的表达及特点。结果Runx2/Cbfa1在牙齿发育过程中的表达具有时空特异性,在牙根开始发育之前,仅在牙槽骨及成骨细胞中表达;当牙根开始发育即从第11天以后各期,在根部牙周膜细胞、成牙骨质细胞及成骨细胞中均呈阳性表达,但牙槽骨呈阴性表达。结论Runx2/Cbfa1在成牙骨质细胞及成骨细胞的分化及牙植骨的形成具有重要作用,可能在牙周组织的发育中发挥作用。

肿瘤坏死因子α干预小鼠成骨细胞cbfa1/runx2基因的表达

背景:肿瘤坏死因子α可降低牙周膜纤维细胞碱性磷酸酶的活性,抑制牙周膜纤维细胞向成骨细胞的功能转化。目的:观察肿瘤坏死因子α对小鼠成骨细胞生长及cbfa1/runx2基因表达的影响。方法:取生长良好的小鼠成骨细胞系MC3T3/E1细胞,分别以20,40,60,80μg/L的肿瘤坏死因子α进行干预,以正常培养的细胞作为对照。采用RT-PCR法检测MC3T3/E1细胞cbfa 1/runx2mRNA的表达;PNPP法测定碱性磷酸酶活性;MTT法检测细胞活力。结果与结论:正常培养的MC3T3/E1细胞cbfa1/runx2 mRNA呈阳性表达,随着肿瘤坏死因子α浓度的增高,其表达水平逐渐下降。同时MC3T3/E1细胞活力和碱性磷酸酶活性也随肿瘤坏死因子α浓度的增高而下降。提示肿瘤坏死因子α可抑制MC3T3/E1细胞生长,而cbfa1/runx2可能参与了成骨细胞的分化过程。

Runx2/Cbfa1在出生后小鼠牙髓牙本质复合体形成中的作用研究

目的探讨Runx2/Cbfa1在出生后小鼠成牙本质细胞分化及牙本质形成中时间和空间的分布特点及意义。方法采用免疫组化SABC法检测Runx2/Cbfa1在出生后BALB/c小鼠牙本质、成牙本质细胞及牙髓细胞中不同发育时期的表达及特点。结果Runx2/Cbfa1在成牙本质细胞的发育成熟过程中具有时空特异性,在牙根尚未发育之前的牙胚钟状晚期,Runx2/Cbfa1只在前期牙本质中有表达,在牙髓细胞及成牙本质细胞中皆为阴性;约从第11天开始,随着牙根的发育,Runx2/Cbfa1在根部成牙本质细胞、牙髓细胞中表达为阳性,在冠部成牙本质细胞中表达为阴性。结论Runx2/Cbfa1参与牙本质的形成和矿化及成牙本质细胞和牙髓细胞的发育,可能对它们起重要作用。

转录调控因子CBF1(RBP-Jκ)对Cbfa1和Ose2元件启动子活性的影响

目的探讨Notch信号转录调控因子CBF1(RBP-Jκ)对核心结合因子Cbfa1基因启动子和骨钙素基因启动子区域Ose2元件启动子活性的影响。方法构建CBF1真核表达载体pCMV-Tag4/CBF1;将梯度浓度pCMV-Tag4/CBF1和荧光素酶报告质粒共转染两成骨前体细胞系Kusa-A1和Kusa-O,用双荧光素酶报告基因方法检测Cbfa1和Ose2元件启动子活性。结果随CBF1浓度增加,Kusa-A1和Kusa-O细胞中Cbfa1和Ose2元件启动子活性均逐渐提高。统计分析表明Kusa-A1细胞中1/40μg/μL实验组两启动子活性均与对照组差异显著;Kusa-O细胞中1/40μg/μL实验组Ose2元件启动子活性与对照组差异显著。结论转录调控因子CBF1可以促进Cbfa1和Ose2元件启动子活性,从而可能对细胞的成骨性分化有正调节作用。

cbfa1、satb2双基因共表达载体的构建及鉴定

目的:构建携带cbfa1和satb2双基因的慢病毒真核表达载体。方法:采用PCR技术,从质粒中扩增基因cbfa1和satb2,经TA克隆、酶切筛选后,对阳性重组子进行商业测序鉴定。将测序正确的cbfa1和satb2分别插入pIRES上、下游的相应酶切位点中,构建pIRES-cbfa1-satb2。然后通过双酶切,得到cbfa1-Ires-satb2片段,将其插到含有neo/kana基因的慢病毒载体pLentinTrident1-CMV的相应酶切位点上,构建慢病毒真核表达载体pLentinTrident1-CMV-cbfa1-Ires-satb2。结果:通过PCR技术成功扩增了cbfa1和satb2基因,借助中间载体pIRES中的内部核糖体进入位点,将cbfa1和satb2同时连到了慢病毒载体pLentinTrident1-CMV上,经PCR、酶切及测序验证,质粒构建成功。结论:本实验成功构建了携带cbfa1和satb2双基因的慢病毒真核表达载体,为进一步研究2种基因的功能奠定了基础。

成骨细胞特异性转录因子OSF2/CBFA1

文章介绍了CBFA基因编码的OSF2/CBFA1转录因子的结构、对成骨细胞生长分化的影响、对骨基质中非胶原蛋白表达水平的调控以及OSF2/CBFA1与遗传性骨病的关系。OSF2/CBFA1作为一种成骨细胞特异性转录因子调控着骨形成过程中成骨细胞的分化,其详细机理有待深入研究。

盐酸二甲双胍对成骨细胞增殖、BMP-2及Cbfa-1基因表达的影响

目的初步研究二甲双胍(MF)在体外对小鼠颅盖骨成骨细胞增殖、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)及核心结合因子(Cbfa-1)mRNA表达的影响,探讨二甲双胍对骨代谢的可能作用机制。方法 (1)分离培养原代颅盖骨成骨细胞并对其进行鉴定。(2)以乳鼠成骨细胞为体外实验模型,不同浓度(0、50、100、200、400μmol/L)的MF干预体外培养的成骨细胞24h后,MTT法检测成骨细胞的增殖能力,实时荧光定量PCR法检测成骨细胞BMP-2及Cbfa-1基因表达。结果二甲双胍干预成骨细胞24h后,可促进成骨细胞的增殖,在浓度400μmol/L的OD值最大为0.298±0.047(P<0.05);可促进BMP-2及Cbfa-1mRNA的表达,呈剂量效应关系。结论二甲双胍可促进成骨细胞的增殖和分化,可能通过调节BMP-2及Cbfa-1的表达,从而促进骨的形成。

RUNX1通过调节SOX2转录促进食管鳞状细胞癌干性

目的:探讨RUNT相关转录因子1(RUNX1)在食管鳞状细胞癌中的表达及其对细胞干性的影响。方法:从GEPIA数据库和GEO数据库(GSE111011)获取RUNX1的表达情况,使用TCGA数据库分析基因表达相关性。利用Western blot检测RUNX1、SOX2、OCT4、KLF4和c-MYC蛋白表达情况。利用qRT-PCR技术检测CD271、CD44、CD54、SOX2和RUNX1的mRNA水平,双荧光素酶报告基因实验检测SOX2启动子活性。通过细胞成球培养和流式细胞术检测侧群细胞和CD271^(+)/CD44^(+)细胞的数量反映细胞干性。结果:GEPIA数据库、GEO数据库和Western blot结果均显示RUNX1在食管癌中高表达。在Eca-109细胞中敲低RUNX1后,抑制SOX2表达和细胞干性(P<0.01)。在KYSE-150细胞中过表达RUNX1后,促进SOX2表达和细胞干性增加(P<0.01)。在KYSE-150细胞中同时过表达RUNX1和敲低SOX2后,RUNX1促进的细胞干性增加被逆转(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验结果显示RUNX1促进SOX2启动子活性,在转录水平调节SOX2表达。结论:RUNX1在食管鳞状细胞癌中高表达,并通过在转录水平调节SOX2表达,从而促进细胞干性。

Choukroun′s富血小板纤维蛋白对人成骨细胞增殖分化及细胞外调节蛋白激酶1/2-Runt相关转录因子2通路的影响

目的 分析Choukroun′s富血小板纤维蛋白(PRF)对人成骨细胞增殖分化及ERK1/2-Runx2通路的影响。方法 组织块法分离人成骨细胞,设置对照组、PRF1组和PRF2组,分别用不含PRF、含1×PRF浸出液和2×PRF浸出液的DMEM完全培养基培养。检测细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性、I型胶原表达及细胞矿化能力,Western blot法测定细胞外调节蛋白激酶1/2-Runt相关转录因子2(ERK1/2-Runx2)信号通路蛋白表达情况。结果 与对照组比较,PRF1组和PRF2组MTT实验A值及ALP活性均升高,且PRF2组高于PRF1组(P<0.05);与培养1天比较,培养3、7天时三组MTT实验A值均升高,且培养7天高于培养3天(P<0.05)。培养7天,PRF1组和PRF2组I型胶原平均灰度值高于对照组,PRF2组高于PRF1组(P<0.05)。培养14、21天,PRF1组和PRF2组钙结节积分光密度高于对照组,PRF2组高于PRF1组(P<0.05);培养21天三组钙结节积分光密度均高于14天(P<0.05)。与对照组比较,PRF1组和PRF2组p-ERK1/2、Runx2蛋白表达升高,且PRF2组高于PRF1组(P<0.05)。结论 PRF可能通过激活ERK1/2-Runx2信号通路参与人成骨细胞增殖分化过程。

ERK1/2-Runx2信号通路在TNF-α对牙周膜干细胞成骨分化影响中的作用

目的:探讨ERK1/2-Runx2信号通路在TNF-α对牙周膜干细胞成骨分化影响中的作用。方法:分离和培养牙周膜干细胞,将其分为对照组(成骨诱导液培养)、TNF-α组(成骨诱导液培养+TNF-α培养)和激动剂组(成骨诱导液培养+TNF-α+ERK培养)。ALP和茜素红染色测定成骨分化功能,采用Western blot测定牙周膜干细胞Osterix、OPN、ERK1/2、p-ERK1/2、Runx2蛋白水平。结果:与对照组比较,TNF-α组ALP染色和茜素红染色程度低,ALP活性和矿化结节降低(P<0.05),Osterix和OPN蛋白水平降低(P<0.05),p-ERK1/2、Runx2蛋白水平降低(P<0.05);与TNF-α组比较,激动剂组ALP染色和茜素红染色程度介于对照组和TNF-α组之间,ALP活性和矿化结节升高(P<0.05),Osterix和OPN蛋白水平升高(P<0.05),p-ERK1/2、Runx2蛋白水平升高(P<0.05)。三组牙周膜干细胞ERK1/2蛋白水平比较无明显差异(P>0.05)。结论:TNF-α可能通过影响ERK1/2-Runx2信号通路从而抑制牙周膜干细胞的成骨分化。

DMP1、Runx2在小鼠下颌第一磨牙萌出过程中的免疫学定位

目的研究小鼠下颌第一磨牙萌出过程中牙本质基质蛋白1(DMP1)和Runt相关转录因子2(RUNX2)的表达,并探索其表达与牙萌出之间的关系。方法分离出生后1 d至14 d小鼠的下颌骨,连续切片,偶氮卡红苯胺蓝染色显示磨牙萌出过程骨胶原形成情况,切片原位杂交法分析DMP1及RUNX2 mRNA在牙齿及周围组织的表达与分布,免疫组化法显示DMP1和RUNX2蛋白的表达与分布。结果冠方骨组织中骨胶原形成在P5 d出现高峰,以后呈逐渐减少的趋势;根方骨胶原形成在整个萌出过程中一直呈活跃状态,在P9 d出现高峰。DMP1表达越丰富,骨胶原形成越多,成骨活动越活跃。结论下颌第一磨牙萌出过程中,根方成骨活动一直很活跃,DMP1的表达与根方成骨活动参与了小鼠第一磨牙的萌出过程。

非小细胞肺癌血清MGMT、RASSF2、RUNX3及RASSF1A基因启动子CpG岛甲基化的联合检测及意义

目的探讨非小细胞肺癌患者血清中人类O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)、RASSF2、人类Runt相关转录因子3、RAS相关区域家族1A基因启动子区域甲基化状况及其临床意义。方法基因测序法检测62例NSCLC患者(肺癌组)和30例肺部良性疾病患者和16例健康体检者(对照组)血清中MGMT、RASSF2、RUNX3、RASSF1A基因启动子区域甲基化状况,并分析目标基因启动子区域甲基化状况与临床特征的关系。结果肺癌组MGMT基因甲基化频率为27.42%(17/62),而对照组为0(0/46)(x2=14.97,P<0.01);MGMT基因甲基化状态与年龄、性别、病理类型和分化状况无明显相关(P>0.05)。甲基化组吸烟指数(620.78±135.34)高于非甲基化组(498.96±150.87)(t=2.91,P<0.05)。MGMT基因甲基化多见于晚期患者,Ⅰ～Ⅱ期甲基化率为0(0/11)而Ⅲ～Ⅳ期为33.33%(17/51)(Fisher精确概率法,P<0.05)。肺癌组RASSF2基因甲基化频率为38.71%(24/62),而对照组为0(0/46)(x2=22.89,P<0.01);NSCLC患者血清RASSF2基因甲基化检出率与年龄、性别、病理类型、临床分期、分化程度无明显相关(P>0.05),不吸烟者RASSF2甲基化率高于吸烟者(61.90%vs26.83%,x2=7.20,P<0.05)。结论 MGMT、RASSF2、RUNX3、RASSF1A等基因异常甲基化在NSCLC患者外周血中有较高的发生率。MGMT、RASSF2、RUNX3、RASSF1A等基因异常甲基化状态可能和患者临床资料有一定关系。MGMT、RASSF2、RUNX3、RASSF1A等基因异常甲基化可能在NSCLC发生、发展中起重要作用。MGMT、RASSF2、RUNX3、RASSF1A等基因异常甲基化状态有望成为NSCLC辅助诊断和预后判断的分子标记。

非小细胞肺癌患者血浆 RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO 基因甲基化状态观察

目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆抑癌基因runt相关转录因子3(RUNX3)、ras相关结构域家族基因1A(RASSF1A)、3-0-硫基转移酶-2(3-OST-2)、死亡相关蛋白激酶(DAPK)、膜结合受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O(PTPRO)等基因启动子区域的甲基化状态。方法采用甲基化特异PCR技术对63例NSCLC患者血浆中RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因是否甲基化进行观察,并以25例健康人作对照。结果 NSCLC患者血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率分别为46.0%、50.8%、26.9%、34.9%、41.3%;健康人血浆中甲基化PTPRO基因检出率为12.0%,而甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK均未检出;两者甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率相比,P均<0.05。NSCLC患者血浆中上述5种甲基化基因联合检测的敏感度为88.9%、特异度为88.0%。血浆甲基化RUNX3基因检出率与NSCLC的病理类型、临床分期以及分化程度有关(P均<0.05);甲基化RASSF1A基因检出率与NSCLC的分化程度有关(P<0.05)。结论 NSCLC患者血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率明显高于健康人。联合检测血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因有可能会有助于NSCLC的早期诊断及其生物学行为的判断。

咳嗽变异性哮喘患儿外周血miR-138及RUNX3对Th1/Th2平衡的调节作用

目的检测咳嗽变异性哮喘(cough variant asthma,CVA)患儿外周血中微小RNA-138(microRNA-138,miR-138)、Runt相关转录因子3(Runt-related transcription factor 3,RUNX3)的表达水平及其对Th1/Th2平衡的调节作用。方法选取CVA患儿65例纳入CVA组,健康儿童30例纳入健康对照组,采集两组儿童外周静脉血,分离培养CD4+T细胞。ELISA法检测CD4+T细胞分泌的干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素(interleukin,IL)-2、IL-4、IL-5和IL-13的水平;流式细胞仪检测Th1、Th2细胞比例;实时荧光定量PCR检测CD4+T细胞中RUNX3 m RNA水平和外周血中miR-138水平;Western blot检测CD4+T细胞中RUNX3蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验检测miR-138和RUNX3的靶向作用;RUNX3-mimic质粒转染至CD4+T细胞中,检测增加RUNX3的表达水平对IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-5、IL-13水平和Th1、Th2细胞比例的影响。结果CVA组与健康对照组相比,CD4+T细胞分泌IFN-γ、IL-2水平降低,IL-4、IL-5和IL-13水平增加,Th1细胞比例和Th1/Th2比值降低,Th2细胞比例增加(P<0.05)。CVA组外周血中CD4+T细胞RUNX3 mRNA及其蛋白相对表达水平低于健康对照组(P<0.001),miR-138的相对表达水平高于健康对照组(P<0.001)。miR-138可靶向调节RUNX3的表达。CD4+T细胞中RUNX3的表达增加后,IFN-γ和IL-2水平升高,IL-4、IL-5和IL-13水平降低,Th1细胞比例和Th1/Th2比值增加,Th2细胞比例降低(P<0.05)。结论miR-138通过靶向RUNX3调节CVA患儿Th1/Th2平衡,为CVA的治疗提供了新方向。

低氧对H2O2预处理MC3T3-E1增殖和成骨分化功能的影响

背景:活性氧簇增加可以导致氧化应激,体内低氧环境在生理和病理状态下都存在,但处于氧化应激状态的骨组织或者已经有氧化应激损伤的骨系细胞在低氧环境下增殖和分化功能的变化未见相关报道。目的:拟观察小鼠成骨细胞样细胞(MC3T3-E1)在不同浓度H_2O_2干预后处于低氧环境下的成骨细胞生物学特性的改变,以期揭示老年骨质疏松和糖尿病患者骨折愈合过程延长的细胞学机制。方法:用不同浓度H_2O_2干预的小鼠成骨细胞样细胞置于不同的氧浓度下培养,用细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞增殖活性的变化,用碱性磷酸酶染色和钙结节染色检测细胞向成骨方向分化能力的改变,并收集RNA检测成骨分化早期特异性基因信使RNA表达的变化。结果与结论:(1)小鼠成骨细胞样细胞用200μmol/L H_2O_2预处理6 h,细胞的增殖活性随着低氧培养时间延长而增加,但仍然低于正常对照组;成骨分化早期的碱性磷酸酶染色减弱,钙结节形成有明显的减少;(2)用400μmol/L H_2O_2预处理6 h,则细胞的增殖活性下降明显,没有受氧浓度的影响,成骨分化早期的碱性磷酸酶染色减弱,低氧使碱性磷酸酶表达进一步降低,钙结节形成明显减少,但氧浓度改变对其影响不大;(3)400μmol/L H_2O_2预处理6 h和再低氧干预时小鼠成骨细胞样细胞的Cbfa1的信使RNA表达降低,常氧下400μmol/L H_2O_2影响小鼠成骨细胞样细胞的Ⅰ型胶原和碱性磷酸酶的表达,低氧培养以及氧化应激损伤后的小鼠成骨细胞样细胞成骨分化早期基因Ⅰ型胶原和碱性磷酸酶的信使RNA表达增加,并且差异有显著性意义;(4)结果证实,低浓度的H_2O_2预处理小鼠成骨细胞样细胞再低氧更容易影响细胞的增殖,而高浓度的H_2O_2预处理小鼠成骨细胞样细胞再低氧更容易影响细胞向成骨方向的分化能力,尤其是早期碱性磷酸酶的形成。

Runx2、Dkk-1和PTH1R在大鼠膝骨关节炎模型软骨中的表达及意义

目的观察大鼠膝骨关节炎模型软骨中Runt相关转录因子2(Runx2)、Dickkopf-1(Dkk-1)和甲状旁腺激素受体1(PTH1R)的表达,探讨其在膝骨关节炎发生发展中的作用。方法将32只10周龄雄性SD大鼠,随机分为假手术组(n=16)和膝骨关节炎模型组(n=16)。模型组行前交叉韧带切断及部分内侧半月板切除术,分别于造模2周和6周后取右膝关节股骨内侧髁软骨,根据改良Mankin评分对HE染色膝关节软骨进行病理观察及评分。免疫组织化学染色检测Runx2、Dkk-1和PTH1R在各组膝关节软骨中的表达水平。结果模型组与同时段假手术组比较、模型组6周与模型组2周比较均显示膝关节软骨明显退变,Mankin评分及Runx2和Dkk-1的阳性细胞率均明显增高,PTH1R阳性细胞率明显降低(P均<0.05)。结论在膝骨关节炎软骨中,Runx2、Dkk-1的高表达和PTH1R的低表达,可能促进下游信号因子释放,导致软骨细胞肥大和软骨细胞外基质分解,促进软骨退变。