黄牛、牦牛和犏牛睾丸组织中Cdc2、Cdc25A基因mRNA表达水平

黄牛和牦牛远缘杂交后代犏牛雄性不育是牦牛杂交改良中的一大难题。Cdc2和Cdc25A是减数分裂的两个关键基因,其表达水平的下降将使精子发生不能正常进行,导致雄性不育。为了探讨Cdc2、Cdc25A基因mRNA表达水平与犏牛雄性不育的关系,文章采用荧光定量PCR技术对Cdc2和Cdc25A基因的组织表达特征以及在黄牛、牦牛和犏牛睾丸组织中的表达水平进行了分析。结果表明:Cdc2和Cdc25A基因在牦牛各种组织中广泛表达,说明Cdc2和Cdc25A基因在各种组织细胞分裂和细胞周期运行中均发挥作用;黄牛和牦牛睾丸组织中Cdc2、Cdc25A基因表达水平均显著高于犏牛(P<0.05),说明睾丸组织中Cdc2和Cdc25A基因的低表达可能与犏牛雄性不育相关。

小鼠受精卵早期发育过程中PKC对cdc2和cdc25C活性的影响

为研究小鼠受精卵细胞早期发育过程中PKC对cdc2和cdc2 5C活性的影响 ,采用免疫印迹和电泳迁移率差异分析的方法 ,观察PKC的激活剂TPA及其抑制剂星形孢子素对小鼠受精卵一细胞期cdc2和cdc2 5C活性的影响 .10nmol L的TPA作用 10min后 ,小鼠受精卵一细胞期卵裂率明显大于对照组 (P <0 0 5 ) ,而星形孢子素作用后卵裂率显著下降 (P <0 0 1) .TPA处理后 ,受精卵中呈去磷酸化状态的活性cdc2明显增加 ,没有活性呈磷酸化状态的cdc2 5C明显减少 ;而星形孢子素处理的受精卵中没有活性的cdc2明显增加 ,有活性的cdc2 5C明显减少 .结果表明 ,TPA短时间作用可以促进小鼠一细胞期受精卵分裂 ,星形孢子素抑制受精卵的分裂 ;TPA可以促进cdc2的去磷酸化以及cdc2 5C的磷酸化 ,从而促进G2 M转换 ,星形孢子素则抑制cdc2和cdc2 5C的活性 ,阻止受精卵由G2

芒果苷对白血病HL-60细胞周期及CDC2/CyclinB1表达的影响

目的:观察芒果苷对白血病HL-60细胞周期分布及细胞周期素B1(CyclinB1)、细胞周期分裂基因2(CDC2)表达的影响,以进一步探讨芒果苷抗白血病的分子作用机制。方法:应用MTT比色法测定芒果苷对白血病HL-60细胞增殖的抑制作用;用流式细胞术(FCM)检测芒果苷对细胞周期的影响;用RT-PCR技术检测CyclinB1及CDC2 mRNA表达水平。结果:芒果苷呈剂量及时间依赖性抑制HL-60细胞的生长,作用24 h后,G2/M期细胞增多,出现G2/M期阻滞;CyclinB1 mRNA和CDC2 mRNA的表达随药物质量浓度的增加而逐渐增强,在芒果苷质量浓度80μmol/L时表达达到峰值。结论:芒果苷可抑制HL-60细胞增殖,阻滞细胞周期于G2/M期,显著上调HL-60细胞CyclinB1 mRNA和CDC2 mRNA的表达水平。芒果苷诱导HL-60细胞G2/M期阻滞可能是其抗白血病作用的分子机制之一。

组织芯片/免疫组化检测CDC2/CyclinB1在胶质瘤中的联合表达及意义

目的:探讨CDC2/CyclinB1在胶质瘤组织芯片中的表达及意义。方法:构建布有各级别人脑胶质瘤、人脑胶质瘤体外细胞系球体及其移植瘤组织、脑肿瘤干细胞、神经干细胞和相应的对照标本共118例的组织芯片,进行CDC2、CyclinB1的EnVision法免疫组化染色,分析其表达率、表达强度及联合表达情况。结果:CDC2、CyclinB1表达阳性率在71例人脑胶质瘤组织中分别为54.9%和52.1%。11例正常成人脑组织中分别为18.2%和9.0%,两者比较P<0.05。CDC2和CyclinB1的联合表达率为89.7%,两者表达呈正相关(r=0.90,P<0.01)。CDC2、CyclinB1的表达在不同级别人脑胶质瘤中也有差异(P<0.05),与病理级别分别呈正相关(r=0.982,P=0.018;r=0.959,P=0.041)。在体外培养的胶质瘤细胞球体、裸鼠皮下移植瘤、人胚胎脑和裸小鼠骨髓中均高表达,而脑肿瘤干细胞和神经干细胞球体未见表达。结论:CDC2和CyclinB1,随着脑胶质瘤恶性度增高而表达量增加;在神经干细胞、脑肿瘤干细胞低表达,而在SHG44和GBM细胞球体中高表达,表明其在肿瘤细胞分化抑制中起作用。这对进一步研究胶质瘤分子病因有重要价值。

涎腺腺样囊性癌组织中HPV感染及p53、p16、EGFR、Cdc2蛋白表达与预后的关系

目的初步探讨HPV感染及p53、p16、EGFR及Cdc2表达与涎腺腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)预后的关系。方法收集76例涎腺ACC手术标本,分别采用PCR-DNA反向点杂交及免疫组化SP法检测肿瘤组织中HPV-DNA及p53、p16、EGFR及Cdc2表达,收集临床资料并随访。Kaplan-Meier模型分析患者生存情况,Log-rank检验比较生存曲线,多因素Cox回归模型进行预后分析。结果涎腺ACC组织中HPV感染率为0(0/76)。p53、p16、EGFR及Cdc2蛋白在肿瘤组织中的阳性率分别为76.3%(58/76)、57.9%(44/76)、60.5%(46/76)及64.5%(49/76)。p53、p16、EGFR及Cdc2蛋白表达与患者性别、年龄、肿瘤部位、TNM分期及病理类型无关(P均>0.05)。EGFR阳性患者中位总生存期(overall survival,OS)低于阴性患者(χ~2=19.111,P<0.01)。EGFR阳性患者中位无进展生存期(progression-free survival,PFS)低于阴性患者(χ~2=6.621,P<0.01)。Cdc2阳性患者中位OS短于阴性患者(χ~2=3.870,P<0.05)。Cdc2阳性患者中位PFS低于阴性患者(χ~2=6.755,P<0.01)。多因素Cox回归模型分析显示EGFR、Cdc2蛋白表达(RR=13.417、13.075,P均<0.001)是涎腺ACC患者预后的独立危险因素。结论涎腺ACC组织中未检测出HPV感染。p53、p16、EGFR及Cdc2蛋白在涎腺ACC组织中呈不同程度表达,p16不能作为涎腺ACC患者HPV感染状态的替代指标。EGFR及Cdc2阳性表达是涎腺ACC患者预后的独立危险因素,临床对EGFR及Cdc2蛋白表达患者应密切随访。

玉米(ZeamaysL.)cdc2和prh1基因的染色体原位杂交物理定位

首次报道了玉米两个低拷贝基因ｃｄｃ２和ｐｒｈ１生物素标记的染色体原位杂交结果。供试探针为这两个基因的ｃＤＮＡ克隆ｃｄｃ２ＺｍＡ和ＺｍＰＰ１，其长度分别为１．３ｋｂ和１．７ｋｂ。结果表明，ｃｄｃ２ＺｍＡ的信号分布在第４、８和９染色体长臂，与着丝粒的百分距离分别为５７．８７±２．６８、２８．４２±１．４５和８８．１６±３．２８，检出率为１０．０７％．３．１３％和８．３３％。ｐｒｈ１ＺｍＰＰ１的信号分布在第４、６和８染色体长臂，与着丝粒的百分距离分别为５３．６２±１．１７．６０．７７±２．９０和１７．１０±１．６１，检出率为１２．０７％．５．１７％和６．４７％。对非放射性原位杂交技术以及基因ｃｄｃ２和ｐｒｈ１的物理位置与功能间的关系作了讨论。

Survivin、P34^(cdc2)在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的 研究非小细胞肺癌组织中survivin和P34cdc2 的表达 ,探讨survivin和P34cdc2 的表达与非小细胞肺癌临床病理特征的关系。方法 随机收集非小细胞肺癌 (含癌旁细支气管和 /或小支气管增生组织和正常肺组织 )标本 10 0例。采用免疫组织化学SP法染色。结果 在癌组织与癌旁细支气管和 /或小支气管上皮增生组织及正常肺组织中survivin和P34cdc2 表达差异有显著性 (P <0 .0 1)。在癌组织中有过表达 ,在癌旁细支气管和 /或小支气管上皮增生组织中的表达较正常肺组织中的表达增强 ;癌组织中survivin和P34cdc2 表达呈正相关 (P <0 .0 1) ,癌旁细支气管和 /或小支气管上皮增生组织中 ,survivin和P34cdc2 的表达也呈正相关 (P <0 .0 1)。癌组织类型、分化程度和淋巴结转移与survivin和P34cdc2 的表达均无相关性 (P >0 .0 5 )。不同临床分期的非小细胞肺癌 ,其survivin和P34cdc2 的表达差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 survivin和P34cdc2 在非小细胞肺癌中有过表达现象 ,在非小细胞肺癌的G2 /M期 ,P34cdc2 可能通过将survivinThr (34)磷酸化而激活或增强细胞的抗凋亡能力 ,从而将细胞周期进程与凋亡调控有机地联系起来。过表达的survivin和P34cdc2 可作为反映非小细胞肺癌细胞分裂增殖、凋亡抑制 (细胞生存?

不同倍性鱼cdc2基因cDNA部分序列的克隆及其在卵巢中的表达分析

利用3-’RACE的方法分别从异源四倍体鲫鲤、三倍体湘云鲫、二倍体红鲫的卵巢中克隆了cdc2基因cDNA的部分序列.选取这3种鱼cdc2 cDNA中一段长为157 bp的保守片段设计特异引物,通过Real-time PCR检测cdc2 mRNA在这3种不同倍性鱼卵巢中的表达水平,结果表明cdc2转录量随着倍性的递增而相应升高.

细胞周期依赖性蛋白激酶1(Cdk1/p34cdc2)对喉癌术后局部复发的预测价值

目的检测喉鳞状细胞癌及癌旁切缘组织中p53、p21和Cdk1/p34cdc2蛋白表达及其与患者预后的关系。方法应用免疫组化SP法检测85例喉鳞状细胞癌及癌旁切缘组织中p53、p21和Cdk1/p34cdc2蛋白的表达,并收集临床病理资料进行随访。结果在随访2年以上的喉鳞状细胞癌中14例出现局部复发(复发组),71例未复发(未复发组)。在喉鳞状细胞癌和癌切缘组织中p53蛋白阳性率分别为60.0%和36.5%;p21蛋白阳性率分别为38.8%和21.2%;Cdk1/p34cdc2蛋白阳性率分别为70.6%和29.4%。喉鳞状细胞癌复发组和未复发组的切缘组织中p53蛋白阳性率分别为71.4%和29.6%(P=0.003),切缘组织中p21蛋白阳性率分别为50.0%和15.5%(P=0.004),切缘组织中Cdk1/p34cdc2蛋白阳性率分别为57.1%和23.9%(P=0.013)。癌旁切缘组织中p53与p21及Cdk1/p34cdc2蛋白表达之间无相关性(P均>0.05)。结论 p53、p21和Cdk1/p34cdc2蛋白在喉鳞状细胞癌的发生、发展中可能起重要作用;癌旁切缘组织中p53、p21和Cdk1/p34cdc2过表达与喉鳞状细胞癌局部复发密切相关。

裂殖壶菌EST文库cdc2基因的筛选与分析

利用已建立的裂殖壹菌(Schizochytrium sp FJU-512)EST文库,通过序列比对分析发现p34cdc2相似基因的3′端序列,分离含该EST序列的质粒ROCHA2004,以T7引物进行反向测序,获得p34cdc2相似基因的全长序列,结合NCBI的ORF finder以及Blastx程序获得p34cdc2蛋白的氨基酸序列;利用同源模建方法构建了该蛋白的三维空间结构,并预测其功能结构域;对该蛋白进行系统发育分析,构建进化树,结果显示该蛋白同小麦(Triticum aestivum)的p34cdc2序列亲缘关系最近。

cdc2基因在多种人类肿瘤细胞中的表达及意义

目的通过检测人表皮细胞Hacat和不同组织来源的6种肿瘤细胞的增殖能力以及cdc2基因在这些细胞中的表达情况,探讨cdc2基因与肿瘤发生、发展、增殖能力之间的关系。方法体外培养人表皮细胞Hacat和不同组织来源的6种肿瘤细胞(宫颈癌细胞Caski、神经胶质瘤细胞U87、肝癌细胞Hepg2、膀胱癌细胞T24、骨肉瘤细胞MG63、肺癌细胞A549)。采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法和免疫印迹(Western blot)法测定细胞中cdc2在mRNA和蛋白质水平的表达情况;采用四甲基偶氮唑(MTT)法检测细胞增殖速度。结果 cdc2基因在Hacat中表达较低,在Caski、U87、Hepg2、T24、MG63和A549中表达较高。MTT法显示:Hepg2、U87、T24、A549、MG63增殖能力较强,Caski次之,Hacat最差。结论 cdc2基因可能参与了肿瘤的发生过程,并与肿瘤的增殖有关。

p34^(cdc2)在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的 :研究非小细胞肺癌组织中p34cdc2 的表达 ,探讨其表达与非小细胞肺癌临床病理特征的关系。方法 :随机收集非小细胞肺癌 (含癌旁组织和正常肺组织 )标本 10 0例 ,采用免疫组织化学S P法显示p34cdc2 的表达并结合肺癌的临床病理特征进行分析。结果 :p34cdc2 的表达在非小细胞肺癌组织与癌旁细小支气管上皮增生组织细胞中定位于细胞质中 ,在癌组织中有过表达 ,在癌旁组织中有增强表达 ,与正常组织间p34cdc2 表达差异有显著性 (P<0 .0 1)。组织类型、分化程度和淋巴结转移与p34cdc2 的表达均无统计学意义。不同临床分期的非小细胞肺癌 ,其p34cdc2 的阳性表达差异有显著性 (P<0 .0 5 )。结论 :p34cdc2 在非小细胞肺癌中有过表达现象 ,过表达的p34cdc2 可作为反映非小细胞肺癌细胞分裂增殖能力和临床分期的参考指标之一。

舌鳞癌中p34cdc2与cyclin B1的表达及相关研究

目的研究舌鳞癌组织中p34cdc2与cyclin B1蛋白的表达,探讨它们阳性表达的相关性及其与舌鳞癌临床病理特征的关系。方法随机收集舌鳞癌标本60例,对照上皮包括正常舌组织11例、癌旁组织49例。采用免疫组织化学SP法显示p34cdc2与cyclin B1蛋白的表达,并结合舌鳞癌的临床病理特征进行分析。结果舌癌组织中可见p34cdc2与cyclin B1蛋白表达并显棕色/黄色,主要定位于细胞浆中。两种蛋白在癌组织中存在增多表达,与正常组织和(或)癌旁组织中的表达差异有显著性(P<0.01)。p34cdc2蛋白的表达在舌鳞癌不同临床分期、组织分级和有无淋巴结转移组间差异有显著性(P<0.05),而与年龄、性别无统计学意义;同时cyclin B1蛋白的表达也在舌鳞癌不同临床分期、组织分级中差异有显著性(P<0.05),而在不同年龄、性别及有无淋巴结转移组间差异无显著性。结论p34cdc2及cyclin B1蛋白在舌鳞癌中有表达增多现象,或许可反映舌鳞癌细胞分裂增殖能力;增多表达的p34cdc2及cyclin B1蛋白可作为评价舌鳞癌临床分期和组织分级等临床病理特征的参考指标之一。

食管鳞癌组织中CDC2、CLDN5蛋白表达及其临床病理意义的研究

目的探讨CDC2及CLDN5在食管鳞癌中表达及其临床病理特征的关系。方法应用免疫组化Elivision法检测90例食管鳞癌组织、28例正常食管黏膜组织及16例重度不典型增生组织中CDC2和CLDN5的蛋白表达情况。结果在食管鳞癌和正常食管黏膜组织中CDC2和CLDN5的阳性表达率分别为88.89%(80/90)、85.56%(77/90)和48.86%(12/28)、25.00%(7/28),两者差异有统计学意义(P<0.05)。CDC2蛋白表达在低分化食管鳞癌中明显高于高分化食管鳞癌;临床分期Ⅲ+Ⅳ期组的CDC2蛋白的表达显著高于Ⅰ期、Ⅱ期组(P<0.05)。CDC2和CLDN5在食管鳞癌中表达呈正相关(r=0.537,P<0.05)。结论 CDC2和CLDN5在食管鳞癌的发生、发展过程中可能发挥重要作用,可能作为食管癌临床早期诊断的重要指标。

细胞周期蛋白依赖性激酶cdc2与恶性肿瘤发生发展的研究

cdc2在细胞周期调控中起着调控G2至M期的作用。在G2期后期,cyclinB与cdc2结合,形成有丝分裂促进因子(MPF),再由cdc25、cyclin H、cdk7等一些磷酸酶和激酶作用,使其激活,活化的MPF通过cdc2对细胞核内组蛋白H1、核纤维层蛋白A、B、C、核仁蛋白nucleolin等蛋白发生直接或间接磷酸化作用,从而诱导产生一系列变化,使细胞发生有丝分裂。cdc2的过度表达或缺乏,可使细胞周期进程发生紊乱,不能正常生长、分化。cdc2过表达往往导致细胞恶性增殖,形成肿瘤。现已证明cdc2过度表达与许多恶性肿瘤的发生、发展、预后有关,但与神经干细胞、胶质瘤干细胞之间的关系尚待阐明。

小鼠神经细胞cdc2类蛋白激酶调节亚基p35^(Nck5a)基因的克隆和鉴定

目的： 获取小鼠神经细胞ｃｄｃ２ 类激酶（Ｎｃｌｋ）调节亚基ｐ３５Ｎｃｋ５ａ基因组ＤＮＡ，用于构建基因重复性打靶载体。方法： 用噬斑原位杂交法从λＰＳ基因文库中克隆小鼠ｐ３５Ｎｃｋ５ａ基因；用限制性内切酶酶切图谱分析和序列测定进行基因组结构分析。结果： 获得较完整的ｐ３５Ｎｃｋ５ａ基因组ＤＮＡ酶切图谱；该基因由一个外显子组成，长９２４ ｂｐ，编码３０７ 个氨基酸的蛋白质，内含子长２０８ ｂｐ，位于５′端侧翼序列中。测定的序列（－ １ ０８０ 至＋ ９２４ ｂｐ 和＋ ３ ７２１至＋ ４ ２２２ ｂｐ）与已报道的序列基本一致，仅在－ １３５和－ ２９５位各插入一个碱基Ｇ。结论： 得到的ｐ３５Ｎｃｋ５ａ基因组ＤＮＡ 片段长约１１ ｋｂ， 其５′端侧翼序列含有一些已知的调控序列，３′端含有ｐｏｌｙ Ａ 的信号序列。

细胞周期调控因子Cdc25的研究进展

综述了Cdc25(cell division cyclin 25)磷酸酶的结构、在细胞周期调控中的作用及调控机制以及在致癌转化中的作用。概述了Cdc25磷酸酶在多种人类癌症中的过表达。最后,叙述了近年来关于使用小分子抑制剂抑制Cdc25磷酸酶的研究进展,展望了开发治癌药物的前景。

人乳头瘤病毒感染及p53、P16、Cdc2表达与喉癌预后的关系

目的研究人乳头瘤病毒(HPV)感染及p53、P16、Cdc2表达与喉癌预后的关系。方法选择2012年6月至2013年5月在该院保留完整随访资料的喉癌手术切除标本62例,分析HPV感染和p53、P16、Cdc2表达在喉癌组织中的阳性表达情况和预后关系,肿瘤分化程度及分期和喉癌患者复发的关系。结果 HPV感染在喉癌组织中以高危型HPV-16为主,通过2年随访,发现喉癌患者中有50例未复发,12例出现复发。喉癌组织中HPV感染率为19.35%(12/62),在喉癌组织中p53阳性表达率为59.68%(37/62),P16阳性表达率为58.06%(36/62),Cdc2阳性表达率为64.52%(40/62)。HPV感染和p53、P16、Cdc2表达和喉癌的分化程度及临床分期无明显相关性(P>0.05),HPV阳性喉癌患者术后复发率[0.00%(0/12)]显著低于无复发患者[24.00%(12/50)],差异有统计学意义(P<0.05)。复发组喉癌患者的p53阳性表达率[58.33%(7/12)]和未复发组[60.00%(30/50)],差异无统计学意义(P>0.05)。复发组喉癌患者的P16阳性表达率[83.33%(10/12)]显著高于未复发组[52.00%(26/50)],差异有统计学意义(P<0.05)。复发组喉癌患者的Cdc2阳性表达率[100.00%(12/12)]显著高于未复发组[56.00%(28/50)],差异也有统计学意义(P<0.05)。经Spearman等级相关分析得知,肿瘤分化程度及分期和喉癌患者的复发无明显相关性(P>0.05)。结论HPV感染、p53、P16、Cdc2表达和喉癌的预后存在一定关联性。

雌核发育二倍体鲫鲤及其他倍性鱼cdc2基因cDNA全序列克隆及表达

为研究雌核发育二倍体鲫鲤产生二倍体卵子的分子机制,实验采用PCR和cDNA末端快速分离法,克隆获得了雌核发育二倍体鲫鲤第三代(G3)、二倍体红鲫、三倍体湘云鲫和四倍体鲫鲤的细胞周期相关基因——cdc2基因cDNA全序列。结果显示,4种不同倍性鱼cdc2基因均编码含有302个氨基酸蛋白,而且编码的蛋白都含有与其他CDK激酶相当保守的序列PSTAVRE;同源性分析发现,4种鱼cdc2基因编码的氨基酸序列之间的相似度大于97.6%,说明Cdc2蛋白在这4种不同倍性鱼中具有高度保守性。采用实时荧光定量PCR(real-timePCR)对cdc2基因在G3、二倍体红鲫、三倍体湘云鲫及四倍体鲫鲤早期卵巢中的表达进行分析,结果发现,G3cdc2基因比普通二倍体红鲫和三倍体湘云鲫表达要高,比四倍体鲫鲤的表达水平低。该研究从分子水平证明了G3早期性腺中存在着大量的多倍体卵原细胞。同时,研究表明,cdc2基因在雌核发育二倍体鲫鲤早期卵巢的高表达暗示着G3多次进入S期却不经历M期导致二倍体配子的产生。

三氧化二砷抑制cdc2基因表达诱导K562白血病细胞G_2/M周期停滞

目的检测三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)诱导慢性髓系白血病急变细胞K562周期停滞中细胞周期相关调节基因的转录、蛋白表达及其磷酸化改变,以期阐明As2O3诱导其周期停滞的分子生物学机制,为克服K562细胞的As2O3抵抗性提供实验基础。方法体外培养K562细胞,采用PI染色、流式细胞仪检测As2O3作用后细胞周期分布的改变;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞周期相关调节基因mRNA表达变化;Westernblot检测相关蛋白及磷酸化改变。结果As2O3作用K562细胞24h后,G2/M期细胞比例明显增加,浓度为0、2、5、10μmol/L时G2/M期细胞比例分别为(22.6±3.4)%、(27.2±2.3)%、(43.8±4.5)%、(36.7±4.1)%;K562细胞在As2O3处理前有Sur-vivin、cdc2、chk1基因表达,As2O3处理后Survivin、chk1的表达无明显变化,但cdc2表达呈浓度依赖性下调;As2O3作用前可见Survivin、cdc2、cdc2-p、chk1等4种蛋白的表达,作用24h后,Survivin的表达条带增强,cdc2蛋白表达水平呈浓度依赖性下调,cdc2-p水平在2～5μmol/L时无明显变化,在10μmol/L时受抑明显,chk1蛋白表达水平在As2O3作用前后无明显改变。结论As2O3显著诱导K562白血病细胞G2/M周期停滞,其机制与抑制cdc2转录水平,下调活性化cdc2蛋白表达有关。不能有效抑制抗凋亡蛋白Survivin的表达可能是K562白血病细胞对As2O3诱导凋亡抵抗的一个重要机制。