副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素CdtC亚基的克隆表达及细胞毒性分析

细胞致死膨胀毒素(CDT)由CdtA、CdtB和CdtC三个亚基构成,是细菌的一种重要毒力因子。为研究副猪嗜血杆菌(H.parasuis)CDT的CdtC亚基的功能,本研究根据G enBank中cdtC基因序列设计引物,扩增cdtC基因,并克隆到原核表达载体pET-28a(+)中进行诱导表达。SD S-PAGE和w estern blot检测目的蛋白主要以包涵体形式存在,分子量约为25 ku。将纯化后的重组蛋白复性后进行体外细胞毒性试验。结果表明,CdtC蛋白对Vero细胞和PK-15细胞有较强的细胞毒性作用。本研究为研究细胞致死膨胀毒素CDT的致病机制奠定了基础。

伴放线放线杆菌cdtC基因的克隆及其原核表达载体pET15b-cdtC的构建

目的:本实验设计克隆Aa CdtC亚基蛋白的编码基因cdtC并构建其原核表达载体pET 15b-cdtC,为研究CdtC亚基对CDT全毒素功能的分子机制奠定基础。方法:厌氧培养Aa ATCC 29523,提取Aa基因组DNA,PCR反应扩增cdtC基因片段。将此片段克隆入pMD 19-T Vector,经限制性内切酶BamHI和Xho I酶切得到粘性末端cdtC片段,克隆入原核表达载体pET 15b中。结果:产物经PCR初步鉴定后进行DNA序列分析,测序结果与Genbank公布序列一致性达100%。结论:本实验成功克隆了cdtC基因,并成功构建了其原核表达载体pET15b-cdtC。为深入研究CdtC亚基以及CDT全毒素分子作用机制奠定基础。

空肠弯曲菌cdtA、cdtB及cdtC真核表达重组载体的构建与表达

目的以空肠弯曲菌(CJ)细胞扩张毒素(cytolethal distending toxi,CDT)cdtA、cdtB及cdtC为目的基因,构建CJ-cdtA、cdtB及cdtC基因的真核表达重组载体pcDNA3.1(+)-cdtA,pcDNA3.1(+)-cdtB,pcDNA3.1(+)-cdtC,为CJ核酸疫苗的研制提供实验材料。方法用Primer5.0软件分析GenBank中空肠弯曲菌细胞扩张毒素cdtA、cdtB及cdtC基因序列,设计合成相应特异性引物,引入EcoRI、BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点,PCR扩增cdtA、cdtB及cdtC目的基因片段,定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+)多克隆酶切位点中,构建重组体pcDNA3.1(+)-cdtA、pcDNA3.1(+)-cdtB及pcDNA3.1(+)-cdtC;通过酶切分析、PCR鉴定及测序鉴定,筛选阳性重组体。结果扩增出特异的cdtA、cdtB及cdtC基因片段,大小约为807bp、798bp、570bp;双酶切及测序鉴定证明成功构建了CJ真核表达重组载体pcDNA3.1(+)-cdtA、pcDNA3.1(+)-cdtB及pcDNA3.1(+)-cdtC。结论 PCR扩增得到了大小约为807bp、798bp、570bp的CJ-cdtA、cdtB及cdtC目的基因片段;并成功构建了pcDNA3.1(+)-cdtA、cdtB及cdtC真核表达重组载体。

一种基于分簇的分布式无线传感器网络拓扑控制算法研究

拓扑控制是无线传感器网络的一个重要研究方向。无线传感器网络中一般节点数量大,分布范围广泛且不规则,难以进行集中式控制。本文提出了一种基于分簇的分布式无线传感器网络拓扑控制(CDTC)算法。利用分簇思想将网络划分为可重叠的簇,簇内各节点按照局部最小生成树算法思想确定邻居关系,调整发送功率,生成合适的网络拓扑。仿真实验证明运行CDTC算法后,网络中节点平均发送功率明显减少,平均节点度较低,节点间干扰较少。

半导体CdTe纳米晶的合成及其光学性能

以巯基乙酸(HSCH2COOH)为稳定剂,在水溶液中合成半导体CdTe纳米晶。通过隧道扫描显微镜(STM)、紫外吸收光谱、荧光光谱等测试技术对所得的样品进行表征。结果表明,随着回流时间的增加,CdTe半导体纳米晶的粒径变大,其荧光发射峰和紫外吸收峰发生红移,荧光颜色从绿色逐渐向红色过渡。

空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌双重PCR鉴别检测方法的建立

为快速检测和鉴定空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌,本研究设计并合成了空肠弯曲杆菌马尿酸酶基因hipO和结肠弯曲杆菌cdtC基因的2对特异性引物,建立并优化了快速检测空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌的双重PCR方法。结果显示,双重PCR对空肠弯曲杆菌hipO基因和结肠弯曲杆菌cdtC基因的扩增产物的大小分别为653bp和313bp。PCR扩增条件最终确定为退火温度为52℃,dNTP终浓度为0.4mmol/L,hipO和cdtC基因引物的终浓度均为2 5μmol/L。该双重PCR的灵敏度可达到6.6 8×1 0-2μg/mL,对多杀性巴氏杆菌、产单核细胞李氏杆菌、产气荚膜梭菌、伤寒沙门菌和金黄色葡萄球菌扩增均无目的条带,说明该PCR方法具有良好的灵敏性和特异性。符合试验结果与单一PCR方法结果相同。用所建立的方法对本实验室采集的鸡肛拭子划线培养后的可疑菌落进行PCR鉴定,结果显示2株为空肠弯曲杆菌,2株为结肠弯曲杆菌。结果表明,本研究建立的双重PCR可以用于同时检测空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌。

放射性碘治疗在儿童分化型甲状腺癌中应用

儿童分化型甲状腺癌(cDTC)的临床病理特征及远期预后与成人分化型甲状腺癌(aDTC)存在较大差异,针对成人的诊疗策略并不能完全适用于儿童。目前cDTC的;I治疗推荐主要基于复发风险分层,相对于aDTC,现有指南中c DTC的复发风险分层体系证据有限且更多侧重淋巴结转移。新近的研究证据揭示了基因特征与c DTC的侵袭性及分化程度的关系,这将为cDTC的复发风险分层体系增加新的证据,并将有助于指导;I治疗前评估、治疗决策及预测疗效;针对融合基因的靶向治疗诱导分化联合;I治疗为儿童碘难治性(RAIR)晚期DTC的治疗提供了新的思路;动态风险度评估(DRS)体系及刺激性甲状腺球蛋白(sTg)水平或可用于cDTC的疗效评价及实时预测最终疾病状态。上述进展将有望为cDTC;I个体化精准诊疗决策提供依据。