子宫肌瘤患者MED12高频突变对细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响

目的:研究MED12高频突变体对细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡及周期的影响,探究MED12突变对于体外细胞功能的作用。方法:外源性转染MED12重组野生型和突变质粒至HEK293T细胞。Western blot法检测MED12蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell检测细胞迁移和侵袭,流式细胞法检测细胞凋亡水平。结果:CCK-8法检测发现,与野生型MED12比较,突变型(G44D)能提高HEK293T细胞的增殖能力,差异有统计学意义(P<0.01),但迁移、侵袭能力、凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:MED12突变体通过提高细胞增殖,进而促进子宫肌瘤的发病。

地塞米松快速抑制卵巢癌细胞系ERK1/2活性

背景与目的:细胞外信号调节的激酶1/2(extracellularsignal-regulatedkinase1/2,ERK1/2)的激活在多种细胞增殖的过程中发挥重要作用。作者曾经发现人工合成的糖皮质激素地塞米松(dexamethasone,Dex)可显著抑制人卵巢癌细胞系HO-8910的增殖。本研究试图观察Dex对HO-8910细胞ERK1/2活性的影响,以探讨其抑制该细胞增殖的信号转导通路。方法:以Westernblot方法测定ERK1/2在HO-8910细胞中的活性,细胞计数方法检测细胞增殖的改变。结果:1×10-7mol/LDex作用于HO-8910细胞5min即出现ERK1和ERK2活性的同步降低,最大作用出现在30min,与对照相比,二者分别减少41%和54%(P均<0.001),4h恢复至对照水平。ERK1/2活性降低的程度随Dex浓度(1×10-10～1×10-6mol/L)升高而增大。该作用不能被糖皮质激素受体(glucocorticoidreceptor,GR)拮抗剂RU486所阻断。ERK1/2上游激酶MEK1/2的抑制剂PD98059也具有抑制该细胞增殖作用,并能增强Dex对细胞增殖的抑制。结论:Dex能够以不依赖GR的方式快速抑制HO-8910细胞ERK1/2活性,这可能与其抑制细胞增殖过程有关。

辛伐他丁对胃癌细胞增殖的影响

目的 研究辛伐他丁对胃癌细胞增殖的影响。 方法 采用甲唑蓝 (MTT)比色法和流式细胞仪检测胃癌细胞的增殖活性和细胞周期。 结果 辛伐他丁可明显降低MNK4 50 胃癌细胞增殖活性、S期细胞比和PI值 ,在 >1μM浓度时 ,与对照组比较具有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,同时加入甲羟戊酸(MVA)则可逆转辛伐他丁的抑制作用。另外 ,辛伐他丁对胃癌细胞经过G2 期也具有一定阻抑作用。 结论 辛伐他丁可抑制胃癌细胞生长增殖 ,提示辛伐他丁具有抗肿瘤作用 ,可作为胃癌辅助治疗的新手段。

高浓度葡萄糖对牙周膜干细胞成骨分化能力的影响

目的观察高浓度葡萄糖刺激下牙周膜干细胞(PDLSCs)的增殖能力和成骨分化能力。方法组织块法体外培养非糖尿病患者PDLSCs,分别用0mg/L(正常对照组)、1100mg/L(低糖组)、4500mg/L(高糖组)浓度葡萄糖刺激,MTT法检测PDLSCs增殖能力,矿化诱导后茜素红染色观察矿化结节形成,实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测Runt相关转录因子2(Runx-2)、碱性磷酸酶(ALP)和I型胶原(Col-1)成骨相关基因表达。结果 MTT法检测显示高糖组OD值较低糖组和正常对照组低(P<0.05);21天成骨诱导后,高糖组矿化结节面积少于低糖组和正常对照组(P<0.05,P<0.01);成骨诱导期间,高糖组ALP、Runx2和Col-1诱导前后相对倍增数低于低糖组和正常对照组(P<0.05,P<0.01)。结论高浓度葡萄糖抑制PDLSCs增殖能力和成骨分化能力。

FOSL1通过ITGA6/PI3K/AKT途径参与儿童呼吸哮喘疾病

目的探究FOS样抗原1(FOS-like antigen 1,FOSL1)对哮喘中气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)增殖与迁移的作用及其分子机制。方法建立TGF-β1诱导的ASMCs模型,并采用CCK-8试剂盒检测细胞活力。使用qRT-PCR和Western印迹方法检测FOSL1及ITGA6的表达量。MTT法、Transwell试验、qRT-PCR和Western印迹方法被用于测定ASMCs细胞增殖、迁移及其过程中关键蛋白的表达量。结果TGF-β1诱导下,ASMCs细胞中的FOSL1表达量上升。沉默FOSL1后,ASMCs细胞的增殖及迁移能力降低,并且细胞增殖过程中关键蛋白细胞核增殖因子及细胞核增殖抗原,迁移过程中关键蛋白基质金属蛋白酶-2及基质金属蛋白酶-9的表达量均显著降低。沉默FOSL1降低ITGA6的表达量。过表达ITGA6及IGF-1/SC79(PI3K/AKT信号通路激活剂)可部分程度上缓解沉默FOSL1导致的ASMCs细胞增殖及迁移能力的降低。结论FOSL1可通过ITGA6/PI3K/AKT通路调节气道平滑肌细胞的增殖及迁移能力,进而影响儿童呼吸哮喘的疾病进程。

转染BMP-II型突变受体基因对Tca8113舌癌细胞增殖的影响

目的 :明确转染BMP II型突变受体对Tca8113舌癌细胞的作用 ,以进一步探讨BMPs对口腔上皮恶变的作用机制。方法 :用FuGENE6(TransfectionReagentKit)真核转染试剂盒将携带BMP II型突变受体cDNA的真核表达载体转染Tca8113细胞 (命名为Tca8113ZR细胞 ) ;然后对Tca8113ZR和Tca8113细胞分别进行生长曲线、MTT检测 ,FCM分析 ,BrdU标记检测细胞的增殖活性及DNA合成 ;以观察转染前后舌癌细胞生物学性状的变化。结果 :Tca8113ZR细胞和Tca8113细胞相比 ,形态未见明显变化 ,但是细胞的增殖活力明显下降。结论

索拉非尼对非小细胞肺癌H460与A549细胞株的抑制作用及其机制

目的探讨索拉非尼对非小细胞肺癌H460、A549细胞株的抑制效果及其作用机制。方法选取H460、A549细胞株进行培养,随机分为对照组和不同浓度(3.0μmol·L^(-1),6.0μmol·L^(-1),9.0μmol·L^(-1))索拉非尼组,采用MTT法检测各组细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期,Western blot法检测Cyclin E1和E2F1的蛋白表达。结果不同浓度索拉非尼组H460、A549细胞OD值均明显低于对照组(P<0.05),其中9.0μmol·L^(-1)索拉非尼组H460、A549细胞OD值分别为(0.550±0.080)和(0.603±0.073),明显低于其他各组(P<0.05)。不同浓度索拉非尼组H460、A549细胞G0/G1期比例均明显高于对照组(P<0.05),其中9.0μmol·L^(-1)索拉非尼组H460、A549细胞G0/G1期比例分别为(68.20±7.40)%和(69.12±7.04)%,明显高于其他各组(P<0.05)。不同浓度索拉非尼组H460、A549细胞Cyclin E1和E2F1蛋白表达明显低于空白对照组(P<0.05),其中9.0μmol·L^(-1)索拉非尼组H460细胞Cyclin E1和E2F1蛋白表达分别为(0.206±0.097)和(0.412±0.096),A549细胞Cyclin E1和E2F1蛋白表达分别为(0.210±0.094)和(0.311±0.095),均明显低于其他组(P<0.05)。结论索拉非尼可抑制非小细胞肺癌H460、A549细胞增殖,将细胞阻滞于G1期,可能与调控Cyclin E1和E2F1蛋白有关。

利用CRISPR/Cas9系统建立长链非编码RNA SNHG1基因敲除细胞系并研究其功能

目的利用CRISPR/Cas9介导的同源定向修复机制构建长链非编码RNA(lncRNA)核仁小分子RNA宿主基因1(SNHG1)稳定敲除的A549细胞系,并进行功能研究。方法设计靶向SNHG1基因的小向导RNA(sgRNA),将其克隆到LentiCRISPR v2质粒中,构建Cas9‐sgSNHG1质粒。以A549细胞基因组DNA为模板,PCR扩增5′同源臂(5′Arm)和3′同源臂(3′Arm)序列,以pEGFP‐Blast质粒为模板,PCR扩增pEGFP‐Blast‐polyA序列;利用重叠PCR将3个序列连接为5′Arm‐pEGFP‐Blast‐polyA‐3′Arm,通过Gibson克隆将其连接到pUC18质粒上,构建SNHG1同源重组模板质粒。将构建成功的两个重组质粒共转染A549细胞,用杀稻瘟菌素(Blast)筛选稳定插入pEGFP‐Blast‐polyA的细胞株,挑取单克隆。实时荧光定量PCR(qPCR)检测敲除效率,CCK‐8法和克隆形成实验检测细胞增殖活力及克隆形成能力。结果成功构建Cas9‐sgSNHG1及SNHG1同源重组模板质粒,筛选获得敲除效率较高的A549细胞系,发现敲除SNHG1可抑制A549细胞增殖活力及克隆形成能力。结论SNHG1稳定敲除的A549细胞系构建成功,SNHG1的癌基因功能受到显著抑制。CRISPR/Cas9介导的同源定向修复可有效抑制长链非编码RNA的表达,是长链非编码RNA功能研究的重要工具。

白细胞介素2和黄芪多糖对人NK细胞活性和增殖的影响

用同位素释放法测定NK细胞的活性和增殖。探讨白细胞介素 2 (1L 2 )和黄芪多糖 (PA)对人自然杀伤细胞 (NK)活性和增殖的刺激作用。结果 :1L 2和PA均可刺激NK活性 ,对照组 16 2±2 2 ;PA组 2 2 4± 3 8;1L 2组 4 0 8± 4 1;1L 2加PA组 74 2± 4 5。 1L 2和PA均可促进NK细胞增殖 (以刺激指数表示 ) ,PA组 1 9± 1 3;1L 2组 6 2 2± 2 3;PA加 1L 2组 9 30± 1 8。结论 :IL 2和PA均可刺激NK活性和NK增殖 ,前者作用较强。PA可协同IL 2 。

PPFP基因促进人正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1增殖和迁徙运动能力的体外实验研究

目的:研究PPFP基因对人正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1生物学特性的影响,以明确PPFP是否具有致瘤作用。方法以我们前期实验构建的PPFP基因慢病毒载体稳定转染细胞株Nthy-ori 3-1PPFP、空白慢病毒载体稳定转染细胞株Nthy-ori 3-1Vector和未转染细胞株Nthy-ori 3-1为研究对象,以MTT法检测细胞增殖情况,平板克隆形成实验检测克隆形成数,软琼脂集落形成实验检测集落形成率,划痕愈合实验观察各组细胞体外迁徙运动能力,流式细胞仪检测各组细胞凋亡和细胞周期。结果以Nthy-ori 3-1Vector组和Nthy-ori 3-1组细胞为对照组,Nthy-ori 3-1PPFP组细胞较对照组在细胞增殖能力、平板克隆形成数、软琼脂集落形成率、体外迁徙运动能力均明显提高或增强,而细胞凋亡率明显下降,G0/G1期细胞明显减少,S期及G2/M期细胞则显著增加。结论PPFP基因可显著促进人正常甲状腺细胞Nthyori 3-1的增殖能力,并显著抑制其凋亡和促进其迁徙运动能力,提示该基因可能在滤泡状甲状腺癌恶性增殖和侵袭转移过程中起关键性作用。