肠上皮内淋巴细胞对肠上皮屏障功能的影响

目的:研究在痢疾志贺菌F2a-12脂多糖刺激下,大鼠小肠上皮内淋巴细胞(IEL)对人结肠癌上皮细胞系Caco-2屏障功能的影响。方法:新鲜分离的大鼠小肠IEL与Caco-2共培养,并用F2a-12LPS刺激共培养细胞。通过检测短路电流、紧密连接相关蛋白表达及透射电镜来反映上皮屏障功能的变化。结果:共培养后跨上皮电阻增加,但在LPS刺激后显著降低;紧密连接相关蛋白ZO-2mRNA表达在共培养后增加,LPS刺激后共培养细胞ZO-1mRNA表达显著下降;透射电镜下可见共培养后细胞间紧密连接显著增强,但在LPS刺激后共培养细胞间的连接几乎消失。首次在电镜下发现上皮细胞与IEL间有连接样结构的存在,为其相互作用提供了形态学的证据。结论:IEL对上皮屏障功能具双向调节作用,在生理状态下增强,但在感染信号存在时降低。

体外培养的猪眼色素上皮细胞屏障功能的研究

目的研究体外培养的猪眼视网膜色素上皮(RPE)细胞的血视网膜外屏障功能。方法对猪眼RPE细胞进行原代培养,第3代细胞接种于微孔滤器,微孔滤器的滤膜为无聚乙烯吡咯酮(PVP)聚碳酸脂膜(polycarbonate),分别于培养1、2、3、4周对滤膜表面行光学显微镜观察,于培养后2周对膜切面行光学显微镜和透射电子显微镜观察;行跨膜电阻测定并用荧光素钠和辣根过氧化物酶(HRP)进行通透性检测。结果成功原代培养了猪眼RPE细胞。光学显微镜观察结果显示,RPE细胞接种1周后,细胞基本汇合,接种后2、3周时RPE细胞密度无明显变化,接种后4周时细胞密度下降;滤膜及细胞标本切面观察结果显示,RPE细胞可在滤膜表面表现出单层有极性生长的特性;接种于微孔滤器2周后,RPE细胞跨上皮细胞电阻达(97.44±11.36)Ω/cm2,并至少持续到接种后3周;通透性检测结果显示,孵育30min后只有0.27%的荧光素钠和0.17%的HRP从滤膜上方到达下方,分子量小的荧光素钠比分子量大的HRP通透率高。结论应用无PVP聚碳酸脂膜的微孔滤器可以建立体外RPE细胞有极性单层生长的模型,并用于屏障功能的研究。