麝香多肽体外诱导成年大鼠和人骨髓间充质干细胞定向分化为神经元的研究

目的 :观察麝香多肽体外定向诱导成年大鼠和人骨髓间质干细胞 (Bonemarrowmesenchymalstemcells,BMMSCs)分化为神经元的能力。方法 :采用含 10 0 - 15 0mg/L麝香多肽的无血清L -DMEM培养基诱导成年大鼠和人BMMSCs分化为神经元 ,免疫组化鉴定神经元烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)、神经巢蛋白 (nestin)的表达。结果 :成年大鼠和人BMMSCs在加入含麝香多肽的无血清L -DMEM培养基诱导后 ,BMMSC胞体收缩 ,突起伸出 ,形似神经元 ;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF、nestin表达阳性 ,GFAP阴性。结论 :麝香多肽可以在体外诱导成年大鼠和人BMMSCs定向分化为神经元。

成年和老年大鼠局灶性脑缺血后脑室下区细胞的增殖分化

目的:比较老年和成年大鼠局灶性脑缺血后脑室下区(SVZ)神经干细胞的增殖与分化。方法:制作大脑中动脉梗死模型, 用免疫组化法检测SVZ的5-溴脱氧尿核苷(BrdU)、神经元核抗原(NeuN)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞数的变化。结果:SVZ的BrdU阳性细胞在正常组和假手术组成年大鼠明显多于老年大鼠。实验组成年和老年大鼠均在缺血后增加,28 d时仍高于正常水平,但成年大鼠各时间点均明显高于老年大鼠。在新生细胞中部分细胞是BrdU/NeuN或BrdU/GFAP双标细胞, 但老年大鼠BrdU/NeuN双标细胞明显少于成年大鼠。结论:大鼠脑缺血激活SVZ神经干细胞增殖能力,成年大鼠明显强于老年大鼠,且新生细胞分化为神经元的比例也明显高于老年大鼠。

牙本质基质对牙囊细胞增殖分化影响的体外研究

目的：研究牙本质基质（DM）对人牙囊细胞（h PFCs）增殖、分化的影响。方法：酶消化组织块法分离培养hDFCs,经鉴定后取第4代细胞并将其随机分为2组,分别用DM浸提液（实验组）和α-DMEM培养液（对照组）进行培养。然后分别用CCK-8法检测各组细胞在培养后1~7 d各时间点的增殖情况;用Western-blot检测培养7 d后各组细胞中ALP、Runx2、OPN、CP-23各成骨/成牙骨质相关基因的蛋白表达水平。结果：DM浸提液对h DFCs的增殖无明显促进作用（P〉0.05）,但能明显上调其ALP、Runx2、OPN、CP-23蛋白表达水平（P〈0.05）。结论：牙本质基质浸提液可诱导hDFCs向成骨/成牙骨质向分化。

诱导人卵黄囊间质干细胞向成骨细胞及神经细胞定向分化

目的:分离纯化及体外定向诱导人卵黄囊间质干细胞(hYS -MSC)分化为成骨细胞及神经细胞。方法:卵黄囊细胞经贴壁培养、传代纯化得到hYS -MSC ,检测其表面抗原表达、对其进行核型分析、细胞周期检测并测定AKP活性;采用地塞米松、β-甘油磷酸钠、维生素C作成骨诱导剂、β-巯基乙醇或复方丹参注射液作为神经诱导剂诱导hYS -MSC向成骨细胞及神经细胞定向分化。组织化学方法作成骨检测;免疫组化方法检测NSE、NF及GFAP在经神经诱导hYS -MSC中的表达。结果:hYS -MSC易于纯化,在培养过程中保持正常核型,具有较大增殖能力。hYS -MSCCD2 9、CD4 4、CD16 6及CD10 5表达阳性,CD34、CD4 5和CD86为阴性;AKP弱阳性。hYS -MSC经成骨诱导AKP强阳性,诱导两周后形成钙盐沉积形成的矿化区。hYS -MSC经神经诱导可见NSE、NF或GFAP阳性细胞,符合神经元及胶质细胞的生物学特征。结论:hYS -MSC在体外培养过程中具有较大增殖能力并保持正常核型,与成体MSC表型一致,在体外可以诱导分化为成骨细胞、神经元及胶质细胞。

再生障碍性贫血患者骨髓间充质干细胞生物学特性的初步研究

目的:研究再生障碍性贫血(aplastic anemia,从)患者骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的生物学特性和初步探讨其异常和AA发生的可能关系。方法:取AA患者骨髓间充质干细胞,测定其生长曲线和倍增时间;流式细胞仪检测其细胞周期和免疫表型;体外定向诱导其向脂肪、成骨、内皮和神经细胞分化;用real-time PCR及油红O染色法比较AA和正常对照组MSCs的成脂分化的不同。结果:AA患者和正常成人的MSCs均呈梭形贴壁生长;AA组细胞倍增时间长于对照组;CD105、CD44、CD29、CD106、FlK-1均阳性;96.51%的细胞处在G0/G1期;AA患者的MSCs保持了多向分化潜能,体外诱导形成脂滴较对照组早,诱导早期的脂蛋白脂酶表达增高。结论:再生障碍性贫血患者的骨髓间充质干细胞增殖能力较正常成人弱,骨髓间充质干细胞的易成脂性可能参与了再障的发病环节。

慢病毒介导E-cadherin过表达对人脂肪干细胞成表皮分化的影响

目的探讨E-cadherin对人脂肪干细胞（hADSCs）成表皮分化的影响。方法利用胶原酶消化法从成人脂肪组织中分离培养hADSCs。携带增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因的慢病毒载体（Lv-EGFP）介导E-cadherin基因以10、25、50和100的感染复数（MOI）作用72h转染hADSCs，荧光显微镜下观察荧光强度并统计转染效率。Lv-EGFP-E-cadherin过表达组慢病毒和Lv-EGFP对照组慢病毒分别转染hADSCs，未转染的hAD-SCs为空白组；4天后RT-PCR检测E-cadheimmRNA的表达。将各组hADSCs经成表皮诱导14天后，RT-PCR检测表皮细胞标志物CK18、ZO-1mRNA的表达情况。结果3代以后hADSCs呈均一长梭形，增殖活跃。MOI=10、25、50、100时，EGFP阳性率分别为51．9％±2．68％、95．1％±3．82％、95．6％±2．56％、96．9％±2．25％，选择MOI=25为最佳转染滴度进行后续实验。与对照组及空白组相比，转染Lv-EGFP-E-cadherin过表达慢病毒可显著增强hADSCs中E-cadherinmRNA的表达（P〈0．05），E-cadherin过表达后可显著增高细胞中CK18、ZO-1mRNA的表达（P〈0．05），促进成表皮分化。结论E-cadherin过表达可在一定程度上促进hADSCs向表皮细胞诱导分化。

人非ATP酶依赖性调节颗粒13对人牙周膜细胞的调节作用

目的探讨人非ATP酶依赖性调节颗粒13(hRpn13)通过泛素-蛋白酶体通路(UPP)途径对人牙周膜细胞(PDLC)的作用,从而揭示其对PDLC增殖、分化和功能的调节作用。方法通过转染敲除来改变PDLC中hRpn13的表达后,用MTT法观测细胞形态,4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)来检测细胞增殖情况,通过检测碱性磷酸酶(ALP)和Ⅰ型胶原纤维的分泌情况来检测细胞成骨分化情况,最后通过检测NF-κB受体活化子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)、泛素化蛋白的改变来研究hRpn13对PDLC功能的调节作用及其可能机制。结果 hRpn13对成纤维细胞的增殖和ALP的活性,Ⅰ型胶原蛋白以及RANKL、OPG的表达起到了负性调节作用,同时hRpn13使泛素化蛋白聚集减少。结论 hRpn13可以通过影响UPP通路来调节成纤维细胞的增殖、分化和功能。