人脐带干细胞外泌体对人毛乳头细胞增殖的影响

目的探究人脐带间充质干细胞外泌体(hUCMSC-Exos)对人毛乳头细胞(HDPCs)增殖的影响,并对hUCMSC-Exos促毛发生长作用的机制进行初步探索。方法二步酶法分离HDPCs并进行体外培养,培养人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs),收集细胞培养上清,通过超高速离心法提取外泌体,并对其进行电镜、粒径及表面标记物鉴定。双氢睾酮(dihydrotestosterone,DHT)诱导HDPCs建立雄激素性脱发细胞模型。将hUCMSC-Exos与HDPCs共培养,采用细胞增殖试验(EdU)检测诱导的HDPCs的相对活力。Real-time qPCR检测碱性磷酸酶(ALP)表达水平、Western blot检测β-catenin、Wnt10b、GSK-3β在蛋白水平的表达。结果所获取的HDPCs、h UC-MSCs和hUCMSC-Exos均符合毛乳头细胞、间充质干细胞及外泌体特征。EdU阳性细胞数显著增加,外泌体可有效促进HDPCs增殖(P<0.05),增强HDPCs活力,减轻DHT造成的损伤(P<0.05)。Real-time qPCR显示外泌体可增强ALP基因表达水平(P<0.05),增强毛囊诱导能力;Western blot证实β-catenin、Wnt10b、GSK-3β在蛋白水平的表达均有差异(P<0.05)。结论hUCMSCExos可促进DHT诱导的HDPCs增殖,增强其毛囊再生修复能力,其机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。

lncRNA GIHCG靶向miR-429对食管鳞状细胞癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨长链非编码核糖核酸(lncRNA)GIHCG靶向微小核糖核酸-429(miR-429)对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法常规培养人ESCC细胞系(EC9706、TE1、KYSE150细胞)及正常食管鳞状上皮细胞系(Het-1A细胞),用RT-PCR法筛选实验细胞。将对数生长期实验细胞随机分为si-NC组、si-GIHCG组,分别转染lncRNA敲低质粒阴性对照、lncRNA GIHCG敲低质粒。用RT-PCR法检测细胞中lncRNA GIHCG、miR-429表达,用CCK-8法检测细胞增殖能力[吸光度值(OD值)],用细胞划痕实验检测细胞迁移能力,用Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,用Western blotting法检测细胞中细胞增殖表型蛋白[细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、增殖细胞核抗原(PCNA)]和转移表型蛋白[基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)]表达。将对数生长期实验细胞随机分为GIHCG-WT+miR-429 mimics组、GIHCG-WT+NC-mimics组、GIHCG-MUT+miR-429 mimics组、GIHCG-MUT+NC-mimics组,用双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA GIHCG与miR-429的靶向关系。结果与Het-1A细胞比较,EC9706、TE1、KYSE150中lncRNA GIHCG相对表达量高(P均<0.05),miR-429相对表达量低(P均<0.05)。由于TE1细胞中lncRNA GIHCG的相对表达表达量最高、miR-429相对表达量最低,因此以TE1细胞作为实验细胞。与si-NC组比较,si-GIHCG组lncRNA GIHCG相对表达量低,miR-429相对表达量高,各时间OD值低,细胞移动距离百分比低,Cyclin D1、PCNA、MMP-2、MMP-9相对表达量低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。与GIHCG-WT+NC-mimics组比较,GIHCG-WT+miR-429 mimics组荧光素酶相对活性低(P<0.05);GIHCG-MUT+miR-429 mimics组、GIHCG-MUT+NC-mimics组荧光素酶相对活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论ESCC细胞中lncRNA GIHCG高表达,miR-429低表达;敲低lncRNA GIHCG通过靶向调控miR-429抑制ESCC细胞增殖、迁移及侵袭。

刺梨提取物CL1对胃癌SGC-7901细胞增殖和人脐血CD34^+造血干/祖细胞增殖分化能力的影响

目的:观察刺梨提取物CL1对胃癌SGC-7901细胞增殖和人脐血CD34+造血干/祖细胞(HSPC)增殖分化能力的影响。方法:采用MTT法测定活细胞OD值,计算CL1对胃癌SGC-7901细胞增殖抑制率。免疫磁珠分选人脐血CD34+造血干/祖细胞,细胞记数、双色直接免疫荧光标记法和流式细胞仪分析细胞增殖分化能力变化。结果:MTT检测法显示,0.01~10μmol.L-1的CL1处理,剂量依赖性和时间依赖性地抑制胃癌SGC-7901细胞生长。经14 d的培养,与细胞对照组相比,10、1μmol.L-1的CL1细胞数有下降趋势,但差异无显著性;表达粒系/单核巨噬系细胞表型CD15和CD11b的细胞百分数无显著差异。经14 d的培养,与培养0 d比较,CD15显著增高(P<0.05),CD11b有增高趋势,但无显著性差异。结论:CL1对胃癌SGC-7901细胞的体外生长具有抑制作用,但对人脐带血CD34+HSPC的增殖、和向粒细胞、单核巨噬细胞分化无明显影响,表明CL1在抗肿瘤作用剂量下,不会明显抑制造血干/祖细胞向粒-单细胞的增殖分化,提示CL1可能不会引起明显的造血抑制。

粉防己甲素抑制人结肠癌细胞增殖与Wnt/β-catenin信号的关系研究

目的研究粉防己甲素(tetrandrine,Tet)对人结肠癌细胞增殖的抑制作用及可能的机制。方法采用结晶紫染色和流式细胞分析检测Tet对HCT116细胞增殖的抑制作用;利用流式细胞术分析和Annexin-V EGFP染色检测Tet对HCT116细胞凋亡的影响;利用萤光素酶报告质粒法检测Tet对Wnt/β-catenin信号转导的影响;采用Western blot检测Tet对HCT116细胞内β-catenin蛋白水平的影响。结果与对照组相比,Tet能抑制HCT116细胞增殖,在5μmol·L-1时已明显抑制细胞增殖(P<0.05);流式分析和Annexin-V EGFP免疫荧光染色检测结果均显示,Tet能明显诱导HCT116细胞凋亡;与对照组相比,Tet处理组LEF/TCF4和Myc/Max报告质粒萤光素酶活性降低,并且Tet处理组细胞内β-catenin蛋白水平也明显下降。结论 Tet能抑制HCT116细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与Tet通过降低细胞内β-catenin蛋白水平,抑制Wnt/β-catenin信号转导有关。

富血小板血浆和浓缩生长因子对人牙周膜细胞增殖和成骨分化影响的研究

目的研究富血小板血浆(PRP)和浓缩生长因子(CGF)对人牙周膜细胞(hPDLCs)增殖及成骨分化的影响。方法分离、培养并鉴定hPDLCs;制备人全血、PRP和CGF,分别进行血小板计数;分别将全血(对照组)、PRP(PRP组)和CGF(CGF组)与hPDLCs共培养,CCK-8法检测细胞增殖能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力;使用1%、5%、10%的PRP和CGF分别对hPDLCs处理24、48、72 h,进行成骨诱导,Western blot法检测成骨相关转录因子Runx2、Osx、Dlx5和Msx2的相对表达量。结果PRP、CGF可促进hPDLCs的增殖和迁移(P<0.05),提高促进成骨相关因子Runx2、Osx、Dlx5的表达并降低抑制成骨因子Msx2的表达(P<0.05)。结论PRP、CGF能促进hPDLCs的增殖和迁移,并促进成骨分化相关转录因子的表达。

小剂量顺铂联合5-氟尿嘧啶对胃癌细胞增殖抑制及其机制的研究

目的:探讨小剂量顺铂(DDP)、5-氟尿嘧啶(5-FU)在体外联合用药对SGC-7901胃癌细胞及胃癌耐药细胞株SGC-7901/5-FU细胞增殖及其相关基因表达的影响。方法:采用MTT法观察在小剂量DDP、5-FU联合用药前后SGC-7901与SGC-7901/5-FU存活率的差异,同时应用免疫组化方法检测SGC-7901与SGC-7901/5-FU中p53、Fas/FasL基因的表达情况。结果:DDP与5-FU均有抑制肿瘤细胞增殖作用,且有浓度相关性;尤以DDP联合5-FU后对细胞存活率的影响明显高于两种药物的单独使用(P<0.01),小剂量DDP联合应用5-FU时效果最明显,但对SGC-7901/5-FU细胞增殖抑制作用明显小于SHC-7901;小剂量联合DDP+5-FU,p53、FasL基因表达的阳性率显著高于单纯的5-FU组或DDP组(P<0.01),而Fas基因表达则相反。结论:小剂量DDP联合5-FU对胃癌细胞具有明显抑制作用,对耐药株也有一定抑制作用,但效果弱于非耐药株。p53、Fas/FasL基因对胃癌细胞的增殖活性有重要作用,在小剂量DDP联合5-FU比各单药应用组基因的改变更明显(P<0.01)。

Mindbomb同源物2基因转染对人脑胶质瘤细胞U251增殖的影响及其机制

目的观察Mindbomb同源物2(MIB2)基因转染对人脑胶质瘤细胞U251增殖的影响,并探讨其作用机制。方法将U251细胞分为空白对照组、阴性对照组、实验组1、实验组2;空白对照组不作任何处理,阴性对照组转染空载体FLAG质粒,实验组1转染MIB2-FLAG质粒,实验组2转染si MIB2。用PCR法检测各组细胞的MIB2mRNA,用蛋白质印迹法检测各组细胞的MIB2、核因子κB(NF-κB)抑制性蛋白(IκB)、NF-κB蛋白,用MTT法检测各组细胞的光密度值。结果实验组1的MIB2 mRNA相对表达量为19.43±3.21、实验组2为0.43±0.17、阴性对照组为1.03±0.12;实验组1、实验组2与阴性对照组相比,P均<0.01。实验组1的MIB2、核因子κB(NF-κB)抑制性蛋白、NF-κB蛋白相对表达量分别为5.11±0.41、0.49±0.13、4.99±0.32,实验组2分别为0.43±0.17、3.12±0.36、0.49±0.14,阴性对照组分别为1.09±0.11、1.02±0.46、1.01±0.21;实验组1、实验组2与阴性对照组相比,P均<0.01;在36、48、72 h三个时点,与阴性对照组和空白对照组相比,实验组1的U251细胞光密度值升高(P均<0.01)。结论转染MIB2基因后人脑胶质瘤U251细胞的增殖能力增强,MIB2基因可能是通过MIB2蛋白调控NF-κB信号通路而发挥作用。

“连花汤”正丁醇提物对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究"连花汤"正丁醇提物对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响,为临床应用"连花汤"治疗子宫内膜癌提供实验依据。方法提取物从10 mg/mL依次降浓度梯度至0.078125 mg/mL分成8组,即:10 mg/mL、5 mg/mL、2.5 mg/mL、1.25 mg/mL、0.625 mg/mL、0.3125 mg/mL、0.15625 mg/mL、0.078125 mg/mL组。MTT法检测细胞抑制率;分别计算出两种细胞的半数抑制浓度(IC_(50)),流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 "连花汤"正丁醇提物在不同浓度、不同时间里对2种内膜癌细胞系的增殖有显著抑制作用。其中,作用24小时、48小时,HEC-1A细胞1.25 mg、0.625 mg、0.3125 mg组间细胞抑制率有显著性差异(P<0.01);Ishikawa细胞5 mg/mL、2.5 mg/mL、1.25 mg/mL、0.625 mg/mL、0.3125 mg/mL、0.15625 mg/mL组间细胞抑制率有显著性差异(P<0.01);作用24小时,HEC-1A细胞、Ishikawa细胞10 mg、5 mg、0.625 mg、0.078125 mg组间细胞抑制率有显著性差异(P<0.01)。与正常组相比,"连花汤"正丁醇提物细胞凋亡率显著增高,差异显著。其中,HEC-1A细胞:高剂量组0.4 mg/mL、中剂量组0.2 mg/mL、低剂量组0.1 mg/mL与正常组比较,细胞凋亡率有显著性差异(P<0.01);Ishikawa细胞:Ishikawa高剂量组1.0 mg/mL、中剂量组0.5 mg/mL、低剂量组0.25 mg/mL与正常组比较,细胞凋亡率有显著性差异(P<0.05)。结论"连花汤"正丁醇提物能有效抑制子宫内膜癌细胞增殖、诱导细胞凋亡。

丹参酮防治动脉再狭窄作用的实验研究

目的 :观察丹参酮对实验性动脉再狭窄的防治作用 ,并初步探讨其作用机制。方法 :雌性KM小鼠随机分为模型组、高剂量组、低剂量组 ,每组 12只。将小鼠左颈总动脉近动脉分叉处结扎 ,造成内膜增生、颈动脉狭窄模型。将模型组结扎动脉对侧血管作为正常组。术前两天开始给药 ,高、低剂量组分别灌胃给予丹参酮 6,3g·kg- 1·d- 1,模型组给予等体积的溶媒。给药 4周后 ,取颈动脉作HE染色 ,光镜下观察动脉形态并用图像分析系统分析动脉内膜面积、中膜面积、相对管腔面积及内膜 /中膜面积 ,用免疫组化测定增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达水平并计算阳性指数。结果 :与正常组比较 ,模型组管腔相对面积明显减小 (P <0 .0 1) ,内膜面积、中膜面积及内膜 /中膜面积增大 ,差异显著 (P <0 .0 1) ;与模型组比较 ,丹参酮低剂及高剂组的管腔相对面积均显著增大 (P <0 .0 1) ,内膜面积、中膜面积及内膜 /中膜面积均有减小 (P <0 .0 5) ,PCNA的表达明显减少 ,阳性指数显著降低 (P <0 .0 1)。结论 :丹参酮可抑制由于血流动力学改变而引起的以平滑肌细胞增殖迁移为主要病理特征的内膜增生 ,提示对经皮腔内冠状动脉血管成形术 (PTCA)

bFGF和PDGF-BB对内皮祖细胞分化的内皮样细胞和平滑肌样细胞增殖和迁移的影响

目的探讨内皮祖细胞分化的内皮样和平滑肌样细胞在碱性成纤维生长因子和血小板源生长因子BB作用下的增殖和迁移能力。方法将分离、培养及纯化的内皮祖细胞培养5天后进行分组:对照组、碱性成纤维生长因子组和血小板源长因子BB组。对照组使用20%胎牛血清的DMEM培养基;碱性成纤维生长因子组和血小板源生因子BB组在20%胎牛血清的DMEM培养基中分别添加碱性成纤维生长因子(30μg/L)和血小板源生长因子BB(40μg/L)。免疫荧光染色鉴定内皮祖细胞以及检测内皮祖细胞内皮方向分化标记物CD31和vWF,及平滑肌方向分化标记物α-SMA和Calponin。将分化的内皮样细胞和平滑肌样细胞用MTT法和Transwell小室分别检测其增殖活性和迁移能力。结果与对照组比较,内皮祖细胞经碱性成纤维生长因子或血小板源生长因子BB诱导后呈现较强的内皮细胞(CD31,vWF)或平滑肌细胞(α-SMA,Calponin)的荧光染色,被诱导细胞分别称为内皮样细胞和平滑肌样细胞;碱性成纤维生长因子促进内皮样细胞和血小板源生长因子BB促进平滑肌样细胞增殖的作用在一定范围内具有时间(0～48 h)和浓度(碱性成纤维生长因子:0～16μg/L;血小板源生长因子BB:0～18μg/L)依赖效应。结论碱性成纤维生长因子和血小板源生长因子BB分别可以促进内皮祖细胞分化成内皮样细胞和平滑肌样细胞,并且在碱性成纤维生长因子和血小板源生长因子BB作用下具有明显的增殖和迁移能力。

FERMT2在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞生长的调控

目的:观察fermitin家族同源蛋白2(FERMT2)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达,并以体外实验分析FERMT2基因敲除对肝癌细胞生长及相关调控分子表达的影响。方法:采用real-time PCR及免疫组化实验检测FERMT2在HCC及癌旁正常肝组织中的表达情况;采用CRISPR/Cas9技术构建FERMT2基因敲除的稳定MHCC97H细胞系,通过WST-1法和流式细胞术比较其与野生型MHCC97H细胞活力、细胞周期和凋亡状态的改变,并采用Western blot检测相关调控蛋白的表达变化。结果:FERMT2在HCC组织中的mRNA和蛋白表达水平均显著高于癌旁组织,且FERMT2蛋白的高表达与HCC患者术后复发有关(P<0.05);成功构建了FERMT2基因敲除的稳定MHCC97H细胞系;与野生型细胞相比,FERMT2基因敲除后细胞活力明显减弱,S期细胞数量明显减少,细胞凋亡增加,且细胞内增殖细胞核抗原、细胞周期蛋白及细胞周期蛋白依赖性激酶2的表达均显著降低(P<0.05);细胞凋亡抑制因子survivin及Bcl2的表达也明显下降(P<0.05),并可检测到cleaved caspase-3。结论:FERMT2在肝癌组织中呈高表达,它可能通过调控细胞周期调节蛋白及抗凋亡蛋白的表达影响肝癌细胞的活力、细胞周期及凋亡,进而在肝癌形成及发展过程中发挥促癌作用。

黄芩素对星形细胞瘤SHG-44细胞增殖、侵袭迁移的影响

目的:观察黄芩素干预人星形细胞瘤SHG-44细胞株后,肿瘤细胞形态、增殖、凋亡、细胞周期以及运动侵袭能力的变化。方法:以体外培养的人星形细胞瘤SHG-44细胞为研究对象,用黄芩素干预后,显微镜观察细胞形态变化,MTT法观察细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期,侵袭小室实验观察细胞侵袭力改变。结果:黄芩素对SHG-44细胞增殖的抑制作用随时间的延长和药物浓度的增加,抑制作用逐渐增强,有明显的时间和剂量依赖性;随黄芩素浓度增加,凋亡率增高,差异有统计学意义(P<0.05);黄芩素将肿瘤细胞阻滞于G0/G1期,与对照组比较S期细胞减少近18%,差异有统计学意义(P<0.05);侵袭小室实验表明随着黄芩素干预浓度增加,SHG-44细胞48h后穿过人工基底膜的细胞数量明显更少,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:黄芩素能显著抑制SHG-44细胞的增殖、侵袭及迁移,提示黄芩素对星形细胞瘤治疗具有潜在应用价值。

炎症因子预处理的脂肪干细胞可明显抑制外周血单个核细胞增殖

目的:观察炎症因子预处理脂肪干细胞(adipose derived stem cells,ASCs)模拟异常炎症环境能否增强ASCs抑制外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)体外增殖的能力。方法:先用酶消化法对ASCs进行分离及体外培养,流式细胞仪检测其表面CD分子表达情况,用特定培养基诱导分化并鉴定其向脂肪组织和骨组织分化的能力。将PBMCs用CFSE标记后,与炎症因子预处理后的ASCs共培养,对照组无ASCs或使用未经炎症因子处理的ASCs,同时用CD3/CD28刺激PBMCs增殖,最后用流式细胞仪检测PBMC的母代细胞比例,从而判断其增殖情况。结果:ASCs形态为梭形,密集时可成鱼群状生长,可在诱导培养基培养下向脂肪组织和骨组织分化,表面CD分子表达情况与国际脂肪治疗联盟的关于ASCs的说明一致。PBMCs与ASCs体外共培养后,与无ASCs组相比,PBMCs的母代细胞比例有所增加,但效果并不显著,而将PBMCs与用炎症因子预处理后的ASCs共培养,PBMCs的母代细胞比例有明显增加(炎症因子处理后ASCs组38.7%±10%vs.无ASCs组28.4%±8.9%,P<0.05),说明炎症因子预处理的ASCs可明显抑制PBMCs的增殖。结论:炎症因子可增强ASCs的抗炎能力,该发现有助于ASCs更好地在组织修复领域发挥治疗作用。

γ-氨基丁酸对肝癌细胞株HepG-2恶性表型的影响

目的:研究γ-氨基丁酸(GABA)对肝癌细胞株HepG-2增殖能力及恶性表型的影响。方法:用不同浓度的GABA与人肝癌细胞HepG-2作用后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长速度,并测定其倍增时间,流式细胞仪检测细胞周期的改变,软琼脂细胞集落形式实验和裸鼠成瘤实验检测细胞的恶性表型。结果:MTT实验结果表明实验组细胞的生长速度明显快于对照组细胞的生长速度,且呈剂量依赖性,其细胞周期分布也发生改变,G1期细胞减少,S期细胞增多;对照组细胞和各浓度组细胞的平均倍增时间分别为39.0,30.6,30.0,27.3,26.6和38.2 h,软琼脂细胞集落形成率依次为3.2%,4.2%,5.4%,6.6%,6.5%,3.5%,Balb/c裸鼠成瘤实验显示,对照组和实验组的肿瘤平均质量依次为0.285和1.382 g,其差异有统计学意义(P<0.01)。结论:GABA能促进细胞增殖,并引起细胞恶化改变。

神经细胞粘附分子对人恶性脑胶质瘤细胞株体内外增殖能力的影响

目的 :探讨神经细胞粘附分子 ( neural cell adhesion molecule,NCAM)对人脑胶质瘤细胞株 U2 51 MG增殖行为的影响。 方法 :将外源性 NCAM-1 40质粒转入 U2 51 MG细胞株 ,采用流式细胞仪及培养细胞增殖动力学方法比较转染前后细胞的细胞周期、增殖细胞核抗原 ( proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达及群体增殖速度 ;在裸鼠颅内原位接种上述细胞 ,观察成瘤率及肿瘤大小。 结果 :NCAM转染后细胞的体外增殖速度减慢 ( P<0 .0 5) ,S期细胞减少 ,PCNA表达率下降 ;裸鼠颅内接种的成瘤率显著降低 ( P<0 .0 1 ) ,肿瘤体积明显较小。 结论 :转染外源性 NCAM在体外、体内均可抑制人脑胶质瘤细胞株 U2 51 MG的增殖。

人脂肪间充质干细胞体外高效扩增新方法

目的运用低强度脉冲场超声(LIPUS)刺激促进人脂肪间充质干细胞(hASCs)增殖,为临床干细胞体外高效增殖提供新方法。方法通过LIPUS体外刺激hASCs细胞生长,采用Scepter 2.0手持细胞计数器进行细胞计数,运用荧光倒置显微镜观察细胞形态,运用流式细胞仪检测细胞表面标志物,并进行干细胞临床前质量检测。结果刺激组50 mW/cm^2和60 mW/cm^2的LIPUS刺激强度均能促进细胞增殖,60 mW/cm^2强度更显著,与对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05);细胞倍增时间比对照组缩短,差异具有统计学意义(P<0.05),刺激后刺激组细胞表面标志物无变化,增殖后干细胞质量检测符合标准要求。结论 LIPUS刺激可促进hASCs有效增殖,低强度脉冲场超声可作为干细胞体外扩增的新方法。

15-脂氧合酶-1在胃癌细胞AGS中的表达

目的研究15-脂氧合酶-1(15-LOX-1)基因在人胃癌细胞AGS中的表达及其对AGS增殖凋亡的影响。方法通过脂质体介导瞬时转染15-LOX-1基因于培养的AGS中,逆转录PCR法和免疫印迹法检测15-LOX-1 mRNA及蛋白表达;四甲基偶氮唑盐法(MTT)、流式细胞术、AnnexinV/PI染色与原位末端标记法(TUNEL)比较转染前后AGS的增殖和凋亡情况。结果胃癌细胞AGS转染后表达有15-LOX-1的mRNA及蛋白。与非转染组及空质粒转染组相比较,转染重组质粒组AGS细胞生长明显受到抑制并且细胞周期停滞在G1期,其凋亡率明显高于非转染组及空质粒转染组。结论15-LOX-1基因能够抑制胃癌细胞AGS的增殖,并促进其凋亡。

脑源性神经营养因子在人牙髓干细胞中的表达及其对细胞增殖分化的影响

目的:检测脑源性神经营养因子(brain-derived neurtrophic factor,BDNF)在人牙髓干细胞中的表达,初步观察其对细胞增殖和分化的影响。方法:采用酶消化法分离培养人牙髓干细胞;RT-PCR检测细胞中BDNF mRNA表达;MTT和碱性磷酸酶活性检测观察其对细胞增殖分化的影响。结果:RT-PCR反应扩增出BDNF mRNA阳性产物;与对照组相比,25ng/mL BDNF可显著促进牙髓干细胞的增殖(P<0.05);100ng/mL时可显著提高碱性磷酸酶活性(P<0.05)。结论:BDNF可表达于人牙髓干细胞,对细胞增殖分化有一定促进作用。

斯钙素1对肾癌细胞生长调控的影响

目的:研究斯钙素1(stanniocalcin1,STC-1)对肾癌细胞生长的调控机制。方法:体外培养肾癌细胞,用0、0.1、0.5和1.0 nmol/L STC-1溶液浸染肾癌细胞,分别为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组;分别用MTT法检测各组肾癌细胞的增殖情况,RT-PCR及ELISA法检测各组肾癌细胞中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、STC-1基因及蛋白的表达,荧光分光光度计检测各组细胞内Ca2+水平。结果:随着STC-1蛋白给药浓度的增加,细胞内HIF-1α、STC-1的表达及Ca2+水平逐渐下降,细胞的促增殖作用逐渐降低,在低剂量组出现一过性增加。结论:STC-1蛋白可能通过调节HIF-1α、Ca2+的水平,促进肾癌细胞增殖,而该促增殖作用可能会因为STC-1对HIF-1α的抑制而逐渐减弱,从而调控肾癌细胞的生长平衡。

重组人促红细胞生成素对癫痫大鼠海马齿状回的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropietin,r-HuEPO)对癫痫大鼠海马齿状回的影响。方法 140只大鼠按随机数字表法分为正常对照组20只,余120只制作氯化锂-匹罗卡品颞叶癫痫模型,符合条件者采用随机数字表将其分为癫痫治疗组和癫痫组;各组均经腹腔注射BrdU,治疗组同时予以r-HuEPO处理;以FJ-B(Fluoro-Jade B)免疫荧光观察神经元变性情况,BrdU免疫组化观察细胞增殖情况,Timm’s染色观察齿状回苔藓纤维发芽情况。结果海马齿状回神经元变性在癫痫组(32.32±5.09)较治疗组(11.12±0.75)和对照组(6.50±1.08)明显(P<0.01),而治疗组和对照组相比无显著差异;第9天细胞增殖在癫痫组(92.8±2.97)较治疗组(16.95±0.54)和对照组(12.80±2.13)明显(P<0.01),治疗组和对照组相比无显著差异;第28天细胞增殖在癫痫组(146.45±5.91)较治疗组(46.27±2.93)和对照组(38.52±3.10)明显(P<0.01),治疗组和对照组相比无显著差异;Timm’s染色结果表明在第14天,癫痫组(0.45±0.19)苔藓纤维发芽比对照组(0.10±0.11)明显(P<0.05),第28天癫痫组(3.60±0.16)比治疗组(0.55±0.10)和对照组(0.30±0.11)更加明显(P<0.01),治疗组与对照组比差异不明显(P>0.05)。结论癫痫能诱发大鼠海马齿状回神经元变性、细胞增殖和苔藓纤维发芽;r-HuEPO处理能降癫痫大鼠海马齿状回神经元变性和细胞增殖,并能抑制苔藓纤维发芽。