PTEN基因对兔晶状体上皮细胞增殖抑制作用的实验研究

目的研究白内障术后晶状体上皮细胞增殖过程中是否存在PTEN基因对PI-3k／PKB信号转导途径的抑制作用，为后发性白内障的防治提供实验依据。方法将健康白色家兔42只（84眼）随机分入实验组（36只）和对照组（6只）。实验组兔行双眼透明晶状体皮质吸出术，对照组不做处理。在术后1d、3d、1周、2周、1个月和2个月各处死随机选择的6只实验组兔。应用免疫组织化学、原位杂交和RT-PCR方法检测赤道部晶状体上皮细胞中增殖细胞核抗原（proliferatingcellnuclearanti-gen，PCNA）及PTEN1TIRNA、PKBmRNA、Ser473-R的表达。结果对照组赤道部LEC核可见PcNA弱阳性表达，实验组术后ld时吸光度（A）值迅速升高为0．86±0．02，与对照组相比，差异有显著统计学意义（P〈0．001）；术后1-7dPCNA的表达维持在高水平状态；2周后，随着时间的延长，PCNA表达逐渐减弱；术后1个月、2个月时大致恢复至术前状态。对照组兔晶状体上皮细胞胞浆中有PTENmRNA的表达，吸光度值（A）为O．54±0．03。实验组术后1dPTENmRNA相对含量明显下降为0．20±0．02（P〈0．001），术后1周时略有恢复0．25±0．04（P〈0．001），术后1个月时恢复术前水平0．53±0．04（P〈0．001）。PKBmRNA的表达恒定，对照组与实验组各时间点差异均无统计学意义（均为P〉0．05）。对照组晶状体上皮细胞中sel473-R的表达较少（0．15±O．01），实验组术后1d时se-73-R的吸光度（A）值迅速升高为0．54±0．03，两组差异有显著统计学意义（P〈0．001）；术后1～3dSer473-R的表达维持在高水平状态；1周时，Ser473．R表达开始减弱；术后1个月、2个月时大致恢复术前状态。PTENmRNA与PCNA的表达呈负相关（r=-0．954，P〈0．001）；PKBmRNA相对含量与PCNA表达呈负相关（r=-0．319，P=0．039）；Ser473-R与PCNA的表达呈显著正相关（r=0．955，P〈0．001）；Ser473-R与PTENmRNA的表达呈显著负相关（r=-0．969，P〈0．001）。结论VrENmRNA在正常兔晶状体上皮细胞中有表达，在白内障术后，它可能通过抑制PI-3k信号转导玲径中的磷酸化过程而抑制晶状体上皮细胞的增殖．

过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)调控HBV微染色体重塑与病毒复制

目的:研究过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferator-activated receptor alpha,PPARα)是否参与调控乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)微染色体重塑与病毒复制。方法:HepG2细胞单独转染、共转染线性HBV单体与PPARα表达或PPARα沉默载体;Southern blot检测转染细胞质内HBV核心颗粒DNA;实时定量PCR定量检测细胞质HBV核心颗粒DNA及细胞核内HBV共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)水平;酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测转染细胞上清中乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)和e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg);染色质免疫共沉淀技术(chromatin immunoprecipitation,ChIP)检测与cccDNA结合的PPARα、组蛋白和染色质修饰酶。结果:与单独转染线性HBV单体相比,共转染PPARα增加了PPARα与HBV cccDNA的结合,增加了HBV开环DNA(open circular DNA,OC DNA)及HBsAg和HBeAg水平,同时也增加了cccDNA微染色质中组蛋白H3和H4的乙酰化水平及乙酰转移酶p300的水平;共转染PPARα沉默载体则有相反的结果。结论:PPARα能直接与cccDNA结合并有助于乙酰转移酶p300募集到cccDNA上,从而调控HBV微染色质的表观遗传学和HBV复制。这一发现对HBV与宿主转录因子间相互作用的相关分子机制提供了新的机制。

VEGF、bFGF浓度梯度对猪血管内皮细胞、成纤维细胞增殖移行的影响

【目的】探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）浓度梯度对于猪体外血管内皮细胞、成纤维细胞增殖移行的影响。【方法】以不同浓度VEGF、bFGF刺激猪血管内皮细胞、成纤维细胞，筛选出在各时间点细胞增殖及移行活力均有显著差异的三个浓度构成浓度梯度。以胶原膜片加栽VEGF、bFGF，以MTT法和计算细胞迁移距离法比较不同时间点浓度梯度组与单一浓度组细胞增殖移行活力的差异。【结果]VEGF浓度梯度组在24h、48h、72h时间点，VEGF浓度梯度组OD值均显著小于对照组25ng／mL和100ng／mL（P〈0．05）IVEGF浓度梯度组6h、12h、24h迁移距离明显大于对照组5ng／mL组、25ng／mL（P〈0．05），但6h、12h、24h与对照组100ng／mL比较无显著性差异（P〉0．05），在12h小于对照组100ng／mL（P〈0．05）。在不同时间点bFGF浓度梯度组0D值与对照组10ng／mLOD值比较无显著性差异（P〉0．05）；但均小于对照组50ng／mL和100ng／mL（P〈0．05）；bFGF浓度梯度组在不同时间点的迁移距离均显著大于对照组10ng／mL、50ng／mL、100ng／mL，其差异均有统计学意义（P〈0．05）。【结论]VECF、bFGF浓度梯度对于血管内皮细胞、成纤维细胞的迁移活力促进作用高于单一浓度，但因受生长因子浓度影响，而对于血管内皮细胞、成纤维细胞的增殖活力较单一低浓度无明显促进作用。

肝激酶B1对高糖条件下ARPE-19细胞增殖、迁移能力的影响及机制研究

目的观察肝激酶B1(LKB1)对高糖条件下人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)增殖、迁移的影响,并探讨其相关调控机制。方法LKB1真核表达载体pCMV-LKB1转染ARPE-19细胞,筛选稳定过表达LKB1的ARPE-19细胞株。将ARPE-19细胞分为4组:正常对照组、高糖组(HG组)、高糖+空白组(HG+B组)、高糖+LKB1组(HG+LKB1组)。用EdU法检测各组细胞增殖情况,Transwell小室观察各组细胞迁移能力,蛋白免疫印迹法检测各组细胞中相关蛋白的表达。结果EdU法检测结果显示,HG+LKB1组与HG组、HG+B组相比细胞增殖率显著降低(P<0.01);Transwell小室观察发现,HG+LKB1组与HG组、HG+B组相比细胞迁移能力显著降低(P<0.01)。蛋白免疫印迹法检测结果显示,HG+LKB1组与HG组、HG+B组相比基质金属蛋白酶-2(MMP2)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达显著降低(P<0.01),磷酸化的AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)显著增加(P<0.01),而磷酸化的哺乳类动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)则显著下降(P<0.01)。结论LKB1可下调MMP2和VEGF的表达,抑制高糖条件下ARPE-19细胞的增殖和迁移,该调控机制可能通过AMPK-mTOR信号通路发挥作用。

富含精氨酸早期肠内营养对烧伤后肠黏膜增殖的实验研究

目的 研究富含精氨酸的肠内营养对大鼠烧伤后肠道黏膜上皮增殖的影响。方法 观察富含精氨酸早期肠内营养组（ＡＥＦ组）、单纯早期肠内营养组（ＥＦ组）及延迟肠内营养（ＤＦ组）大鼠在烧伤后第 １、３、６和９ ｄ时，肠黏膜增殖细胞核抗原标记指数（ＰＣＮＡＬＩ）和肠黏膜脱氧核糖核酸（ＤＮＡ）的变化。结果 在烧伤后第１天，各组肠道黏膜ＰＣＮＡ的阳性细胞极为罕见。与ＤＦ组相比，在烧伤后第３天ＡＥＦ组肠黏膜ＰＣＮＡＬＩ即有明显升高［（２０．６１±７．５３）‰ ｖｓ（６．９±２．７）‰，Ｐ＜０．０５），而ＥＦ组在烧伤后第６天才有显著升高（１８．２±５．１）‰ｖｓ（１０．８１±５．１０）‰Ｐ＜０．０５］。结论 烧伤后肠黏膜屏障受损，肠上皮细胞增殖受抑。单纯早期肠道可减轻肠黏膜损害，但不能尽快改善肠道黏膜增殖。通过在早期肠道营养中加用精氨酸可进一步增加肠道黏膜上皮的增殖。

肿瘤微环境影响间充质干细胞增殖及其分子机理

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是一类具有靶向迁移特性的潜在抗瘤细胞。肿瘤微环境中的生长因子和趋化因子可能对MSCs的生物学行为产生显著影响,但MSCs在肿瘤微环境中的生物学行为变化规律及其机理还并不清楚。该文探究了大鼠肝癌细胞条件培养基(conditioned medium from hepatocellular carcinoma cells,HCC-CM)对大鼠间充质干细胞(rat mesen-chymal stem cells,rMSCs)增殖的影响及其机理。研究发现,HCC-CM能显著促进rMSCs的增殖和基质衍生因子-1(stromal derived factor-1,SDF-1)的表达。Western blot检测发现,HCC-CM在15 min至2 h均显著上调rMSCs ERK1/2磷酸化,PD98059可完全消除HCC-CM诱导的ERK1/2磷酸化并同时阻断HCC-CM诱导的rMSCs增殖。趋化因子C-X-C受体4(Chemokine C-X-C motif 4,CXCR4)抑制剂AMD3100部分抑制ERK1/2磷酸化,同时也部分抑制了HCC-CM促rMSCs增殖。结果揭示了HCC-CM对rMSCs增殖的影响以及ERK1/2信号分子和SDF-1/CXCR4在HCC-CM促rMSCs增殖过程中的作用,为全面了解MSCs在重塑的肿瘤微环境中生物学行为的变化规律奠定了基础。