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鼻咽癌组织SNHG15和LINC00261的表达及其临床意义
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作者 曲莉 尹昕 +2 位作者 张蕊 杨妍 裴明阳 《解剖学杂志》 CAS 2024年第4期333-338,共6页
目的:探讨鼻咽癌中小核仁RNA宿主基因15(SNHG15)和LINC00261的表达水平及其临床意义。方法:收集2018年1月至2020年2月本院93例行鼻咽癌根治性切除术患者的鼻咽癌组织和癌旁组织样本以及临床资料;培养鼻咽癌CNE-1细胞和正常鼻咽部上皮NP6... 目的:探讨鼻咽癌中小核仁RNA宿主基因15(SNHG15)和LINC00261的表达水平及其临床意义。方法:收集2018年1月至2020年2月本院93例行鼻咽癌根治性切除术患者的鼻咽癌组织和癌旁组织样本以及临床资料;培养鼻咽癌CNE-1细胞和正常鼻咽部上皮NP69细胞,分为空白对照组、shRNA-NC组(转染SNHG15对照)、SNHG15-shRNA组(转染SNHG15)、pcDNA-NC组(转染LINC00261对照)、LINC00261-pcDNA组(转染LINC00261);采用RT-qPCR检测SNHG15和LINC00261表达水平;采用CCK-8和克隆形成实验检测各组细胞的增殖情况;采用Pearson法分析组织中SNHG15和LINC00261表达水平的相关性;采用Kaplan-Meier法分析鼻咽癌组织SNHG15和LINC00261表达水平与患者预后的关系;采用多因素Cox回归分析影响鼻咽癌患者预后的相关因素。结果:鼻咽癌组织中SNHG15表达水平高于癌旁组织,LINC00261表达水平则低于癌旁组织;鼻咽癌组织中SNHG15和LINC00261表达水平呈负相关。CNE-1细胞中SNHG15表达水平高于NP69细胞,LINC00261表达水平则低于NP69细胞;SNHG15-shRNA组和LINC00261-pcDNA组CNE-1细胞克隆形成数量均低于空白对照组、shRNA-NC组及pcDNA-NC组,细胞增殖能力降低。不同SNHG15和LINC00261表达水平的鼻咽癌患者年龄、肿瘤直径及组织学类型差异无统计学意义,而SNHG15高表达组及LINC00261低表达组发生淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期的患者所占比例显著高于SNHG15低表达组及LINC00261高表达组;SNHG15低表达患者3年生存率(84.78%)显著高于SNHG15高表达患者(65.95%),LINC00261低表达患者3年生存率(63.04%)显著低于LINC00261高表达患者(87.23%)。结论:鼻咽癌组织中SNHG15和LINC00261表达与患者临床病理特征及预后密切相关,淋巴结转移、TNM分期及SNHG15是鼻咽癌患者死亡的危险因素,而LINC00261是鼻咽癌患者死亡的保护因素。 展开更多
关键词 鼻咽癌 长链非编码RNA 小核仁RNA宿主基因15 LINC00261 临床病理特征 预后
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猪源SIRT5促进O型口蹄疫病毒在PK-15细胞复制
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作者 陈国辉 史喜绢 +11 位作者 别鑫恬 杨行 赵思越 张大俊 赵登率 闫文倩 陈玲玲 赵美玉 何路 郑海学 刘霞 张克山 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期421-429,共9页
目的探究猪源SIRT5对O型口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus serotype O,FMDV-O)复制的影响及其调控FMDV-O复制的初步机制。方法利用Western Blotting和RT-qPCR检测FMDV-O感染PK-15细胞后内源性SIRT5表达情况;设计合成3对SIRT5特... 目的探究猪源SIRT5对O型口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus serotype O,FMDV-O)复制的影响及其调控FMDV-O复制的初步机制。方法利用Western Blotting和RT-qPCR检测FMDV-O感染PK-15细胞后内源性SIRT5表达情况;设计合成3对SIRT5特异性siRNA,通过Western Blotting和RT-qPCR检测SIRT5、FMDV-O蛋白水平、转录水平及病毒拷贝数的变化情况;构建SIRT5真核表达质粒转染至PK-15细胞,运用Western Blotting、RT-qPCR实验方法探究过表达SIRT5对FMDV-O复制的影响,同时利用RT-qPCR检测过表达SIRT5对SeV、FMDV-O诱导的I型干扰素刺激基因mRNA表达水平的影响。结果FMDV-O感染PK-15细胞后内源性SIRT5的表达上调;siRNA干扰SIRT5抑制FMDV-O的复制;过表达SIRT5促进FMDV-O复制;过表达SIRT5降低了SeV、FMDV-O诱导的干扰素刺激基因mRNA的表达水平。结论FMDV-O感染刺激宿主SIRT5表达,而猪源SIRT5通过抑制I型干扰素刺激基因的产生进而促进FMDV-O复制。本研究为进一步探究猪源SIRT5促进FMDV-O复制的机制提供参考依据。 展开更多
关键词 猪源SIRT5 FMDV-O 干扰素刺激基因 PK-15细胞
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干扰素刺激基因ISG15对猪流行性腹泻病毒复制的作用及机制分析
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作者 刘莉莉 边缘 +2 位作者 吴圣龙 包文斌 吴正常 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2545-2555,共11页
【目的】探究干扰素刺激基因ISG15在猪流行性腹泻病毒(PEDV)复制中所发挥的作用及机制。【方法】利用实时荧光定量PCR检测ISG15基因组织表达谱及肠道组织差异表达情况,同时以猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)为研究模型,检测PEDV CV777毒株感染... 【目的】探究干扰素刺激基因ISG15在猪流行性腹泻病毒(PEDV)复制中所发挥的作用及机制。【方法】利用实时荧光定量PCR检测ISG15基因组织表达谱及肠道组织差异表达情况,同时以猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)为研究模型,检测PEDV CV777毒株感染细胞不同时间点PEDV M基因mRNA和N蛋白表达量,并从RNA和蛋白水平检测ISG15表达变化;分别构建猪ISG15基因干扰和过表达细胞,通过实时荧光定量PCR、Western blotting及间接免疫荧光试验检测ISG15基因表达对PEDV复制水平的影响;对ISG15基因过表达前后进行转录组测序分析,筛选其下游调控基因及信号通路。【结果】ISG15基因在仔猪肠道组织中特异性高表达,其中空肠和回肠中表达量极显著高于其他组织(P<0.01);PEDV感染组十二指肠、空肠及回肠中ISG15基因表达量显著或极显著高于健康组(P<0.05;P<0.01);M基因mRNA和N蛋白表达量出现上升趋势,与0 h相比,ISG15基因表达水平在24 h出现极显著上调(P<0.01);ISG15基因过表达后PEDV复制出现显著或极显著下降(P<0.05;P<0.01),而ISG15基因干扰后PEDV复制出现极显著上调(P<0.01);转录组测序发现,过表达ISG15基因前后存在1 532个差异表达基因,且其主要富集在自噬、MAPK、内吞等信号通路中。【结论】本研究揭示了PEDV感染过程中ISG15基因的调控功能及作用机制,发现ISG15基因上调可显著抑制PEDV复制,增进了对PEDV与宿主细胞互作分子机制的认识。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) ISG15基因 病毒复制 转录组
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雷州山羊TBX 15基因多态性及其与体尺性状的关联分析
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作者 周光现 谭嘉泳 +4 位作者 杨健 刘艳芬 甘尚权 赵志辉 康丹菊 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期3930-3938,共9页
【目的】本研究旨在筛查雷州山羊T盒子转录因子15(TBX15)基因潜在的单核苷酸多态性(SNP)位点,并分析其与体尺性状的关联性,为雷州山羊分子选育提供理论支撑。【方法】采集78只雷州山羊血样提取基因组DNA,利用PCR扩增和直接测序法检测TBX... 【目的】本研究旨在筛查雷州山羊T盒子转录因子15(TBX15)基因潜在的单核苷酸多态性(SNP)位点,并分析其与体尺性状的关联性,为雷州山羊分子选育提供理论支撑。【方法】采集78只雷州山羊血样提取基因组DNA,利用PCR扩增和直接测序法检测TBX 15基因SNP位点,并分析其遗传多样性;采用SPSS 23.0软件分析TBX 15基因多态性与雷州山羊体高、体长和胸围等体尺性状的关联性;利用HaploView软件进行TBX 15基因SNP位点的连锁不平衡和单倍型分析。【结果】在雷州山羊TBX 15基因内含子上发现3个SNPs位点:g.96346139 A>G、g.96345894 T>C和g.96330058 G>A,均存在3种基因型,优势基因型分别为GG、CC和AA;卡方检验结果表明,其均处于Hardy-Weinberg平衡状态;多态信息含量(PIC)分别为0.309、0.285及0.294,均为中度多态(0.25<PIC<0.50)。关联分析结果发现,雷州山羊TBX 15基因g.96346139 A>G位点GG基因型个体的体高、十字部高和体斜长均显著高于AA基因型(P<0.05);g.96345894 T>C位点CC基因型个体的体高、十字部高、体斜长和胸深均显著高于TT基因型(P<0.05);g.96330058 G>A位点GG基因型个体的胸深显著低于其他2种基因型(P<0.05)。在单倍型和连锁不平衡分析中发现,3个SNPs位点间存在强连锁关系(R 2>0.33),有5种主要单倍型,其中优势单倍型是ACG,其概率为0.716。【结论】雷州山羊TBX 15基因3个SNPs位点对体高、体斜长等体尺指标具有显著影响,且该3个位点间具有强连锁关系,单倍型ACG可作为雷州山羊选育的候选标记。 展开更多
关键词 雷州山羊 TBX 15基因 体尺性状 多态性 关联性
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ISG15蛋白在原发性肝细胞癌中表达及其对预后的影响
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作者 黄丽芳 宋建华 +3 位作者 韦翠容 林子芹 杨达平 粟连秀 《现代医药卫生》 2024年第2期209-212,共4页
目的探讨干扰素刺激基因15(ISG15)蛋白在原发性肝细胞癌(HCC)中的表达水平及其临床预后价值。方法选取2018年1月至2020年10月该院经术后病理确诊的HCC患者100例,根据ISG15蛋白表达水平将其分为低表达组和高表达组。比较不同临床特征患者... 目的探讨干扰素刺激基因15(ISG15)蛋白在原发性肝细胞癌(HCC)中的表达水平及其临床预后价值。方法选取2018年1月至2020年10月该院经术后病理确诊的HCC患者100例,根据ISG15蛋白表达水平将其分为低表达组和高表达组。比较不同临床特征患者ISG15蛋白表达水平,分析不同ISG15蛋白表达水平患者生存情况。结果癌组织及癌旁组织中ISG15蛋白表达水平分别为(5.00±1.69)、(3.78±1.22),二者比较,差异有统计学意义(t=5.766,P<0.001)。不同肿物大小、HBV-DNA拷贝数及分化程度患者ISG15蛋白表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。低表达组中位生存期为40.5个月,生存率为70.83%,高表达组中位生存期为33.0个月,生存率为24.39%,二者比较,差异有统计学意义(χ^(2)=9.980,P=0.0016)。结论ISG15蛋白在HCC癌组织中高表达,其在抑制肿瘤细胞生长、抵抗HBV病毒复制、抑制癌细胞分化过程中具有相关作用。ISG15蛋白表达与临床预后相关,低表达者生存期更长。 展开更多
关键词 原发性肝细胞癌 干扰素刺激基因15 预后
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新西兰白兔BMP 15基因的真核表达载体构建、表达模式及其在卵巢组织的表达
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作者 陈孟娟 刘雨晴 +4 位作者 王智通 温佳乐 许会芬 于光晴 李明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期562-575,共14页
旨在获得新西兰白兔BMP 15基因序列及其组织表达规律,构建其真核表达载体,预测BMP15的生物学功能。本研究选择180日龄性成熟的健康新西兰白兔作为研究对象,采用RT-PCR技术扩增BMP 15基因CDS区序列,利用T4连接方法将目的片段连接至线性化... 旨在获得新西兰白兔BMP 15基因序列及其组织表达规律,构建其真核表达载体,预测BMP15的生物学功能。本研究选择180日龄性成熟的健康新西兰白兔作为研究对象,采用RT-PCR技术扩增BMP 15基因CDS区序列,利用T4连接方法将目的片段连接至线性化的Pmcherry-N1和pCMV-Myc空载体,构建真核表达载体,利用生物信息学分析其编码蛋白的性质及结构。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术与Western blotting技术检测pCMV-Myc-BMP 15过表达情况。接下来,使用qRT-PCR检测BMP 15基因在不同组织中的表达水平。激光共聚焦方法检测BMP 15基因的亚细胞定位。利用免疫荧光技术检测内源BMP15在新西兰白兔卵巢组织定位情况。结果表明:克隆得到新西兰白兔BMP 15基因CDS区序列长1182 bp,PCR及测序结果表明pCMV-Myc-BMP 15和Pmcherry-N1-BMP 15真核表达载体构建成功。生物信息学分析显示,BMP 15基因编码393个氨基酸;BMP15蛋白不稳定系数为55.32,等电点大小为9.69,是一种稳定的碱性蛋白质。BMP15蛋白共有26个磷酸化位点,15个糖基化位点,存在信号肽,不存在跨膜结构域。系统进化树表明,新西兰白兔与猪亲缘关系最近,与鸡的亲缘关系最远。二级结构和三级结构分析结果表明,BMP15蛋白主要由α-螺旋(38.68%)、无规则卷曲(37.4%)、延伸链(15.52%)、β-转角(8.40%)组成,为混合型蛋白。蛋白互作关系预测发现,BMP15蛋白与FSHR、FIGLA、BMPR1B、AMHR2、NOBOX等卵巢生长发育的相关蛋白之间存在相互作用。不同组织表达分析显示,BMP 15基因在卵巢组织中特异性表达;激光共聚焦结果显示,BMP15主要存在于在细胞质中。将pCMV-Myc-BMP 15转染至HEK293T细胞内,BMP15的mRNA水平和蛋白水平均显著上调。卵巢组织免疫荧光检测结果显示,BMP15主要定位在卵巢颗粒细胞的细胞质中。本研究成功构建了BMP15的真核表达载体,对BMP 15基因及其编码的蛋白的理化性质和生物学特性进行了预测分析,在HEK293T细胞内成功过表达,并得到了该基因的亚细胞定位情况、组织表达情况及在卵巢组织的分布情况。为后续开展BMP 15基因在卵巢生长发育中的功能及机制研究提供了理论依据。 展开更多
关键词 新西兰白兔 BMP 15基因 克隆 组织表达 细胞定位
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水牛KLF 15基因克隆、分子特征和组织差异表达分析
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作者 周芳廷 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期3715-3725,共11页
【目的】试验旨在获取水牛Krüppel样因子15(Krüppel-like factor 15,KLF15)基因,分析其分子特征和组织差异表达,初步揭示该基因的结构和功能。【方法】克隆水牛KLF 15基因编码区,对该基因的结构、氨基酸序列一致性、理化特性... 【目的】试验旨在获取水牛Krüppel样因子15(Krüppel-like factor 15,KLF15)基因,分析其分子特征和组织差异表达,初步揭示该基因的结构和功能。【方法】克隆水牛KLF 15基因编码区,对该基因的结构、氨基酸序列一致性、理化特性、基序、保守结构域、生物学功能等进行比较分析,并采用实时荧光定量PCR法检测KLF 15基因在水牛各组织中的表达水平。【结果】克隆得到水牛KLF 15基因编码区长为1212 bp,编码403个氨基酸。生物信息学分析显示,水牛KLF15与其他牛科物种氨基酸序列的一致性较高,是核内的亲水性蛋白,无信号肽序列及跨膜结构,包含KLF15_N、COG5048和zf-C2H2锌指结构等保守结构域。水牛KLF15的主要功能是调控DNA转录、结合DNA、结合锌指结构等。KLF 15基因在泌乳期水牛的脂肪中表达量最高,在非泌乳期水牛的肌肉中表达量最高,但在2个时期的水牛中均为在乳腺、心脏、肝脏、脾脏等组织中中度表达,在肺脏、肾脏、瘤胃和小肠等组织中低表达或几乎不表达。【结论】水牛KLF15是细胞核内的蛋白,可结合锌指结构调控DNA的转录,在脂合成旺盛的组织中发挥功能。 展开更多
关键词 水牛 KLF 15基因 分子特征 组织表达 生物信息学
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鸡IL-15基因的克隆及序列分析
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作者 张凤 田艳花 +2 位作者 牛四坤 台晶杰 刘文娟 《畜禽业》 2024年第4期1-4,共4页
目的利用基因工程的方法,将鸡白细胞介素15(ChIL-15)基因在原核表达系统中进行表达,为ChIL-15的应用提供科学依据。方法根据美国国家生物信息中心(NCBI)GenBank中已发表的ChIL-15基因,设计引物,用PCR方法扩增目的基因片段。结果成功从... 目的利用基因工程的方法,将鸡白细胞介素15(ChIL-15)基因在原核表达系统中进行表达,为ChIL-15的应用提供科学依据。方法根据美国国家生物信息中心(NCBI)GenBank中已发表的ChIL-15基因,设计引物,用PCR方法扩增目的基因片段。结果成功从鸡的脾脏中扩增出含编码区的ChIL-15基因,ChIL-15基因为581bp,通过测序进行比对,表明ChIL-15基因克隆成功。提取的质粒经酶切鉴定、PCR鉴定、测序比对以及编码成氨基酸进行比对均与GenBank中登录号AF139097.1基本符合,核苷酸的同源性为99.82%。结论通过使用PCR方法成功扩增出来的ChIL-15基因片段,具有较高的同源性,并与已发表的基因序列相符。这为进一步研究ChIL-15基因的功能和应用提供了科学依据。 展开更多
关键词 chil-15 克隆 序列分析
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Myod1通过调节lncRNA SNHG15和miR-24-3p对氧糖剥夺SH-SY5Y细胞增殖及凋亡的影响
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作者 冀方超 张晨昕 +3 位作者 任占军 潘云志 逯琦 孙兴元 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期989-999,共11页
目的:探讨肌源性分化蛋白1(Myod1)对氧糖剥夺(OGD)诱导的SH-SY5Y细胞增殖抑制和凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测正常对照组研究对象和缺血性脑梗死组患者外周血及正常培养的SH-SY5Y细胞(对照组)... 目的:探讨肌源性分化蛋白1(Myod1)对氧糖剥夺(OGD)诱导的SH-SY5Y细胞增殖抑制和凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测正常对照组研究对象和缺血性脑梗死组患者外周血及正常培养的SH-SY5Y细胞(对照组)和OGD细胞模型(OGD组)细胞中Myod1和长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因15(SNHG15)mRNA表达水平。分别采用si-Myod1、pcDNA3.0-Myod1、si-SNHG15、pcDNA3.0-SNHG15、si-NC、空载质粒(Vector)、miR-NC和miR-24-3p模拟物(miR-mimics)质粒转染SH-SY5Y细胞后,进行OGD处理,将SH-SY5Y细胞分为对照组、OGD组、OGD+Vector组、OGD+Myod1组、OGD+si-NC组、OGD+si-Myod1组、OGD+si-SNHG15组、OGD+si-SNHG15+Vector组、OGD+si-SNHG15+Myod1组、OGD+miR-NC组、OGD+miR-mimics组、OGD+miR-mimics+Vector组和OGD+miR-mimics+SNHG15组。采用CCK-8法检测各组细胞活性,采用5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)染色法检测各组EdU阳性细胞率,采用原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测各组TUNEL阳性细胞率,采用Western blotting法检测各组细胞中裂解的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、裂解的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(cleaved caspase-9)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平。染色质免疫共沉淀(CHIP)法评估Myod1和SNHG15之间的关联。双荧光素酶报告基因实验评估Myod1与SNHG15及SNHG15与miR-24-3p的靶向关系。结果:与正常对照组比较,缺血性脑梗死组患者外周血中Myod1和SNHG15 mRNA表达水平均升高(P<0.05)。与对照组比较,OGD组细胞中Myod1和SNHG15 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05)。与OGD组比较,48和72 h时OGD+Myod1组细胞活性和EdU阳性细胞率均降低(P<0.01),TUNEL阳性细胞率升高(P<0.01);OGD+si-Myod1组细胞活性和EdU阳性细胞率均升高(P<0.01),TUNEL阳性细胞率降低(P<0.01)。Myod1可与SNHG15的启动子序列结合。SNHG15可吸附miR-24-3p,Myod1与SNHG15及SNHG15与miR-24-3p存在靶关系。敲低SNHG15后,与OGD组比较,48和72 h时OGD+si-SNHG15组细胞活性和EdU阳性细胞率均升高(P<0.01),TUNEL阳性细胞率降低(P<0.01),细胞中Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达水平降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.01);与OGD+si-SNHG15组比较,48和72 h时OGD+si-SNHG15+Myod1组细胞活性和EdU阳性细胞率降低(P<0.05),TUNEL阳性细胞率升高(P<0.05),细胞中Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达水平升高(P<0.05),Bcl-2的蛋白表达水平降低(P<0.05)。过表达miR-24-3p和SNHG15后,与OGD组比较,48和72 h时OGD+miR-mimics组细胞活性和EdU阳性细胞率升高(P<0.01),TUNEL阳性细胞率降低(P<0.01),细胞中Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达水平降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.01);与OGD+miR-mimics组比较,48和72 h时OGD+miR-mimics+SNHG15组细胞活性和EdU阳性细胞率降低(P<0.05),TUNEL阳性细胞率升高(P<0.05),细胞中Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达水平升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:Myod1可通过与SNHG15启动子区结合进而吸附miRNA-24,促进OGD诱导的SH-SY5Y细胞的增殖抑制和细胞凋亡。 展开更多
关键词 肌源性分化蛋白1 小核仁RNA宿主基因15 微小RNA-24-3p SH-SY5Y细胞 脑梗死
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长链非编码RNA CASC15对肝细胞癌增殖、侵袭和迁移的影响及作用机制
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作者 吴东洋 蔡青山 +4 位作者 刘东 左刚刚 李树栋 刘立友 郑建兴 《实用肿瘤学杂志》 CAS 2024年第1期18-29,共12页
目的探究长链非编码RNA(lncRNA)癌症易感性基因15(Cancer susceptibility candidate 15,CASC15)在肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)中的分子调控机制。方法通过生物信息学方法预测目的基因表达,并分析目的基因表达与患者生存时... 目的探究长链非编码RNA(lncRNA)癌症易感性基因15(Cancer susceptibility candidate 15,CASC15)在肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)中的分子调控机制。方法通过生物信息学方法预测目的基因表达,并分析目的基因表达与患者生存时间的关系;收集临床HCC患者肝癌组织和癌旁组织;CCK-8、Transwell和流式细胞术实验检测HCC细胞SMMC7721和Huh-7的增殖、侵袭、迁移以及凋亡;双荧光素酶实验检测miR-144-3p与CASC15和富含亮氨酸的重复序列蛋白1(Leucine rich repeat containing protein 1,LRRC1)的靶向关系;qRT-PCR和Western blot检测mRNA和蛋白表达情况;免疫荧光实验用于蛋白定位研究;回复实验验证CASC15/miR-144-3p/LRRC1对HCC进展的影响。体内实验验证CASC15对HCC进展的影响。结果TCGA数据库与qRT-PCR检测显示HCC组织和细胞中CASC15高表达、miR-144-3p低表达、LRRC1高表达(P<0.05)。增殖、侵袭、迁移的细胞功能实验结果表明在肿瘤发展中CASC15和LRRC1起到促进作用,miR-144-3p则是抑制作用,与凋亡实验结果一致(P<0.05)。细胞功能实验表明CASC15抑制miR-144-3p功能,miR-144-3p抑制LRRC1,CASC15与miR-144-3p结合,并导致LRRC1上调。回复实验结果表明CASC15通过抑制miR-144-3p促进LRRC1的表达从而促进HCC细胞增殖、侵袭和迁移并抑制细胞凋亡。结论CASC15可能通过调节miR-144-3p/LRRC1轴,从而促进HCC进展。 展开更多
关键词 癌症易感性基因15 miR-144-3p 富含亮氨酸的重复序列蛋白1 肝癌细胞 细胞生物学功能
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lncRNASNHG15调控miR-95-3p对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响
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作者 孙凯廷 池益利 《中国现代医生》 2024年第21期55-61,共7页
目的探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)核仁小RNA宿主基因15(small nucleolar RNAhost gene 15,SNHG 15)调控微RNA95-3p(microRNA95-3p,miR-95-3p)对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响。方法将乳腺癌细胞分为对照组、敲减组、干... 目的探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)核仁小RNA宿主基因15(small nucleolar RNAhost gene 15,SNHG 15)调控微RNA95-3p(microRNA95-3p,miR-95-3p)对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响。方法将乳腺癌细胞分为对照组、敲减组、干扰组、共转染组,体外培养人乳腺癌细胞系MDA-MB-231。测定SNHG 15 mRNA、miR-95-3p mRNA相对表达量;使用噻唑兰(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)法检测乳腺癌细胞增殖能力;流式细胞仪检测乳腺癌细胞凋亡情况;划痕试验检测乳腺癌细胞迁移能力;Transwell侵袭实验测定乳腺癌细胞侵袭个数;采用Western blot法测定半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)相对表达量。结果与对照组比较,敲减组SNHG 15 mRNA、miR-95-3p mRNA相对表达量及增殖能力、增殖率、迁移能力、侵袭个数、Bcl-2蛋白表达下降;凋亡情况、凋亡率、caspase-3、Bax表达升高(P<0.05)。与敲减组、干扰组比较,共转染组SNHG 15 mRNA、miR-95-3p mRNA相对表达量及增殖能力、增殖率、迁移能力、侵袭个数、Bcl-2蛋白表达升高;凋亡情况、凋亡率、caspase-3、Bax表达降低(P<0.05)。与干扰组比较,共转染组SNHG 15 mRNA、miR-95-3p mRNA相对表达量及增殖能力、增殖率、迁移能力、侵袭个数、Bcl-2表达升高,凋亡情况、凋亡率、caspase-3、Bax蛋白表达降低(P<0.05)。结论lncRNA SNHG 15可通过调控miR-95-3p表达影响乳腺癌细胞的增殖与凋亡,与乳腺癌细胞的发生、发展呈正相关。 展开更多
关键词 长链非编码核仁小RNA宿主基因15 长链非编码RNA 微小RNA95-3p 乳腺癌 增殖 凋亡
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传染性支气管炎病毒S-ChIL-15融合基因真核表达质粒的构建及其体外表达 被引量:2
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作者 王衡 李广兴 +1 位作者 刘博奇 任晓峰 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期35-40,共6页
通过一段编码(G3S)4多肽的碱基linker将传染性支气管炎病毒(IBV)S基因和鸡IL-15(ChIL-15)基因连接,构建了pcDNA3.1-IBVS-ChIL-15融合基因重组质粒。将该重组质粒转染Vero细胞,并通过RT-PCR、免疫组织化学及免疫荧光试验对重组质粒的体... 通过一段编码(G3S)4多肽的碱基linker将传染性支气管炎病毒(IBV)S基因和鸡IL-15(ChIL-15)基因连接,构建了pcDNA3.1-IBVS-ChIL-15融合基因重组质粒。将该重组质粒转染Vero细胞,并通过RT-PCR、免疫组织化学及免疫荧光试验对重组质粒的体外瞬时表达情况进行检测。结果显示,成功构建了S-ChIL-15融合基因,转染24 h后能检测到IBVS-ChIL-15融合基因和该融合基因瞬时表达的产物。 展开更多
关键词 传染性支气管炎病毒 S基因 鸡IL-15基因 瞬时表达 融合基因
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Diversity of Bmp15 and Gdf9 Genes in White Goat of Guizhou Province and Evolution of the Encoded Proteins 被引量:6
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作者 冉雪琴 林尖兵 +2 位作者 杜智勇 覃成 王嘉福 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期593-602,共10页
Members of the transforming growth factor-beta superfamily, growth differentiation factor 9 (GDF9) and bone morphogenetic protein 15 (BMP 15), have crucial roles in fecundity of sheep. Our previous investigation c... Members of the transforming growth factor-beta superfamily, growth differentiation factor 9 (GDF9) and bone morphogenetic protein 15 (BMP 15), have crucial roles in fecundity of sheep. Our previous investigation confirmed that the fecundity mutations of sheep presented in highly prolific White goat individuals of Guizhou province. To illuminate other polymorphisms in Bmpl5 and Gdfl) genes and the relationship of these mutations with function, we cloned and characterized the coding region of Bmp15 and Gdfl). Molecular models of BMP15 and GDF9 mature peptide of White goat were constructed based on the homology of human BMP7 experimental tertiary structure. Two exons encoded prepropeptide of 394 amino acids in BMPI5 and 453 residues in GDF9, respectively. Apart from the FecXs mutation (S99I) in BMP15 and V791 mutation in GDF9 confirmed in White goat previously, other seven and three polymorphism sites were detected from BMP15 and GDF9 mature peptides, respectively. S32G, N66H, S99I/P99I and G107R in BMP15 could be important for the binding of dimer to receptors. Changes of P78Q and V79I in GDF9 might affect the binding of dimer to receptor type t. Comparing the length of BMP 15 and GDF9 prepropeptide in vertebrates, an increase in length of BMP 15 presented along with the protein evolution from fish to mammal and the divergence of the N-terminus residues in matured BMP15 peptide might contribute to the sensitive control on the fertility of animal species with low ovulation rate. These findings gave a valuable explanation for the correlation of mutations in Bmpl5 and Gdfl) genes with the control on fecundity of White goat and supported the notion that they were the pivotal factors in female fertility of White goat in Guizhou province. 展开更多
关键词 BMP15 GDF9 gene EVOLUTION White goat
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Cloning of Rabbit Bone Morphogenetic Protein 15 and Its Expression During in vitro Maturation of Rabbit Oocytes 被引量:3
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作者 尹萍 季金强 +1 位作者 李霖 丁家桐 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期603-607,共5页
Partial cDNA sequence of rabbit BMP15 was cloned by RT-PCR from rabbit ovaries, showing a similarity of 83%-90% with the BMP15 nucleotide sequences in humans, mice, ovine, sheep, cows and pigs. The expression of BMP15... Partial cDNA sequence of rabbit BMP15 was cloned by RT-PCR from rabbit ovaries, showing a similarity of 83%-90% with the BMP15 nucleotide sequences in humans, mice, ovine, sheep, cows and pigs. The expression of BMP15 in rabbit cumulus-oocyte complexs during oocytes in vitro maturation (IVM) was measured by fluorescent quantitative RT-PCR method. BMP 15 was expressed at low levels in immature oocytes and increased to the highest level at 16h of IVM, which coincides with the time of cumulus cell expansion, then declined slowly under IVM cultivation. The expression pattern of BMP 15 suggested that it might be important in cumulus expansion in rabbits. 展开更多
关键词 RABBIT Bone morphogenetic protein 15 OOCYTE gene cloning Fluorescent quantitative RT-PCR
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3-1E/mChIL-15融合基因构建及在真核细胞中的表达 被引量:2
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作者 马德星 潘龙 +2 位作者 郎跃深 杨静红 李广兴 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期54-59,共6页
将鸡堆形艾美尔球虫(E.acervulina)子孢子和裂殖子表面抗原3-1E基因片段与鸡白细胞介素15成熟蛋白基因片段(mChIL15)通过四个柔性氨基酸SPGS连接,构建并鉴定真核表达质粒pcDNA3.1/3-1E-linker-mChIL-15。表达质粒纯化后应用磷酸钙... 将鸡堆形艾美尔球虫(E.acervulina)子孢子和裂殖子表面抗原3-1E基因片段与鸡白细胞介素15成熟蛋白基因片段(mChIL15)通过四个柔性氨基酸SPGS连接,构建并鉴定真核表达质粒pcDNA3.1/3-1E-linker-mChIL-15。表达质粒纯化后应用磷酸钙法体外转染293T细胞,通过间接免疫荧光和免疫组织化学方法对重组质粒的体外瞬时表达进行检测。结果表明,成功构建了融合基因3-1E-linker-mChIL-15,转染后30h可检测到融合基因编码的融合蛋白在293T细胞中的瞬时表达。研究为鸡艾美尔球虫基因工程疫苗进一步研制及应用奠定了基础。 展开更多
关键词 3-1E/mchil-15 融合基因 真核表达质粒 瞬时表达
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肿瘤相关基因ADAM15在结肠癌中一个非同义变异对细胞黏附及侵袭的影响
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作者 王晶 贺礼兵 +2 位作者 张国燕 刘筱涵 程杉 《首都医科大学学报》 北大核心 2023年第6期1044-1052,共9页
目的解析ADAM15基因单核苷酸变异(single nucleotide variant,SNV)在结肠癌肿瘤发生发展相关的细胞学过程中的具体功能作用。方法首先对具有侵袭表型的结肠癌患者癌组织及癌旁组织全外显子组测序,然后进行野生型/突变型ADAM15结肠癌HCT-... 目的解析ADAM15基因单核苷酸变异(single nucleotide variant,SNV)在结肠癌肿瘤发生发展相关的细胞学过程中的具体功能作用。方法首先对具有侵袭表型的结肠癌患者癌组织及癌旁组织全外显子组测序,然后进行野生型/突变型ADAM15结肠癌HCT-8细胞系细胞功能实验,进而完成野生型/突变型ADAM15细胞系的转录组测序分析。结果采用全外显子组测序在预后不良的患者中检出ADAM15基因SNV rs6427128,提示可能影响结肠癌的进展。细胞功能实验显示,rs6427128损失了ADAM15所具有的上调细胞侵袭能力的作用,而使细胞黏附能力增加约26%。转录组测序分析显示,与野生型相比,rs6427128过表达细胞的差异表达基因富集在细胞黏附、DNA的复制与转录、炎症反应等多种细胞生物学过程,提示rs6427128变异可能通过促进肿瘤细胞的黏附参与调节肿瘤微环境的重塑,从而影响结肠癌的进展。结论结合适当的细胞模型和较为精细的分析方法,深入解析临床样本中所检出的一些高频非同义潜在功能性变异体,可以为肿瘤相关基因的结构功能关系提供有益的提示性实验室数据。 展开更多
关键词 结肠癌 ADAM15基因 细胞黏附 单核苷酸变异 肿瘤微环境
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Polymorphism of p16INK4a gene and rare mutation of p15INK4b gene exon2 in primary hepatocarcinoma 被引量:30
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作者 Yang Qin Bo Li Yong Shu Tan Zhi Lin Sun Feng Qiong Zuo Ze Fang Sun Institute of Biochemistry and Molecular Biology,West China University of Medical Sciences,Chengdu 610041,Sichuan Province,China Department of General Surgery,The First Affiliated Hospital,West China University of Medical Sciences,Chengdu 610041,Sichuan Province,China Department of Pathology,The First Affiliated Hospital,West China University of Medical Sciences,Chengdu 610041,Sichuan Province,China 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2000年第3期411-414,共4页
INTRODUCTION Hepatocellular carcinoma(HCC)is the mostcommon cause of death from cancer in China.Themechanisms of hepatocarcinogenesis are not yetknown clearly,p16INK4a gene,the multiple tumorsuppressor gene 1(MTS1),en... INTRODUCTION Hepatocellular carcinoma(HCC)is the mostcommon cause of death from cancer in China.Themechanisms of hepatocarcinogenesis are not yetknown clearly,p16INK4a gene,the multiple tumorsuppressor gene 1(MTS1),encodes P16 protein,which acts as an inhibitor by binding directly toCDK4 and CDK6 and preventing its association 展开更多
关键词 P16INK4A gene P15INK4B gene POLYMORPHISM MUTATION HEPATOCARCINOMA
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ANTITUMOR EFFECTS OF HUMAN IL-15 GENE MODIFIED LUNG CANCER CELL LINE 被引量:2
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作者 沈永泉 崔莲仙 +2 位作者 何维 薛莉 巴德年 《Chinese Journal of Cancer Research》 SCIE CAS CSCD 1997年第4期8-12,共5页
Human IL15 cDNA fragment, which contains all codons encoding the human IL15 mature protein and signal peptide was transducted into the human lung squmouse cancer cells(PG cells) and murine lung adenocarcinoma cells(LA... Human IL15 cDNA fragment, which contains all codons encoding the human IL15 mature protein and signal peptide was transducted into the human lung squmouse cancer cells(PG cells) and murine lung adenocarcinoma cells(LA795 cell lines). Two IL15 highly expressed cell clones PG1 and LA795A were used to inoculate the nude mice and the T739 syngeneic mice respectively. PG1 cell express higher level of class ⅠMHC molecule on their surface than PG cells. It was shown that the modified LA795A tumor cells grew slowly in T739 mice and induced high levels of CTL/NK/LAK activity in vivo as well, compared with the case of inoculation with LA795 or LA795neo. No significant difference in the tumor growth was observed in groups of the nude mice inoculated by PG1, PG and PGneo cells respectively, except the gene modified cells could not show the lung metastasis of tumors. The supernatants derived from the LA795A cell culture could promote CTL/NK/LAK activity from the whole splenocytes and the CD4/CD8deleted splenic cells in vitro. The results indicated that the IL15 gene transfected tumor cells play important roles in the process of antitumor or antitumor metastasis. 展开更多
关键词 INTERLEUKIN-15 gene therapy TUMOR gene transduction CYTOTOXICITY
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OCTN and CARD15 gene polymorphism in Chinese patients with inflammatory bowel disease 被引量:20
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作者 Mei Li Xiang Gao +3 位作者 Chang-Cun Guo Kai-Chun Wu Xin Zhang Pin-Jin Hu 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2008年第31期4923-4927,共5页
AIM: To investigate the single nucleotide polymorphism (SNPs) distribution of NOD2/CARD15 (R702W, G908R), OCTN1 1672CFT and OCTN2-207G/C in Chinese patients with inflammatory bowel disease (IBD). METHODS: A to... AIM: To investigate the single nucleotide polymorphism (SNPs) distribution of NOD2/CARD15 (R702W, G908R), OCTN1 1672CFT and OCTN2-207G/C in Chinese patients with inflammatory bowel disease (IBD). METHODS: A total of 61 patients with Crohn's disease (CD), 151 patients with ulcerative colitis (UC), and 200 unrelated healthy controls were genotyped. Genotyping was performed by sequence specific primer polymerase chain reaction (PCR-SSP) or by restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) analysis. RESULTS: Among the subjects in our study groups, including patients with CD, UC and healthy controls, none had OCTN and CARD15 variants and very rare IBD family history was found in our patients with the percentage of 0 (0/61 with CD) and 1.3% (2/151 with UC). CONCLUSION: Our results indicate that although OCTN or CARD15 variation is associated with susceptibility to IBD in Western populations, these might be rare and may not be associated with susceptibility to IBD in Chinese patients. 展开更多
关键词 Inflammatory bowel disease Ulcerative colitis Crohn's disease CARD15 Carnitine/organic cation transporter gene
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干扰素刺激基因15抗病毒感染的分子机制 被引量:2
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作者 唐井玉 杜汉宇 +6 位作者 贾楠楠 汤傲星 刘春草 朱杰 孟春春 李传峰 刘光清 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第6期170-176,共7页
干扰素刺激基因15(ISG15)是由病原微生物或干扰素诱导产生的一种大小为15 kDa的泛素样蛋白。在干扰素诱导的数百个干扰素刺激基因中,ISG15是诱导最强烈、最快的ISG蛋白之一。研究表明,ISG15对多种病毒具有抗病毒作用。此外,ISG15在调节... 干扰素刺激基因15(ISG15)是由病原微生物或干扰素诱导产生的一种大小为15 kDa的泛素样蛋白。在干扰素诱导的数百个干扰素刺激基因中,ISG15是诱导最强烈、最快的ISG蛋白之一。研究表明,ISG15对多种病毒具有抗病毒作用。此外,ISG15在调节宿主损伤、DNA修复,调节信号通路及抗原递呈中也发挥着重要的作用。文章介绍了ISG15的概况,并阐述了近年来ISG15在抗病毒、免疫调节和调节宿主信号通路过程中的作用。 展开更多
关键词 干扰素刺激基因15 抗病毒作用 免疫调节
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