核受体NURR1在前列腺癌细胞中的表达及其对环状RNA表达谱的影响

目的探讨核受体NURR1过表达对前列腺癌(PCa)细胞中环状RNA(circRNA)表达谱的影响,为揭示NURR1相关circRNA分子在PCa进展过程中的作用提供参考。方法通过UALCAN和TNMplot分析NURR1在PCa中的表达;通过高通量测序分析筛选NURR1过表达的PCa细胞中特征性circRNA分子表达谱;通过GO和KEGG分析差异表达的circRNA分子的功能和参与的信号通路。结果circ_0000915在DU145、LNCaP以及PC3细胞中均发生显著的下调表达。在核受体NURR1上调表达的DU145细胞中,1个circRNA上调表达(circ_0005991),2个circRNA下调表达(circ_0001460、circ_0001315);在核受体NURR1上调表达的LNCaP细胞中有2个circRNA显著上调表达(circ_0040729、circ_0000722);在NURR1上调表达的PC3细胞中有3个circRNA上调表达(circ_0001577、circ_0000854、circ_0018168),4个circRNA下调表达(circ_013035、circ_0003028、circ_0082096、circ_0005320)。KEGG分析发现差异表达的circRNA分子与背侧/腹侧神经管模式、蛋白质折叠伴侣、无序结构域特异性结合、BMP信号通路的正调控以及神经管模式化功能显著相关。结论circRNA在NURR1介导的PCa进展过程中发挥着重要作用,但是在不同的PCa细胞类型中存在着一定的差异。核受体NURR1与circ_0000915分子在PCa进展中的分子机制有待进一步研究。

督脉隔药灸联合水凝胶多功能复合敷料对压力性损伤大鼠Nrf2/HO-1/NQO1信号通路的影响

目的观察督脉隔药灸联合水凝胶多功能复合敷料对压力性损伤大鼠创面修复及核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2 related factor 2,Nrf2)/血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)/NADPH醌氧化还原酶1(NADPH quinone oxidoreductase 1,NQO1)信号通路的影响。方法选取50只SPF级SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、水凝胶敷料组、督脉隔药灸组、联合干预组,每组10只。除假手术组外,其余4组借助压力装置构建压力性损伤大鼠模型。分组干预并记录各组大鼠的压力性损伤修复情况及创面组织病理变化;借助ELISA检测各组大鼠的血清炎性因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6以及氧化应激因子丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)水平;Western blot与RT-PCR检测各组大鼠创面肉芽组织Nrf2、HO-1、NQO1、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白及mRNA的表达水平。结果HE染色结果显示:假手术组皮肤结构未被破坏;模型组创面肉芽组织可见明显的细胞坏死、变性及炎性细胞浸润;干预各组可见创面修复,表现为散在炎性细胞浸润,“气球样”坏死变性明显减少。Masson染色结果显示:假手术组创面皮肤组织胶原纤维较为整齐;模型组创面肉芽组织可见大面积的胶原纤维沉积、紊乱;干预各组可见不同程度的创面修复。与假手术组对比,模型组大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA水平和创面肉芽组织Nrf2、HO-1、NQO1、MMP-9蛋白及mRNA的表达水平均升高(P<0.05),而创面修复率、血清SOD、GSH-Px水平均下降(P<0.05);与模型组比较,水凝胶敷料组、督脉隔药灸组、联合干预组的血清TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA水平均下降(P<0.05),而创面修复率、血清SOD、GSH-Px水平和创面肉芽组织Nrf2、HO-1、NQO1、MMP-9蛋白及m RNA的表达水平均升高(P<0.05),且联合干预组较其他干预组更优(P<0.05)。结论督脉隔药灸可有效促进压力性损伤的创面修复,与水凝胶多功能复合敷料联合使用效果更佳,其机制可能与督脉隔药灸抑制创面炎性反应及氧化应激,并激活Nrf2/HO-1/NQO1信号通路相关。

重楼皂苷Ⅰ对去势抵抗性前列腺癌DU145细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨重楼皂苷Ⅰ(PPⅠ)对去势抵抗性前列腺癌(CRPC)细胞株DU145细胞增殖的影响及其诱导细胞凋亡的分子机制。方法采用MTT法检测PPⅠ对CRPC细胞株DU145细胞增殖能力的影响,使用流式细胞仪检测DU145细胞的凋亡率,同时应用Western blot检测PPⅠ对DU145细胞p-ERK1/2、ERK1/2、特异性蛋白1(SP1)及Zeste基因增强子同源物2(EZH2)蛋白表达的影响;通过加入ERK1/2抑制剂(PD98059)检测PPⅠ对SP1表达的影响,通过转染SP1、EZH2过表达质粒分别检测PPⅠ对SP1、EZH2表达的影响;采用双荧光素酶报告基因检测EZH2启动子活性,并探讨ERK1/2、SP1和EZH2之间的关系。设未加药组为空白组。结果MTT法检测结果显示,PPⅠ能抑制DU145细胞体外生长,与空白组相比,细胞存活率从给药浓度0.4μmol·L^(-1)开始明显下降,且呈时间和剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,PPⅠ能诱导DU145细胞早期凋亡,与空白组相比,细胞早期凋亡率从给药浓度0.4μmol·L^(-1)开始明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示,PPⅠ以时间依赖性方式促进p-ERK1/2和ERK1/2蛋白的激活和表达(P<0.05),以剂量依赖性方式抑制SP1、EZH2蛋白的表达(P<0.05);抑制ERK1/2磷酸化能逆转PPⅠ对SP1表达的下调作用,SP1过表达可逆转PPⅠ对EZH2蛋白表达的下调作用,然而EZH2过表达不能逆转PPⅠ对SP1表达的下调作用,与PPⅠ组相比,ERK1/2抑制剂+PPⅠ组SP1表达上调(P<0.05),PPⅠ+SP1过表达质粒组EZH2蛋白表达上调(P<0.05),而PPⅠ+EZH2过表达质粒组SP1表达差异无统计学意义(P>0.05)。双荧光素酶报告基因检测结果显示,SP1过表达可逆转PPⅠ对EZH2启动子活性的下调,与PPⅠ组相比,PPⅠ+SP1过表达质粒组EZH2启动子活性上调(P<0.05)。结论PPⅠ可通过介导ERK1/2通路抑制SP1和EZH2蛋白表达,从而诱导CRPC DU145细胞早期凋亡,进而抑制细胞生长。

芪蓝方对人前列腺癌DU145细胞增殖和凋亡的作用机制研究

目的:观察芪蓝方对人前列腺癌DU145细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:以DU145细胞为研究对象,通过观察不同浓度芪蓝方组(400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.56、0μg/ml)细胞形态变化,筛选出高、中、低浓度应用于后续实验,并采用CCK-8法检测DU145细胞增殖,流式细胞术检测DU145细胞周期、凋亡情况,Western印迹检测DU145细胞中细胞周期、凋亡相关蛋白Cyclin D1、Bax、Bcl-2、Cleaved-Caspase 3的表达。结果:筛选结果显示100、200、400μg/ml浓度的芪蓝方均能显著抑制DU145细胞的生长、降低轮廓清晰度和贴壁能力,且200、400μg/ml浓度的芪蓝方可显著降低DU145细胞活力,故确定高中低浓度为400、200、100μg/ml,并用于后续实验研究。与空白组比较,G2期各浓度组DU145细胞数显著增加(P<0.01),而S期高、中浓度组细胞数显著下降(P<0.01、P<0.05);与空白对照组相比,芪蓝方各组DU145细胞总凋亡数均显著增高(P<0.01),高浓度组Cyclin D1表达显著降低,高、中浓度组Bcl-2表达明显降低,Bax和Cleaved-Caspase 3表达水平明显上升(P均<0.01)。结论:芪蓝方能够抑制前列腺癌DU145细胞的细胞增殖,促进其细胞凋亡,其机制可能与下调细胞周期相关蛋白Cyclin D1表达,破坏Bax/Bcl-2平衡,上调Cleaved-Caspase 3表达相关。

玉米胚乳突变基因ae1和du1的遗传效应

利用玉米ae1和du1隐性纯和突变自交系与普通玉米自交系48-2的杂交F1、F2代子粒为研究材料,通过单粒法测定子粒的直链淀粉含量和重量,用于分析玉米胚乳突变基因ae1和du1的遗传效应。结果表明:F2代中具有ae1或者du1纯和突变的子粒表皮皱缩,重量明显下降,直链淀粉含量显著提高。在ae1与du1的杂交后代中,子粒的单粒重和直链淀粉含量没有显著变化,表明ae1与du1双突变并不能导致直链淀粉含量增加。单突变的ae1和du1群体内各子粒间的直链淀粉含量和重量差异较大,说明遗传背景中存在影响直链淀粉含量的修饰基因,表明在选育高直链淀粉玉米品系时,应当重视遗传背景的选择和修饰基因的累加。采用单粒法技术对分离后代进行直链淀粉含量和重量选择,有利于积累高直链淀粉修饰基因,是选育子粒饱满、高粒重的高直链淀粉玉米自交系的有效方法。

pcDU_6质粒载体介导的TGFβ_1 shRNA抑制TGFβ_1在人腹膜间皮细胞中的表达

目的 :研究pcDU6质粒载体介导的转化生长因子β1短发夹RNA(shorthairpinRNA ,shRNA)对人腹膜间皮细胞 (HPMCs)转化生长因子 β1(TGFβ1)表达的影响。方法 :针对TGFβ1的以GGCC开始的 2 1碱基大小的片段 ,分别设计 2对寡核苷酸 ,形成双链后将其依次连入带有U6启动子的 pcDNA3.1( )载体 (命名为 pcDU6) ,2对DNA双链通过BamHI酶切位点连接后形成中间由 6碱基序列间隔的反向互补序列 ,构建成TGFβ1短发夹RNA的产生质粒。采用胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞 ,建立稳定的体外培养模型。用脂质体转染表达转化生长因子β1shRNA的pcDU6载体质粒和表达反义TGFβ1RNA的pcDNA3.1( )的载体质粒入 4 .2 5 %D 葡萄糖和LPS刺激下人腹膜间皮细胞。采用逆转录多聚酶链式反应 (RT PCR)半定量分析HPMC中TGFβ1mRNA的表达。采用双抗夹心法酶联免疫吸附实验检测HPMC培养液中TGFβ1蛋白质水平。结果 :HPMC在 4 .2 5 %D 葡萄糖和LPS的刺激下可明显上调TGFβ1的表达 (P <0 .0 1)。pcDU6载体质粒介导的转化生长因子 β1shRNA干扰组较 pc DU6空载体组明显下调TGFβ1的表达 (P <0 .0 1)。pcDU6载体质粒介导的转化生长因子 β1shRNA干扰组间比较 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;pcDNA3.1( )的载体质粒介导的反义RNA组与

SIRT1抑制剂sirtinol对前列腺癌DU145细胞凋亡的影响及可能机制

目的观察SIRT1抑制剂sirtinol对前列腺癌DU145细胞系细胞凋亡和细胞凋亡关键调控因子(Bcl-2、Bax、Cytochrome C和Caspase-3)表达变化的影响,探讨SIRT1在前列腺癌发生的可能机制。方法体外培养DU145细胞,实验分对照组(DMSO组)和sirtinol组(终浓度为10,25和50μmol/L),Western印迹检测DU145细胞SIRT1蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;Western印迹检测DU145细胞中细胞凋亡关键调控因子Bcl-2、Bax、Cytochrome C和Caspase-3的蛋白表达。结果与对照组相比,随着sirtinol浓度的增加,SIRT1蛋白表达水平逐渐降低,细胞凋亡比例增加,诱导细胞发生凋亡。不同浓度sirtinol作用DU145细胞后Bcl-2蛋白表达减少,且随剂量增加表达越低;Bax蛋白表达增加,Bcl-2/Bax比率降低;伴随Cytochrome C的释放和Caspase-3的激活。结论下调SIRT1表达诱导前列腺癌细胞DU145细胞凋亡,其机制可能与改变细胞凋亡关键调控因子Bcl-2、Bax、Cytochrome C和Caspase-3的蛋白表达相关。

shRNA介导GSTP1基因沉默对激素非依赖性前列腺癌细胞株DU145的影响

目的:探讨谷胱甘肽巯基转移酶P1(glutathione S-transferase P1,GSTP1)基因沉默对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株DU145增殖活性和对化学治疗药物敏感性的影响。方法:根据选取靶序列形成短发卡状RNA(short hairpinRNA,shRNA)的DNA模板设计3条表达载体(shRNA255,shRNA554,shRNA593),并克隆到质粒pGPU6/GFP/Neo。经酶切和测序鉴定,筛选转染率最高基因沉默效果最好的shRNA作RNA干扰。DU145细胞株分为空白质粒转染组和shRNA转染组。转染前后按化学治疗药物分为氟尿嘧啶(fluorouracil,FU)组及紫杉醇(paclitaxel,PA)组,并按作用浓度(FU:30,60,120,240μg/mL;PA:0.2,2,10,20μg/mL)分别分成4个亚组,并分别设有一个空白对照组。四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide,MTT]比色法检测转染后细胞增殖活性的变化,MTT及末端脱氧核苷酸转移酶介导脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记法(terminal de-oxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)检测转染前后不同浓度FU和PA对DU145细胞抑制增殖及诱导凋亡的效果。结果:3条表达载体(pGPU6/GFP/Neo-shRNA255,pGPU6/GFP/Neo-shRNA554,pGPU6/GFP/Neo-shRNA593)的转染率分别为(63.3±1.04)%,(76.2±0.68)%,(72.7±0.33)%,shRNA554转染率最高,三者之间比较差异有统计学意义(P<0.01)。转染后mRNA含量分别为128.31±2.50,43.24±4.30和85.62±6.30,GSTP1蛋白含量分别为163.92±12.40,65.38±9.30和114.25±16.70,shRNA554转染后GSTP1基因mRNA和蛋白含量均最低,三者比较差异有统计学意义(P<0.01)。MTT检测转染前FU不同浓度(30,60,120,240μg/mL)四个亚组作用后细胞存活率分别为(95.60±2.11)%,(90.20±0.86)%,(83.10±3.12)%和(74.60±1.32)%;转染后存活率为(91.30±1.43)%,(84.6±2.13)%,(73.2±1.52)%和(65.5±0.94)%。TUNEL检测转染前FU不同浓度(30,60,120,240μg/mL)四个亚组作用后细胞凋亡率分别为(5.50±0.88)%,(10.20±1.64)%,(15.20±2.39)%和(25.10±2.59)%;转染后凋亡率(10.80±0.62)%,(15.70±1.32)%,(20.40±1.89)%和(34.90±2.54)%。转染后相同FU浓度下细胞存活率降低,凋亡率增加,差异均具有统计学意义(P<0.01)。MTT检测转染前PA不同浓度(0.2,2,10,20μg/mL)四个亚组作用后细胞存活率为(98.50±2.34)%,(95.20±1.32)%,(89.40±0.68)%和(82.70±1.73)%;转染后存活率为(94.2±0.78)%,(86.5±2.13)%,(78.7±1.34)%和(70.1±0.76)%。TUNEL检测转染前PA不同浓度(0.2,2,10,20μg/mL)四个亚组作用后细胞凋亡率分别为(2.4±1.07)%,(5.2±1.33)%,(10.5±2.41)%和(20.7±1.92)%;转染后凋亡率(5.46±2.13)%,(13.8±1.24)%,(21.2±2.39)%和(29.2±2.21)%。转染后相同PA浓度下细胞存活率降低,凋亡率增加,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论:shRNA介导的GSTP1基因沉默可抑制雄激素非依赖型前列腺癌DUl45细胞增殖活性,诱导凋亡,并且其作用呈现时间依赖性,可提高其对于化学治疗的药物敏感性。

sirtinol对前列腺癌DU145细胞周期的影响及其机制

目的:观察沉默信息调节因子1(SIRT1)抑制剂sirtinol对前列腺癌DU145细胞生长增殖、细胞周期进程和细胞周期正性调节蛋白Cyclin D1、CDK4及pRb表达的影响,探讨SIRT1在前列腺癌发生中的可能作用机制。方法:取处于对数生长期DU145细胞随机分为对照组(DMSO组)和sirtinol组(终浓度分别为10、25和50μmol·L-1),MTT法测定各组DU145细胞生长抑制率,RT-PCR和Western blotting法检测DU145细胞中SIRT1mRNA和蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞周期进程,Western blotting法检测DU145细胞中细胞周期蛋白Cyclin D1、CDK4和pRb的表达水平。结果:与对照组比较,各浓度sirtinol组DU145细胞生长抑制率明显升高(P<0.01),G1期细胞明显增多(P<0.01),且呈浓度依赖性。与对照组比较,各浓度sirtinol组DU145细胞中SIRT1mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Cyclin D1和pRb蛋白表达水平降低(P<0.01),CDK4蛋白表达无明显变化(P>0.05)。结论:下调SIRT1表达可以抑制前列腺癌DU145细胞的增殖和阻滞细胞周期进程,其机制可能与改变细胞周期蛋白CyclinD1和pRb的表达有关。

MADP-1基因对前列腺癌细胞系DU145体外生长的影响

[目的]探讨新基因MADP鄄1对雄激素非依赖性前列腺癌细胞系DU145增殖的影响,了解其功能。[方法]采用脂质体和绿色荧光蛋白基因标记的质粒载体pIRES鄄hrGFP鄄1α,将MADP鄄1基因导入前列腺癌细胞系DU145中。应用荧光显微镜、流式细胞仪分析和分选术及细胞生长曲线动态观察MADP鄄1基因对DU145细胞系的影响。[结果]转染细胞在荧光显微镜下显示绿色荧光。转染MADP鄄1基因组细胞生长加速,与转染空载体组及对照组相比,有显著差异穴P<0.05雪。[结论]新基因MADP鄄1在体外具有促进前列腺癌细胞系DU145增殖的作用。

沉默信息调节因子1小干扰RNA抑制前列腺癌细胞DU145的迁移

目的观察沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)小干扰RNA(siRNA)对前列腺癌DU145细胞迁移和基质金属蛋白酶中MMP2和MMP9表达变化的影响。方法体外培养DU145细胞,实验分Scramble siRNA组和SIRT1 siRNA组;利用脂质体介导转染技术转染前列腺癌DU145细胞,Western blot方法检测DU145细胞中SIRT1的干涉效能;划痕实验、平板克隆实验和Transwell迁移实验研究SIRT1对其体外迁移运动能力的影响;Western blot方法检测DU145细胞中MMP2和MMP9的蛋白表达。结果与Scramble siRNA组比较,SIRT1 siRNA组SIRT1的蛋白表达水平降低,明显抑制DU145细胞的迁移,降低MMP2和MMP9蛋白。结论下调SIRT1的表达可以抑制前列腺癌细胞DU145的迁移,其机制可能与改变基质金属蛋白酶中MMP2和MMP9的表达相关。

艾灸督脉对阿尔茨海默病患者认知功能及血浆外泌体中Aβ_(1-42)和lncRNA H19的影响

[目的]观察艾灸督脉治疗阿尔茨海默病(AD)的临床疗效,探究艾灸督脉治疗AD影响人血浆外泌体的可能作用机制。[方法]纳入AD患者和健康受试者各30例。AD组取百会、大椎、风府、命门4穴,百会隔附子饼实按灸,其余3穴温和灸,每日20 min,共治疗8周。在治疗前后采用蒙特利尔认知评估量表(MoCA)和阿尔茨海默病评定量表-认知(ADAS-Cog)对AD患者进行认知评估,收集两组清晨空腹静脉血样本,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测Aβ_(1-42)蛋白浓度,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测lncRNA H19相对表达量,并做双变量的Pearson线性相关分析。[结果]与治疗前相比,AD组艾灸后MoCA量表评分有显著提高(P<0.05),ADAS-cog量表评分显著降低(P<0.05)。与健康受试组相比,AD组治疗前血浆外泌体Aβ1-42及lncRNA H19表达水平均较高(P<0.05);与治疗前相比,AD组血浆外泌体中Aβ_(1-42)浓度及lncRNA H19表达水平均有所降低(P<0.05)。Pearson线性相关分析显示ADAS-cog评分与Aβ_(1-42)浓度水平、lncRNA H19相对表达量存在正相关性(P<0.05);MoCA评分与Aβ_(1-42)浓度水平、lncRNA H19相对表达量存在负相关性(P<0.05);MoCA评分与ADAS-cog评分存在较强的负相关性(P<0.05)。[结论]艾灸督脉组穴疗效确切,能够降低AD患者血浆外泌体中Aβ_(1-42)和lncRNA H19的表达水平,进而推测艾灸督脉改善认知功能可能与下调lncRNA H19的表达,促进Aβ_(1-42)的清除有关。

基于HXD019DU的学习型红外遥控系统

随着物联网技术的发展和生活质量的日益提升,日常家居使用的智能化家电愈发多样,使用的遥控类型也有很多形式,本文基于深圳宏芯达科技有限公司的蓝牙红外自学习方案设计了一种基于STC8G1K08单片机的自学习型蓝牙红外遥控系统,可将现如今生活中常见的红外遥控设备进行遥控与学习。系统由微信APP、STC8G1K08单片机、HXD019DU单元、TLSR8232蓝牙单元和独立按键组成。系统适用于普通家电、智能家电、移动互联、学校管理、公共场所的红外设备管理。该系统拓展性强,可满足一般场景的遥控应用。

黄连解毒汤对动脉粥样硬化大鼠血sICAM-1和sVCAM-1的影响

目的探讨黄连解毒汤对动脉粥样硬化大鼠血清中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)水平的影响及其作用机制。方法雄性SD大鼠,随机分成正常对照组、模型对照组、黄连解毒汤低中高3个剂量组及阿托伐他汀组,每组10只。除正常对照组喂普通饲料外,其余喂以高脂饲料,同时定期灌服维生素D3(60万U/次,第2,4,6周)造模8周,从第6周开始每天灌胃给药1次,黄连解毒汤低剂量组2.7g/kg,中剂量组5.3g/kg,高剂量组10.6g/kg,阿托伐他汀钙片组1.8mg/kg,正常对照组灌服等量蒸馏水,连续4周。结果黄连解毒汤中剂量组,高剂量组及阿托伐他汀组均与模型对照组的ICAM-1,VCAM-1表达均比模型对照组低(P<0.05～0.01)。结论黄连解毒汤对动脉粥样硬化起到一定干预作用,其机制可能与抑制炎症反应有关。

1-MCP和延迟冷藏对‘早红考密斯’梨货架期间品质和软化相关基因表达的影响

【目的】针对‘早红考密斯’梨因果肉软化和果实腐烂导致损耗严重等问题,通过分析1-MCP和延迟冷藏处理对‘早红考密斯’梨果实腐烂和货架期软化的影响,解析‘早红考密斯’梨中果实软化相关基因表达模式,旨在为延长‘早红考密斯’梨货架期提供新的理论依据。【方法】‘早红考密斯’梨经1.0μL·L-1 1-甲基环丙烯(1-MCP)处理后,分别在(20±2)℃下放置0、3和6 d后再进行(0±0.5)℃冷藏。冷藏95 d后转入货架期((20±2)℃)分析果实品质变化,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析多聚半乳糖醛酸酶基因(PG1、PG2)、α-阿拉伯呋喃糖苷酶基因(ARF1、ARF2)和β-半乳糖苷酶基因(GAL4)的表达模式。【结果】延迟冷藏易导致‘早红考密斯’梨果实软化和腐烂,并且随着处理时间延长,果实腐烂率加剧;与空气密封处理后直接冷藏(CK)相比,1-MCP结合延迟冷藏处理能有效维持货架期果实硬度,抑制果实呼吸速率和乙烯生成速率,减少果实腐烂,保持果实品质,但随着延迟冷藏处理时间延长,果实货架期呼吸速率和乙烯生成速率增加,果实软化进程加快;1-MCP结合延迟冷藏处理可显著抑制果实软化相关基因PG1、PG2、ARF1、ARF2和GAL4等的表达,但随着延迟冷藏处理时间延长,这种抑制效果减弱。【结论】延迟冷藏易导致‘早红考密斯’梨腐烂,因此采后需尽快冷藏;1-MCP抑制软化和腐烂效果明显,结合延迟冷藏处理,在一定程度上有利于‘早红考密斯’梨冷藏后货架期果实软化;PG1、PG2、ARF1和GAL4参与了‘早红考密斯’梨冷藏后货架期果实的软化过程。

Snail1基因启动子区组蛋白修饰在前列腺癌细胞EMT发生中的作用

目的探讨Snail1基因启动子区的组蛋白修饰与前列腺癌DU145细胞发生上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)现象的关系。方法 RT-PCR、Western blot及IF法验证TGF-β1诱导前列腺癌细胞发生EMT过程中相关标记物的变化;利用Ch IP试验来筛查Snail1启动子区组蛋白修饰及RNA聚合酶Ⅱ的富集区域。结果诱导前列腺癌发生EMT过程中,仅有DU145细胞EMT相关标记物的变化明显(P<0.05);DU145细胞中Snail1经TGF-β1诱导后出现明显上调的现象;Snail1基因启动子区域的P4位点存在H3K4ME3及RNA聚合酶Ⅱ的富集。结论 TGF-β1通过促使Snail1基因启动子区P4位点的H3K4ME3富集导致Snail1表达上调,促进了前列腺癌DU145细胞EMT现象的发生。

沉默信息调节因子1(SIRT1)在前列腺癌恶性生物学表型中的作用

目的观察SIRT1在前列腺癌组织和细胞中的表达,探讨SIRT1在前列腺癌发生中的作用。方法收集辽宁医学院附属第一医院手术切除的8例成对前列腺癌组织和癌旁组织随机分组,体外培养Pr EC、LNCap、PC3和DU145细胞,real-time PCR和Western blot法检测SIRT1和P53在前列腺癌组织和细胞中mRNA和蛋白表达。提取细胞系中总蛋白、浆蛋白和核蛋白,Western blot法检测PC3和DU145细胞中SIRT1和P53的蛋白表达和定位。结果前列腺癌组织中,SIRT1的mRNA和蛋白表达明显高于癌旁组织(P<0.01);LNCap、PC3和DU145细胞中SIRT1的mRNA和蛋白表达明显高于Pr EC细胞(P<0.01);PC3和DU145细胞系SIRT1蛋白表达明显高于胞质(P<0.01)。结论 SIRT1可能通过P53不同方式促进前列腺癌发生,为探讨SIRT1在前列腺癌恶性生物学表型中的作用和机制奠定基础。

电针下合穴对十二指肠溃疡模型大鼠组织高迁移率族蛋白1及核因子-κB等的影响

目的:对比观察电针十二指肠溃疡模型大鼠下巨虚、足三里、上巨虚、阳陵泉等穴后对十二指肠组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)及核因子-κB(NF-κB)表达的影响,探讨小肠下合穴下巨虚治疗对应腑病是否存在相对特异性。方法:将70只健康SD大鼠随机分为空白、模型、下巨虚、足三里、上巨虚、阳陵泉、承筋组共7组,每组10只,雌雄各半。除空白组外均皮下注射盐酸半胱胺建立十二指肠溃疡大鼠模型,造模成功并治疗10 d后,肉眼观察大鼠十二指肠黏膜溃疡情况,ELISA法检测十二指肠组织TNF-α、HMGB1含量,免疫组化法检测十二指肠中NF-κB的表达。结果:1与模型组比:5个穴位组TNF-α、HMGB1含量均降低(P<0.01),且上巨虚、下巨虚和足三里组溃疡评分及NF-κB的表达依次降低(P<0.05或P<0.01);2与下巨虚组比:阳陵泉组和承筋组评分、TNF-α、HMGB1含量以及NF-κB的表达均偏高(P<0.01或P<0.05),上巨虚组TNF-α、HMGB1含量亦增高(P<0.05),足三里组较之差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:1电针下巨虚对DU大鼠炎症干预效果明显优于阳陵泉、承筋穴及上巨虚穴,提示下巨虚穴对DU具有一定的相对特异性;2足三里穴效果与下巨虚穴相当,二穴靶器官效应可能存在交集,其具体机制和内涵仍有待进一步研究。

针刺百会、人中穴对急性脑缺血大鼠模型葡萄糖转运蛋白1、3的影响

【目的】探讨早期针刺治疗对脑缺血模型大鼠局部葡萄糖代谢的调节作用。【方法】将80只3个月龄的SD大鼠随机分为正常组、模型组、2 h针刺组和24 h针刺组4组,每组20只。采用开颅法复制急性脑缺血模型。针刺治疗取百会、人中穴,采用泻法,针刺行针捻转频率120次/min,每隔4 min行针1次,每次行针1 min,总共针刺治疗30 min。2 h针刺组在造模后2 h即开始针刺治疗,在24 h后再次针刺治疗,一共治疗2次;24 h针刺组在模型制备后24 h针刺1次。针刺治疗结束后,大鼠予以神经功能评分,并取材,行2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定缺血区域梗死面积,采用免疫组织化学法检测缺血脑组织葡萄糖转运蛋白(GLUT)1、3的表达。【结果】模型组大鼠神经功能评分指数较正常组升高,TTC染色结果显示左侧大脑半球肿胀,梗死体积明显大于对侧,免疫组织化学结果显示缺血脑组织区域GLUT1和GLUT3免疫阳性物较正常组增多(P<0.01)。与模型组比较,2 h针刺组和24 h针刺组均能有效改善脑缺血状况,降低神经功能评分指数,减少TTC染色后的梗死面积,增加缺血脑组织区域GLUT1和GLUT3蛋白表达(P<0.05),而2 h针刺组疗效优于24 h针刺组(P<0.05)。【结论】针刺可以有效改善急性脑缺血大鼠脑缺血损伤。针刺改善缺血性脑组织的能量代谢作用可能是通过上调脑内GLUT1和GLUT3的蛋白表达,提高葡萄糖的血脑屏障转运效率,从而促进葡萄糖代谢,为缺血性脑组织提供能量以延缓供能的相对不足,对抗脑缺血损伤。早期以针刺干预调节脑缺血大鼠能量代谢可以起到积极效果。

miR-3691-3p靶向调控E2F3/PRDM1对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨微小RNA-3691-3p(miR-3691-3p)调控的靶基因E2F3(E2F transcription factor 3)和PR结构域蛋白1(PR domain containing 1,PRDM1)对前列腺癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法:在前列腺癌DU145细胞株中,转染不同浓度梯度的miR-3691-3p mimic后,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测候选靶基因E2F3和PRDM1 mRNA和蛋白表达的变化;人工合成候选靶基因的小干扰RNA(E2F3 siRNA和PRDM1 siRNA)转染入DU145细胞中,采用实时荧光定量PCR检测siRNA在细胞中的转染率;DU145细胞株分别转染阴性对照siRNA、E2F3 siRNA和PRDM1 siRNA后,采用MTT、Transwell、划痕实验检测DU145细胞株增殖、迁移、侵袭能力的变化。结果:随着miR-3691-3p mimic转染浓度增高,在DU145细胞株中E2F3和PRDM1 mRNA的表达量逐渐下降(P<0.01或P<0.05),两个蛋白的表达水平均明显降低(P<0.01)。与阴性对照组相比,转染E2F3 siRNA和PRDM1 siRNA的DU145细胞株中,E2F3和PRDM1在mRNA水平上表达量显著减少(E2F3:t=31,P<0.01;PRDM1:t=10.44,P<0.01)。且转染E2F3 siRNA的DU145细胞增殖、迁移和侵袭能力显著下降(均P<0.01);而转染PRDM1 siRNA的DU145细胞增殖和侵袭能力显著下降(均P<0.01),迁移能力没有明显变化(P>0.05)。结论:在DU145细胞中,低水平的miR-3691-3p通过靶向调控E2F3和PRDM1的增高来增强细胞的生物学特性。