UHPLC-Orbitrap HRMS技术分析常通口服液的化学成分

目的明确常通口服液(CTOL)中的化学成分,为其药效物质基础研究及二次开发提供参考。方法采用超高效液相色谱-静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Orbitrap HRMS)技术进行分析。将CTOL检测样品上样Hypersil Gold色谱柱,以0.1%甲酸(含5 mmol/L甲酸铵)-乙腈作为流动相进行梯度洗脱;采用电喷雾离子源,在正、负离子模式下进行检测,数据使用Xcalibur qual browser 4.3和Compound Discoverer 3.3软件进行处理。收集各化合物的一级、二级质谱数据,根据仪器自带的质谱库以及网络数据库mzCloud、mzVault等对未知化合物进行鉴定,并通过同中药系统药理学数据库与分析平台进行匹配,从而对各化学成分进行药材归属。结果从CTOL中共鉴定分析出53个化学成分,包括24个黄酮类化合物、8个醌类化合物、5个苯丙素类化合物、4个糖和苷类化合物、5个有机酸类化合物、3个氨基酸类化合物、1个生物碱类化合物、1个酚类化合物和2个其他类化合物。53个化合物中有12个来源于丹参,9个来源于枳实,7个来源于大黄,4个来源于当归,1个来源于厚朴,16个来源于甘草,4个来源于多味药材。结论CTOL中主要含黄酮类、醌类、苯丙素类、糖和苷类化合物,且化学成分主要来源于甘草、丹参和枳实。

高效液相色谱法测定常通口服液中大黄素的含量

目的 :测定常通口服液中大黄素的含量。方法 :采用高效液相色谱法 ,以Nova -PakC18 为色谱柱 ,甲醇 -0 1%磷酸 (85∶15)为流动相 ,检测波长为254nm。结果 :常通口服液中大黄素的含量在0 48～2 40μg/ml浓度范围内线性关系良好 (r=0 9998)。平均回收率为99 73 % (n=5) ,RSD=1 42 %。结论 :本方法简便、快速 ,测定结果准确。

常通口服液对大鼠术后肠粘连的预防作用

目的观察常通口服液预防术后肠粘连的作用。方法选用Ｗｉｓｔａｒ大鼠６０只，刮伤其盲肠浆膜，创面滴无水酒精，钳夹壁腹膜制成损伤性肠粘连模型。随机将动物分成５组，分别给５、１０、２０ｇ／ｋｇ的常通口服液灌胃，维生素Ｅ０．５ｇ／ｋｇ和生理盐水２０ｍｌ／ｋｇ灌胃，术后７ｄ观察肠粘连程度。结果与对照组比较，常通口服液３个剂量组和维生素Ｅ组均能降低术后肠粘连的程度（Ｐ＜０．０１），但前者作用优于后者。结论常通口服液具有预防术后肠粘连的作用。

常通口服液的质量标准研究

目的 :建立常通口服液 (黄芪、丹参、大黄等 )的质量标准。方法 :采用高效液相色谱法对方中君药丹参中的丹参素进行含量测定 ,对黄芪、丹参、大黄进行薄层鉴别。结果 :丹参素在 1 .31～ 1 69.68μg·mL- 1 范围内 ,对照品浓度在峰面积呈良好线性关系 ,平均加样回收率为 1 0 0 .4 % ,RSD为 1 .9%。薄层图谱斑点清晰 ,阴性对照无干扰。结论 :方法简便可靠 ,精密度高 ,分离度好 。

电感耦合等离子质谱法测定常通口服液中重金属镉的含量

目的测定中药常通口服液中重金属镉(Cd)的含量。方法采用电感耦合等离子质谱法(ICP-MS)。结果重金属镉Cd在0.0025～0.0125μg/mL浓度范围内线性关系良好(r=0.9997),平均回收率为99.37%(n=5,RSD=2.73%)。常通口服液中重金属镉含量符合规定。结论该方法简便、准确、快速、重复性好,灵敏度高,可为常通口服液的质量控制提供一种简便方法。

常通口服液预防术后肠粘连的实验研究

目的观察中药常通口服液用于术后腹腔肠粘连的效果。方法选取54只SD雄性大鼠随机分为6组(n=9):正常对照组、模型对照组、四磨汤组、常通口服液低、中、高剂量组。除正常对照组外,其余大鼠均按Ellis法制备成肠粘连模型。正常及模型对照组予以蒸馏水灌胃(10ml/kg);四磨汤组以10ml/kg灌胃给药;常通口服液低、中、高剂量组分别按4.3、8.6、17.2g/kg灌胃给药。各组于术后第7天取血,测定白细胞(WBC)计数及纤维蛋白原(FIB)浓度;同时进行粘连程度肉眼分级。结果常通口服液能明显减轻肠粘连程度,降低大鼠血浆中WBC计数及FIB浓度。结论常通口服液能够预防腹腔术后肠粘连形成。

常通口服液对手术所致肠粘连大鼠肠壁转化生长因子表达的影响

目的:探讨常通口服液对术后肠粘连的防治作用机理。方法:采用损伤盲肠浆膜,结扎相应腹壁制成肠粘连模型,观察常通 口服液对粘连模型大鼠肠壁转化生长因子(TGF-β1)的影响,结果:常通口服液能抑制创面TGF-β1的过度表达。结论:常通口服 液通过抑制模型肠壁创面TGF—β1的过度表达而起到预防肠粘连的作用可能是其机理之一。

常通口服液对术后肠粘连大鼠血清细胞因子的影响(英文)

目的观察常通口服液对术后粘连大鼠血液中肿瘤坏死因子α(TN F-α)、转化生长因子β1(TG F-β1)、白细胞介素-1β、4、6、10(IL-1β、IL-4、IL-6、IL-10)水平的影响。方法选用SD 雄性大鼠,随机分为6 组:正常对照组、模型对照组、四磨汤组及常通口服液低、中、高剂量组。除正常对照组外,其余大鼠均按Ellis法制备成肠粘连模型。正常及模型对照组予以蒸馏水灌胃(10 m l/kg);四磨汤组以10 m l/kg 灌胃给药;常通口服液低、中、高剂量组分别按4.3、8.6 、17.2 g/kg 灌胃给药。各组于术后第7 天取血,酶联免疫吸附法测定细胞因子水平,同时进行粘连程度肉眼分级。结果常通口服液能显著减轻模型大鼠的肠粘连程度,降低术后肠粘连大鼠血清中致炎细胞因子TN F-α、IL-1β、TG F-β1、IL-6 水平,但对抗炎细胞因子IL-4、IL-10 水平无影响。结论本实验初步筛选出有意义的术后粘连疗效评价指标,为术后粘连临床疗效评价和新药研发建立客观、准确、可靠的临床疗效评价指标提供了实验依据。

电感耦合等离子质谱法测定常通口服液中铅的含量

目的建立中药常通口服液中重金属铅(Pb)的含量测定方法.方法采用电感耦合等离子质谱法测定常通口服液中铅的含量,RF功率1.35 kW,反射功率＜5W,采样深度6.8 mm,溶液提升量1 mL·min-1,氩气流量:冷却气12.0 L·min-1,辅助气1.0 L·min-1,雾化气1.0 L·min-1.结果铅在1～8μg·mL-1浓度范围内线性关系良好(r=0.999 2),平均回收率为99.12%,RSD=2.86%.结论该方法简单、快捷、灵敏,可用于常通口服液的质量控制,常通口服液中铅含量符合规定.

火焰原子吸收分光光度法测定常通口服液中微量元素Zn的含量

目的测定中药常通口服液中微量元素Zn的含量. 方法火焰原子吸收分光光度法.结果 Zn在1～7 μg/mL质量浓度范围内线性关系良好(r=0.9996),平均回收率为99.48%(n=5,RSD=2.35%). 结论本法简单、快捷、灵敏.

原子荧光光度法测定常通口服液中重金属砷的含量

目的测定中药常通口服液中重金属砷（As）的含量。方法采用原子荧光光度法，负高压300V，光源用砷空心阴极灯，灯电流为60mA，原子化器高度8．0mm，载气流量300mL·min^-1，屏蔽气流量700mL·min^-1。结果重金属砷在0．4-25．6ng·mL^-1浓度范围内线性关系良好，r=0．9997，平均回收率为98．27％，RSD=2．83％（n=5）。结论该法简单、快速、灵敏，常通口服液中重金属砷含量符合规定。

MTT法测定常通口服液对正常及粘连腹膜成纤维细胞增殖的影响

目的探讨常通口服液(CTOL)对体外培养的正常腹膜成纤维细胞(NF)及粘连腹膜成纤维细胞(AF)增殖的影响。方法(1)药物血清的制备:雄性SD大鼠20只,随机分为4组:正常血清组,CTOL低、中、高剂量组。大鼠灌服相应剂量的药物7d后,腹主动脉采血,分离药物血清。(2)成纤维细胞的体外培养:采用组织块贴壁培养法进行成纤维细胞培养,本实验所用细胞为第3~8代。(3)成纤维细胞的增殖:细胞以5×103/孔接种到96孔培养板,分别加入CTOL低、中、高剂量的含药血清和空白对照血清,培养24、48、72、96h,MTT法观察细胞增殖情况。结果药物剂量与吸光度值之间存在负相关性,同时药物剂量与抑制率之间存在正相关性。与NF正常血清对照组比较,CTOL各剂量组在作用24、48h时,其OD值均无显著性变化(P>0.05),但当作用72、96h时,其OD值均呈显著性降低(P<0.01);与AF正常血清对照组比较,CTOL低、中、高剂量组药物血清作用24、48、72、96h,其OD值均呈显著性降低(P<0.05),同一时间点比较,CTOL低剂量对AF的抑制率比对NF的抑制率高,但无统计学差异。CTOL中剂量在作用96h,对AF...

常通口服液对炎症因子参与大鼠肠粘连的影响

目的:观察常通口服液对术后粘连大鼠血液中肿瘤坏死因子α(TNF-α),转化生长因子β1(TGF-β1),白细胞介素- 1β、4、6、10(IL-1β、IL-4、IL-6、IL-10)水平的影响。方法:选用SD雄性大鼠,随机分为6组:正常对照组、模型对照组、四磨汤组及常通口服液低、中、高剂量组。除正常对照组外,其余大鼠均制备成肠粘连模型。各组于术后第7天取血,酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞因子水平;同时用肉眼观察法进行粘连程度肉眼分级。结果:常通口服液能显著减轻模型大鼠的肠粘连程度,降低术后肠粘连大鼠血清中致炎细胞因子TNF-α、IL-1β、TGF-β1、IL-6水平。但对抗炎细胞因子IL-4、IL-10水平无影响。结论:本实验为术后粘连临床疗效评价指标筛选提供了实验依据。

电感偶合等离子质谱法测定常通口服液中砷含量

目的测定中药常通口服液中重金属砷的含量。方法电感偶合等离子质谱法。结果与结论重金属砷在5￣25ng/ml浓度范围内线性关系良好(r=0.9998),平均回收率为98.94%(n=5,RSD=2.58%)。常通口服液中重金属砷含量符合规定。

高效液相色谱法测定常通口服液中大黄酸的含量

目的建立常通口服液中大黄酸的含量测定方法。方法高效相色谱法,十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液64:36,检测波长为230nm。结果方法线性关系良好,平均加样回收率98.84%,RDS为0.71%。结论方法简便可靠,精密度高,分离度好,可用于常通口服液的质量控制。

常通口服液对肠粘连大鼠血TNF-α、IL-4的影响

目的 观察常通口服液对大鼠肠粘连模型血TNF-α、IL-4水平的影响。方法 选用SD雄性大鼠,随机分为6组:正常 对照组、模型对照组、四磨汤组及常通口服液低、中、高剂量组。除正常对照组外,其余大鼠均按Ellis法制备成肠粘连模型。常通中 剂量组与模型对照组于术后第1、3、5、7、9天采血,其余各组于术后第7天取血,酶联免疫吸附法(ELISA)测定TNF-α、IL-4水平。结 果 与正常对照组比较,模型对照组TNF-α显著升高(P<0.001),而IL-4无显著性变化(P>0.05);与模型对照组比较,常通低、中、 高剂量组TNF-α含量均显著降低(P<0.01～0.001),而IL-4水平无明显变化(P>0.05)。结论 TNF-α与肠粘连形成有关,可作为 粘连形成的一种标志物。

常通口服液对肠黏连大鼠白细胞介素-6、10的影响

目的:观察常通口服液对术后黏连大鼠血液中白细胞介素-6、10(IL-6、IL-10)水平的影响。方法:选用SD♂大鼠,随机分为6组:正常对照组、模型对照组、四磨汤组及常通口服液低、中、高剂量组。除正常对照组外,其余大鼠制备成肠黏连模型。正常及模型对照组予以纯化水灌胃(10mL.kg-1),四磨汤组以10mL.kg-1灌胃给药,常通口服液低、中、高剂量组分别按4.3,8.6,17.2g.kg-1灌胃给药。常通中剂量组与模型对照组于术后第1,3,5,7,9天采血,其余各组于术后第7天取血,酶联免疫吸附法(ELISA)测定IL-6及IL-10水平。结果:常通口服液能显著降低术后肠黏连大鼠血清中致炎细胞因子IL-6水平。但对抗炎细胞因子IL-10水平无影响。结论:IL-6与肠黏连形成有关,可作为黏连形成的一种标志物。

常通口服液对肠粘连大鼠血TGF-β_1的影响

目的观察常通口服液对大鼠肠粘连模型血转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)水平的影响.方法 (1)选取54只SD雄性大鼠随机分为6组(n=9):正常对照组、模型对照组、四磨汤组、常通口服液低、中、高剂量组.除正常对照组外,其余大鼠均按Ellis法制备成肠粘连模型.正常及模型对照组予以蒸馏水ig(10ml·kg-1);四磨汤组以10m1·kg-1ig给药;常通口服液低、中、高剂量组分别按4.3、8.6、17.2g·kg-1ig给药.各组于术后第7d取血,酶联免疫吸附法(ELISA)测定TGF-β1水平.(2)选用SD雄性大鼠90只,随机分为2组,按Ellis法制备成肠粘连模型.给药方法及给药剂量同方法(1).常通口服液中剂量组与模型对照组于术后第1、3、5、7、9d采血,不同时间点各取血9只大鼠,并处死.测定TGF-β1水平.结果 (1)与正常对照组比较,模型对照组TGF-β1显著升高(P<0.001);与模型对照组比较,常通口服液中、高剂量组均能显著降低TGF-β1含量(P<0.05～0.01),而低剂量组TGF-β1含量无明显减少(P>0.05).(2)常通口服液中剂量组与模型对照组各个时间点相应比较,在术后第5、7、9d 3个时间点有显著性差异(P<0.01～0.001).结论常通口服液能降低TGF-β1水平.细胞因子TGF-β1在肠粘连形成中可能发挥一定作用.

常通口服液对实验性肠粘连兔纤溶活性的影响

目的:观察常通口服液(CTOL)对实验性肠粘连兔纤溶活性的影响。方法:仿 Thomas and Rhoads方法制作兔肠粘连模型,并以CTOL连续预防给药灌服7天后,兔耳静脉采血检测t-PA和PAI活性的变化,并肉眼观察兔肠粘连的情况。结果:CTOL各剂量组对兔术后肠粘连有明显的预防作用,并使其血中t-PA活性增高,PAI显著下降。结论:CTOL可能是通过调节机体的纤溶系统以达到防治术后肠粘连的作用。

常通口服液制备工艺研究

目的:优化常通口服液的制备工艺。方法:采用正交设计法研究水提取与乙醇提取的最佳条件,比较2条提取工艺路线、2条醇沉路线以及3种醇沉浓度(50%、65%、75%)对常通口服液中丹参素、大黄素含量的影响;采用高效液相色谱(HPLC)法测定丹参素与大黄素的含量。结果:以12倍量水、提取2次、每次提取3.5h时丹参素含量最高;以6倍量、70%乙醇提取1h时大黄素含量最高;先醇提后水提与水提取路线的丹参素含量无显著性差异(P>0.05);先醇提后水提的大黄素含量显著高于水提取路线(P<0.05);先醇沉后合并、先合并后醇沉路线的丹参素与大黄素含量无显著性差异(P>0.05)。3种醇沉浓度的丹参素含量无显著性差异(P>0.05),大黄素含量有显著性差异(P<0.05),以50%醇沉浓度时损失最少。根据最佳工艺路线制备常通口服液,3批成品的丹参素含量无显著性差异(P>0.05);薄层鉴别、澄明度与pH值检查均符合质量标准规定。结论:按照最佳工艺路线制备的常通口服液成品质量可控、稳定性良好。