c-di-GMP通过趋化调节蛋白CheB／CheR调控钩端螺旋体运动

目的问号钩端螺旋体（简称钩体）是引起钩体病的重要病原体，人类通过带菌动物尿液污染的疫水或疫土而感染，趋化和运动系统在钩体感染过程中发挥重要作用。钩体基因组序列分析表明其中有数个趋化调节蛋白CheB和CheR的编码基因，但其具体的调控机制未知。方法Real-timePCR检测了钩体基因组中5个基因在钩体感染宿主细胞过程中mRNA的水平变化：T-A克隆了CheB和CheR的编码基因片段并构建了原核表达系统；检测了c-di-GMP浓度变化对CheB和CheR表达菌株表型的影响。结果在感染细胞60min后，cheBl的mRNA水平显著提高，cheB3也有一定程度的提高，而cheB2和cheR则无明显差异；成功构建了5个基因的原核表达系统，其中重组CheBl、CheB3和CheR2蛋白使大肠杆菌运动能力明显增强；在加入二鸟苷酸环化酶抑制剂和磷酸二酯酶抑制剂后，各表达菌株形成菌落大小与对照相比无明显不同，但CheB2菌落形态与对照相比出现明显褶皱。结论CheB和CheR可影响大肠杆菌的swarming运动能力，并受胞内c．di，GMP浓度的影响。