蛋白4.1R对肝细胞HL-7702增殖、凋亡以及糖酵解的影响

目的探究蛋白4.1R对肝细胞增殖、凋亡以及糖酵解的影响,并初步阐明其分子机制。方法以肝细胞株HL-7702为材料,利用CRISPR/Cas9技术构建4.1R^(-/-)HL-7702细胞株。设置对照组为正常培养的4.1R+/+HL-7702细胞,实验组为4.1R^(-/-)HL-7702细胞。细胞在培养24、48以及72 h时,分别用CCK-8及EdU-488染色,然后利用酶标仪以及流式细胞术检测细胞的增殖能力。细胞经Annexin V-FITC/PI染色后,流式细胞术检测HL-7702细胞在培养24、48以及72 h时的凋亡水平。利用生化试剂盒分别检测HL-7702细胞葡萄糖摄取量、乳酸分泌量以及ATP生成的变化。pH计检测培养48 h HL-7702细胞上清培养基的pH值。qRT-PCR检测HL-7702细胞糖酵解过程关键调节酶HK2、PFKL、PKM2以及LDHA的mRNA表达量。Western blotting检测AMPK、p-AMPK、Raptor以及p-Raptor的蛋白表达量。结果Western blotting以及基因测序结果表明4.1R^(-/-)HL-7702细胞株构建成功。与对照组相比,4.1R^(-/-)组的CCK-8和EdU-488实验结果均显示HL-7702细胞的增殖能力降低;细胞凋亡实验结果表明,4.1R^(-/-)HL-7702细胞凋亡水平升高。蛋白4.1R的缺失导致HL-7702细胞葡萄糖摄取量(P<0.05)、乳酸分泌量(P<0.001)、ATP生成(P<0.001)下降,细胞上清培养基pH值(P<0.01)升高。qRT-PCR实验结果表明糖酵解过程关键调节酶的mRNA表达量均下降(P<0.001)。相较于HL-7702细胞,4.1R^(-/-)HL-7702细胞的AMPK和Raptor蛋白表达量下降,p-AMPK和p-Raptor蛋白表达量升高。结论蛋白4.1R的缺失导致HL-7702细胞增殖能力降低、凋亡水平增加,糖酵解过程被抑制,其调控机制与下游AMPK-mTORC1信号通路的激活密切相关。

蜈蚣毒液中钾离子通道Kv4.1抑制剂SsTx-P2的分离和结构鉴定

目的:挖掘蜈蚣毒液中的电压门控钾离子通道Kv4.1多肽抑制剂,确定其一级结构,并对其空间结构进行建模分析。方法:利用离子交换层析和反相高效液相色谱对蜈蚣毒液的多肽组分进行分离纯化,通过全细胞膜片钳技术鉴定能够抑制Kv4.1通道的多肽;运用基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱鉴定多肽的分子量,借助Edman降解测序和二维质谱测序确定多肽的一级结构;基于迭代线程装配细化在线分析建立多肽空间结构模型。结果:从蜈蚣毒液中分离纯化得到一条能够抑制Kv4.1通道的多肽SsTx-P2,分子量为6122.8,氨基酸序列为NH2-ELTWDFVRTCCKLFPDKSECTKACATEFTGGDESRLKDVWPRKLRSGDSRLKD-OH,其在1.0µmol/L浓度下能够抑制Kv4.1通道超过95%的电流。空间结构模型显示,多肽SsTx-P2拥有一个保守的螺旋结构。结论:本文通过分离纯化从蜈蚣毒液中得到一条多肽SsTx-P2,能够强效抑制钾离子通道Kv4.1,其空间结构具有一定的保守性。

2022年10月30日渤海M_(L)4.1地震预测与思考

依据近年来我国南北地震带部分地区强震、大震与华北地区中等地震活动的某些相关性特征,结合华北地区地震活动演化特点,以及对异常信度较高的区域异常项目对比与分析,山东地震台测震学与综合预报学科对研究区近期发生的一次中等地震,即2022年10月30日渤海海域M_(L)4.1地震作出预测,并指出:近年来南北地震带中南段中部大震发生前后,华北地区中等以上地震多出现长时间平静现象,且平静打破后,其后续ML 4地震分布也有一定规律可循;莱州湾及附近海域存在小震调制比高值异常;渤海海域及附近部分地区M_(L)3地震较活跃,同时,M_(L)3地震能量释放呈逐渐增强态势。希望通过对2022年渤海海域M_(L)4.1地震预测过程的分析与总结,为今后地震研究相关工作提供借鉴。

2022年青州M_(L)4.1地震前后的重力场变化分析

以2022年青州M_(L)4.1地震为研究目标,根据先前学者总结的区域重力场变化在大震孕育发生中的异常特征,通过计算相邻两期重力变化、累计重力变化的方式,分析了震中附近变化的空间尺度和数量级。本文分析了区域重力场变化显著地区的测点单点变化情况,包括高炳西、济南站、王坟及庙子等测点,以及高炳西场地南北两测点重力差的变化情况。根据高炳西场地南北两测点周边干扰情况,包括降水量、地面沉降、地形改正等,分析了该两测点重力差变化的原因。本文认为青州ML4.1地震发震前后的重力场有变化,且该变化与地震孕育发生导致的地下物质迁移有关。

从AQP4/Kir4.1的表达和分布探讨水平衡在糖尿病视网膜水肿中的机制与研究进展

糖尿病视网膜病变(DR)是糖尿病(DM)引起的严重并发症,其发病机制可能与视网膜水肿清除机制不足相关。Müller细胞上的水通道蛋白4(AQP4)和内向整流性钾通道4.1(Kir4.1)共同参与的钾离子(K+)和水的共转运,广泛参与视网膜水液代谢,进而影响视网膜水肿清除机制。在生理状态下,AQP4/Kir4.1的表达和分布平衡,呈结构和功能性耦联关系,在病理条件下,二者的表达和分布失衡,导致水分子和K+的转运功能异常,引起细胞和组织的水肿。因此,维持AQP4与Kir4.1动态平衡对维持正常的视网膜内环境具有重要的意义。本文将从AQP4与Kir4.1在Müller细胞上的分布角度探讨水液平衡在糖尿病视网膜水肿中的机制与研究进展。

2020年山东长清M4.1地震前DF地脉动信号的变化特征

地震前重力仪可能记录到与震源有关的高频扰动信号。2020年2月18日山东长清发生M4.1地震,距离震中约52 km的泰安站PET重力仪记录数据在震前5 d出现能量增强、 DF地脉动垂直位移增大(0.13×10^(-6)m)的现象。为了厘清该现象与长清地震的关系,本文首先对2020年2月的重力数据进行0~0.5 Hz频段的时频分析并计算了DF脉动信号垂直位移,得到结果与地震背景噪声能量辐射的全球模型(ASSM)同步;在排除台风影响,对比分析嘉祥台重力数据和泰安站JCZ-1地震计垂直向速度记录数据,同时结合芝罘海洋观测站数据,判定该信号源自海浪激发的脉动信号。泰安站重力仪DF地脉动垂直位移均方差作为预测指标的R值检验,结果表明该DF信号的增强不符合异常识别指标,与2020年长清M4.1地震无关。本文对重力数据变化的分析方法和流程,以及对造成数据变化信号源的判定方法和思路,为重力仪观测数据的异常识别和判定提供了参考,可应用于相关地震分析预报工作。

长清M4.1地震岩石圈磁场异常特征

对2018~2020年山东及周边50个流动地磁矢量测点观测数据进行处理,得到2018-04~2019-04和2019-04~2020-04连续两期岩石圈磁场变化特征。结果表明,两期水平和垂直矢量在济南长清M4.1地震震中附近均具有较明显的局部异常特征,震前近2 a出现异常。前一期震中附近水平矢量幅值较高,近场发生转向且方向较为一致,垂直矢量幅值同样较高,在震中附近发生反转;后一期震中附近水平矢量方向汇聚,能量弱化,垂直矢量同样幅值较低,方向在震中附近发生反转。这种异常能量先强后弱特征,可能与震区应力状态的阶段性改变有关。

基于NUP50-AS1和RP5-1159O4.1 lncRNA分子的结直肠癌预后模型的构建

目的:探讨基于长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)分子对结直肠癌患者预后评价的可行性。方法:通过对TCGA数据库中结直肠癌患者转录组数据的系统挖掘,首先根据差异表达分析,筛选出在癌组织中异常表达的lncRNA分子,然后通过单变量Cox回归分析找出与预后显著相关的lncRNA分子,利用这些分子的回归系数构建结直肠癌预后评价系统。结果:大量的lncRNA分子在结直肠癌组织中呈现异常表达,与正常组织相比,分别有793个和495个lncRNA分子在癌组织中升高和降低,单变量Cox回归分析结果显示有6个lncRNA分子与结直肠癌患者的预后存在显著关联(P<0.05)。利用穷举法,结果显示有NUP50-AS1和RP5-1159O4.12个lncRNA分子的单变量回归系数构建的预后分数对于生存期预测性能最佳(AUC=0.71);根据预后评分,高分组和低分组在生存时间比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:本研究发现基于NUP50-AS1和RP5-1159O4.12个lncRNA分子构成的预后评分能够在一定程度上作为结直肠癌患者预后的生物标志物之一。

大型气相化学动力学软件包CHEMKIN及其在燃烧中的应用

燃烧化学反应动力学是计算燃烧学中的重要内容之一。本文介绍了处理气相化学动力学的大型软件包 CHEMKIN的结构和不同版本的特点 ,并描述了它在燃烧问题中的应用。最后通过一个算例对 H2 /O2 /N2 均相绝热等压燃烧体系进行了处理和计算 ,以具体说明该软件包的应用效果。

脂多糖活化星形胶质细胞并下调其内向整流性钾离子通道(Kir4.1)的表达

目的探讨脂多糖(LPS)对星形胶质细胞的活化作用及内向整流性钾离子通道4.1(Kir4.1)表达的影响。方法分离培养新生SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞;LPS处理或者和白细胞介素1受体拮抗剂(IL-1ra)处理培养的细胞,MTT法检测细胞活力,免疫细胞化学技术检测星形细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,ELISA检测细胞培养上清中的IL-1β的水平,实时定量PCR法检测星形胶质细胞IL-1β和Kir4.1 mRNA的表达情况。结果 LPS促进星形胶质细胞的活化具有浓度和时间依赖性。LPS可促进星形胶质细胞IL-1β的分泌和IL-1βmRNA的表达,下调Kir4.1 mRNA的表达;与LPS组相比较,IL-1ra可以有效对抗上述两结果。结论 LPS可诱导培养的星形胶质细胞活化;LPS下调星形胶质细胞Kir4.1 mRNA表达可能与IL-1β有关。

基于CHEMKIN对锅炉SNCR脱硝系统模拟及优化

为了提高锅炉SNCR系统脱硝效率,本文利用化学动力学CHEMKIN软件,应用SNCR脱硝系统基元反应机理,对SNCR技术及含添加剂(CH4、H2)的SNCR脱硝过程进行数值模拟,以预测反应条件(温度、氨氮摩尔比、停留时间、烟气中初始NO浓度、烟气中的氧浓度)及添加剂(CH4、H2)对脱硝效率的影响及优化。通过CHEMKIN软件模拟及优化,能有效确定适合实际工程应用的反应温度窗口及还原剂氨的合适喷射量。

人颞叶内侧癫痫海马组织星形胶质细胞水通道蛋白4和内向整流性钾离子通道4.1的再分布

目的研究人颞叶内侧癫痫海马组织星形胶质细胞水通道蛋白4(AQP4)和内向整流性钾离子通道4.1(Kir4.1)的分布。方法对10例颞叶内侧癫痫(MTLE)和6例非颞叶内侧癫痫(non-MTLE)手术切除海马组织,应用光镜及透射电镜观察组织学及超微结构,免疫荧光组织化学法观察星形胶质细胞AQP4和Kir4.1的分布。结果 MTLE海马组织星形胶质细胞大量增生伴明显肿胀,神经元显著固缩。non-MTLE海马组织中,AQP4和Kir4.1在星形胶质细胞血管周围足突(pAST-ef)分布多于其他部位,呈现极性分布特点;而在MTLE海马组织中,AQP4和Kir4.1在pAST-ef分布减少,其他部位分布增加,极性分布改变。结论海马组织星形胶质细胞上AQP4和Kir4.1极性分布变化可能与颞叶内侧癫痫发生相关。

肺小细胞癌组织中4.1蛋白家族的表达

目的:探讨肺小细胞癌组织中4.1蛋白家族的表达情况以及与淋巴结转移的关系。方法:取肺小细胞癌标本41例,采用免疫组织化学Envision+染色法检测4.1蛋白家族的表达情况。以21例癌旁正常组织作为对照。结果:肺小细胞癌组织中4.1R、4.1N和4.1G的阳性表达率低于癌旁正常组织(P<0.05),4.1B在2种组织中的表达差异无统计学意义(P>0.05);癌组织中4.1N、4.1G和4.1B的表达均与淋巴结转移无关(P>0.05),4.1R的表达与淋巴结转移有关(P<0.05)。结论:4.1蛋白家族成员在肺小细胞癌的发生、发展过程中作用不同。

Kir 4.1基因沉默对U-251细胞周期的影响

目的:针对人内向整流性钾离子通道(inwardly rectifying potassium channel protein,Kir)4.1基因构建si RNA干扰载体,探讨其对U-251细胞增殖、生长的影响,为临床治疗及开发新的抗肿瘤药物提供实验依据。方法:采用细胞培养、质粒转染、流式分选、RT-PCR、Western blot及流式细胞仪对构建的质粒进行鉴定并观察对照组和干扰组细胞周期的变化。结果:对DH5α中抽提的重组载体测序验证结果和插入序列一致;成功筛选出一个有效质粒;质粒转染U-251细胞后,细胞周期中的G2期细胞数量由19.39%降至1.5%,明显减少(P=0.018),S期细胞数量由36.32%升至51.22%,明显增多(P=0.027)。结论:成功构建针对人Kir 4.1基因的si RNA干扰载体;Kir 4.1干扰载体可能是通过抑制U-251细胞周期中的G2期,使U-251细胞的生长停滞在S期,从而达到干扰U-251细胞的增殖能力。

中国人先天性溶血性贫血红细胞膜骨架4.1蛋白电泳变异型(英文)

目的 :鉴定中国人先天性溶血性贫血 (溶贫 )红细胞膜 4.1蛋白 (band4.1)电泳变异类型。 方法 :以普通显微镜、相差镜和扫描电镜观察 2 5例溶贫患者红细胞形态学变化。以 4%～ 15 %梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳作红细胞膜蛋白定性定量分析。结果 :(1) 2 5例红细胞形态学异常溶贫患者中 ,band4.1定性定量改变者 11例 (4 4%)。(2 ) Band4.1电泳变异型 :14.1a/b亚基同时缺陷 ;2 4.1a亚基缺陷 ,a/ b亚基相对含量比值倒置 (患者 0 .6 5～ 1.2 0 ,正常对照 1.87± 0 .2 2 ) ;34 .1a亚基部分缺失伴异常区带 (相对分子质量 70 0 0 0、6 2 0 0 0、480 0 0 ) ;44 .1a亚基完全缺失伴 740 0 0异常区带。 (3)除了 band4.1a完全缺失者为筛孔状红细胞形态变化以外 ,其他电泳变异型与细胞形态学变化无明显对应关系。结论 :Band 4.1缺陷不仅可以导致红细胞椭圆形变和球形变 ,还可导致其他形态改变如筛孔形状。除了 spectrin、band 3以外 ,band 4.1缺陷是中国人遗传性球形红细胞增多症 (HS)另一种常见病因 ,而欧美国家为 ankyrin缺乏 ,在日本更常见 band 4.2缺乏。 Band 4.1a完全缺失和部分缺失伴异常区带电泳型未见于国外文献报道。结果提示 ,HS的主要病因和 band 4.1变异型差异可能与种族不同有关。

IL-1β促进星形胶质细胞增殖并下调Kir4.1的表达

目的探讨白细胞介素1β(IL-1β)对星形胶质细胞增殖及其内向整流性钾离子通道4.1(Kir4.1)表达的影响。方法体外培养新生SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞;用IL-1β或者和白细胞介素1受体拮抗剂(IL-1Ra)处理培养的星形胶质细胞,流式细胞术检测IL-1β对星形胶质细胞细胞周期的影响;荧光定量PCR检测IL-1β对星形胶质细胞Kir4.1 mRNA表达的影响;Western blot法检测IL-1β对星形胶质细胞Kir4.1蛋白表达的影响。结果 IL-1β可以以剂量和时间依赖的方式促进星形胶质细胞的增殖。用10 ng/m L的IL-1β处理星形胶质细胞24 h后,Kir4.1 mRNA和蛋白的表达均下降,IL-1Ra可以有效对抗由IL-1β引起的Kir4.1 mRNA和蛋白的表达下降;Kir4.1 mRNA和蛋白的表达下调也能因IL-1β的去除而部分被恢复。结论 IL-1β可以促进星形胶质细胞的增殖,IL-1β是影响星形胶质细胞Kir4.1表达的关键因素。

RegCM4.1对中国区域气候模拟能力评估

利用中国气象局提供的1985—2004年756个台站的逐日降水和气温观测数据评估了区域气候模式(Reg CM4.1)对中国地区不同季节的降水和气温的模拟性能,并结合中国的区域气候特征和气候带分布进行分区讨论。结果表明Reg CM4.1能够较好地再现中国地区四季降水占全年百分比、降水率的空间分布特点以及降水带南北摆动的季节变化特征。Reg CM4.1对平均气温分布模拟较好,强度和高低中心与观测事实接近,但对青藏高原地区的气温分布模拟值一致偏低。同时发现Reg CM4.1能够合理再现内陆地区气温日较差明显大于沿海地区的总体分布特征,不过模拟值在新疆和沿海地区比观测结果均偏低。

蛋白4.1家族在不同乳腺癌细胞株中的表达与定位

背景与目的:目前,已在多种人类肿瘤中发现蛋白4.1家族成员表达异常。本研究旨在通过检测蛋白4.1家族成员(4.1R/B/G/N)在3株转移能力不同的人乳腺癌细胞株MCF-7、T-47D和MDA-MB-231中的表达和定位,探讨蛋白4.1家族成员与乳腺癌细胞转移能力之间的关系。方法:采用Westernblot检测蛋白4.1家族成员在MCF-7、T-47D和MDA-MB-231细胞中的表达;免疫荧光标记对蛋白4.1家族成员在3株细胞中的表达进行定位。结果:4.1R/B/G在3种细胞系中均有表达,在T-47D细胞中的表达量均明显高于在MCF-7细胞中的表达量(P<0.05);但在高转移性的MDA-MB-231细胞中它们的表达水平转而下降。4.1N在T-47D细胞中的表达量明显低于在MCF-7细胞中的表达量(P<0.01),而在MDA-MB-231细胞中的表达则几乎检测不到,提示4.1N表达下调或缺失与乳腺癌细胞转移能力密切相关。4.1R/B/G/N在MCF-7和T-47D细胞中均主要定位于细胞膜及胞间连接处,同时4.1B在细胞核中也有表达;而在高转移的MDA-MB-231细胞中蛋白4.1家族成员均定位于细胞质中,提示蛋白4.1家族成员亚细胞定位的改变可能是乳腺癌细胞转移过程中的重要事件。结论:4.1N表达缺失和蛋白4.1家族成员亚细胞定位的改变与乳腺癌细胞MDA-MB-231的高转移性密切相关。

2018年安徽无为M_(L)4.1地震地下流体前兆异常特征

对2018年4月6日无为M_(L)4.1地震前的地下流体前兆异常特征以及该地震的震源机制解进行了分析,结果表明,无为地震前的异常分布在距震中64~233 km范围内,这些异常在时间进程上,可分为中期趋势背景异常和短临异常,主要以中期趋势背景异常为主。这些中期趋势背景异常均表现为水位的破年变变化。从空间演化上看,2018年安徽无为M_(L)4.1地震前出现的中期趋势背景异常沿着长江破碎带有序分布。这种比较明显的异常群体性特征为地震预测提供了较好的依据。震源机制解结果显示,节面I的走向为NE向,节面Ⅱ的走向NW向。反演的震源机制的P轴(主压轴)方向为NE向(70°),倾角近水平(7°)。无为地震震源机制解所得主压应力作用方向与无为地震前异常展布方向相同。这说明地震孕育过程中区域应力加载作用和流体前兆响应具有密切关系。

长江三峡工程库首区胡家坪MS4.1水库诱发地震研究

本文在系统收集有关资料并对地震现场进行考察的基础上,分析了2008年11月22日发生在秭归县归州镇香溪村胡家坪MS4.1级地震及其发生的地质-水文地质与地震活动背景条件,介绍了地震灾害。并进一步讨论了相关的地震前兆异常、地震成因等科学问题,认为该地震是在水库水体荷载与库水下渗的共同作用下沿仙女山断裂发生的构造型水库诱发地震,并认为震前有一定的前兆异常,这个地震的发生除了水库蓄水作用之外,可能还与汶川地震对该区应力场的影响有关。