Construction, expression and characterization of human interferon α2b-(G4S)n-thymosin α1 fusion proteins in Pichia pastoris

AIM:Interferon α2b (IFNα2b) and thymosin α1 (Tα1) exhibit synergic effects in the treatment of hepatitis B and hepatitis C when used together. For developing a fusion protein drug, fusion proteins of IFNα2b and Ta1 linked by different lengths of (G4S)n(n = 1-3) were constructed and expressed in Pichia pastoris. METHODS: Using PCR and molecular clone techniques, the fusion genes of IFNα2b-(G4S)n-Tα1 (n = 1-3) were constructed and subcloned into the eukaryotic expression vector pPIC9. After transformation of these plasmids into P. pastoris, the expressed fusion proteins IFNα2b-(G4S) n-Tα1 (n = 1-3) were obtained. These proteins were purified through diethylaminoethyl (DEAE) affinity chromatography and Superdex?75 gel filtration and analyzed by SDS-PAGE and Western blot. Antiviral and E-rosette assays were used to investigate the bioactivities of these fusion proteins. RESULTS: DNA sequencing confirmed that the fusion genes of IFNa2b-(G4S)n-Tα1 (n= 1-3) were correctly cloned to the pPIC9 vector. The recombinant IFNα2b-(G4S)n-Tα1 (n = 1-3) fusion proteins expressed in P. pastoris were purified with DEAE and Superdex?75 gel filtration chromatography. The fusion proteins could be observed on sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis with molecular weight (MW) of 23.2, 22.9, and 22.6 ku, respectively, and reacted to the IFNa2b monoclonal antibody and Tal polyclonal antibody. The purified fusion proteins exhibit antiviral activity and can enhance the percentage of E-rosette-forming-cell in E-rosette assay. CONCLUSION: The recombinant IFNa2b-(G4S)n-Tα1 (n = 1-3) fusion proteins were successfully expressed in P. pastoris. Purified fusion proteins exhibit both antiviral activity of IFNa2b and immunomodulatory activity of Tal in vitro. These results will be the basis for further evaluation of the fusion proteins' function in vivo.

Preliminary results of Thymosin-a1 versus interferon-α treatment in patients with HBeAg negative and serum HBV DNA positive chronic hepatitis B

INTRODUCTIONIn China ,the incidence and mortality of gastric cancer rank the second among all cancers. Recent development of cancer [1-20].The aim of this study was investigat the insight of apoptosis and bcl-2, p53 and C-myc protein expression in the development of gastric cancer .

全身化疗加或不加胸腺肽α_1治疗晚期非小细胞肺癌

目的：比较全身化疗加或不加胸腺肽α１（Ｔα１）及小剂量干扰素（ＩＦＮ－α）对晚期非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）的疗效、毒性及免疫功能的变化。方法：将３０例晚期ＮＳＣＬＣ患者随机分为治疗组及对照组，分别接受ＭＶＰ方案（丝裂霉素、西艾克、顺铂）加Ｔα１及小剂量 ＩＦＮ－α或单纯 ＭＶＰ方案化疗。结果：治疗组部分缓解率４０．０％，对照组 ２６．０％（Ｐ＞０．０５），中位缓解期分别为４．５个月及４．２个月。疗后治疗组Ｔ淋巴细胞及Ｔ辅助细胞（Ｔ４）水平明显高于对照组。治疗组除干扰素引起的发热外，其毒性与对照组基本相同。结论：全身化疗同时应用Ｔα１及小剂量ＩＦＮ－Ｑ治疗晚期ＮＳＣＬＣ，其疗效有所提高。且毒性未见增加，Ｔα１对晚期肺癌患者的免疫功能具有一定的调节效用。

日达仙联合化疗药物经动脉介入栓塞化疗治疗恶性肿瘤的临床观察

目的 :通过免疫调节剂日达仙联合化疗药物经动脉介入栓塞化疗治疗恶性肿瘤 ,观察其安全性、有效性、可行性。方法 :5 8例肝癌、胃癌、肺癌患者分二组 ,A组日达仙 +化疗药物经动脉介入栓塞治疗 ,B组单纯化疗药物经动脉介入栓塞治疗。结果 :日达仙 +化疗药物组介入后副作用明显低于单纯化疗药物组 ,而且细胞免疫水平无明显下降 ,NK细胞及CD4 /CD8比例略有升高。结论 :日达仙联合化疗药物经动脉介入栓塞化疗是安全有效和可行的 。

胸腺肽α_1对恶性肿瘤患者化疗期间免疫功能影响

目的：观察胸腺肽α1（Tα1）对化疗期间恶性肿瘤患者的免疫功能影响。方法：20例晚期恶性肿瘤患者随机分成A，B两组。A组给予单一化疗；B组在化疗同时给予Tα11．6mg／次，sc，2次／周，连用2个月。两组病例在治疗前后分别用流式细胞仪测定外周血T细胞亚群（CD3，CD4，CD8及CD4／CD8）和NK细胞活性。结果：B组的CD4，CD4／CD8和NK细胞活性治疗后明显高于治疗前，有统计学意义（P＜0．05）。治疗后A，B两组相比，B组的NK细胞活性明显高于A组，有统计学意义（P＜0．05）。结论：Tα1能明显提高肿瘤患者的免疫功能，特别对提高NK细胞活性尤为明显，并且没有发现明显的毒副作用，是一种低毒高效的生物反应调节剂。

胸腺肽在晚期非小细胞肺癌化疗中的作用

背景与目的：肺癌的发生、发展与机体的免疫功能状况密切相关,恶性肿瘤患者存在明显的免疫功能紊乱,主要表现为细胞免疫功能下降.本研究评价胸腺肽联合化疗对晚期非小细胞肺癌的疗效、毒副反应、生活质量及免疫功能的影响.方法：42例非小细胞肺癌随机分为2组,治疗组：NP方案＋胸腺肽.长春瑞滨（NVB）25 mg/m^2,静脉滴注,第1、8天,顺铂（DDP）70～80 mg/m^2,静脉滴注,第1天.化疗后第3天每日静脉滴注胸腺肽200 mg,连续7～10 d.对照组：单化疗,用NP方案,剂量、用法同上.结果：治疗组化疗后CD4和NK细胞活性显著高于化疗前和对照组化疗后水平（P＜0.01）,对照组NK细胞活性化疗后显著低于化疗前水平（P＜0.05）.治疗组KPS提高率为61.9%（13/21）,而对照组为28.6%（6/21）,两组差异有显著性（P＜0.05）.治疗组有效率52.4%（11/21）,1年生存率为52.6%.对照组有效率42.9%（9/21）,1年生存率38.8%.两组间疗效、毒副反应及1年生存率比较差异无显著性（P＞0.05）.结论：胸腺肽联合化疗能提高肺癌化疗患者机体的免疫功能,改善患者生存质量.

应用CHOP方案联合日达仙治疗非霍奇金淋巴瘤的临床研究

目的 采用多中心随机对照临床研究 ,非霍奇金淋巴瘤化疗病人用或不用日达仙对病人免疫功能及对疗效和生活质量提高的作用。方法 参照REAL淋巴瘤病理分类标准 ,随机分为A、B两组 ,采用CHOP方案治疗 ,其中B组病人治疗期间应用日达仙 1 6mg皮下注射 ,每周二次。所有病人须进行不少于 4个周期的化疗 ,以及日达仙须连续给药不少于 15周。结果 本研究根据入组标准共入组病人 3 4例。其中男性 2 1例 ,女性 13例 ,平均年龄 48岁。病理按REAL分型标准低度恶性者 9例 ,中度恶性者 2 0例 ,高度恶性者 2例 ,未定型 3例。A、B两组病人的总有效率 (RR)相近(82 3 5 %vs 88 3 % ) ,统计学差异无显著性 ,但B组病人的完全缓解率明显高于A组病人 (70 6%vs3 5 3 % ) ,差异有显著性统计学意义 (P值 <0 0 5 )。两组病人的体力状况评分KPS(ECOG)在治疗前后没有明显差别。毒副反应无明显差别。所有病人均未见Ⅲ Ⅳ级的毒副反应出现。免疫功能测定A组病人治疗前后CD4/CD8比值改善有统计学差异 ,NK细胞下降差异有显著性 (P <0 0 5 )。B组病人CD3、CD4升高及NK细胞升高明显。结论 CHOP方案联合日达仙可提高非霍奇金淋巴瘤病人的免疫功能 ,提高CD4/CD8比值及NK细胞的数量。

口服转胸腺素α1基因聚球藻对小鼠T细胞亚群作用的研究

为探讨口服后转胸腺α1(Tα1)基因聚球藻对T细胞亚群的作用,将小鼠随机分为空白对照组、野生藻组、转化藻(小剂量、中剂量和大剂量)组和日达仙组,用灌服的方式,给予空白对照组20mL·kg^(-1)的生理盐水,野生藻组0.4g·kg^(-1)的野生聚球藻;转化藻小、中、大剂量组,分别0.2g·kg^(-1)、0.4g·kg^(-1)和0.6g·kg^(-1)的转Tα1基因聚球藻;日达仙组则肌注给予3.2mg·kg^(-1)的胸腺素α1(日达仙)。结果表明转Tα1基因藻口服后可显著提高CD3亚群水平,显著提高CD4亚群水平,明显提高CD4/CD8的比值。提示转Tα1基因聚球藻具有增强机体免疫功能的作用。

胸腺法新注射液联合化疗对老年胃癌伴肝转移患者的疗效观察

目的观察胸腺法新注射液联合化疗对老年胃癌伴肝转移患者的疗效。方法选择2013年10月-2015年10月于西安市第一医院老年消化内科治疗的晚期胃癌伴肝转移患者76例为研究对象,按照随机双盲法分成对照组和观察组,每组38例,对照组予以顺铂联合替吉奥胶囊、5-氟尿嘧啶治疗,观察组在此基础上加用胸腺法新治疗,观察2组患者的临床疗效、生活质量、肝功能变化,并观察患者的药物不良反应。结果观察组近期总有效率为63.2%(24/38),显著高于对照组的36.8%(14/38),差异有统计学意义(χ~2=8.81,P=0.045);生活质量总改善率观察组患者为81.5%(31/38),显著高于对照组的65.7%(25/38),差异有统计学意义(χ~2=7.22,P=0.034)。治疗前2组ALT、胆红素、白蛋白、球蛋白比较无显著性差异(P>0.05),治疗后2组上述指标均改善(观察组:t=2.378、2.165、2.367、2.045,对照组:t=2.175、2.147、2.059、2.372,P<0.05),且观察组改善幅度优于对照组(t=2.608、2.514、2.414、2.389,P<0.05)。治疗前2组的胃癌标志物AFP、CEA、CA199水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),治疗后2组上述指标均改善(观察组:t=2.174、2.279、2.141,对照组:t=2.154、2.049、2.387,P<0.05),且观察组改善幅度优于对照组(t=2.412、2.389、2.369,P<0.05)。患者用药后主要的不良反应包括三系细胞减少、腹泻、口腔黏膜炎以及神经毒性等,但2组患者不良反应发生率比较差异无统计学意义(χ~2=0.740、0.390、0.510、0.420,P>0.05)。结论胸腺法新注射液联合化疗对于老年胃癌伴肝转移患者疗效较为显著,在提高患者生活质量、改善肝功能的同时不增加药物不良反应,值得临床推广应用。

化疗联合胸腺肽α1治疗乳腺癌的基础与临床观察

目的评价观察化疗联合胸腺肽α1对乳腺癌患者毒副作用及免疫功能的影响。方法87例乳腺癌患者随机分为治疗组43例和对照组44例。对照组单用化疗。治疗组采用胸腺肽α1＋化疗，胸腺肽α1给药方案：化疗当天开始1．6mg／周，皮下注射，直至患者完成2个疗程的化疗。结果2组均按期完成化疗计划。化疗期间，治疗组19例，对照组有31例WBC〈4×10^9／L。2组WBC〈4×10^9／L患者的例数差异有统计学意义（x^2=6．14，P〈0．05）。对照组有26例患者，治疗组有34例出现胃肠道不良反应。2组胃肠道不良反应发生率差异有统计学意义（x^2=4．06，P〈0．05）。治疗组化疗后细胞免疫指标水平高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论胸腺肽α1配合化疗能提高患者的免疫功能，改善患者生活质量。

胸腺肽α1对Ⅱ、Ⅲ期老年食管癌患者新辅助化疗及手术后免疫功能的影响

目的:探讨胸腺肽α1对Ⅱ、Ⅲ期老年食管癌患者新辅助化疗及手术后细胞免疫功能的影响。方法:64例60-75岁Ⅱ、Ⅲ期老年食管癌患者随机分为治疗组、对照组两组,治疗组35例,对照组29例,治疗组采用术前DP(多西他赛+奈达铂)方案化疗结合胸腺肽α1治疗;对照组只用DP方案化疗。分别于化疗前1天、化疗一周期、两周期后、手术后7天抽取患者外周血,采用流式细胞术(flow cyometry,FCM)检测T细胞亚群百分率(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)及NK细胞含量变化。结果:化疗一周期后,两组CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平无差异(P>0.05);化疗两周期后及术后7天,治疗组CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及NK细胞水平均高于对照组(P<0.05)。化疗毒副反应低于对照组(P<0.05)。结论:胸腺肽α1联合化疗应用于Ⅱ、Ⅲ期老年食管癌新辅助化疗,可减轻毒副反应,提高患者的化疗、手术耐受性及免疫功能,改善生活质量。

胸腺肽α_1对老年晚期结肠癌患者化疗期间生命质量的影响

目的 评价胸腺肽α1对老年晚期结肠癌患者化疗期间生命质量的影响。 方法用随机对照方法,比较单纯化疗组(对照组)和单纯化疗+胸腺肽α1(试 验组)化疗毒副反应程度和生命质量的改变,生命质量评分用EORTC QLQ-30 中文版测定。结果 对照组白细胞减少、恶心呕吐反应的严重程度明显高于试 验组;化疗后,患者的整体健康状况、躯体功能、情绪功能、食欲、乏力等有明显加 重趋势,疼痛呈减轻趋势,对上述影响试验组明显优于对照组。结论 胸腺肽α1 能减轻化疗的毒副反应,改善化疗患者的生命质量。

胸腺肽α_1对恶性肿瘤化疗患者细胞免疫功能的影响

目的观察胸腺肽1α对恶性肿痛化疗患者细胞免疫功能的影响。方法63例恶性肿瘤患者分为两组,试验细化疗期间同时子胸腺肽α1.6m g/次,皮下注射,每周2次;对照组采用单化疗。两组病例在治疗前后分别检测T淋巴细胞亚群及NK淋巴细胞活性。结果治疗后两组病人的细胞免疫功能不同(Hote lling T2检验,F=2.482,P=0.042),不能认为胸腺肽1α无法提高恶性肿瘤患者的细胞免疫功能;化疗后试验组的CD 3、NK淋巴细胞水平高于对照组,差异接近或小于检验水准(P=0.068,0.034)。结论胸腺肽1α可能改善恶性肿瘤化疗患者的细胞免疫功能。

胸腺肽a1联合抗病毒药治疗肾移植术后巨细胞病毒肺炎

目的研究胸腺肽a1对肾移植术后巨细胞病毒(CMV)肺炎的治疗效果和不良反应。方法肾移植术后CMV肺炎患者46例分为两组,组Ⅰ单独使用抗病毒药更昔洛韦,组Ⅱ联合应用胸腺肽a1和抗病毒药。结果46例患者总存活率56.52%(26/46),组Ⅱ存活率72.73%(16/22)明显高于组Ⅰ患者的41.67%(10/24)(P<0.05),两组各有1例发生急性排斥反应。结论胸腺肽a1联合抗病毒药可提高CMV肺炎的治愈率,是安全有效的抗CMV病毒肺炎的疗法。

SOX和XELOX在进展期胃癌新辅助化疗中的临床疗效比较

目的探讨SOX和XELOX在进展期胃癌新辅助化疗中的临床疗效。方法选取201 1年2月1日一2015年10月1日我院行SOX和XELOX新辅助化疗的胃癌患者75例。分析两种方案临床分期、疗效评价、手术情况、术后病理、不良反应、生存分析等情况。结果 SOX和XELOX有效率分别为47.22%和41.03%。两组在CT疗效评价、有效率、疾病控制率方面比较,差异均不具有统计学意义(P>0.05);两组DFS、OS中位生存时间,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 SOX和XELOX对进展期胃癌进行新辅助化疗均具有较高的安全性和有效性,XELOX远期疗效要优于SOX,改善患者预后。

胸腺肽α1对严重脓毒症治疗中应用临床意义

目的 探讨胸腺肽α1在严重脓毒症中的应用价值。方法 选取2014年9月~2016年10月在浙江省肿瘤医院治疗的严重脓毒症患者94例,将患者随机分为观察组（n=45）和对照组（n=49）,对照组给予常规治疗,观察组在常规治疗的基础给予胸腺肽α1,观察2组治疗前后T细胞亚群、CD14＋单核细胞人类白细胞抗原（HLA-DR）等变化。结果 观察组呼吸机使用时间和ICU治疗时间分别为（12.51±3.82）d和（15.81±3.18）d,明显短于对照组（P〈0.05）;观察组和对照组28 d病死率比较差异无统计学意义;观察组治疗后CD14＋单核细胞HLA-DR、CD3＋和CD4＋T细胞较治疗前明显改善（P〈0.05）;观察组治疗后HLA-DR、CD3＋和CD4＋分别为（36.04±8.90）%、（58.93±8.74）%和（43.20±9.90）%,明显高于对照组（P〈0.05）;观察组治疗后肿瘤坏死因子（TNF-α）、内毒素和C反应蛋白（CRP）分别为（56.40±11.78）ng/L、（27.83±9.98）ng/L和（53.20±9.73）g/m L,明显低于对照组（P〈0.05）。结论 严重脓毒症治疗中应用胸腺肽α1,可改善患者细胞免疫功能,调节炎症反应状态,缩短机械通气时间和ICU住院时间。

低剂量胸腺肽联合化疗治疗胃癌

目的 评价低剂量胸腺肽贯序免疫 -化疗治疗胸部肿瘤的作用。方法 84例胃癌在化疗前连续滴注低剂量胸腺肽 2周 ,4周重复一次 ,共 3个周期。结果 全部病人能耐受治疗 ,没有严重的毒副反应 ;低剂量胸腺肽联合化疗 3个月后 ,病人外周血CD3、CD4 、CD4 /CD8表达及NK细胞活性明显增高 (P <0 .0 1)。结论 低剂量胸腺肽联合化疗 (CDDP、EPI、5 Fu等 )对胃癌有疗效 ,毒性可耐受 ;并增强NK细胞活性 。

胸腺肽α_1联合DCF治疗晚期胃癌的临床观察

目的:观察注射用胸腺肽α_1联合DCF治疗晚期胃癌的临床效果及毒副反应。方法:60例晚期胃癌患者随机分成治疗组和对照组,治疗组30例采用DCF方案化疗联合注射用胸腺肽α1,对照组30例单独使用DCF方案化疗。结果:治疗组和对照组的有效率分别为43.3%和33.3%,两组比较有统计学意义。治疗组一般症状改善明显优于对照组,治疗组在骨髓抑制、虚弱、厌食、恶心、呕吐及黏膜炎毒副反应发生率低于对照组,两组比较有统计学意义(P<0.05),在神经毒性、感染及腹泻方面有减轻毒副反应的趋势,但没有统计学意义(P>0.05)。结论:胸腺肽α_1联合DCF方案治疗晚期胃癌,提高了化疗有效率,并能确切减轻化疗相关不良反应,改善患者体能状况,值得进一步临床研究。

胸腺法新治疗带状疱疹的疗效观察

目的观察胸腺法新治疗带状疱疹患者的临床疗效。方法将82例带状疱疹患者随机分为治疗组42例和对照组40例,两组患者均给予常规治疗,治疗组在常规治疗基础上加用胸腺法新皮下注射治疗,比较两组的临床疗效。结果治疗组患者在止疱、皮损愈合及疼痛缓解时间上均少于对照组,治疗组疗程比对照组疗程缩短,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论胸腺法新治疗带状疱疹疗效确切,且优于常规治疗方法,建议在临床推广应用。

渗透休克法从大肠杆菌中提取GST-Tα1-TP5融合蛋白

目的:从大肠杆菌中选择性抽提GST-Tα1-TP5融合蛋白。方法:采用渗透休克法从大肠杆菌中提取GST-Tα1-TP5融合蛋白,优化操作条件,并与超声破碎法进行比较。结果:优化后的渗透休克法从大肠杆菌提取GST-Tα1-TP5融合蛋白可使杂蛋白量含量相对超声破碎法降低一个数量级。结论:渗透休克法可高效提取大肠杆菌表达的GST-Tα1-TP5融合蛋白。