沉香汤治疗胃脘痛疗效及对中医证候、胃黏膜的影响

目的 研究沉香汤联合常规西医治疗胃脘痛患者的临床疗效,及其对患者中医证候和胃黏膜的影响。方法 选取惠州市中心人民医院2020年9月1日—2021年3月31日治疗的120例胃脘痛患者,将其按随机数字表法分为观察组和对照组,每组60例,对照组患者接受常规西医药物治疗,观察组患者在对照组基础上联合沉香汤治疗,比较两组患者的临床疗效、中医证候积分、胃黏膜情况以及不良反应等。结果 观察组患者治疗总有效率显著高于对照组患者[91.67%(55/60)vs 73.33%(44/60)](P<0.05);接受治疗后,两组患者各中医证候积分均显著降低(P<0.05),且观察组患者治疗后各中医证候积分均显著低于对照组(P<0.05);观察组患者治疗前后胃黏膜糜烂、出血及萎缩分别减少7例、17例、18例,改善率分别为70.00%、85.00%、87.50%,对照组患者治疗前后胃黏膜糜烂、出血及萎缩分别减少5例、16例、12例,改善率分别为55.56%、69.57%、63.64%,两组胃黏膜糜烂、出血及萎缩改善率差异无统计学意义(P>0.05);两组患者治疗期间不良反应发生率差异无统计学意义[6.67%(4/60)vs 5.00%(3/60)](P>0.05)。结论 沉香汤联合常规西医治疗胃脘痛患者临床疗效和安全性较好,可有效改善患者症状及胃黏膜情况。

蒙药清心沉香八味散对急性抑郁模型小鼠行为学及单胺类神经递质的影响

目的:观察蒙药清心沉香八味散的抗抑郁作用及对单胺类神经递质的影响。方法:将实验动物(雄性昆明种小鼠)随机分为5组,分别为空白对照组(蒸馏水)、阳性药对照组(盐酸氟西汀0.02 g/kg)及受试蒙药清心沉香八味散高、中、低剂量组(27、9、3 g/kg),各组小鼠采用灌胃方式给药,7 d后采用小鼠悬尾实验(TST)、小鼠强迫游泳实验(FST)初步评估其抗抑郁作用。FST行为学实验完成后取血浆及海马组织,采用酶联免疫吸附方法(ELISA)分别检测动物血浆及海马组织中5-HT、DA、NE的含量。结果:与空白组比较,蒙药中、低剂量组能显著缩短小鼠FST的行为绝望时间,差异具有统计学意义(P<0.05),蒙药低剂量组能显著缩短小鼠TST的行为绝望时间,差异具有统计学意义(P<0.05),蒙药清心沉香八味散低剂量组能显著升高小鼠血浆中DA水平,差异具有统计学意义(P<0.05),蒙药清心沉香八味散低、中、高剂量组能显著升高小鼠海马组织中5-HT、DA、NE的含量,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:蒙药清心沉香八味散对小鼠可能有一定的抗抑郁样作用,其作用可能与其调节单胺类神经递质的含量相关。

八味沉香散含药血清对H9c2细胞氧糖剥夺损伤的保护机制研究

目的研究八味沉香散含药血清对H9c2细胞氧糖剥夺损伤的保护机制。方法将H9c2细胞分为空白组、模型组和八味沉香散低、中、高剂量组(含药血清剂量依次为2.5、8、12 g/kg)。体外培养H9c2细胞并建立氧糖剥夺损伤模型,含药血清干预后检测细胞存活率,观察细胞形态,检测生化指标乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、呼吸链复合酶Ⅰ(ComplexⅠ)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)水平,检测细胞内活性氧(ROS)含量、线粒体膜电位和细胞凋亡情况,检测氧化应激相关蛋白[Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)、核转录因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、NADH氧化还原酶辅酶10(Ndufa10)、硫氧还蛋白(Trx)]、凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)和细胞色素C(Cytc)]的表达。结果与空白组比较,模型组细胞形态破损,LDH、CK和MDA水平均显著升高(P<0.01),CAT、ComplexⅠ、SOD、GSH-Px水平和线粒体膜电位均显著降低(P<0.01),细胞内ROS含量和凋亡率均显著升高(P<0.01),氧化应激相关蛋白(Keap1、Nrf2、HO-1、Ndufa10和Trx)和促凋亡相关蛋白(Bax、Caspase-3、Cytc)表达水平均显著升高(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平显著降低(P<0.05)。给予八味沉香散含药血清后,细胞形态改善,以上指标大部分显著逆转(P<0.05或P<0.01)。结论八味沉香散含药血清对H9c2细胞氧糖剥夺损伤有较好的保护作用,其机制与降低细胞氧化损伤、抑制细胞凋亡相关。

沉香舒郁片质量标准研究

目的:提高沉香舒郁片质量标准。方法:采用TLC法对沉香舒郁片中木香、沉香、厚朴进行薄层色谱定性鉴别;采用HPLC法同时对沉香舒郁片中陈皮及厚朴的有效成分进行定量测定。以乙腈(A)-0.2%磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱;检测波长288 nm,柱温:40℃;流速:1.0 ml/min;进样量:10μl。结果:木香、沉香及厚朴的TLC色谱图斑点清晰,与杂质斑点可有效分离,阴性样品无干扰。在选定的色谱条件下,橙皮苷在8.13~81.28μg/ml范围内呈良好线性关系(r=0.9999,n=5),厚朴酚在9.86~98.56μg/ml范围内呈良好线性关系(r=0.9999,n=5),平均回收率分别为99.8%(RSD为0.6%)和99.7%(RSD为0.3%)。结论:本试验所拟定质量标准重现性好,专属性强,可有效控制沉香舒郁片质量。

基于UPLC-QTRAP-MS/MS与网络药理学的苍降辟瘟香防治新型冠状病毒肺炎的潜在活性成分研究

目的:对苍降辟瘟香四种主要配方成分(苍术、沉香、大叶降真香、龙肝香)防治新型冠状病毒肺炎的潜在活性成分进行鉴别与筛选。方法:应用Thermo Scientiffc vanquish超高效液相色谱-Thermo Scientiffc Q-Exactive Orbitrap离子阱质谱联用鉴定苍降辟瘟香燃烧后空气中挥发物的主要化学物质和药材来源,通过TCMSP数据库获取苍降辟瘟香的活性成分与相关靶点;通过Genecards数据库获取COVID-19的相关靶点,String数据库绘制蛋白质相互作用网络(PPI),Cytoscape软件构建“化学成分/疾病-药物靶点-基因功能相互关系图”与“化学成分/疾病-药物靶点-代谢通路相互关系图”并使用Centiscape插件筛选核心靶点;David数据库对交集靶点进行GO与KEGG富集分析,Auto dock1.5.7软件与Sailvina beta 2.0插件将筛选得到的活性成分与核心靶点进行分子对接验证,Pymol软件将分子对接结果进行可视化分析。结果:苍降辟瘟香燃烧后空气中挥发物共分离出1107个不同保留时间的一级质荷比,结合质谱一二级数据库和人工鉴定确认了其中56种化合物结构,其类别主要为苯丙素、生物碱、黄酮、苷以及萜类;以OB值≥30%、DL值≥0.18为筛选条件,获得苍降辟瘟香中药物活性成分共21个,药物-疾病交集靶点共46个,核心靶点共10个;GO与KEGG富集分析预测了379个GO功能富集条目与124条KEGG代谢通路;分子对接结果证实苍降辟瘟香中主要活性成分与核心靶点具有较为稳定的结合活性。结论:苍降辟瘟香可能通过多成分、多靶点及多通路参与COVID-19的防治。

基于网络药理学从线粒体自噬途径探讨八味沉香散抗缺血性心脏病的作用机制

目的基于网络药理学结合分子对接技术及细胞实验验证,探讨八味沉香散经线粒体自噬途径抗缺血性心脏病(ischemic heart disease,IHD)的潜在机制。方法利用Swiss target prediction平台预测八味沉香散入血成分靶点;从GeneCards、NCBI、OMIM数据库中筛选缺血性心脏病、线粒体自噬相关靶点;取三者交集得到八味沉香散经线粒体自噬途径抗缺血性心脏病的潜在靶点。构建“成分-疾病-潜在靶点”网络及蛋白质相互作用网络,分别进行网络分析筛选出关键活性成分和核心靶点,并进行分子对接。利用DAVID数据库进行GO富集及KEGG富集分析。构建H9C2细胞缺氧模型,考察八味沉香散含药血清对H9C2细胞存活率、自噬水平及关键通路相关蛋白表达的影响。结果筛选得到八味沉香散经线粒体自噬途径抗IHD的关键活性成分9种,核心靶点8个;分子对接结果显示关键活性物质和核心靶点均有较好的结合活性。KEGG结果显示八味沉香散经线粒体自噬途径抗IHD的作用可能与EGFR、PI3K-Akt、MAPK、FoxO等信号通路有关。细胞实验结果表明八味沉香散可增加缺氧条件下H9C2细胞的细胞活性,明显降低细胞中LC3、p62的蛋白相对表达量,升高p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT的蛋白相对表达量。结论八味沉香散可能通过槲皮素、山奈酚、柚皮素、去氢二异丁香酚等活性成分作用于AKT1、STAT3、MAPK3,EGFR等多个靶点调控线粒体自噬发挥抗缺血性心脏病的作用,其具体机制可能与PI3K-AKT信号通路相关。

基于超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法和网络药理学的沉香化气片改善胃动力障碍作用机制研究

目的探讨沉香化气片改善胃动力障碍的作用机制。方法根据超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法(UPLC-QTOF-MS)的一级质谱和二级质谱信息,结合文献和TCMSP数据库数据,对沉香化气片活性成分进行指认。基于这些成分,结合PharmMapper,Uniport等数据库筛选沉香化气片活性成分改善胃动力障碍的潜在作用靶点,通过String数据库构建蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络;通过David数据库实现京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路和基因本体论(GO)功能富集分析;采用Cytoscape3.7.2软件进行可视化分析。结果UPLC-Q-TOF-MS技术共筛选得255个化学成分,TCMSP数据库筛选出101个交集成分,其中槲皮素、木犀草素、山柰酚、甘草查尔酮A、葛花苷元、柚皮素、芒柄花黄素、川陈皮素、异鼠李素为沉香化气片改善胃动力障碍的关键成分;前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、雌激素受体1(ESR1)、一氧化氮合酶2(NOS2)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARG)、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素6(IL-6)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、信号转导及转录激活因子3(STAT3)、白细胞介素1β(IL-1β)、血管内皮生长因子受体A(VEGFA)、表皮生长因子受体(EGFR)、促分裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)等为沉香化气片改善胃动力障碍的关键靶点,作用机制可能涉及缺氧诱导因子1(HIF-1)信号通路、信号通路、结核等。结论沉香化气片通过多成分、多靶点、多通路可缓解肠胃气机不畅的症状,为深入阐明沉香化气片作用机制及其临床应用提供了参考。

高效液相色谱法测定沉香舒郁片中沉香四醇和厚朴酚含量

目的:建立高效液相色谱法测定沉香舒郁片中沉香四醇和厚朴酚含量。方法:采用高效液相色谱法,以乙腈为流动相A,0.1%甲酸溶液为流动相B,梯度洗脱;检测波长为252 nm;柱温:30℃;流速:1.0 ml/min;进样量:10μl。结果:沉香四醇的线性范围为4.70~94.08μg/ml(r=0.9999,n=5),厚朴酚的线性范围为4.39~87.84μg/ml(r=0.9999,n=5),平均加样回收率分别为100.0%(RSD为1.0%)和99.6%(RSD为0.8%)。结论:该方法简便、准确,重复性好,可作为沉香舒郁片质量控制方法。

沉香化滞丸联合双歧杆菌四联活菌片治疗慢性阻塞性肺疾病合并胃肠功能紊乱的临床效果

目的探讨沉香化滞丸联合双歧杆菌四联活菌片治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并胃肠功能紊乱的临床效果。方法选取80例COPD合并胃肠功能紊乱患者随机分为两组各40例。除常规治疗外,对照组采用双歧杆菌四联活菌片治疗,研究组在对照组基础上采用沉香化滞丸治疗。比较两组的治疗效果、胃肠黏膜功能及不良反应发生情况。结果研究组治疗总有效率为95.00%,高于对照组的80.00%(P<0.05)。治疗后,研究组血清D-乳酸、内毒素水平低于对照组(P<0.05)。治疗期间,两组均未出现明显不良反应。结论沉香化滞丸联合双歧杆菌四联活菌片治疗COPD合并胃肠功能紊乱临床效果显著,能有效改善患者胃肠黏膜功能且安全性较高,值得临床推广应用。

基于藏药“味性化味”理论探讨拉美丸组方及功效

目的:探讨藏药拉美丸组方形成及其药用功效。方法:查阅藏医古籍文献,用文献搜索与整理的方法分析拉美丸的配方来源及其组成,应用藏药“味性化味”药性分析系统,分析拉美丸临床功效。结果:拉美丸最早来源于蒂玛丹增彭措的《甘露白玻璃》,由沉香、肉豆蔻、广枣、石灰华、木香、诃子等24味藏药材组成。药性分析显示,六味以甘、苦为主,三化味以苦化味为主,十七效以凉、钝、重、稀等为主。方剂对治疗赤巴的热性和锐性,以及隆的轻性效果良好。结论:藏药拉美丸对萨滞布病及白脉病疗效良好,可为拉美丸藏药标准制定提供参考。

沉香茶提取物的体外抗氧化和体内降血脂作用评价

本文以广东大面积种植的白木香叶为原料制成的沉香茶为研究对象,采用体外抗氧化法测定其水浸液的抗氧化能力,体内高血脂小鼠模型评价其降血脂作用。实验结果显示沉香茶水浸液具有较强的体外抗氧化能力和体内降血脂能力。其水浸液具有清除羟自由基(OH)、超氧阴离子(O2-)、DPPH自由基(DPPH)以及络合亚铁离子(Fe2+)和还原磷钼酸的能力,IC50分别为700.45±38.04、58.03±4.4、16.24±2.4、70.69±2.8、215.46±14.27 mg/mL;能明显降低高血脂症小鼠血清中TC、TG水平和升高HDL-C水平,与模型组比较,差异具有显著性(P<0.05)。

普洱茶理化品质及特征“陈香”物质基础研究

以不同贮藏年份的普洱茶为研究对象,采用国家标准分析方法和气质联用技术(GC-MS)对其理化品质和特征"陈香"的物质基础进行研究。结果表明,随着贮藏年限的增加,普洱茶中水浸出物、可溶性糖含量先降后升;茶多酚和儿茶素、氨基酸总体出现降低趋势;其他品质成分变化不显著。鉴定出醇类、酮类、甲氧基化合物、醛类和烯类等54种香气化合物。具有愉快的木香、药香等"陈香"特征的物质比对照显著增加,主要包括雪松醇、雪松烯、β-愈创烯、α-紫罗酮、β-紫罗酮、二氢猕猴桃内酯、乙酸苯甲酯、苯甲酸苯甲酯等;而具有花香的物质如芳樟醇、水杨酸甲酯、壬醛等出现降低趋势。推测陈年普洱茶特征"陈香"的物质基础主要是上述具有愉快木香、药香气味的芳香物质。

八味沉香散对心肌缺血大鼠的保护作用

目的观察八味沉香散对异丙肾上腺素所致实验大鼠心肌损伤的保护作用。方法给予SD大鼠po八味沉香散,连续10 d,第8天起ip异丙肾上腺素5 mg.kg-1,qd,连续3 d。第1次注射异丙肾上腺素后,记录Ⅱ导联心电图。末次注射异丙肾上腺素24 h,后测定心肌梗死范围。结果八味沉香散组的心电图ST段移位、T波抬高、心率变化值和心肌梗死范围明显低于生理盐水组。结论八味沉香散对异丙肾上腺素引起的心肌缺血损伤有保护作用。

藏药二十味沉香丸的质量标准研究

目的 建立常用藏药二十味沉香丸的鉴别和含量测定方法。方法 采用薄层色谱法和高效液相色谱法。结果 建立了二十味沉香丸中沉香、马钱子、诃子、红花、降香等药材的薄层色谱鉴别方法 ,并采用HPLC测定了该藏药制剂中诃子等药材中的有效成分没食子酸的含量 ,其回归方程为 :A =5 0 2 0 5C - 10 4 18(r=0 .9995 ) ,没食子酸的平均回收率为 10 0 6 4 % ,RSD =1 13% (n =5 )。结论 鉴别与含量测定方法简便、准确 ,可用于二十味沉香丸的质量控制。

藏药八味沉香散对低氧大鼠学习记忆的影响研究

目的研究在低氧下藏药八味沉香散对大鼠学习、记忆能力的影响。方法应用MORRIS水迷宫的学习记忆动物模型来观测藏药八味沉香散对低氧下大鼠空间学习、记忆能力的影响,并通过电镜图像分析和细胞形态计量研究藏药八味沉香散对神经突触可塑性的影响。结果各低氧组大鼠均出现空间学习记忆障碍,表现为MORRIS水迷宫测试潜伏期延长(P<0.05),各低氧组第1天潜伏期均明显延长,而低氧Rg1药物组和低氧BCP药物组与低氧对照组相比潜伏期逐渐缩短(P<0.05),但潜伏期都长于常氧下各组。电镜下观察到各低氧组的海马CA3区PSD厚度变薄、突触间隙增宽、突触活性区长度缩短,与各常氧组相比差异有显著性(P<0.05),低氧Rg1药物组和低氧BCP药物组与低氧对照组相比PSD厚度较厚、突触间隙较窄。结论在低氧下海马CA3区突触形态结构的变化是导致学习记忆功能减退的形态学基础,八味沉香散对低氧下大鼠海马CA3区突触形态结构的维持有一定的保护作用,对大鼠空间学习记忆有一定的促进作用。

藏药八味沉香散对急性低氧大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨藏药八味沉香散对低氧大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 W istar大鼠随机分5组,为常氧对照组、低氧组和八味沉香散高、中、低剂量组。将低氧组和八味沉香散高、中、低剂量组放入模拟海拔5 500 m的低氧低压舱内;常氧对照组和低氧组每天0.9%生理盐水灌胃,八味沉香散组每天以成人剂量的20倍、15倍和10倍灌胃,连续给药14 d,制脑缺血再灌注损伤大鼠模型,测血清血红蛋白(Hb)、红细胞压积(Hct)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮(NO)和内皮素-1(ET-1)的值。结果八味沉香散不同剂量组可显著降低ET-1含量(P<0.05),同时MDA、SOD、GSH、GSH-Px和NO与低氧组比较也有显著性差异(P<0.05)。结论八味沉香散在低氧环境下对脑缺血再灌注损伤具有保护作用。

藏药二十味沉香丸对大鼠低氧性肺动脉压力升高的干预作用

目的:观察藏药二十味沉香丸对大鼠低氧性肺动脉压力升高干预作用,从而证实ET-1参与低氧性肺动脉高压的形成。方法:将165只Wistar大鼠随机分为高原对照组、二十味沉香丸藏药组和平原对照组,于给药后第1、3、7、15、30天用生理信号采集系统记录肺动脉压并计算左右心室质量比,用ELISA方法测定血清HIF-1α和ET-1蛋白水平,用Western Blot方法测定肺组织ETA受体水平。结果:与高原对照组比较,藏药二十味沉香丸组动物肺动脉压自给药后第7天显著降低(P<0.01),自第3天左右心室比及血清HIF-1α含量显著降低(P<0.05或P<0.01),第3、7天血清ET-1含量显著降低(P<0.05或P<0.01),各时间点肺组织ETA受体表达均显著降低(P<0.01或P<0.001)。结论:ET-1是引起大鼠肺动脉压升高和右心室壁增厚的重要因素之一,其只在低氧早期发挥作用,并不参与低氧后期的肺动脉压升高。藏药二十味沉香丸能够防止大鼠肺动脉压过度升高和右心室壁增厚,其机制可能与直接抑制ET-1和ETA受体水平或抑制HIF-1α后间接引起ET-1水平下调有关。

海南沉香挥发油的气相色谱指纹图谱研究

采用水蒸气蒸馏法提取海南沉香挥发油,并对其进行GC-MS分析,建立的海南沉香药材挥发油的GC指纹图谱具有稳定性、特征性。对10批海南沉香药材进行分析,相似度为0.913-0.997。该方法可作为海南沉香药材地道性鉴定的一种新手段。

陈香普洱茶品质安全性评价与分析

为了探明普洱老茶饮用的安全性,以贮藏多年的陈香普洱茶为原料,以未渥堆发酵的普洱茶为对照,采用国家标准测定方法对其主要的品质安全性指标进行评价和分析。结果表明,在本研究范围内未检测出致病菌如黄曲霉素、致泻大肠埃希氏菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌,有1个样品检出沙门氏菌;样品农残检出值为0;重金属铅的含量在0.55 mg/kg～4.43 mg/kg范围内,除1个样品外,其余铅含量均符合茶叶卫生标准和食品中污染物限量要求;总灰分含量范围在6.176%～9.411%,水不溶性灰分含量范围在2.44%～5.217%,大部分样品的水溶性灰分占总灰分的50%以上,酸不溶性灰分含量较低,在0.161%～1.815%范围内,说明茶叶中沾染的泥沙较少,品质较好。

沉香化气胶囊对糖尿病大鼠小肠ICC和肌间神经丛的影响

目的:探讨沉香化气胶囊对糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠小肠Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)、肌间神经丛的影响.方法:将健康♂SD大鼠分为正常对照组、DM模型组、DM模型+中药组.大鼠一次性腹腔注射(ip)链脲佐菌素(STZ,60mg/kg)造模,选取成功模型,DM模型+中药组每天给予中药灌胃,模型组和正常对照组每天给予同等容量的蒸馏水,持续灌胃4wk.所有大鼠干预4wk结束后,给予印度墨汁灌胃测定小肠传输速率,利用免疫组织化学和图像分析观察十二指肠c-Kit、突触素(synaptophysin,Syn)、蛋白基因产物9.5(protein gene product 9.5,PGP9.5)的表达.结果:灌胃4wk后,DM模型+中药组小肠传输速率均比DM模型组明显增加(71.26±5.22 vs 45.52±6.42,P<0.01),仍低于对照组(71.26±5.22 vs 80.40±7.33,P<0.05);DM模型+中药组c-Kit、突触素、PGP9.5的阳性产物面积和吸光度值均比DM模型组明显增加(443.28±24.40 vs 358.83±35.03,832.33±58.78 vs 488.83±58.56,889.17±82.75 vs 445.17±64.06,0.16±0.02 vs 0.13±0.02,0.25±0.02 vs 0.16±0.01,0.24±0.02 vs 0.15±0.01,均P<0.01),仍低于正常对照组(443.28±24.40 vs 557.28±42.35,P<0.01;832.33±58.78 vs 937.67±101.23,P<0.05;889.17±82.75 vs 1050.50±90.22,P<0.01;0.16±0.02 vs 0.18±0.02,P<0.05;0.25±0.02 vs 0.29±0.03,P<0.01;0.24±0.02 vs 0.27±0.02,P<0.01).结论:沉香化气胶囊可以促进糖尿病大鼠小肠肌间神经丛c-Kit、突触素和PGP9.5的表达,提示对受损的DM大鼠小肠ICC、肌间神经丛有部分恢复作用,从而对糖尿病大鼠的胃肠动力障碍有一定的改善效应.