两种方法检测胃癌患者CHFR基因启动子区甲基化的状态

背景与目的:目前认为CpG岛甲基化导致转录抑制是恶性肿瘤发生的重要机制之一。微管抑制剂诱发有丝分裂应激时,CHFR基因能够控制细胞分裂的进行。本研究检测胃癌中CHFR基因启动子区甲基化状态,探讨该基因甲基化状态与胃癌临床病理特征的关系;并比较甲基化特异性PCR方法(methylation-specific polymerase chain reaction,MSP)和结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法(combined bisulfite restriction analysis,COBRA)在检测胃癌组织CHFR基因甲基化状态的差异性。方法:首先采用MSP方法检测64例胃癌患者胃癌组织和相对应的癌旁正常组织中CHFR基因启动子区的甲基化状态,然后采用COBRA方法检测64例胃癌患者胃癌组织中CHFR基因启动子区的甲基化状态,并将检测结果结合各病例的临床特征进行分析。结果:MSP方法检测结果显示,51.6%的胃癌组织和18.8%的癌旁正常组织中存在CHFR基因异常甲基化,两者之间的差异有统计学意义(P<0.001);CHFR基因启动子区异常甲基化状态在不同临床病理学特征(包括年龄、性别、肿瘤大小、病理分期、Borrman分型、肿瘤浸润深度、组织分化程度和淋巴转移程度)的胃癌组织和癌旁组织中的差异无统计学意义(P值均>0.05)。COBRA方法检测结果显示,肿瘤组织CHFR甲基化阳性率为42.2%(27/64),与MSP方法检测结果的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CHFR基因异常甲基化是胃癌发生过程中的频发事件,检测胃黏膜组织中CHFR基因异常甲基化状态可能有助于胃癌的诊断。对于胃癌组织CHFR基因启动子区甲基化的检测,MSP与COBRA两种方法没有明显差异。

5-氮杂-2-脱氧胞苷及曲古抑菌素A对人胃癌SGC-7901细胞生长及CHFR基因表达水平的影响

背景与目的:抑癌基因甲基化具有可逆性,相关药物可逆转甲基化使失活的基因重新表达。本研究观察去甲基化制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-dC)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对体外培养的人胃癌SGC-7901细胞活性及CHFR基因mRNA和蛋白表达水平的影响。方法:使用不同浓度的5-Aza-dC和(或)TSA处理SGC-7901细胞,分为对照组、TSA组(250 nmol/L)、5-Aza-dC组(5μmol/L)及TSA(250 nmol/L)联合5-Aza-dC(5μmol/L)组等4个组,采用台盼蓝染色法检测细胞活性,并利用RT-PCR及蛋白质印迹法(Westernblot)方法检测CHFR基因mRNA和蛋白表达的水平。结果:5-Aza-dC和TSA作用24、48、60和72 h后SGC-7901细胞活性均被抑制,且抑制率呈浓度和时间依赖性,两药联合作用更明显;SGC-7901细胞经5-Aza-dC单独或与TSA联合干预后,能提高CHFR基因mRNA和蛋白表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:5-Aza-dC和(或)TSA均能抑制细胞活性,提高CHFR基因mRNA和蛋白表达水平,两药联合的效果比单药明显增加,为临床胃癌患者的化疗方案提供了实验依据。

Chfr基因在急性白血病骨髓细胞中表达的研究

为了探讨急性白血病(AL)患者骨髓细胞中有丝分裂早期检查点Chfr基因的表达及其意义,对46例初诊未治疗的AL患者骨髓单个核细胞,用RT-PCR和免疫组织化学的方法检测Chfr基因mRNA及蛋白的表达,并与正常人骨髓单个核细胞进行对照。结果表明:免疫组织化学和RT-PCR分析显示,28例急性髓细胞白血病(AML)中的15例,18例急性淋巴细胞白血病(ALL)中的13例骨髓单个核细胞Chfr基因mRNA和蛋白的表达与正常对照相比显著下降,同时Chfr基因表达异常病例染色体检查存在核型异常。结论:急性白血病骨髓细胞有丝分裂检查点Chfr基因表达受损,可能在白血病发病中具有重要作用。

CHFR基因启动子区超甲基化在食管癌临床意义中的研究进展

CHFR是一个新的有丝分裂早前期检查点基因,在有丝分裂应激时,延迟染色体凝集和中心体分离,阻止细胞进入有丝分裂期,其表达增强细胞对应激的生存能力。研究显示,CHFR在人正常组织中广泛表达,而在肿瘤组织中表达缺失,如胃癌、子宫内膜癌、宫颈癌等。CHFR基因启动子区超甲基化是其表达沉寂的主要原因,并与肿瘤的发生发展有关,在食管癌中已有相关报道。现对CHFR基因启动子区超甲基化在食管癌的发生、诊断、治疗及判断预后上的意义做一综述。

Mechanism and pathobiologic implications of CHFR promoter methylation in gastric carcinoma

AIM： TO investigate the aberrant methylation of CHFR promoter in human gastric cancer （GC） and its impact on the expression of CHFR mRNA and protein, as well as its correlation with clinical and histological features of human GC. METHODS： Methylation-specific polymerase chain reaction （MSPCR） was used to detect the methylation status of CHFR promoter in 20 primary GC samples and paired normal gastric mucosa. The CHFR mRNA and protein expressions were investigated both by RT-PCR and by Western blotting. The CHFR protein expression in 39 GC samples was immunohistochemically examined. RESULTS： The DNA methylation of the CHFR gene was found in 9 of the 20 GC samples （45%） and the down-regulation of CHFR mRNA and protein was significantly associated with the methylation status of the CHFR gene （P = 0.006）. In 20 samples of corresponding non-neoplastic mucosa, no DNA methylation of the CHFR gene was detected. The CHFR gene methylation in poorly differentiated GC samples was significantly higher than that in well-differentiated GC samples （P = 0.014）. Moreover, the negative CHFR protein expression rate in paraffin-embedded GC samples was 55.07% （38/69）, the positive rate in poorly differentiated GC samples was 36.73% （18/49）, which was significantly lower than 65.00% （13/20） in well-differentiated GC samples （X^2 = 4.586, P = 0.032）. CONCLUSION： Aberrant methylation of the CHFR gene may be involved in the carcinogenesis and development of GC, and is the predominant cause of down-regulation or loss of CHFR mRNA or protein expression. As aberrant methylation of CHFR promoter is correlated with tumor differentiation, it may help to predict the prognosis of GC and CHFR may become a novel target of gene therapy for GC in the future.

有丝分裂前期检查点Chfr基因作用的研究进展

细胞在长期进化过程中发展出了一套保证细胞周期中DNA复制和染色体分配质量的检查机制 ,通常被称为细胞周期检查点 (checkpoint)。有丝分裂前期检查点Chfr(checkpointwithFHAandringfinger)蛋白在正常组织中广泛表达 ,其结构和功能都十分保守 ,许多研究表明Chfr在细胞分裂过程中发挥着重要作用 ,细胞分裂存在有丝分裂应激时 ,Chfr通路激活引起Plk1的泛素化并降解 ,控制Cdc2激酶的活性 ,延迟染色体凝集和中心体分离 ,阻止细胞于有丝分裂前期 ,它的表达增强细胞对应激的生存能力。本文对Chfr基因的结构 ,Chfr蛋白质的作用和功能研究进展作一综述。

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对胃癌AGS细胞CHFR基因去甲基化作用及意义

目的观察5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对胃癌AGS细胞CHFR基因去甲基化的作用,并探讨其临床意义。方法分别采用BSP和RT-PCR技术检测5-Aza-CdR处理前后胃癌AGS细胞CHFR基因启动子甲基化状态及其mRNA。结果 AGS细胞CHFR基因启动子在5-Aza-CdR处理前呈现高甲基化状态(甲基化率≥60%),其mRNA表达完全缺失;5-Aza-CdR处理后则表现为低或无甲基化状态(甲基化率≤20%),其mRNA表达恢复正常。结论 CHFR基因启动子在AGS细胞中呈高甲基化状态,5-Aza-CdR能显著逆转其CHFR基因异常甲基化,诱导CHFR基因表达,为胃癌的治疗提供新思路。

CHFR甲基化与晚期食管癌患者含紫杉醇方案化疗疗效相关性的研究

目的研究CHFR甲基化水平与晚期食管癌对紫杉醇化疗的关系。方法 100例晚期食管癌患者以紫杉醇方案化疗,最终92例患者按要求完成并进行临床疗效评价。检测CHFR基因甲基化水平与缓解率、无进展生存时间之间的关系。结果 CHFR基因在食管癌患者外周血中呈高频率的甲基化,其甲基化频率为21.7%。甲基化的患者缓解率高于非甲基化的患者(70.0%/41.7%),甲基化的患者无病进展时间长于非甲基化患者(6.3个月/5.7个月)。ECOG评分亦会影响无病进展时间。其他临床因素与缓解率和无进展生存时间无显著相关性。结论 CHFR甲基化水平可能与晚期食管癌患者对紫杉醇化疗疗效和无病进展生存时间相关。

CHFR基因与胃癌关系研究新进展

CHFR(Checkpoint with FHA and ring finger),是Scolnick和Halazonetis于2000年新发现的一种能够检测分裂期正常细胞的分裂情况及控制分裂进行的基因,是一个新的有丝分裂前期检查点基因,同时也是一种新发现的抑癌基因。CHFR编码一种具有FHA和RING区的蛋白,当微管抑制剂诱发有丝分裂应激时,这种蛋白具有延迟染色体的浓集、阻止细胞进入有丝分裂中前期的作用,在正常人组织中普遍表达,而在多种肿瘤组织中发现其表达缺失,而CpG岛的甲基化是导致CHFR表达缺失或沉默的重要机制。胃癌是世界上发病率最高的肿瘤之一,在肿瘤引起的死亡原因中占第二位。胃癌的发生过程涉及到许多基因和复杂的步骤,相关基因包括癌基因,抑癌基因,DNA修复基因,抑癌基因的功能由于基因突变、启动子的甲基化而丢失。甲基化发生于基因的启动子区时会导致基因的沉默,由此而引发肿瘤的发生。启动子区异常甲基化已经作为细胞恶变的一个独立的途径而被许多文献所报道,有研究显示胃癌的发生发展过程中也涉及许多抑癌基因的甲基化现象,其中包括CHFR基因。本文对CHFR基因的结构、编码蛋白的功能及其与胃癌关系的研究进展作一综述。

宫颈癌患者CHFR基因异常甲基化的检测

目的:探讨CHFR(checkpoint with FHA and ring finger)基因启动子异常甲基化在宫颈癌发生发展过程中的作用及其在宫颈癌早期诊断中的价值。方法:用甲基化特异性PCR方法检测42例宫颈癌组织、30例宫颈上皮内瘤样病变组织(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及20例正常宫颈组织中CHFR基因启动子区CpG岛甲基化状态。结果:宫颈癌组织及CIN中CHFR基因异常甲基化检出率分别为33.3%(14/42)和6.7%(2/30),正常宫颈组织中未检出CHFR基因甲基化;三组间CHFR基因异常甲基化发生率之间比较差异具有统计学意义(χ2=10.69,P=0.005);CHFR基因甲基化发生率与年龄、病理分级、临床分期之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CHFR基因的异常甲基化参与了宫颈癌的发生和发展过程,其甲基化的检测对宫颈癌的早期诊断有一定的价值。

胃癌组织RUNX3和CHFR基因启动子高甲基化的研究

目的:检测胃癌患者肿瘤组织及其相应的癌旁组织中RUNX3和CHFR基因启动子区域甲基化状态,并探讨其甲基化状态的改变与临床病理特征的关系。方法:将2007年3月至2007年9月间42例胃癌患者(男:女=34:8)的手术切除标本分为两组:一组是肿瘤组织,另一组是相应癌旁组织。胃癌患者术前均未行放疗和化疗,癌旁组织取自肿瘤组织5cm以外。采用酚-氯仿抽提法提取组织DNA,甲基化特异性PCR法(MSP)检测肿瘤组织及相应癌旁正常组织(各42例)中RuNX3和CHFR启动子区域甲基化状态,并用1.5%的琼脂糖凝胶对PCR产物进行电泳分析。结果:54.7%和40.4%的胃癌组织中分别存在RUNX3和CHFR基因异常甲基化,而相应的癌旁正常组织中这两个基因的甲基化率均是7.1%,癌组织中RUNX3和CHFR基因的异常甲基化率显著高于相应的癌旁正常组织(PRUNX<0.05,PCHER<0.05)。胃癌组织中该两基因的甲基化与肿瘤大小显著相关(PRUNX3<0.05,RCHFR<0.05),但与患者年龄(PRUNX3=0.711,RCHER=0.845)、性别(PRUNX3=0.764,PCHER=0.849)、肿瘤浸润深度(PRUNX3=0.276,RCHER=0.542)、组织分化程度(PRCNX3=0.491,RCHFR=0.695)、病理分期(PRUNX3=0.555,RCHER=0.237)以及淋巴结受累(PRUNX3=0.155,RCHER=0.124)等临床病理特征无关。结论:RUNX3和CHFR基因启动子区的异常甲基化是胃癌发生发展中的频繁事件,在胃癌的发生中具有肿瘤特异性。通过检测胃黏膜中RUNX3和CHFR的甲基化状态,对于胃癌的早期诊断具有一定的参考价值。

CHFR基因甲基化与消化道肿瘤发生及对化疗药物敏感性的研究新进展

CHFR是一个新的有丝分裂前期检查点基因,同时也是一种新发现的抑癌基因。研究发现CHFR在正常组织中广泛表达,在癌组织中却频繁缺失,而启动子CpG岛的甲基化是导致CHFR表达缺失或沉默的重要机制,由此而引发肿瘤的发生。文章将对CHFR基因甲基化与消化道肿瘤的发生以及对化疗药物敏感性的研究进展作一综述。

大肠癌FHIT和CHFR基因甲基化状态分析

目的:分析大肠癌组织中FHIT和CHFR基因启动子区甲基化水平及其临床意义。方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR,MSP)技术检测46例大肠癌及癌旁正常组织的FHIT和CHFR基因启动子区甲基化状态。结果:大肠癌组织的FHIT和CHFR基因甲基化率分别为54.35%、49.15%,高于癌旁组织13.04%、8.69%,组间差异均有统计学意义(P<0.05),FHIT和CHFR基因甲基化状态与分化程度、淋巴结转移有显著相关性(P<0.05),与年龄、性别、肿瘤部位、Dukes分期无相关性(P>0.05)。结论:FHIT和CHFR基因启动子区的甲基化可能与大肠癌的发生、发展及预后相关。

有丝分裂前期检查点CHFR基因的作用

CHFR是一个新的有丝分裂前期检查点基因，定位于染色体12q24．33，CHFR是Polo样激酶1（PLK1）的泛素连接酶。CHFR延迟染色体凝集、阻止细胞由有丝分裂早前期进入中前期。研究证实，CHFR是一个抑癌基因，CHFR表达沉默，对细胞周期的正常调控功能失活，最终导致肿瘤发生。阐明CHFR在肿瘤中的作用机制将为肿瘤的临床治疗提供一定的参考价值。

5-Aza-dC和TSA对人喉癌细胞系中CHFR基因启动子甲基化及mRNA表达水平的影响

目的:探讨5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dC)和制霉菌素A(TSA)对人喉癌细胞系中CHFR基因启动子区甲基化与mRNA表达水平的影响。方法:采用荧光定量PCR技术和甲基化特异性PCR技术检测5-Aza-dC和TSA处理前后的Hep-2人喉癌细胞系基因CHFR启动子区甲基化与mRNA表达水平的变化。结果:在对照组Hep-2人喉癌细胞系中CHFR基因启动子区显示DNA甲基化,用5-Aza-dC作用后DNA甲基化程度明显减弱,mRNA表达量上调(1.75±0.21);用TSA作用后DNA甲基化程度和mRNA表达量(1.05±0.13)无明显变化。联合使用5-Aza-dC和TSA后DNA甲基化程度明显减弱,mRNA表达量明显上调(2.15±0.18)。结论:CHFR基因启动子区DNA甲基化在喉癌的发生、发展中是一个频发事件,是导致其mRNA表达下调的主要原因,5-Aza-dC单独应用和联合TSA能够逆转DNA甲基化状态,从而调控其基因表达,为临床使用药物治疗喉癌提供了新思路。

儿童B细胞性非霍奇金淋巴瘤中CHFR的表达及其作用机制

目的探究儿童B细胞性非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)中CHFR(check point with FHA and ring finger)基因表达及其作用机制及临床病理特征。方法选择B-NHL组织90例(B-NHL组)和淋巴结反应性增生组织50例(对照组)作为研究对象,选择荧光定量PCR方法对样本进行检测,对其CHFR基因mRNA表达水平进行评估。结果 1B-NHL组CHFR基因mRNA表达量明显低于对照组,数据差异有统计学意义(t=-3.346,P<0.05);2B-NHL组CHFR基因mRNA表达量在性别、有无全身症状、乳酸脱氢酶水平以及ECOG评分项目中进行比较,各组间数据差异均无统计学意义(P>0.05);3将B-NHL患儿进行Ann/Arbor分期,Ⅰ+Ⅱ期患儿CHFR基因mRNA表达量明显高于Ⅲ+Ⅳ期患儿,差异有统计学意义(P<0.05)。对B-NHL患儿进行IPI评分,0-1分组患儿CHFR基因mRNA表达量明显高于2-5分组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在儿童B-NHL发病过程中,CHFR表达水平发挥一定作用,CHFR作用机制与B-NHL恶性程度及进展具有相关性。

CHFR基因在B细胞淋巴瘤细胞中的表达及意义(英文)

目的:探讨CHFR基因在B细胞淋巴瘤Raji细胞中的表达,以及CHFR基因甲基化对Raji细胞增殖和凋亡中所产生的影响。方法:体外培养人B细胞淋巴瘤细胞株Raji细胞,用不同浓度的去甲基化试剂5-氮杂-2脱氧胞苷处理Raji细胞株,通过RT-PCR检测CHFR基因表达水平的变化,通过MS-PCR检测CHFR基因甲基化变化,CCK法及流式细胞术检测Raji细胞增殖及凋亡变化。结果:CHFR基因在Raji细胞中出现弱表达,经去甲基化试剂处理后CHFR基因表达水平增高,随药物浓度增加Raji细胞的抑制率及凋亡率增高。结论:5-氮杂-2脱氧胞苷可以恢复CHFR基因表达水平,抑制Raji细胞的增殖,促进凋亡。CHFR基因在细胞增殖起负向调控的作用。

B细胞性非霍奇金淋巴瘤中CHFR mRNA的表达与其临床病理特征关系的研究

目的:探讨CHFR(checkpoint with FHA and ring finger)基因在B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)中的表达水平及其与临床病理特征之间的关系。方法:采用荧光定量PCR方法检测81例B细胞非霍奇金淋巴瘤组织和38例淋巴结反应性增生组织(RH)CHFR mRNA的表达水平。结果:①81例B-NHL组织中低水平表达CHFR mRNA,其中2例表达缺失;而在淋巴结反应性增生组中该基因全部表达,差异有统计学意义(P<0.05)。②B-NHL患者中I+II期组和III+IV期组CHFR mRNA表达存在差异,III+IV期表达水平低于I+II期,差异有统计学意义(P<0.05);B-NHL组按IPI评分分0-1分组和2-5分组,高评分组CHFR mRNA表达量低于低评分组,差异具有统计学意义(P<0.05);而CHFR mRNA表达量与年龄、性别、有无症状、LDH水平及ECOG评分无相关性。结论:CHFR表达水平的降低在非霍奇金淋巴瘤的发生过程中具有一定作用,并与其恶性程度及进展相关。

5'-Aza-CdR对B细胞淋巴瘤的抑制作用及对瘤细胞CHFR表达和甲基化的影响

目的:探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5'-Aza-Cd R)对人伯基特淋巴瘤Raji裸鼠移植瘤的抑制作用,以及对瘤组织中CHFR表达和甲基化的影响。方法:1皮下接种Raji细胞悬液构建荷瘤裸鼠模型18只,并随机分为实验组和对照组,分别予腹腔内注射等体积的5'-Aza-Cd R(1μg/g)及生理盐水,计算肿瘤体积大小,绘制肿瘤生长曲线,24天后比较两组移植瘤体积大小和重量。2分别从移植瘤组织中提取DNA及RNA,应用实时荧光定量PCR检测CHFR m RNA的表达,甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测CHFR基因甲基化情况。结果:1实验组移植瘤生长速度较缓慢。实验结束时,实验组移植瘤体积、重量与对照组相比,差异有显著统计学意义(P<0.01)。2实验组瘤细胞中CHFR m RNA的表达水平(3.69±1.20)与对照组(1.04±0.30)相比,差异有显著统计学意义(t=3.94,P<0.001)。3实验组中的甲基化条带与对照组相比明显变暗,同时出现非甲基化条带,对照组中CHFR基因启动子只有甲基化条带被扩增。结论:5'-Aza-Cd R能抑制人伯基特淋巴瘤的生长,诱导瘤细胞CHFR m RNA表达增加,其机制可能为5'-Aza-Cd R使甲基化的CHFR启动子发生去甲基化。