Manganese enhances the expression of the manganese superoxide dismutase in cultured primary chick embryonic myocardial cells

In the present study, the effect of manganese（Mn） on antioxidant status and the expression of the manganese superoxide dismutase（MnSOD） gene in cultured primary myocardial cells collected from the chick embryos was investigated. The hypothesis that Mn supplementation would enhance the expression of MnSOD in cultured primary myocardial cells of chick embryos was tested. Eggs collected from Mn-depleted Arbor Acres laying breeder hens were incubated for 10 days and then myocardial cells were isolated and cultivated for 8 days. The embryonic myocardial cells on day 6 were treated with Mn in the cell culture medium at different time points when the proportion of cells showing spontaneous contraction was over 95% after the 3-day primary culture. A completely randomized design involving a 3 Mn levels（0, 0.5 and 1.0 mmol L^（-1））×3 incubation time points（12, 24 and 48 h） factorial arrangement of treatments（n=6） was used in the current experiment. The results showed that MnSOD activity and m RNA expression level were induced by Mn and increased with incubation time, which supported the hypothesis that Mn would enhance the expression of the MnSOD gene, and thus might protect myocardial cells from oxidative stress during the chick embryonic development.

培养中E8鸡胚前脑5-羟色胺免疫反应神经细胞的鉴定

本研究采用免疫细胞化学PAP方法,对培养4天的E_8鸡胚前脑5-羟色胺(5-HT)免疫反应神经细胞的表达进行研究。发现生长在基板蛋白(LN)支持物上的前脑细胞,98％为神经特异性烯醇酶(NSE)免疫反应阳性细胞,证明为神经细胞;其中部分神经细胞显示5-HT免疫反应强阳性,约占培养神经细胞的10.4％,大多数细胞为多突或双极的形态学特征。为了要了解其余2％的NSE免疫反应阴性细胞是否为胶质细胞,我们以胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体做胶质细胞特异性染色,阳性细胞为2％,与上述结果一致。

在体和离体的鸡背根节神经细胞5-羟色胺的免疫组织化学研究

用PAP免疫组织化学方法研究了鸡胚和雏鸡背根节内5-HT神经细胞的形态与胚胎发育,并在离体细胞培养条件下研究了靶周围组织(皮肤)对其胚胎发育的影响。在鸡腰骶部背根节,5-HT免疫反应阳性细胞最先出现于鸡胚13d(E_(13)),占0.4%;孵出后2d(AH_2)占6.2%。阳性细胞主要为大的A类细胞和极少的小B类细胞。免疫反应阳性的周围神经末梢位于皮肤和跟腱中。取自E_9鸡胚的背根节细胞培养7d后有部分出现5-HT阳性免疫反应,取自E_6鸡胚的背根节细胞培养10d仍为阴性反应;然而,当取自E_6鸡胚的背根节细胞与皮肤组织联合培养10d后,则出现5-HT阳性免疫反应细胞。本文还对脊髓5-HT细胞的出现进行了讨论。

鸡肠上皮细胞的分离及原代培养方法

取18日龄鸡胚，研究鸡肠上皮细胞（IEC）分离及原代培养的方法。结果表明：较好的分离条件是肠组织经0.1g／L中性蛋白酶和300U／mL胶原酶Ⅺ联合消化；较佳的培养条件是细胞在含2．5％～5％胎牛血清的DMEM培养基中，39℃、5％～7．5％CO2下培养，IEC可在1～2d贴壁，6～7d明显增殖，11～12d汇合成片。

鸡胚破骨细胞的分离培养与鉴定

从18日龄鸡胚长骨(股骨和胫骨)中机械分离破骨细胞于盖玻片和骨片上培养,以建立鸡胚破骨细胞体外培养方法。结合倒置相差显微镜、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、甲苯胺蓝染色及透射电镜(TEM)和扫描电镜(SEM)对其形态和功能进行观察鉴定。结果表明,直接分离的细胞具有典型的破骨细胞的形态特点:属多核大细胞,TRAP染色阳性,能在骨片表面形成吸收陷窝。结论:鸡胚长骨机械分离法可获得一定数量并具有骨吸收活性的破骨细胞。

用鸡胚和MDCK细胞分离流感病毒的实验研究

目的 通过两种分离流感病毒方法的比较 ,提高流感病毒分离率和流感监测效果。方法 对 5 0 0份咽拭子标本同时采用MDCK细胞培养法和鸡胚双腔培养法分离。结果 细胞培养法分离流感病毒 35株 ,分离率为 7% :鸡胚双腔培养法分离流感病毒 12株 ,分离率为 2 4 %。共 35株病毒株 ,其中A3 型 15株 ,S型 2 0株。结论 流感病毒分离中 ,细胞培养法比鸡胚培养法敏感 ,同时用两种方法培养 ,可明显提高流感病毒分病率。

小鼠牙胚的鸡胚培养模型的建立

目的 采用鸡胚建立一种新的小鼠牙胚体内培养模型。方法 取 15d龄的昆明胎鼠下颌第一磨牙牙胚 ,将其用钨丝固定于孵化 4～ 5d(翼芽期 )的鸡胚内 ,继续孵化 10d后 ,终止培养并取材 ,进行苏木精 -伊红染色 ,常规组织学观察。结果 小鼠牙胚在鸡胚内可继续生长发育 ,从帽状期进入到钟状末期 ,镜下可见分化成熟的成牙本质细胞、成釉细胞和分泌的基质。结论 以翼芽期鸡胚作为小鼠牙胚体内培养的宿主 ,可以保持其发育 ,再现牙齿形成过程中的细胞分化、形态发生的生理过程。

儿茶提取物抗甲型流感病毒作用的实验研究

目的 研究从中药儿茶中提取的药物成分抗甲型流感病毒的作用。方法 用狗肾传代MDCK细胞培养法观察儿茶提取物抑制甲型流感病毒的致细胞病变作用;用鸡胚培养法观察儿茶提取物抑制甲型流感病毒增生的作用;用红细胞凝集试验观察儿茶提取物体外直接抑制甲型流感病毒的作用。结果 1)儿茶提取物的细胞毒性较低,可有效抑制甲型流感病毒感染细胞(P<0.05);2)儿茶提取物在一定范围内可明显抑制甲型流感病毒在鸡胚内的增生,经红细胞凝集试验测定抑制病毒效价为8倍或8倍以上;3)儿茶提取物直接与甲型流感病毒作用后可抑制病毒血凝效价达16 倍以上。结论 儿茶提取物具有很好的抗甲型流感病毒的作用。

背侧抑制性轴突导向蛋白抑制鸡胚脊髓神经嵴细胞的迁移

目的:初步探讨背侧抑制性轴突导向蛋白(draxin)在鸡胚脊髓神经嵴细胞迁移过程中的作用。方法:应用神经嵴细胞特异性标记物HNK-1免疫组化染色检测不同发育阶段正常鸡全胚脊髓神经嵴细胞迁移特性;鸡draxin表达载体质粒转染COS7细胞株,收集上清作为条件培养液。分别用含draxin的条件培养液处理体外培养的鸡全胚和鸡胚脊髓神经管,观察在体和离体条件下draxin对脊髓神经嵴细胞迁移特性的影响。结果:HH12-13到HH18-19阶段正常鸡胚脊髓发育过程中,神经嵴形成明显的从头侧到尾侧的渐进性、节段性迁移特性;draxin对体外培养的全胚和神经管内神经嵴细胞的迁移均具有明显抑制性调控作用。结论:Draxin抑制早期鸡胚脊髓神经嵴细胞的迁移。

鸡肠上皮细胞原代培养与鉴定

为了探讨鸡肠上皮细胞体外分离培养方法,进一步研究鸡源志贺菌Ipa C毒力蛋白在鸡肠上皮细胞上的受体蛋白分子,试验分别无菌取14,16,18日龄鸡胚肠组织,用300 U/m LⅪ型胶原酶和0.1 mg/m LⅠ型中性蛋白酶混合搅拌消化25 min,用壁差法纯化鸡肠上皮细胞,贴壁时间差为3 h,分别种植于20%FBS包被过的和未包被过的一次性塑料细胞培养瓶中,在倒置显微镜下观察细胞生长状态,透射电镜下对培养细胞进行鉴定。结果表明:采用16日龄鸡胚肠组织用Ⅺ型胶原酶和Ⅰ型中性蛋白酶联合消化25 min,可获得较多的肠隐窝单位,肠上皮细胞在20%FBS包被过的一次性细胞培养瓶中贴壁效果良好,细胞生长状态良好;透射电镜下可见鸡肠上皮细胞的微绒毛,鉴定为鸡肠上皮细胞。

鸡胚前脑细胞在各种支持物特别是人羊膜基膜上生长的定量研究

作者采用Ⅰ型胶原、人羊膜基膜(HABM)基质面、Fibronectin(FN)、多聚鸟氨酸(PO)、PO+FN、PO+Laminin(LN)、鼠尾胶原和 HABM 上皮面作为8天鸡胚前脑细胞生长的支持物,观察这些支持物对前脑细胞生存生长的影响。前脑细胞以每个孔不同的细胞密度在 PO、LN 和HABM 上皮面培养。发现每个孔4×10~5细胞密度细胞生长最好。用 MTT 做为线粒体脱氢酶底物的自动比色法,对前脑细胞在各种支持物上的生长进行了定量测定。结果表明,所测光密度值(OD)与细胞生存、生长成正比,且 HABM 上皮面是前脑细胞生长最好的支持物。各种支持物促进前脑细胞生长的顺序浓次是:HABM 上皮面>鼠尾胶原>PO+LN>PO+FN>PO>FN>HABM 基质面>Ⅰ型胶原。HABM 上皮面比基质面促进前脑细胞生长作用明显强(P<0.01);鼠尾胶原比Ⅰ型胶原强(P<0.05);PO+LN 比 PO 作用强(P<0.05)。这提示 LN 很可能是 HABM、鼠尾胶原和 PO+LN 中促进神经生长的主要活性因子。

一种可用于肿瘤实验模型的半无壳鸡胚培养技术

目的:建立一种可以用于肿瘤体内研究的大样本模型。方法:将瘤细胞接种于10d龄的鸡胚尿囊膜上,重新封闭后7d取材。结果:90.9%的尿囊膜上出现明显的肿瘤。结论:该方法可用于肿瘤体内实验的大样本研究,为肿瘤及其微循环研究提供了简便、经济的模型。

新生家兔颈上神经节双核神经细胞的数目

本文采用计数方法,研究了新生家兔颈上神经节双核神经细胞的数量。出生后的双核神经细胞占节细胞总数的31.4%,出生后100天增至41.4%。由计数推测,双核神经细胞系来自单核神经细胞的相互融合,或者由于无丝分裂的结果。

EHF病毒在传代鸡胚上的实验观察

本文报道了用已知EHFV seoul株接种9～10d龄鸡胚后鸡胚出现严重局限的出血斑;ELISA试验显示感染鸡胚尿囊液和对照鸡胚尿囊液OD值之比>2.1;免疫荧光试验在感染鸡胚心、脑、肺、肝、肾组织印片细胞浆内可见不同程度荧光颗粒。

柔嫩艾美耳球虫体外培养方法与影响因素

鸡球虫的体外培养方法有鸡胚培养和细胞培养两种,即球虫在鸡胚和体外培养细胞中完成从子孢子到卵囊的内生性发育过程。体外培养对深入研究球虫学及球虫病学具有重要的作用和意义。本文从细胞和鸡胚两个方面对球虫体外培养进行分析和讨论,以便为球虫病的研究提供技术支持。

软骨细胞培养液对鸡胚绒毛尿囊膜血管抑制效应的研究

目的 检测软骨细胞培养液中是否存在抑制血管生长的因子。方法 用酶消化、分离鸡胚关节软骨细胞 ,体外单层培养 ,收集细胞培养液。采用鸡胚绒毛尿囊膜实验检测该培养液对血管的抑制效应。结果 加软骨细胞培养液的实验组血管数为 2 75± 0 99且血管较细、分支少 ;不加样的对照组血管数为 4 5± 1 0 8且血管较粗、分支多。两组有显著差异 (P <0 0 5 )

鸡胚培养与嵌合体鸡的制备

目的 探讨自X期鸡胚培养方法 ,制备嵌合体鸡。方法 分离供体麻鸡种蛋的胚盘细胞 ,注入受体来航鸡种蛋胚盘 ,然后用以下两种方法培养鸡胚 :①钝端开窗法 ,沿鸡蛋气室边缘开口 ,内壳膜开小孔 ,注射胚盘细胞后再封口 ,置孵化器内 ,温度 38℃ ,翻蛋角 90° ;②两次倒蛋法 ,胚盘细胞注入受体蛋后 ,倒入代用蛋壳Ⅰ ,置孵化器内 ,温度 38℃ ,翻蛋角 90° ,72h后 ,倒入代用蛋壳Ⅱ ,改翻蛋角 30°。结果 用钝端开窗法注射 83只种蛋 ,出雏 35只 (4 2 2 % ) ,表型嵌合体 7只 ,3只存活 ;用两次倒蛋法 ,注射 72只种蛋 ,出雏 10只 (13 9% ) ,表型嵌合体 5只 ,1只存活。结论 钝端开窗法较经典的两次倒蛋法出雏率明显提高 ,用该方法制备嵌合体鸡更为方便可行。

胚胎毒理体外实验及雄性生殖毒理实验研究概述

寻找并建立简便、快捷、能真实准确的反映化学物质或药物对人类生殖健康危害程度的实验方法是目前国内外研究的热点,胚胎毒理体外实验及雄性生殖毒理实验是评价化学物质致畸的两种重要方法。本文主要介绍了这两种方法在评价化学物质危害性方面近几年国内外的研究应用及其利弊。

第X期至“蚊虫珠”期鸡胚的易壳培养

将发育至第 X期的鸡胚转入代用蛋壳内，分为 4组分别添加蛋清至满或空余一定气室，正立或倒置孵化，观察鸡胚发育至“蚊虫珠”期胚胎的比率。结果发现鸡胚仅在代用蛋壳气室充盈无气泡、并与壳膜充分接触时， 85％ (34/40)的鸡胚能发育至“蚊虫珠”期。

实时荧光定量RT-PCR、细胞培养法和鸡胚培养法在流感检测中的对比分析

目的比较本实验室已有的3种流感病毒检测方法的差异,以确定它们在不同情形下的适用方向。方法通过实时荧光定量反转录PCR、细胞培养和鸡胚培养3种方法同时检测488份流感样病例(ILI)鼻咽拭子样本,计算出它们的灵敏度和特异度,并进行统计分析。结果实时荧光定量RT-PCR、细胞培养和鸡胚培养的阳性检测率分别为16.80%、6.76%、3.07%;相对于实时荧光定量RT-PCR,细胞培养的灵敏度为40.24%,特异度为100.00%,鸡胚培养的灵敏度为18.29%,特异度为100.00%;与细胞培养相比,鸡胚培养的灵敏度为45.45%,特异度为100.00%。结论3种方法在灵敏度方面差异很大,但在特异性上没有差异。由于实时荧光定量RT-PCR具有很高的灵敏度,并且检测速度快,适用于暴发疫情的应急检测;细胞培养和鸡胚培养作为经典的病毒分离方法,可以获得流感毒株,用来开展抗原性、基因特性和耐药性等深入研究。