Anti-leukemic and anti-angiogenic effects of D-Limonene on K562-implanted C57BL/6 mice and the chick chorioallantoic membrane model

Background: D-Limonene, a monoterpene from citrus fruit has been found to have chemopreventive and chemotherapeutic activities in various types of cancers. In this study, we evaluated the in vivo effect of D-Limonene on a K562-induced model of chronic myeloid leukemia(CML) in C57 BL/6 mice.Method: The tail vein injection model of K562 cells in immunocompromised C57 BL/6 mice was developed and evaluated for characteristics of the disease. The mice were treated with D-Limonene and evaluated for haematological parameters. We also evaluated the effect of D-Limonene on angiogenesis using the chick chorioallantoic membrane(CAM) assay.Results: In a complete blood count, a significant dose-dependent reduction in white blood cell, neutrophil and lymphocyte counts, but an elevation in red blood cell count and haemoglobin content was observed with D-Limonene treatment compared to the disease control or untreated group. In the CAM assay, D-Limonene produced a significant dose-dependent reduction in number of blood vessels in treatment groups compared to the vehicle-treated group.Conclusion: These studies suggest promising anti-leukemic and anti-angiogenic effects of D-Limonene in the treatment of CML.

水蛭、斑蝥对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的影响

目的研究中药水蛭、斑蝥对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的影响。方法将12只Wistar大鼠随机分为水蛭组(高低剂量组)、斑蝥组(高低剂量组)、血清组和空白组,中药水蛭、斑蝥各制成水煎液,灌胃7d,采血清备用。建立6d鸡胚绒毛尿囊膜血管模型,观察各组血清对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的影响。结果水蛭高剂量组有明显地抑制新生血管数量的作用,与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05);斑蝥高、低剂量组与空白组比较,亦能较强地抑制新生血管数(P<0.05);水蛭、斑蝥高低剂量组有抑制血管生成面积的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论虫类中药水蛭、斑蝥对CAM血管生成有一定的抑制作用。

科罗索酸的抗肿瘤作用及其对CAM和YSM血管生成的影响

目的探究科罗索酸(corosolic acid,CRA)的抗肿瘤作用及其对鸡胚绒毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)和卵黄囊膜(yolk sac membrane,YSM)血管生成的影响。方法 MTT法检测CRA对肺癌细胞A549增殖的影响。将生物发光标记的人肺癌细胞A549接种到裸小鼠体内,建立生物发光标记的裸小鼠荷瘤模型,采用IVIS小动物活体成像系统检测小鼠体内肿瘤生长情况。采用鸡胚孵化实验,观察CRA对CAM和YSM血管生成的影响。结果 CRA对A549增殖抑制的IC_(50)值为26.8μg/mL。荷瘤动物试验结果表明:CRA对A549实体瘤有显著的抑制生长作用(P<0.01)。在鸡胚孵化实验中,CRA可明显降低CAM和YSM血管生成。结论 CRA对A549具有一定的治疗作用,其作用机制可能与抑制肿瘤组织中血管生成有关。

改良CAM移植瘤模型的制备及其对肿瘤血管新生抑制药物的筛选效果

目的：以改良方法在鸡胚绒膜尿囊膜（chickchorioallantoicmembrane，CAM）上接种人成神经胶质瘤U87细胞制备移植瘤，验证改良模型筛选抗肿瘤血管新生药物的有效性和可行性。方法：将鸡胚种蛋随机分为2组，分别使用传统方法与改良方法建立CAM-U87移植瘤模型；改良方法在鸡胚孵育中增加9—16h的开窗适应期，再将特制的硅胶圈放置在CAM组织-级血管的半侧；硅胶圈内接种U87细胞建立CAM—U87移植瘤模型。模型的硅胶圈内分别加入经典抗血管新生药物沙利度胺（50、100、200μg／ml）和自主研发抗血管新药G386，以DMSO为对照；体视显微镜观察肿瘤形态，H—E染色法观察瘤组织新生微血管密度（microvesseldensity，MVO），原位杂交（insituhybridization，ISH）技术检测血管标记物VEGFR2的表达。结果：成功制备改良CAM—U87细胞移植瘤，改良模型不影响CAM本身的血管生成，其瘤细胞接种成功率较传统模型显著升高[（70．00±4．226）％vs（41．25±5．154）％；t=4．314，P=0．0007]，移植瘤体积显著增大[（60．20±6．012）vs（15．97±2．403）mm3；t=6．012，P〈0．0001]。沙利度胺和G386两药均能显著抑制移植瘤组织中的血管形成，使瘤组织中MVD显著降低[沙利度胺200μg／ml时（15．85±1．15）％vs（29．80±4．16）％；t=2．49，P=0．0474]、VEGFR2表达明显减少。结论：改良方法成功制备CAM—U87移植瘤模型，经沙利度胺和G386验证，该模型对抗肿瘤血管新生药物的筛选具有良好的有效性和可行性。

丹参酮ⅡA对CAM血管生成影响的实验研究

目的探讨丹参酮ⅡA(TsⅡA)对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型血管生成作用的影响。方法将鸡胚随机分为生理盐水组、溶媒对照组、bFGF组、TsⅡA0.005mol/L组、TsⅡA0.010mmol/L组、TsⅡA0.015mmol/L组,检测尿囊膜的血管增生程度。结果①各组浓度的TsⅡA均具有较明显的促血管新生作用,与生理盐水组和溶媒对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);TsⅡA0.010mol/L组和TsⅡA0.015mol/L组与bFGF组相比,差异无统计学意义(P>0.05);②具有一定的剂量依赖关系:TsⅡA0.010mol/L组与TsⅡA0.005mol/L组相比,差异有统计学意义(P<0.05),但TsⅡA0.010mol/L组与TsⅡA0.015mol/L组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论活血化瘀中药单体——TsⅡA可促进CAM的血管增生,具有一定的促血管新生作用。

人骨肉瘤细胞系OS-732CAM移植瘤中VEGF、bFGF的表达及意义

目的 :研究人骨肉瘤细胞系OS 732血管生成相关作用。方法 :应用鸡胚绒毛尿囊膜模型 ,通过解剖显微镜及透射电镜观察该细胞系促血管生成特点 ,并以免疫组化方法检测人骨肉瘤细胞系OS 732鸡胚绒毛尿囊膜移植瘤中血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子 (Basicfibroblastgrowthfactor ,bFGF)的表达。结果 :该细胞系具有较强的诱导血管生成能力 ,解剖显微镜下可见血管辐辏现象 ,透射电镜下可见新生血管壁由单层内皮细胞构成 ,内皮细胞裂隙增宽 ,基底膜不完整 ,缺乏平滑肌成分 ,移植瘤组织中VEGF和bFGF均呈阳性表达 ,其中VEGF呈高表达。结论 :肿瘤诱导的新生血管在病理、生理及形态功能方面都具有特征性 ,其诱导血管生成过程中可能有多种血管生长因子的共同参与 ,针对血管生长因子为靶点进行抗血管生成治疗对改善骨肉瘤预后可能具有重要意义。

鸡胚尿囊膜移植瘤模型的优选及HepG2-CAM模型生物学特性研究

目的比较四种肿瘤瘤株鸡胚尿囊膜(CAM)移植瘤模型,优选出最佳移植瘤株,研究其生物学特性。方法分别将4种瘤株接种于CAM上,观察各自鸡胚存活、瘤株成活、成瘤和诱导血管生成情况等各项指标。结果四组间鸡胚存活、诱导CAM血管生成均无显著差异,但是人肝癌HepG2细胞组成瘤率最高(P<0.05),为最佳移植瘤株。结论 HepG2-CAM最佳接种细胞数为8×106个/只鸡胚,最长生长周期为接种鸡胚后10 d,最佳实验期为接种鸡胚后8 d。

Establishment of a transplantation tumor model of human osteosarcoma in chick embryo

Objective: We established a transplantation tumor model of human osteosarcoma in chick embryo, studied its morphological and biological characteristics, and observed its dynamic process of angiogenesis induction so that a simple and practical model can be provided for studying osteosarcoma. Methods: Human osteosarcoma cells at different concentrations were inoculated in chorioallantoic membrane (CAM) of chick embryos at different embryonic ages to observe the factors affecting the survival of the transplanted osteosarcoma in chick embryo, growth characteristics of the transplantation tumor, and the morphological characteristics and biological characteristics of the transplantation tumor. Results: The transplantation tumor model of human osteosarcoma in chick embryo was successfully established. It was found that the transplantation tumor was easy to grow and it showed strong angiogenesis-inducing effects. Under the light microscope, the transplantation tumor showed a similar tissue structure to human osteosarcoma. Conclusion: It is feasible to establish a transplantation tumor model of human osteosarcoma in chick embryo. The model can be easily duplicated with a simple operation, which provides a useful animal model for studying osteosarcoma.

神经母细胞瘤动物模型研究进展与应用

神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)是儿童最常见的实体恶性肿瘤,居我国儿童肿瘤发病率第四位,占儿童肿瘤死亡人数的15%,高危患者存活率低。目前对于NB的发病及药物治疗机制知之甚少。NB动物模型可以表征NB发展特征,是研究预防和治疗NB的重要工具,然而尚未有一种动物模型可以模拟人类NB的所有特征。本文介绍了当前研究较多的几种NB动物模型(小鼠模型、鸡胚绒毛尿囊膜模型和斑马鱼模型),并对每种NB动物模型的种类、构建方法、特征、优缺点及研究进展做了详细阐述,同时对NB的应用方向及前景进行概括,以期为NB动物模型构建和NB治疗等提供理论依据。

姜黄素具有抑制血管生成与诱导肿瘤细胞凋亡双重作用

目的 探讨姜黄素的抗肿瘤机制。方法 采用鸡胚绒毛尿囊膜模型观察姜黄素对血管生成的影响 ;利用培养的肿瘤细胞SMMC 772 1,采用电子显微镜及流式细胞仪观察姜黄素诱导SMMC 772 1细胞凋亡的作用。结果 姜黄素能明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜内的血管生成 ,2 0 μmol·L-1的姜黄素即可诱导SMMC 772 1细胞凋亡。结论 姜黄素的抗肿瘤机制是多方面的 。

通心络促血管生成作用的实验研究

目的 探讨中药通心络对鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)模型血管生成作用的影响。方法 运用血清药理学的方法制备药物血清 ,鸡胚随机分为空白血清组、贝复济组及通心络大、小剂量组 ,检测尿囊膜的血管增生程度。结果 通心络大剂量组CAM的血管增生数明显高于空白血清组 (P <0 .0 5) ,而与贝复济组无明显差异 (P >0 .0 5) ;通心络小剂量组与空白血清组相比无明显差异 (P >0 .0 5)。结论 通心络可促进鸡胚绒毛尿囊膜的血管增生 。

参麦注射液对血管生成影响的研究

目的 :探讨参麦注射液 (简称参麦 )对血管生成的影响。方法 :采用MTT法检测参麦对牛血清促进的牛内皮细胞、人肝癌细胞SMMC 772 1增殖的影响 ;琼脂糖刮除法检测参麦对牛血清促进的牛内皮细胞迁移的影响。利用鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM )模型 ,观察参麦对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响。结果 :参麦能明显抑制牛内皮细胞增殖 ,与SMMC 772 1比较 ,差异有显著性 ;参麦能抑制牛内皮细胞迁移 ;并可抑制鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成。结论 :参麦能抑制血管生成 ;抑制内皮细胞增殖和迁移可能是参麦抗血管生成的机理之一 ;同时也说明参麦是一种特异性血管生成抑制剂。

26种活血化瘀中药对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

目的:采用鸡胚绒毛尿囊膜(ChickChorioallantoicMembrane,CAM)法从26种活血化瘀中药中初筛血管生成抑制剂。方法:试验组分别为26种活血化瘀中药,所用片剂、胶囊剂、丸剂、散剂溶解成饱和溶液,汤剂制成含生药2g/ml的水煎醇沉液,注射液、口服液、膏剂用原药物浓度。种鸡蛋孵化7天,建立CAM模型,按20μl胚加药液于明胶海绵载体上,每日1次,连续3天。孵化第10天,计数CAM载体周围5mm的血管分支点。结果:15种活血化瘀中药CAM的血管分支点数量降低(P<0.05)。结论:榄香烯乳剂、莪术油葡萄糖注射液、磷酸川芎嗪注射液、注射用阿魏酸钠、雷公藤多苷片、火把花根片、祖师麻片、复方斑蝥胶囊、大黄广廿灬虫虫丸、大活络丸、复方丹参滴丸、七厘散、活血通脉片、三棱丸及桃红四物汤Ⅱ号具有抑制CAM血管生成的作用。

华蟾素联合三氧化二砷抑制鸡胚尿囊膜血管生成的实验研究

目的:观察和比较华蟾素注射液、三氧化二砷注射液单药以及联合用药后对鸡胚尿囊膜(CAM)血管生成的抑制作用。方法:100只七日龄鸡胚随机分为4组(每组25只):生理盐水(NS)对照组、华蟾素组、As2O3组和华蟾素联合As2O3组。CAM上植入甲基纤维素碟,加入各组药物,观察对血管生长的影响。结果:华蟾素、As2O3以及两药联合对鸡胚尿囊膜新生血管均有抑制作用,以两药联合后抑制血管的作用最强。结论:华蟾素、As2O3以及两药联合均具有抗血管生成作用,两药联用后且具有协同作用。

青蒿琥酯抑制新生血管生成的作用

目的 为研究青蒿琥酯成为抗血管生成药物的可能性 ,观察其对新生血管的影响 ,并初步探讨其机制。方法 采用鸡胚绒毛尿囊膜、大鼠主动脉环无血清培养、人脐静脉内皮细胞损伤迁移等实验 ,检测青蒿琥酯对新生血管增殖与迁移的抑制作用。结果 鸡胚绒毛尿囊膜实验表明 ,青蒿琥酯有较强的血管增殖抑制作用 ,对微血管作用强于大血管 ;大鼠主动脉环无血清培养实验表明 ,青蒿琥酯能明显推迟血管新生 ,减少新生血管数量 ;人脐静脉内皮细胞损伤迁移实验表明青蒿琥酯对内皮细胞具有增殖和迁移抑制作用。在这些体内外实验中 ,青蒿琥酯抑制血管生成作用呈剂量依赖性。结论 青蒿琥酯具有抑制新生血管生成作用 ,此作用可能与抑制血管内皮细胞迁移有关。

中药当归、川芎、丹参提取液促血管生成作用的实验研究

目的:观察中药当归、川芎、丹参对体外培养的心肌微血管内皮细胞及鸡胚尿囊膜模型的血管数的影响。方法:采用酶消化法培养心肌微血管内皮细胞;应用MTT比色法检测中药对内皮细胞的增殖活性;通过鸡胚尿囊膜模型观察中药对血管生成的作用。结果:与空白对照组比较,川芎高剂量组、当归中、高剂量组及丹参高、中、低剂量组对微血管内皮细胞有明显促增殖作用(P<0.05),当归、丹参有剂量依赖性关系;同时它们具有促进微血管再生的作用。结论:当归、丹参、川芎对微血管内皮细胞和微血管有促进增殖的作用,这可能是其促血管生成的作用机制之一。

葛根素对子宫内膜异位症细胞恶性行为调控机制研究

目的:观察葛根素对子宫内膜异位症(endometriosis,EM)血管形成的影响以及葛根素对EM肿瘤相关基因的调控作用。方法:利用子宫内膜细胞原代培养技术、鸡胚绒毛尿囊膜(chicken chorioallantoic membrane,CAM)模型、基因芯片等方法,了解EM肿瘤相关基因表达的情况,观察葛根素对EM血管生成、肿瘤相关基因的调控作用。结果:葛根素可明显抑制种植内膜组织囊泡及周边血管形成,其血管阳性面积显著小于模型组(P<0.05)。基因芯片结果显示,增殖期EM在位内膜组织较之正常在位内膜组织、EM异位内膜组织较之EM在位内膜组织,在癌基因,抑癌基因,细胞黏附、侵袭、转移、血管生成相关基因及细胞凋亡相关基因表达方面有明显不同。100μmol/L葛根素可明显上调EM在位基质细胞凋亡基因BAD、BAX、CASP8、CASP9和TNFRSF6表达,并增强细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子CDKN1B、CDKN2A及IFNA1、IFNB1基因表达;减少癌基因FOS、CHEK2、SRC和黏附侵袭基因ITGB5、MMP9及生长、转录因子基因PDGFA、NFKBIA表达。结论:葛根素能够抑制异位灶新生血管的形成,减少异位灶的血液供应;通过调整EM癌基因、抑癌基因、细胞周期相关因子基因表达,并通过影响凋亡相关基因的表达,促进细胞凋亡,从而改变EM内膜细胞类似肿瘤细胞的恶性行为。

鸡胚绒毛尿囊膜技术的改进

目的 :摸索改进鸡胚绒毛尿囊膜 (chickchorioallantoicmembrane ,CAM)技术 ,为抗血管形成药物筛选提供良好的体内血管实验模型。方法 :对传统的蛋壳上开窗方式的CAM技术进行改进 ,将孵育 3d的鸡胚脱离蛋壳移入平皿中 ,继续孵育 3d后将待测药物植入到CAM和卵黄囊膜 (yolksacmembrane,YSM )上 ,2 4h后观察药物对CAM和YSM血管的作用。结果 :平皿中孵育鸡胚至第 6天 ,鸡胚存活率为 46 .7% ,生长状况良好 ,CAM直径达到1.2cm。检测的 6种药物出现两种不同的心血管效应 ,即抑制和吸引趋化血管的效应。结论 :平皿中孵育CAM技术在研究药物、生物因子、肿瘤等的血管效应方面有良好的应用价值。

重楼中几个甾体皂苷类成分对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

目的对重楼中的成分进行分离鉴定,结合药理模型筛选具有抑制血管生长活性的成分。方法采用乙酸乙酯提取和硅胶柱层析法进行提取分离;利用1HNMR、13CNMR、13CNMR-APT、MS、IR、UV确定其化学结构,并且应用鸡胚绒毛尿囊膜模型进行活性筛选。于鸡胚发育的第7天,将加药后的明胶海绵载体加于鸡胚绒毛尿囊膜上,孵育2 d后,固定鸡胚绒毛尿囊膜,取出观察。结果从重楼中分离得到了4个甾体皂苷类成分,分别为重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅴ和纤细薯蓣皂苷。通过活性筛选发现重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、纤细薯蓣皂苷3组鸡胚尿囊膜的小血管数目均小于空白组,其中重楼皂苷I经统计分析P<0.05具有显著性差异。结论重楼皂苷Ⅰ具有抑制血管生长的活性。

龙葵抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的研究

目的:探讨龙葵对血管新生的影响。方法:应用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管新生模型进行研究,在鸡胚培养的第7天,分别给予高、中、低3个剂量(2·5,2·0,1·5mg·μL-1)的龙葵水提物。培养至第9天收集数据进行评估。结果:龙葵给药组血管新生面积明显小于对照组(P<0·001)。病理形态学分析表明,给药组载体下CAM新生组织中新生血管数显著减少,并可见大血管结构破坏迹象。周围CAM组织中仅见少量新生血管。而对照组的载体下组织及周围CAM中均见大量新生血管。结论:龙葵可明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管新生。