通心络促血管生成作用的实验研究

目的 探讨中药通心络对鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)模型血管生成作用的影响。方法 运用血清药理学的方法制备药物血清 ,鸡胚随机分为空白血清组、贝复济组及通心络大、小剂量组 ,检测尿囊膜的血管增生程度。结果 通心络大剂量组CAM的血管增生数明显高于空白血清组 (P <0 .0 5) ,而与贝复济组无明显差异 (P >0 .0 5) ;通心络小剂量组与空白血清组相比无明显差异 (P >0 .0 5)。结论 通心络可促进鸡胚绒毛尿囊膜的血管增生 。

芥子碱对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

目的:探讨芥子碱对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)新生血管生成的影响。方法:用溶剂萃取法制备芥子碱,通过CAM模型,检测芥子碱对CAM新生血管生成的影响。结果:与生理盐水对照组相比,中、大剂量芥子碱组(5.0、10.0g/L)CAM实验作用部位的血管生成明显受抑,周围血管网模糊,密度减少(P<0.01),抑制率分别达到54.24%和71.62%,而小剂量组(2.5g/L)差异不显著(P>0.05)。结论:芥子碱具有一定的抗血管生成活性,且其作用效果呈剂量依赖性。

奥沙利铂联合复方苦参注射液抗血管生成作用的实验研究

背景与目的:肿瘤的生长、转移、复发和预后均与肿瘤血管生成密切相关。以肿瘤血管生成为靶点,开发血管生成抑制剂在抗肿瘤研究中是一个十分活跃的研究领域。近年来,研究发现某些化疗药物,在小剂量、高频率的给药方式下可以选择性地显著抑制肿瘤组织内新生血管内皮细胞的生长,使肿瘤细胞因为血供不足而生长受阻。这称为小剂量化疗或抗血管生成化疗。中医药治疗肿瘤具有独到的疗效,近年来发现许多中药制剂及中药来源的药物有抗血管新生作用。本研究旨在在国内外现有的研究基础上探讨奥沙利铂联合复方苦参注射液对体内外血管生成的抑制作用。方法:采用MTT法观察奥沙利铂(L-OHP)联合复方苦参注射液对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)、人结肠癌LoVo细胞增殖的影响;采用transwell板,观察L-OHP联合复方苦参注射液对HUVEC迁移的影响;采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型,观察L-OHP联合复方苦参注射液对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管的抑制作用。结果:HUVEC和LoVo细胞对不同浓度两种药物进行联合的敏感性不同。2μg/m l奥沙利铂和25μl/m l复方苦参注射液对HUVEC增殖的抑制率分别为31.6%、32.1%,联合应用后的抑制率为54.4%,具有协同作用;0.5μg/m l奥沙利铂和6.25μl/m l复方苦参注射液具有抑制HUVEC迁移的作用,联合应用具有协同效应。奥沙利铂联合应用复方苦参注射液具有抑制鸡胚尿囊膜血管生成作用。结论:小剂量L-OHP和复方苦参注射液在体外有抑制细胞生长,在体内具有抑制血管生成作用,两者联合具有协同效应。

鸡胚及禽类细胞系在生物医药领域的应用及研究进展

鸡胚因发育过程清楚,长久以来作为基础和应用科学研究领域重要的实验模型,尤其在鸡胚发育早期绒毛尿囊膜阶段,因其血管丰富,是天然的免疫缺陷宿主,是病理学、药理学和肿瘤学等研究领域的理想实验模型。作者简述了发育早期的鸡胚组织结构,并介绍了鸡胚绒毛尿囊膜在肿瘤研究、血管生成、器官移植、烧伤等疾病机理研究中的应用,以及在鸡胚病理模型基础上进行的抗肿瘤药物筛选的应用。重点介绍了鸡胚及禽类细胞系在病毒繁殖和疫苗生产、治疗性蛋白和单抗生产方面的应用研究进展。多种人源病毒、禽源病毒、支原体等可在鸡胚及禽类细胞上增殖,并用于疫苗生产。作者对常用的禽类纤维原细胞和多能干细胞的发展和特点进行了阐述,并总结了商业化的禽类细胞系来源以及部分易感病毒。鸡胚表达系统能够在目的蛋白特定位点产生人源化糖基,减少目的蛋白对人的过敏反应,且禽蛋廉价易得,可作为生产人用单克隆抗体和治疗性蛋白的合适供体。作者介绍了鸡胚及禽类细胞系在生物医药领域应用的最新进展,并对鸡胚作为动物模型在未来的应用进行了展望。

隐丹参酮对鸡胚尿囊膜血管生成的抑制作用

目的评价隐丹参酮对鸡胚尿囊膜(CAM)新生血管生成的抑制作用。方法在六日龄CAM上植入含隐丹参酮的甲基纤维素膜片并孵化48 h。解剖显微镜下计数加药组和对照组局部血管数,用抑制率反映药物对CAM新生血管形成的影响。结果隐丹参酮0.1μg/egg和0.2μg/egg剂量相关性减少CAM局部的血管数,抑制率分别达到65%和72%;与对照组相比用药组局部血管明显变细受损。结论隐丹参酮对CAM血管生成有显著的抑制作用。

几种收涩中药对鸡胚尿囊膜血管生成影响的实验研究

目的研究收涩中药乌梅、椿皮、金樱子、五味子、五倍子、赤石脂、禹余粮对鸡胚尿囊膜生成的影响。方法采用血清药理学方法,制备收涩药物的大鼠血清;建立鸡胚绒毛尿囊膜模型,并应用鸡胚绒毛尿囊膜模型进行活性筛选。于鸡胚发育的第5天,将加药物血清后的明胶海绵载体加于鸡胚绒毛尿囊膜上,孵育48 h后,固定鸡胚绒毛尿囊膜,取出,采用医用图像采集系统分析结果。结果收涩药物金樱子、五味子、五倍子、乌梅、赤石脂、椿皮对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管数目有一定抑制作用(P<0.05);乌梅组、椿皮组对抑制新血管生成有一定的趋势,与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论收涩中药对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管有一定的抑制作用。

丹酚酸B对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生作用的影响

目的探讨丹酚酸B对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的影响。方法将7日龄鸡胚制备鸡胚绒毛尿囊膜(chick embryo chorioallantoic membrane,CAM)模型,随机分为6个组,分别为PBS(phosphatebuffer solution)对照组,丹酚酸B 4个剂量组(150、50、16.67、5.56 mg.L-1)及VEGF(vascular endo-thelial growth factor)组,培养3 d后时采集数据进行评价。结果丹酚酸B 150、50 mg.L-1组血管新生面积明显高于PBS(phosphate buffer solution)对照组(P<0.01,P<0.05)。结论丹酚酸B可明显促进鸡胚绒毛尿囊膜血管新生。

改良鸡胚尿囊膜肿瘤实验动物模型及其生物学行为观察

目的利用鸡胚尿囊膜建立人移植瘤模型并观察其生物学行为和组织学形态已有报道。但是,在实际工作的过程中仍存在不少的问题。因此,通过改良的方法,获得简单,快捷,可重复的动物模型。方法将人胶质瘤SWO-38细胞滴加到鸡胚尿囊膜上,观察影响鸡胚的存活和成瘤的可能因素、移植瘤的生长特性和形态学特征。结果利用改良的方法成功建立胶质瘤鸡胚尿囊膜的模型;肿瘤组织能够诱导血管生成,镜下形态符合恶性胶质瘤的形态学特征。结论该模型简单,快捷,易于建立。便于观察肿瘤组织的生物学行为,可用于抗肿瘤的药物筛选。

小鼠endostatin基因的克隆、表达及表达产物的活性鉴定

目的 克隆并表达小鼠 endostatin基因 ,并初步检测其血管生长抑制功能 ,为胶质瘤的基因治疗探索新的途径 .方法 从小鼠肝组织用 RT- PCR法扩增 endostatin基因 ,重组入 p UC19质粒 ,经测序证实无误后 ,重组入表达载体p DH,经温度诱导表达 ,并用鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)实验检测表达产物活性 .结果 从小鼠肝组织中成功扩增到endostatin基因 ,测序与报道序列一致 .重组进 p DH后经温度诱导表达 ,在 SDS- PAGE电泳上得到一条新的蛋白表达带 ,分子质量为 2 0 ku.纯化后的蛋白能明显抑制 CAM的血管生长 .结论 成功构建了小鼠 endostatin c DNA的重组克隆p DH- Endo,并在大肠杆菌中获得高效表达 .在 CAM实验中表明纯化后的蛋白具有明显血管抑制作用 .

一种可用于肿瘤实验模型的半无壳鸡胚培养技术

目的:建立一种可以用于肿瘤体内研究的大样本模型。方法:将瘤细胞接种于10d龄的鸡胚尿囊膜上,重新封闭后7d取材。结果:90.9%的尿囊膜上出现明显的肿瘤。结论:该方法可用于肿瘤体内实验的大样本研究,为肿瘤及其微循环研究提供了简便、经济的模型。

人canstatin cDNA分泌型真核表达载体的表达及生物学作用研究

目的将人canstatin cDNA分泌型真核表达载体pSecTag2B/canstatin稳定转染中国仓鼠卵巢(CHO-K1)细胞并获得稳定表达canstatin蛋白产物的细胞株。再进一步研究表达产物的生物学作用。方法将人canstatin cDNA的重组1质粒pSecTag2B/canstatin稳定转染CHO-K1细胞,应用RT-PCR、western-blotting法检测表达产物,再用多种方法进一步研究canstatin的生物学作用。结果成功的将pSecTag2B/canstatin稳定转染CHO-K1细胞并鉴定出上清液中有目的蛋白的表达。该细胞培养上清液能抑制鸡胚绒毛尿囊膜中微血管的生成,抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC-12)的生长并诱导其凋亡。结论①成功的将pSecTag2B/canstatin稳定转染CHO-K1细胞并获得能稳定表达can-statin蛋白产物的细胞株;②证实含canstatin蛋白产物的细胞培养上清液具有抑制鸡胚绒毛尿囊膜微血管生成的活性并可在体外抑制HUVEC-12的生长和诱导其凋亡。

软骨多糖对鸡胚尿囊膜血管生成的抑制作用

探讨软骨多糖对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)新生血管生成的影响。碱提—酶解法从猪软骨中分离提取软骨多糖,通过CAM模型,检测软骨多糖对CAM新生血管生成的影响。结果表明,与生理盐水对照组相比,用药组局部血管受到明显破坏,密度减少。软骨多糖高剂量组(5mg/mL)和低剂组(1mg/mL)相关性地减少CAM局部的血管数,抑制率分别达到64%和47%。软骨多糖对CAM血管生成有显著的抑制作用。

原儿茶酸衍生物的合成及活性研究

目的:探讨原儿茶酸(protocatechuic acid,PCA)及其衍生物体外清除DPPH自由基活性及对鸡胚绒毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)血管新生的影响。方法:利用苄基保护及苄酯水解等相关反应,得到PCA系列衍生物PCA-1,PCA-2,PCA-3,结构经1H,13C-NMR及MS验证,并采用DPPH自由基体外抗氧模型、CAM对PCA及其衍生物的活性进行筛选。结果:PCA及含有邻二酚羟基的PCA-1的体外清除DPPH自由基活性较强;PCA,PCA-3对新生血管有一定的抑制作用,而PCA-2则能促进血管的新生(P<0.001)。结论:PCA分子结构中的邻二酚羟基为体外清除DPPH自由基的活性部位;不含邻二酚羟基,同时有羧基时能增强其促血管新生活性,但需要进一步的实验验证。