中华眼镜蛇毒活性组分选择性抑制内皮细胞增殖

目的观察中华眼镜蛇毒活性组分(Ch ina cobra venomactive factor,CCVAF)对内皮细胞增殖的选择性抑制作用。方法实验分对照组和不同浓度的CCVAF组,应用MTT法分析CCVAF对牛肺主动脉内皮细胞(bovine arteria pu lmona-lis vascu lar endothelial cells,BAVEC)、SD大鼠主动脉血管平滑肌细胞(smooth musc le cells,SMC)、人胚肺成纤维细胞HLF以及人支气管上皮细胞HBE生长增殖的影响;并运用直线回归分析统计对比CCVAF在不同时间点对BAVEC的IC50及上述各细胞的24 h IC50。结果CCVAF呈剂量及时间依赖性抑制内皮细胞的增殖:6、12、24、48、72 h其IC50分别为4.955、4.932、2.443、3.048、3.133 mg.L-1,24 h抑制作用最强;观察此时浓度与抑制作用的关系,0.625、1.25、2.5、5、10、20 mg.L-1,抑制率分别是4.41%、30.94%、61.81%、86.17%、96.05%、98.68%,10 mg.L-1抑制率即达高峰,且各浓度组抑制作用与对照组相比差异有显著性(P<0.05)。CCVAF抑制内皮细胞增殖具有一定的选择性,作用24 h后,抑制BAVEC生长的作用明显高于其它3种细胞,对BAVEC、HLF、HBE、SMC的24 h IC50分别为2.443、22.233、35.318、32.810 mg.L-1。结论CCVAF能够选择性抑制内皮细胞增殖,这在抗血管生成及其靶向治疗研究中可能具有重要意义。

中华眼镜蛇毒组分抑制肺癌细胞H1299的血管生长因子VEGF和Bfgf

目的:了解中华眼镜蛇毒活性组分(CCVAF)对人非小细胞肺癌细胞株H1299VEGF、bFGF表达的抑制作用。方法:采用RTPCR方法检测H1299细胞中VEGF、bFGFmRNA表达的变化;利用ELISA检测培养上清中VEGF、bFGF蛋白的含量。结果:不同浓度的(2.0、4.0μg·ml-1)CCVAF对H1299bFGFmRNA水平有降低作用,其中4.0μg·ml-1CCVAF作用7h后bFGFmRNA的表达明显降低,但对VEGFmRNA的表达无明显影响。CCVAF作用H1299细胞24h后,其细胞上清中VEGF、bFGF的含量较对照组明显减少(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论:CCVAF可抑制H1299细胞bFGFmRNA和蛋白的表达及VEGF蛋白的表达。

眼镜蛇毒活性组分抑制内皮细胞生长及其生化机制初探

目的探讨中华眼镜蛇毒活性组分（CCVAF）抑制新生牛肺主动脉血管内皮细胞（BAVEC）生长的作用及其生化机制。方法用MTT法测定CCVAF抑制BAVEC的增殖活性,用伊红-考马斯亮蓝法观察细胞骨架,罗丹明-鬼笔环肽荧光探针F-actin骨架蛋白定位,荧光标记流式细胞法测荧光强度表胞内钙离子浓度[Ca^2＋]i及分光光度法测细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）及一氧化氮（NO）的含量。结果CCVAF（0.625-20μg/mL）剂量依赖性地抑制内皮细胞的生长,IC50=2.45μg/mL。CCVAF与BAVEC共同孵育后,引起细胞间连接减少,细胞F-actin分布混乱;细胞上清液中LDH活力及NO的含量及胞内[Ca^2＋]i分别增加。结论CCVAF抑制BAVEC增殖,可能与CCVAF导致细胞骨架改变,LDH及NO分泌量及胞内Ca^2＋浓度增加等生化机制有关。

中华眼镜蛇毒活性组分抑制微血管形成研究

目的探讨中华眼镜蛇毒活性组分(CCVAF)抗血管生成的作用。方法采用原代培养牛肺主动脉内皮细胞克隆形成实验、Transwell小室趋化实验及大鼠胸主动脉环体外无血清培养微血管样结构形成实验,分别观察CCVAF对内皮细胞克隆形成、细胞迁移及大鼠动脉环微血管生成的影响。结果 CCVAF浓度为1.25,2.5,5.0μg/mL时,其对内皮细胞克隆形成抑制率分别为17.7%,40.3%,62.9%,呈浓度依赖性(r=0.982,P<0.05),而对内皮细胞迁移抑制率分别为20.5%,59.0%,73.5%,呈浓度依赖性(r=0.902,P<0.05);大鼠动脉环培养至第13天,CCVAF组较溶剂对照组微血管生成率下降了86.5%,CCVAF+VEGF组较VEGF对照组微血管生成率下降了88.1%。结论 CCVAF能够抑制内皮细胞克隆的形成、Hela细胞诱导的内皮细胞迁移和大鼠动脉环微血管的生成。