中华骨髓库造血干细胞捐献志愿者HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1高分辨单体型频率初步分析

目的分析中华骨髓库造血干细胞捐献者HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB15位点在高分辨基因分型水平上的单体型频率及连锁不平衡特征。方法根据718名中华骨髓库捐献者HLA5位点高分辨分型数据,运用Arle-quin3.1软件以最大似然法分析单体型频率。结果双座位连锁不平衡分析显示,HLA-C与HLA-B、HLA-DRB1与HLA-DQB1呈现较为显著的连锁不平衡;多位点单体型频率分析结果显示,最常见的2、3、4、5位点单体型分别为:A*0207-B*4601(7.34%)、Cw*0102-B*4601(8.71%)、B*1302-DRB1*0701(6.19%)、DRB1*0901-DQB1*0303(14.27%)、A*3001-B*1302-DRB1*0701(5.36%)、A*0207-B*4601-Cw*0102(7.06%)、A*3001-Cw*0602-B*1302-DRB1*0701(5.36%)、Cw*0602-B*1302-DRB1*0701-DQB1*0202(6.12%)、A*3001-Cw*0602-B*1302-DRB1*0701-DQB1*0202(5.29%)。结论本研究提供了中华骨髓库718名捐献者HLA5位点高分辨单体型频率遗传学数据,将为临床寻找HLA匹配的无关供者、法医学鉴定、HLA与疾病相关研究等提供分子遗传学参考。

吉林骨髓库汉族造血干细胞捐献者HLA-A、B、DRB1基因分布和单体型分析

目的了解中国造血干细胞捐献者资料库吉林分库HLA基因及单体型分布特征。方法采用PCR-SSP、PCR-SSO和PCR-SBT法对吉林分库内10 120份吉林籍汉族捐献者HLA-A、B、DRB1基因低分辨分型,用Excel软件计算HLA基因频率、单倍型频率及其连锁不平衡参数。结果吉林分库内汉族捐献者的HLA-A、B、DRB1基因(含血清学特异性)分别有21、45、13种,频率高的基因是:A*02、A*24、A*11、A*30,B*13、B*60、B*61、B*62、B*35、B*46、B*51,DR*01、DR*03、DR*04、DR*07、DR*09、DR*12、DR*15。HLA单体型分布,两座位连锁频率较高的有:A30-B13、A02-B46、A02-B61、A02-B58,B13-DR07、B13-DR12、B46-DR09、B61-DR09,A2-DR09、A30-DR07、A02-DR12、A02-DR15;三座位连锁频率较高的是:A30-B13-DR07、A02-B46-DR09、A02-B13-DR12、A02-B61-DR09。结论为临床造血干细胞移植寻找合适匹配的供受对,以及吉林地区汉族人群HLA基因多态性与HLA相关疾病的研究提供了有意义的参照数据。

基于Illumina Miseq测序技术的8000份标本HLA分型检测结果分析

目的利用Illumina Miseq二代测序(NGS)技术进行HLA分型工作并分析其结果的准确性。方法利用Illumina Miseq二代测序技术,对8 000人份血液标本进行HLA-A,HLA-B和HLA-DRB1位点的分型工作。为验证二代测序技术的准确性,同时选取1 000人份血液标本进行一代测序(PCR-SBT)分型实验,比较两种测序方法所得分型结果。结果分型结果显示PCR-NGS HLA分型技术获得的数据与一代测序PCR-SBT技术数据完全吻合,且利用NGS测序技术的8 000人份标本中高分辨率结果 7 908份(含G族1 058人份),中分辨率结果 92份,高分辨率比例达到98.85%。结论利用NGS测序技术进行HLA分型可以大大减少实验工作量,提高高分辨率结果比例,更容易对罕见型和新等位基因进行鉴定,在工作量大,时间紧迫时相对于传统的一代测序分型有明显优势。

基因组DNA高通量提取技术及其在骨髓库捐献者样本HLA基因分型中的应用

本研究旨在建立从全血EDTA抗凝样本中高通量提取基因组DNA的有效方法,以常规应用于Luminexr SSO HLA流式磁珠基因分型。使用2ml深孔板和TECAN DNA全自动工作站,从288份骨髓捐献者样本中提取基因组DNA;提取的DNA样本用紫外分光光度仪测定其浓度和纯度,并采用琼脂糖凝胶电泳检测DNA的完整性;DNA样本用Onelambdar SSOHLA-A、B和DRB1基因分型试剂盒进行PCR扩增、分子杂交和Luminex流式磁珠分析仪检测,统计分析每一DNA样本HLA-A、B和DRB1基因扩增产物经DNA探针分子杂交后的阳性磁珠和阴性磁珠的荧光信号强度。结果表明:从400μl全血中提取了基因组DNA,288份样本的DNA产量平均为3.217±0.715μg,A260/A280值平均为1.710±0.103,A260-A320/A280-A320值平均为1.761±0.151;用琼脂糖凝胶电泳法测得DNA的分子量均大于15kb;每一样本HLA-A、-B和-DRB1杂交后的阳性磁珠的荧光信号强度均>600RFU,而阴性磁珠的荧光信号强度<50RFU。结论:本方法适用于从大量全血样本中快速提取基因组DNA,所得的基因组DNA适用于高通量中华骨髓捐献者样本的HLA流式磁珠基因分型等下游的移植免疫学与分子生物学实验。

应用骨髓库HLA资料构建高匹配诱导多能干细胞库的可行性研究

目的研究利用骨髓库HLA资料建立高匹配诱导多能干细胞(iPS)库的可行性。方法通过对中华骨髓库湖南分库长沙实验室5 236(人)份HLA分型数据统计分析,找出O型HLA-A、-B、-DRB1三座位纯合子数据,计算以纯合子志愿者为假定iPS供者、5 236名随机志愿者为假定患者的匹配几率;同时计算随机志愿者HLA单体型频率,评估以O型HLA高频单体型纯合子志愿者为假设iPS供者的匹配几率。结果在5 236份骨髓供者资料中共发现O型HLA单体型纯合子14种,以此建库可以分别为49.81%(2 608/5 236)、61.29%(3 209/5 236)、79.51%(4 163/5 236)、75.76%(3 967/5 236)及97.78%(5 120/5 236)的假定患者提供5种匹配水平的iPS供者;共检出17种高频率(HF>1%)的单体型,以这些单体型的O型纯合子建库可以分别为64.06%(3 354/5 236)、75.55%(3 956/5 236)、81.11%(4 247/5 236)、78.76%(4 124/5 236)及98.28%(5 146/5 236)的假定患者提供5种匹配水平的iPS供者。结论利用中华骨髓库现有的HLA资料可以建立数量少、效率高的iPS细胞库。

无偿献血志愿者加入中华骨髓库的影响因素

目的了解无偿献血志愿者捐献造血干细胞的影响因素以及对捐献造血干细胞的认知情况,建立广东省顺德地区造血干细胞供者信息库。方法2018年3月1日~9月30日广东省佛山市顺德区中心血站(以下简称“本血站”)的1200名无偿献血者采取现场匿名方式独立填写自制无偿献血和捐献造血干细胞的调查问卷;收集自2006年建立中华骨髓库(CMDP)以来至2018年9月30日在本血站入库的685名志愿者信息,进行数据整理分析。结果共924份问卷纳入研究,结果显示无偿献血志愿者以男性(54.0%)、职员(29.5%)和学生(28.8%)为主,大多数人受教育程度不高,多为大专(39.2%)和高中及以下(35.5%),从年龄层上分析,18~35岁的青年(74.9%)居多;685名CMDP志愿者以男性(71.1%)、工人(30.1%)为主,学历以高中及以下(50.5%)居多、18~35岁青年(65.3%)相比其他年龄段增多。CMDP志愿者与无偿献血志愿者在性别、学历、职业、年龄分布方面差异有高度统计学意义(P<0.01)。CMDP志愿者与无偿献血志愿者的献血次数比较,差异有高度统计学意义(P<0.01)。结论CMDP志愿者均为无偿献血志愿者,鼓励无偿献血者加入CMDP应着重男性、中年、较低学历、工人志愿者。多次无偿献血志愿者能更加了解造血干细胞捐献,从而加入CMDP。加强志愿者对献血和造血干细胞事业的了解以及保障志愿者的权益有益于佛山无偿献血以及造血干细胞捐献事业的发展。