基于ChIP-qPCR技术研究益气养阴活血汤对短暂高糖致HK-2细胞持续表观遗传改变的影响

目的:探讨短暂高糖通过诱发肾小管上皮细胞(HK-2)细胞持续性染色质重塑导致细胞炎性损伤的作用机制及中药益气养阴活血汤(TD)的干预作用。方法:HK-2细胞分设低糖组、高糖组、短暂高糖组、短暂高糖+TD组,染色质免疫共沉淀(Ch IP)-q PCR法测NF-κB p65基因启动子区Set7表达及组蛋白H3第4位一甲基化(H3K4me1)水平,q PCR法测p65及NF-κB依赖性基因单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)的m RNA水平,观察各组各因子水平差异。另通过慢病毒转染对Set7基因敲减,测敲减前后p65基因启动子区H3K4me1水平、p65、MCP-1、TNF-α、IL-10 m RNA表达。结果:高糖组、短暂高糖组p65基因启动子区Set7表达及组蛋H3K4me1水平、p65、MCP-1、TNF-α、IL-10 m RNA表达均高于低糖组(P<0.05),高糖组与短暂高糖组无明显差异。除IL-10外,短暂高糖+TD组的各m RNA水平均低于短暂高糖组(P<0.05);Set7敲减后4组H3K4me1、p65水平均无明显差异。结论:短暂高糖可通过大量招募Set7引起NF-κB p65启动子区H3K4me1水平持续增加,导致下游p65及NF-κB依赖性炎性因子持续高表达,TD则通过上述机制抑制染色质重塑持续高表达,减少短暂高糖后的长期细胞损伤,从而减轻高糖导致的肾损伤。