三氯生对小球藻的生长效应研究

研究三氯生(Triclosan)对小球藻(Chlorella spp)生长状况、藻细胞光合色素及碳水化合物含量的影响,检测三氯生对小球藻的毒性效应。采用概率单位-浓度对数法进行数据处理。结果表明:藻细胞密度随药剂浓度增加而明显下降,且呈现较好的剂量-效应关系;96h半抑制效应浓度(EC50)为0.0650mg·L-1,属于高毒;三氯生明显抑制小球藻光合色素含量的增加,并对碳水化合物含量变化有持续的影响。

NaHCO_3浓度对塔胞藻、小球藻和新月菱形藻生长的影响

在温度为 ( 2 2± 1 )℃ ,盐度为 2 8的条件下 ,用不同浓度的NaHCO3( 0 ,1 0 0 ,2 0 0 ,40 0 ,80 0 ,1 2 0 0和 1 60 0mg/L)对青岛海洋大学微藻种质库保存的塔胞藻 (Pyramidomonassp.)、小球藻 (Chlorellaspp .)和新月菱形藻 (Nitzschiaclosterium )进行培养。实验结果表明 ,NaHCO3浓度对 3种海洋微藻生长的影响差异显著 ,经过 6d的培养 ,塔胞藻和小球藻的细胞浓度都在NaHCO3浓度为 1 2 0 0mg/L时达到最大值 ;新月菱形藻的细胞浓度在NaHCO3浓度为 40 0mg/L时达到最大值。

小球藻的优化培养及胞内多糖的提取

小球藻细胞中所含有的多糖和糖蛋白等活性物质具有明显的抗肿瘤、抗病毒感染及增强机体免疫力等作用。首先考察了几个重要的环境因素对小球藻生长及胞内多糖含量的影响 ,确定了优化的环境条件为 :光照 1 7h ,培养温度 1 5℃ ,营养盐KNO3 浓度为 2mmol/L。在此优化条件下 ,大批量培养小球藻至平衡期 ,离心收集藻细胞 ,再经过冻融与超声波破碎 ,三氯乙酸沉淀蛋白质 ,最后通过SephadexG - 75凝胶柱分离得到了两种分子量不同的多糖 ,并结合醋酸纤维素膜电泳证明了同样的结论。

小球藻培养条件的优化

[目的]优化小球藻培养条件,以提高小球藻生物量。[方法]在无菌培养条件下,对影响小球藻生长的主要营养因素Na2CO3、NaNO3、KH2PO4和MgSO4等进行了单因素和正交试验优化。[结果]微量元素和pH值对小球藻的生长有非常明显的影响,优化培养基配方为:Na2CO30.02g/L,NaNO32.0g/L,KH2PO40.02g/L,MgSO40.1g/L,环境条件为pH值6.0。[结论]该研究为扩大培养小球藻提供依据。

小球藻培养条件的研究

对影响小球藻生长的NaHCO3、NaNO3、KH2PO4、维生素等4种主要营养因素进行了优化,获得了以海水为基础的优化培养基配方:NaHCO30.10g/L,NaNO30.225g/L,KH2PO40.005g/L,pH6.0.另外,适量添加土壤浸出液和维生素也会明显提高藻的产量.流加培养可以促进小球藻生物量的增加.

不同方法培养小球藻的试验

试验系采用不同方法培养小球藻观察其生长情况。小球藻在水泥地中培养，最高密度是40．0cm组的2880．0×104cells／mL，但培养液深度在20．0～60．0cm范围内生长无显著差异；在三角烧瓶中培养指数生长末期的最高密度达8000．0×104cells／mL；在生物反应器中培养，一次性培养指数生长期末期的最高密度达13000．0×104cells／mL，半连续培养时适宜的起始密度为4500．0×104cells／mL，每天可以采收1／3藻液，密度约为6800．0×104cells／mL，这样每天就有较高的、稳定的收获量。结果表明小球藻在生物反应器中培养其生长最好。

小球藻Rubisco在叶绿体中的免疫金标定位

应用免疫技术对Rubisco在中国小球藻(Chlorella spp.640909)叶绿体中进行了分子定位及Native-PAGE电泳、SDS-PAGE电泳及其Westen印迹分析,并对小球藻淀粉核(Pyrenoid)超微结构进行了观察。结果显示:Native-PAGE电泳图谱主要为一条主带,Westen印迹反应证明该条带即为Rubisco酶,SDS-PAGE电泳及其Western印迹图谱显示Rubisco大亚基分子量大约为55kD。中国小球藻淀粉核为椭圆形,被淀粉鞘所包围,中央有一条由2个类囊体组成的纵向通道,并在蛋白核内段处稍膨胀。淀粉核与叶绿体基质存在多处联系。免疫分子定位显示Rubisco大亚基和全酶分子主要分布于叶绿体的淀粉核上,且Rubisco在淀粉鞘部位也有少量分布,极少部分分布在叶绿体基质中,表明叶绿体淀粉核与光合作用关系密切。Rubisco聚集于淀粉核可能有利于藻类对CO_2固定。

从小球藻中提取和富集多不饱和脂肪酸的研究

研究了从海水小球藻Chlorellaspp.中提取和富集多不饱和脂肪酸（PUFA）的方法,就提取剂体系、用量、提取次数等对小球藻粗脂肪提取率的影响以及尿素包合法中尿素、甲醇与脂肪酸甲酯的质量比对PUFA、EPA富集效果的影响进行了研究。结果表明：采用氯仿-甲醇提取剂体系,结合超声波萃取法,小球藻粗脂肪的提取率最高,提取次数为两次比较合适,与标准溶剂量相比,总溶剂量可减少42%。在室温（20~22℃）下,尿素与脂肪酸甲酯的质量比为6∶1,尿素与甲醇的质量比为1∶4时,PUFA占总脂肪酸的含量由脲包前的50%提高到82.9%;EPA占总脂肪酸的的含量由脲包前的39%提高到71.6%,EPA富集系数为1.84。

制备生物柴油用小球藻的油脂富集培养研究

研究了培养温度、光照强度、氮源及其氮含量对小球藻Chlorella spp的生长、油脂含量及脂肪酸的影响,以期获得最为适宜的富含油脂微藻的培养条件。采用比生长速率评价微藻的生长状况,以溶剂浸提法提取微藻中的油脂,并采用气质联用和气相色谱分析微藻的脂肪酸组成。研究结果表明,既能使微藻Chlorella spp良好生长又可提高其油脂含量的培养条件为:温度25℃、光照强度3 500 lux、添加氮源硝酸钠并使其含氮质量浓度为0.25 g/L,此时的油脂含量可达43.7%。微藻脂肪酸的组成以C16∶0、C18∶0、C18∶2为主,表明小球藻的主要脂肪酸组成为C16和C18脂肪酸。

小球藻营养液投喂轮虫效果的研究

通过小球藻营养液和活性干酵母单独或混合投喂褶皱臂尾轮虫(Brachionus plicatilis)的对比试验,从轮虫的生长状况、抱卵率和怀卵量的变化,比较不同饵料及投喂方式对轮虫生长繁殖的影响,结果表明：①投喂小球藻营养液和酵母的干重比为2：1(小球藻营养液53 g·亿个^(-1)·d^(-1)、酵母10g·亿个^(-1)·d^(-1))的轮虫增长密度最高；②投喂小球藻营养液和酵母的干重比为1：1(小球藻营养液40 g·亿个^(-1)·d^(-1)、酵母15 g·亿个^(-1)．d^(-1))的轮虫抱卵率最高；③单独或混合投喂小球藻营养液的轮虫培养桶内水质保持良好,水色呈浅褐色．且水中颗粒状物少；④水温28C比23C时轮虫增长快、抱卵率高,但易长红色真菌和聚缩虫。

高效原油降解小球藻株用于油污废水净化的实验研究

目的：研究应用生物技术净化含油污废水的方法。方法：制备具有降解原油功能的藻类，进行培养、转接、增殖，通过观察检测原油降解效果，筛选具优势的藻类用于净化含油污废水。结果：将筛选出的7种相对高效藻中的任意4种为一组进行正交实验，用于处理含油废水，表明以普通小球藻和蛋白核小球藻具优势，其中以普通小球藻最具优势，对于18．4mg／L的含油废水，降解去除率高达94％～95％。结论：小球藻属中的普通小球藻和蛋白核小球藻具有降解原油的能力，以普通小球藻降解原油的能力最强，单种藻株降解原油的能力比混合藻株强。

臭氧处理海水对小球藻生长和水质的影响研究

臭氧消毒后生成的氧化物如果过量将影响养殖生物和饵料微藻的生长,为此采用经臭氧处理的海水培养小球藻(Chlorella spp.),分析臭氧处理海水生成氧化物对小球藻生长的影响以及臭氧处理海水后氨氮(NH4+-N)和亚硝酸盐氮(NO2--N)含量变化。试验结果表明,在温度(25±1)℃,光照度10 000 lx左右,光照时数∶黑暗时数为14 h∶10 h,pH8.0±0.1,盐度30.0±0.1的条件下,臭氧生成氧化物质量浓度<0.735mg/L时,对小球藻不产生毒害作用;在臭氧生成氧化物质量浓度>1.036 mg/L时,有明显的毒害作用(小球藻大量死亡);质量浓度为2.364 mg/L时,小球藻全部死亡。经臭氧处理的海水,其氨氮和亚硝酸盐氮的质量浓度降低,其中氨氮最大降低82.6%。

小球藻生物富集锌、镉机制的研究

藻类对许多重金属具有较强的生物富集能力。小球藻 (Chlorellaspp )分别在不同系列Zn2 + 、Cd2 + 浓度下培养 8d间隔2d,测定小球藻的生物量及Zn和Cd的含量。结果表明 ,小球藻随水体中Zn2 + 和Cd2 + 的浓度不同 ,在重金属水体中暴露时间不同 ,具有不同的富集速率和能力。

小球藻中多糖的提取、分离与纯化

拟对小球藻中具有抗病毒、抗肿瘤等作用的活性物质成分研究，本文对小球藻多糖的提取与分离进行了初步研究．小球藻 （ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｓｐｐ．）经光照培养、冻融与超声彼破碎细胞，三氯乙酸沉淀蛋白，通过Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５凝胶柱分离可以得到分子量不同的两种多糖，结合醋酸纤维素膜电泳实验证明了同样的结论．

应用黄金分割法优选小球藻的培养温度

利用黄金分割(0.618)优选法测定了两株分离自海南近岸海域的小球藻(Chlorella spp.)的最适生长温度。结果表明,黄金分割优选法可以较少的实验次数找到小球藻的最适培养温度。两株小球藻在15～40℃温度范围内均可生长。小球藻HNC11的最适生长温度为34～36.5℃;小球藻HNC2的最适生长温度为28～30.5℃左右。

不同浓度小球藻与养殖模式对橄榄蛏蚌生长的影响

在水温为31.3~33.0℃的室内条件下,对体质量2.22~4.09 g的橄榄蛏蚌(Solenaia oleivora)投喂小球藻(Chlorella.spp),浓度设置为1.0×10^(6)、1.0×10^(5)、0.5×10^(5)、1.0×10^(4)和1.0×10^(3) cells/L,研究不同浓度小球藻对橄榄蛏蚌生长的影响;另设置无土、浅土池塘(5 cm厚)散养与网箱吊养模式,投喂小球藻密度为1.0×10^(4) cells/L,研究不同培育模式对橄榄蛏蚌生长的影响。30 d后测定不同浓度小球藻与不同养殖条件对橄榄蛏蚌生长率的影响。结果表明,在不同小球藻浓度间,橄榄蛏蚌含水量有一定差异;在小球藻浓度为1.0×10^(4) cells/L时橄榄蛏蚌体长与体质量增长率最高,在小球藻浓度为1.0×10^(3) cells/L时橄榄蛏蚌体长与体质量增长率最低。方差分析结果表明,不同小球藻浓度间橄榄蛏蚌肥满度无显著影响(F=0.817,P=0.543,P>0.05),含水量差异显著(F=6.627,P=0.009,P<0.05);3种养殖模式中,浅土模式更有利于橄榄蛏蚌生长,在该模式下与在自然环境中橄榄蛏蚌的栖息生境、摄食习性相似,能充分利用养殖水体底层的营养物质。

三种海洋微藻抗肿瘤活性的研究

利用不同的溶剂提取紫球藻、小球藻、等鞭金藻胞内和胞外产物,采用MTT(M ethylth iazoly pheny-tetrazoliumbrom ide)比色法检测胞内外产物对HeLa和K562肿瘤细胞活性的影响,以筛选和研究其中的抗肿瘤活性物质。结果表明:紫球藻胞外水相和破碎后上清液经石油醚∶乙酸乙酯(V∶V=1∶1)的萃取物、小球藻破碎后上清液经乙酸乙酯、正己烷∶环己烷(V∶V=1∶1)、三氯甲烷、甲醇∶甲苯(V∶V=1∶1)、石油醚的萃取物和等鞭金藻破碎后上清液经石油醚、乙醚、正己烷、乙醇的萃取物都有明显的抑制肿瘤细胞的效果,显示了从海洋生物微藻中开发新的抗肿瘤药物的潜力。

藻–菌单一及共生系统对海水养殖尾水的净化作用

为探索高效可行的海水养殖尾水处理技术,在净化尾水污染物的同时达到微藻生物量积累,本文对比了普通小球藻(Chlorella vulgaris)和芽孢杆菌(Bacillus spp.)在游离和固定形态下,单一和共生系统的细胞生长及其对尾水中氨氮(NH4+-N),正磷酸盐(PO43--P),总磷(TP),化学需氧量(CODMn)的去除效果。实验结果表明:游离状态下,藻-菌共生系统促进小球藻细胞生长及尾水中PO43--P和CODMn的去除。固定态藻-菌共生系统对NH4+-N, PO43--P和TP的处理效果优于单一固定态小球藻和单一固定态芽孢杆菌。对比实验设计的所有处理(游离或固定态下的单一藻、单一菌、藻-菌共生),藻-菌共固定系统的处理效果相对最优,对NH4+-N, PO43--P, TP和CODMn的去除率分别达到96.57%, 98.62%, 89.89%和39.09%,出水NH4+-N, PO43--P分别达到中国《渔业水质标准》和《海水养殖水排放要求》二级标准, CODMn达到《污水综合排放标准》二级标准。

共培体系下的藻菌互作研究

藻类和细菌之间的关系十分复杂,互相影响生长。相关细菌群落改变了微藻的代谢和生理。深入研究微藻和细菌之间的相互作用,对研究微藻生物量有重要影响。对小球藻与多株芽孢杆菌的相互作用进行了研究,在共培养条件下测定小球藻和芽孢杆菌的生长状况,评价小球藻和芽孢杆菌相互作用的影响,为建立高效的藻菌共生系统奠定基础,以促进微藻生物量的积累、降低微藻培养成本。

小球藻培养条件及其抑制α-葡萄糖苷酶活性的研究

通过对小球藻培养条件中初始pH值、接种量、培养温度、光照等因素进行研究,探讨小球藻的最佳培养条件,并对培养的小球藻提取物进行α-葡萄糖苷酶活性抑制实验。结果表明,初始pH值为7,接种量为100:10,培养温度为25℃/20℃(昼/夜),光照强度为10000Lx为小球藻的最佳培养条件;其水提物对α-葡萄糖苷酶活性的IC50值为3.14mg/mL,具有一定的抑制活性。