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稳定表达细胞色素P4502B6的Flp-In^(TM)CHO细胞系的建立及鉴定
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作者 李靖 陆定艳 +4 位作者 陈帅帅 孙佳 郑林 李勇军 刘亭 《贵州医科大学学报》 CAS 2024年第10期1435-1439,1446,共6页
目的构建稳定表达细胞色素P4502B6(CYP2B6)的Flp-In^(TM)CHO细胞系。方法将Flp-In^(TM)CHO细胞分为Flp-In^(TM)CHO组、Flp-In^(TM)CHO空载体组及Flp-In^(TM)CHO-CYP2B6组,通过Lipofectamine2000转染试剂,分别将pcDNA5/FRT空质粒和pcDNA5... 目的构建稳定表达细胞色素P4502B6(CYP2B6)的Flp-In^(TM)CHO细胞系。方法将Flp-In^(TM)CHO细胞分为Flp-In^(TM)CHO组、Flp-In^(TM)CHO空载体组及Flp-In^(TM)CHO-CYP2B6组,通过Lipofectamine2000转染试剂,分别将pcDNA5/FRT空质粒和pcDNA5/FRT-CYP2B6重组质粒转染至Flp-In^(TM)CHO空载体组细胞和Flp-In^(TM)CHO-CYP2B6组细胞中,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)及荧光素酶实验检测转染细胞中CYP2B6 mRNA水平、蛋白表达水平及活性,用四氮唑盐(MTS)测定转染CYP2B6的Flp-In^(TM)CHO细胞对环磷酰胺的毒性敏感性。结果与Flp-In^(TM)CHO组和Flp-In^(TM)CHO空载体组相比,Flp-In^(TM)CHO-CYP2B6组细胞中CYP2B6的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.01)、酶活性显著增加(P<0.001),对环磷酰胺的毒性敏感度显著增加(P<0.001)。结论成功构建稳定表达CYP2B6的Flp-In^(TM)CHO细胞系,为研究药物代谢和筛选毒性药物提供工具。 展开更多
关键词 细胞色素P4502B6 稳定表达 酶活性 环磷酰胺 Flp-In^(TM)cho细胞系
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市政污泥及其热处理渣对CHO-K1细胞的毒性研究
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作者 顾迪 张晨 +3 位作者 顾卫华 赵静 白建峰 张承龙 《有色金属(冶炼部分)》 CAS 北大核心 2024年第8期166-174,共9页
评估市政污泥资源化产物的健康风险对其安全规范利用具有指导意义。分别对某污水处理厂的污泥进行了热解和好氧发酵处理,运用中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)对市政污泥及其热处理渣开展细胞毒性试验和遗传毒性试验,评估其对典型哺乳动物细胞... 评估市政污泥资源化产物的健康风险对其安全规范利用具有指导意义。分别对某污水处理厂的污泥进行了热解和好氧发酵处理,运用中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)对市政污泥及其热处理渣开展细胞毒性试验和遗传毒性试验,评估其对典型哺乳动物细胞的危害和潜在风险。结果显示,与原污泥样品相比,污泥热解渣和好氧发酵渣的细胞毒性和遗传毒性均降低。与原污泥样品相比,RTCA细胞增殖试验结果显示,污泥热解渣和好氧发酵渣对CHO-K1细胞的生长抑制性明显减弱;CCK-8细胞毒性试验结果显示,污泥热解渣和好氧发酵渣的细胞相对存活率分别增加了161%和137%;Caspase 3细胞凋亡蛋白酶活力试验结果显示,暴露于污泥热解渣和好氧发酵渣中的CHO-K1细胞的Caspase 3凋亡蛋白酶的活性分别降低了29.3%和20.1%;彗星试验结果显示,污泥热解渣和好氧发酵渣的尾长分别缩短了64.5%和25.9%,尾矩分别减少了78.4%和28.1%。研究结果表明,热处理技术(热解处理和好氧发酵处理)可减少市政污泥的细胞毒性和遗传毒性,降低市政污泥对生态环境和人体健康的潜在风险。 展开更多
关键词 污泥热处理 cho-K1细胞 细胞毒性 彗星试验 重金属
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恒稳磁场辅助CHO细胞培养和表达特性研究
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作者 李晓红 李红文 +3 位作者 高丽 张雪艳 杨哪 李荣明 《工业微生物》 CAS 2024年第5期39-43,共5页
以中国仓鼠卵巢细胞为宿主细胞构建重组表达细胞用以表达单克隆抗体,已经被广泛应用于生物制药领域。物理调控是影响细胞增殖和表达的重要方式,但针对恒稳磁场暴露下的CHO细胞培养及其抗体表达还鲜有报道。基于此,文章利用3.0 mT恒稳磁... 以中国仓鼠卵巢细胞为宿主细胞构建重组表达细胞用以表达单克隆抗体,已经被广泛应用于生物制药领域。物理调控是影响细胞增殖和表达的重要方式,但针对恒稳磁场暴露下的CHO细胞培养及其抗体表达还鲜有报道。基于此,文章利用3.0 mT恒稳磁场,在37℃、8%CO_(2)环境下对CHO细胞进行克隆培养,通过克隆扩增筛选、蛋白表达及分析、拷贝数监测等手段来评估其对抗体表达的影响。结果表明,与对照组相比,在3.0 mT磁场环境下,单克隆形成数量增加了13.24%,细胞数量显著增多,单克隆抗体表达水平提升53.2%,克隆筛选周期缩短4~5 d。此外,在亚克隆筛选中,亚克隆的细胞数量和抗体表达在磁场暴露下略有增加,而抗体表达、蛋白质量和基因拷贝数在传代后均无显著变化,表明磁场暴露环境中培养的重组CHO细胞具有稳定的性质。该研究结果有望为未来CHO细胞的大规模培养以及磁场暴露下的高效生产抗体研究提供参考。 展开更多
关键词 cho细胞 恒稳磁场 克隆表达 抗体表达 蛋白质特性
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重组人糖蛋白激素β5/α2融合蛋白在CHO-S细胞中的表达纯化及功能活性分析 被引量:1
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作者 千爱君 萧耿苗 +4 位作者 李壮 梁志成 穆云萍 赵子建 李芳红 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期390-396,共7页
目的在悬浮中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO-S)中分泌表达、纯化重组hCGH-CTP融合蛋白,验证其对3T3-L1成熟脂肪细胞脂质积累的影响。方法构建CTP连接肽融合人糖蛋白激素β5/α2重组蛋白表达载体pcDNA3.1-rhCGH-CTP,... 目的在悬浮中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO-S)中分泌表达、纯化重组hCGH-CTP融合蛋白,验证其对3T3-L1成熟脂肪细胞脂质积累的影响。方法构建CTP连接肽融合人糖蛋白激素β5/α2重组蛋白表达载体pcDNA3.1-rhCGH-CTP,将其瞬时转染CHO-S悬浮细胞中,大量表达纯化并验证rhCGH-CTP蛋白生物学活性;通过干预3T3-L1成熟脂肪细胞24 h,观察细胞内甘油三酯(TG)水平的变化。结果Western blot结果显示,rhCGH-CTP蛋白在CHO-S细胞中成功表达,表达量可达715.4 mg·L^(-1);用AKTA pure蛋白纯化系统纯化蛋白,SDS-PAGE方法鉴定纯化出的蛋白纯度较高可达90%。此外,在高表达TSHR基因的成熟脂肪细胞3T3-L1中,利用ELISA试剂盒测定不同浓度rhCGH-CTP蛋白干预后胞内cAMP含量明显升高,说明rhCGH-CTP蛋白具有生物活性;油红O染色结果发现,与对照组相比,不同浓度rhCGH-CTP蛋白干预组的成熟脂肪细胞中TG含量明显降低(P<0.05)。结论成功表达并纯化了rhCGH-CTP融合蛋白,其具有良好的生物学活性并能有效降低TG,该研究为后续深入揭示CGH蛋白的生理作用及在临床实践中的潜在应用提供了重要基础。 展开更多
关键词 重组人糖蛋白激素β5/α2融合蛋白 真核表达 悬浮cho-S细胞 cAMP活性 基因工程 脂代谢
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改良Cho缝合术与B-Lynch缝合术治疗剖宫产产后出血患者的效果比较
5
作者 阮舜珊 《中国民康医学》 2024年第12期148-150,共3页
目的:比较改良Cho缝合术与B-Lynch缝合术治疗剖宫产产后出血患者的效果。方法:回顾性分析2020年5月至2023年5月在该院行剖宫产分娩的70例产妇的临床资料,根据子宫缝合方法不同将其分为观察组和对照组各35例。对照组采用B-Lynch缝合术,... 目的:比较改良Cho缝合术与B-Lynch缝合术治疗剖宫产产后出血患者的效果。方法:回顾性分析2020年5月至2023年5月在该院行剖宫产分娩的70例产妇的临床资料,根据子宫缝合方法不同将其分为观察组和对照组各35例。对照组采用B-Lynch缝合术,观察组采用改良Cho缝合术。比较两组止血效果,术中、产后2 h、产后24 h出血量,手术时间,产后恶露持续时间,以及并发症发生率。结果:观察组治疗总有效率为94.74%(36/35),高于对照组的78.12%(25/35),差异有统计学意义(P<0.05);观察组术中及产后2、24 h出血量均少于对照组,手术时间、产后恶露持续时间均短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组并发症发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:改良Cho缝合术治疗剖宫产产后出血可提高止血效果,减少术中及产后出血量,缩短手术时间及产后恶露持续时间,效果优于B-Lynch缝合术治疗。 展开更多
关键词 改良cho缝合术 B-LYNCH缝合术 子宫压迫缝合术 剖宫产 产后出血
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锌离子对CHO细胞IgG2抗体表达及二硫键异构体分布的影响
6
作者 刘学明 蒋仁材 +4 位作者 韦梦娟 刘唯 胡婷婷 郭兴东 曹春来 《生物化工》 CAS 2024年第3期14-19,34,共7页
目的:研究Zn^(2+)对中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)生长、IgG2表达及其二硫键异构体分布的影响。方法:补料分批培养外分泌IgG2的CHO细胞株中,分别添加不同浓度的葡萄糖酸锌,每天监测细胞密度以及活率;培养14 d后离心除细胞得上清液,通过生... 目的:研究Zn^(2+)对中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)生长、IgG2表达及其二硫键异构体分布的影响。方法:补料分批培养外分泌IgG2的CHO细胞株中,分别添加不同浓度的葡萄糖酸锌,每天监测细胞密度以及活率;培养14 d后离心除细胞得上清液,通过生化分析仪测定上清液中IgG2含量,之后应用蛋白A磁珠亲和得到IgG2纯化样品,非还原十二烷基硫酸钠毛细管电泳(nrCE-SDS)、阳离子交换高效液相色谱(CEX-HPLC)和反相高效液相色谱(RP-HPLC)检测IgG2二硫键异构体分布。结果:25~200μmol/L浓度条件下,Zn^(2+)对于CHO细胞生长,活率维持以及IgG2抗体的表达均有一定的负面影响,并与Zn^(2+)浓度具有负相关性;而Zn^(2+)的添加能够显著提高IgG2二硫键异构体中IgG2-B亚型的比例,下调IgG2-A和IgG2-A/B两种亚型比例。其中100μmol/L Zn^(2+)效果最明显,IgG2-B比例提高近10个百分点。结论:Zn^(2+)能够抑制CHO细胞生长以及IgG2表达,同时Zn^(2+)对二硫键异构体的调控至关重要。 展开更多
关键词 cho细胞 免疫球蛋白G2 锌离子 二硫键异构体
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接种重组带状疱疹疫苗(CHO细胞)偶合带状疱疹性神经痛1例
7
作者 吴燕飞 周翠萍 +1 位作者 邓鹏飞 杨来宝 《现代医药卫生》 2024年第17期3049-3052,共4页
采用流行病学方法提取受种者、疫苗生产企业和接种方相关资料,对接种重组带状疱疹(HZ)疫苗(CHO细胞)后出现的1例HZ性神经痛(PHN)病例开展调查,评估PHN与疫苗接种的因果关系,并为防止类似事件提供科学依据。根据疫苗接种与临床表现的时... 采用流行病学方法提取受种者、疫苗生产企业和接种方相关资料,对接种重组带状疱疹(HZ)疫苗(CHO细胞)后出现的1例HZ性神经痛(PHN)病例开展调查,评估PHN与疫苗接种的因果关系,并为防止类似事件提供科学依据。根据疫苗接种与临床表现的时间和因果关联等确定所患PHN与疫苗无因果关系,不属于预防接种异常反应,属偶合症。重组HZ疫苗是目前预防HZ安全、有效的手段。 展开更多
关键词 重组带状疱疹疫苗 cho细胞 带状疱疹性神经痛 偶合症 病例报告
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APS作为重组(CHO细胞)乙型肝炎疫苗佐剂的安全性及免疫效果 被引量:21
8
作者 姚伟 李玉 +3 位作者 任魁 张岩锐 范临兰 郑菊梅 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2002年第4期211-213,共3页
目的 探讨黄芪多糖(APS)作为重组(CHO细胞)乙肝疫苗免疫佐剂的可行性。方法APS与重组(CHO细胞)乙肝病毒表面抗原(HBsAg)混合制成疫苗,进行了动物毒性试验、过敏试验及效力试验。结果 该佐剂毒性轻微,无过敏反应,同一剂量组动物... 目的 探讨黄芪多糖(APS)作为重组(CHO细胞)乙肝疫苗免疫佐剂的可行性。方法APS与重组(CHO细胞)乙肝病毒表面抗原(HBsAg)混合制成疫苗,进行了动物毒性试验、过敏试验及效力试验。结果 该佐剂毒性轻微,无过敏反应,同一剂量组动物血清抗-HBs阳转率高于Al(OH)3对照组。结论APS是一种很有潜力的疫苗佐剂。 展开更多
关键词 APS cho细胞 乙型肝炎疫苗佐剂 安全性 免疫效果 黄芪多糖
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通过载体DHFR基因的弱化提高抗体在CHO细胞中的表达 被引量:10
9
作者 白银 王琰 +3 位作者 张海荣 周丽君 吕英谦 俞莉章 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期62-64,67,共4页
目的:提高抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体在二氢叶酸还原酶缺陷的CHO细胞株(CHO/DHFR-)中表达的产量。方法:对表达载体中DHFR基因表达调控序列进行一系列的删除突变和点突变后,构建不同的嵌合抗体表达载体。用这些载体转染CHO细胞并以递增量... 目的:提高抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体在二氢叶酸还原酶缺陷的CHO细胞株(CHO/DHFR-)中表达的产量。方法:对表达载体中DHFR基因表达调控序列进行一系列的删除突变和点突变后,构建不同的嵌合抗体表达载体。用这些载体转染CHO细胞并以递增量的氨甲喋呤(MTX)筛选,用ELISA法测定每个加压水平的各组细胞中抗体的表达水平。结果:通过对表达载体中DHFR基因表达调控序列的突变,使DHFR的基础表达水平产生了不同程度的弱化。转染CHO细胞后,可明显提高MTX加压增加抗体表达的效果,抗体表达水平的增加基本与DHFR基因的弱化程度呈正相关。从弱化程度最高的pWS2-BDI组中,我们筛选得到表达量达55μg/(106细胞·24 h)的高表达细胞株,经锌离子进一步诱导后,表达量可达100μg/(106细胞·24 h)以上。结论:弱化表达载体中DHFR的表达,可提高MTX对工程抗体表达的增加效果。 展开更多
关键词 载体 DHFR基因 真核表达 抗体 cho细胞
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三种病毒启动子在中国地鼠卵巢(CHO)细胞中表达活性的比较 被引量:9
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作者 刘文军 杨芙蓉 +2 位作者 阮力 任贵方 朱既明 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期164-168,共5页
三种病毒启动子在中国地鼠卵巢(CHO)细胞中表达活性的比较刘文军杨芙蓉阮力任贵方朱既明(中国预防医学科学院病毒学研究所北京100052)关键词CHOdhfr-细胞,启动子,瞬时表达,HBsAg基因,CAT基因目前大多... 三种病毒启动子在中国地鼠卵巢(CHO)细胞中表达活性的比较刘文军杨芙蓉阮力任贵方朱既明(中国预防医学科学院病毒学研究所北京100052)关键词CHOdhfr-细胞,启动子,瞬时表达,HBsAg基因,CAT基因目前大多数哺乳动物细胞表达载体中的启动子-... 展开更多
关键词 乙型肝炎 表面抗原 cho 病毒 启动子 基因表达
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人IL-24基因在CHO细胞中的表达及其抗肿瘤效应 被引量:11
11
作者 缪竞诚 陈雄艳 +2 位作者 盛伟华 谢宇锋 杨吉成 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期567-570,共4页
目的构建人IL-24基因真核表达载体,在CHO细胞中进行稳定表达,并检测重组表达蛋白rhIL-24的抗肿瘤活性。方法将测序验证的人IL-24基因亚克隆至真核表达载体pcDNA3,构建重组真核表达载体pcDNA3-hIL-24,转染CHO细胞进行稳定表达,经RT-PCR... 目的构建人IL-24基因真核表达载体,在CHO细胞中进行稳定表达,并检测重组表达蛋白rhIL-24的抗肿瘤活性。方法将测序验证的人IL-24基因亚克隆至真核表达载体pcDNA3,构建重组真核表达载体pcDNA3-hIL-24,转染CHO细胞进行稳定表达,经RT-PCR鉴定后用MTT法、Ho-echst染色和流式细胞术检测CHO细胞表达的rhIL-24诱导A549人肺腺癌细胞凋亡的抗肿瘤效应,用ELISA检测其刺激免疫细胞分泌IL-6和IFN-γ的功能。结果经双酶切和PCR鉴定,重组真核表达载体构建正确,人IL-24在CHO细胞中获得稳定表达,且所表达的人IL-24具有较强的诱导A549人肺腺癌细胞凋亡及上调免疫细胞表达IL-6和IFN-γ的免疫刺激活性。结论人IL-24基因的稳定表达和抗肿瘤效应的实验研究,为进一步研究人IL-24抗肿瘤的分子机制及潜在的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 人白细胞介素-24 稳定转染 cho细胞 凋亡
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N-acetyl-l-aspartate values of hippocampus are reduced in patients with hypochondriasis
12
作者 Huseyin Ozdemir Osman Mermi +4 位作者 M. Gurkan Gurok Sema Saglam Hanefi Yildirim Semih Sec Specialist Murad Atmaca 《Journal of Biomedical Science and Engineering》 2013年第6期693-697,共5页
Background: Given that on the one side considerable similarities between hypochondriasis and obsessive- compulsive disorder (OCD) by means of sharing a number of features, including intrusive thoughts and repeated che... Background: Given that on the one side considerable similarities between hypochondriasis and obsessive- compulsive disorder (OCD) by means of sharing a number of features, including intrusive thoughts and repeated checking (Barsky, 1992), on the other side similar structural neuroimaging data that found hypochondriac patients to have significantly smaller mean left and right OFC, and greater left thalamus volumes compared to those of healthy controls. Aims: We considered to investigate the hippocampal neurochemicals, found changed in OCD patients, in hypochondriac patients. Methods: Fifteen patients with hypochondriasis, recruited from our out- or in-patient clinics, were compared with 15 healthy control comparisons in regard to proton magnetic resonance spectroscopy (1H-MRS) imaging of hippocampus. Results: The patients with hypochondriasis had lower right and left NAA/CHO, and NAA/CRE, and near-significant lower right CHO/CRE hippocampal ratios than healthy matched comparison subjects. Conclusion: The data of the present investigation in patients with hypochondriasis provide preliminary evidence of lower right and left NAA/CHO, and NAA/CRE, near-significant lower right CHO/CRE hippocampal ratios, revealing neurochemical alterations in hippocampus and a further support the notion that hypochondriasis shares a variety of neurobiological similarities with OCD. 展开更多
关键词 HYPOchoNDRIASIS NAA/cho NAA/CRE cho/CRE MRS
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rCHO细胞在葡萄糖限制流加培养过程中的生长与代谢特性 被引量:14
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作者 高量 游磊 +1 位作者 朱明龙 谭文松 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第1期74-78,共5页
以调控rCHO细胞的葡萄糖代谢为主要研究目标,通过在2L生物反应器中进行的批培养和葡萄糖限制恒速流加培养的方法,考察了在培养过程中葡萄糖浓度对rCHO细胞生长、葡萄糖和谷氨酰胺消耗,以及副产物乳酸、氨和丙氨酸生成的影响。结果表明:... 以调控rCHO细胞的葡萄糖代谢为主要研究目标,通过在2L生物反应器中进行的批培养和葡萄糖限制恒速流加培养的方法,考察了在培养过程中葡萄糖浓度对rCHO细胞生长、葡萄糖和谷氨酰胺消耗,以及副产物乳酸、氨和丙氨酸生成的影响。结果表明:葡萄糖限制的流加培养过程中,活细胞密度XV达到2.35×106cells·mL-1,较批培养提高一倍;而乳酸生成大幅减少。在葡萄糖限制培养阶段,qLac和YLac/Gluc持续降低至零,而qo2/qGluc由0.7mmol·mmol-1上升至4.3mmol·mmol-1,说明更多葡萄糖进入高效释能代谢途径。同时谷氨酰胺的消耗增加,YAmm/Gln增大,YAla/Gln下降,证明谷氨酰胺的能量利用率也有所提高。 展开更多
关键词 批培养 流加培养 葡萄糖限制 cho细胞
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用于生产重组蛋白药物的抗凋亡CHO宿主细胞株的建立 被引量:6
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作者 来大志 付玲 +5 位作者 于长明 齐连权 翁少洁 于婷 王海涛 陈薇 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期322-326,共5页
哺乳动物工程细胞在大规模培养生产重组蛋白时很容易发生细胞凋亡 ,从而导致生产过程提前终止 ,造成生产成本高昂。细胞代谢产物氨已被证明可以促进细胞凋亡 ,而线粒体膜整合蛋白Bcl 2可以通过促进线粒体膜完整性而抑制细胞凋亡。本实... 哺乳动物工程细胞在大规模培养生产重组蛋白时很容易发生细胞凋亡 ,从而导致生产过程提前终止 ,造成生产成本高昂。细胞代谢产物氨已被证明可以促进细胞凋亡 ,而线粒体膜整合蛋白Bcl 2可以通过促进线粒体膜完整性而抑制细胞凋亡。本实验应用谷氨酰胺合成酶加压系统在CHO工程细胞中高效表达中国仓鼠Bcl 2蛋白 ,使细胞具有抗凋亡能力的同时 ,利用谷氨酸和氨合成谷氨酰胺而有效降低培养基中氨的含量 。 展开更多
关键词 细胞凋亡 cho细胞 谷氨酰胺合成酶 重组蛋白药物 哺乳动物细胞 表达系统
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携带共扩增基因的CHO细胞表达载体的构建 被引量:10
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作者 刘国奇 陈小密 +4 位作者 徐静 宋宏彬 于长明 童贻刚 王海涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第1期17-19,共3页
目的构建携带共扩增基因的CHO细胞表达载体。方法以质粒载体 pCI neo为骨架 ,应用小鼠二氢叶酸还原酶(dhfr)基因的cDNA ,构建了哺乳动物细胞表达载体pCdhfr1。把绿色荧光蛋白基因亚克隆到pCdhfrl的多克隆位点 ,构建了表达质粒 pFP。结... 目的构建携带共扩增基因的CHO细胞表达载体。方法以质粒载体 pCI neo为骨架 ,应用小鼠二氢叶酸还原酶(dhfr)基因的cDNA ,构建了哺乳动物细胞表达载体pCdhfr1。把绿色荧光蛋白基因亚克隆到pCdhfrl的多克隆位点 ,构建了表达质粒 pFP。结果经脂质体法转染CHO细胞 ,以氨甲喋呤为选择标记 ,经过一轮扩增后 ,获得表达绿色荧光蛋白的CHO细胞株。结论应用CHO/DHFR表达系统 ,为构建CHO细胞的工程细胞株建立了良好的模型。 展开更多
关键词 二氮叶酸还原酶 cho细胞 构建 表达载体
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表达单克隆抗体的CHO细胞无蛋白培养基的优化 被引量:10
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作者 刘国庆 陈飞 +2 位作者 赵亮 范里 谭文松 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第1期96-101,共6页
在自主研发无蛋白培养基的基础上,考察了氨基酸、维生素和葡萄糖对CHO细胞生长、代谢与抗体合成的影响。结果表明,对培养过程中消耗较多的氨基酸进行补充,虽然不能促进细胞生长,但有利于培养后期细胞活性维持与抗体合成;B族维生素的添... 在自主研发无蛋白培养基的基础上,考察了氨基酸、维生素和葡萄糖对CHO细胞生长、代谢与抗体合成的影响。结果表明,对培养过程中消耗较多的氨基酸进行补充,虽然不能促进细胞生长,但有利于培养后期细胞活性维持与抗体合成;B族维生素的添加能促进细胞生长并延长培养时间;作为重要的碳源和能源,葡萄糖浓度较高时会抑制细胞生长,而浓度较低时不能有效支持细胞生长与抗体合成,维持其在适当浓度有利于细胞生长并能延长培养时间,从而有利于提高抗体产量。通过合理调整各营养物的浓度配比形成了优化的无蛋白培养基,CHO细胞在该培养基中的最高密度达到52.6×105cells mL 1,抗体产量达到274 mg L 1,与初始培养基相比分别提高了33%和63%。总之,在细胞培养过程中应维持充足且平衡的营养物成分,以有效供应细胞生长与抗体合成的需求。 展开更多
关键词 cho细胞 单克隆抗体 无蛋白培养基 优化
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谷氨酰胺对微囊化重组CHO细胞生长代谢及内皮抑素表达的影响 被引量:7
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作者 周晶 张英 +4 位作者 王为 马隽宇 张华安 郭昕 马小军 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期162-166,共5页
微囊化技术是一种有发展潜力的生物技术,在细胞移植和药物控释等方面具有广泛的应用。然而由于目前微囊化细胞规模化培养技术还不成熟,阻碍了其在临床治疗中的推广与应用。为了了解微囊化重组CHO细胞的生长代谢特性为今后规模化培养优... 微囊化技术是一种有发展潜力的生物技术,在细胞移植和药物控释等方面具有广泛的应用。然而由于目前微囊化细胞规模化培养技术还不成熟,阻碍了其在临床治疗中的推广与应用。为了了解微囊化重组CHO细胞的生长代谢特性为今后规模化培养优化提供技术参考,考察了主要氮源物质谷氨酰胺对微囊化重组CHO细胞生长代谢及内皮抑素表达的影响。结果显示:当谷氨酰胺起始浓度从2.69mmolL增加到9.05mmolL时最大活细胞密度并没有增高,细胞增殖没有显著差异。当谷氨酰胺起始浓度较低(2.69mmolL)时,葡萄糖的比消耗速率较大;当谷氨酰胺起始浓度增高时(7.91mmolL~9.05mmolL)葡萄糖和谷氨酰胺的比消耗速率增大,但细胞对葡萄糖和谷氨酰胺的利用率降低。谷氨酰胺对产物表达有显著影响,起始浓度为4.97mmolL时的内皮抑素累积浓度最高,达546.36ngmL,过低和过高谷氨酰胺起始浓度下内皮抑素的累积浓度均较低。 展开更多
关键词 谷氨酰胺 微囊化 cho细胞 代谢 内皮抑素
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人Delta-like-1胞外区在CHO细胞的表达纯化及对造血祖细胞的扩增作用 被引量:7
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作者 鲁茁壮 吴祖泽 +3 位作者 刘红军 张群伟 贾向旭 王立生 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第3期222-226,共5页
Notch信号通路在调控造血干细胞的增殖分化中具有重要作用。本研究克隆表达人Notch配体Delta like 1(Dll 1)的胞外区 (hDll 1ext) ,并观察其对脐带血造血祖细胞的扩增作用。从人骨髓单个核细胞中提取总RNA ,用RT PCR的方法扩增Delta lik... Notch信号通路在调控造血干细胞的增殖分化中具有重要作用。本研究克隆表达人Notch配体Delta like 1(Dll 1)的胞外区 (hDll 1ext) ,并观察其对脐带血造血祖细胞的扩增作用。从人骨髓单个核细胞中提取总RNA ,用RT PCR的方法扩增Delta like 1基因胞外区 ,克隆到T载体。测序正确后 ,亚克隆到pcDNA3.1/Myc His(+)A表达载体。用脂质体转染CHO细胞 ,G4 18筛选单克隆 ,Western印迹检测hDll 1ext的分泌表达情况。选择表达量高的细胞克隆 ,扩增并收集上清。用金属亲和层析柱从上清中纯化融合蛋白hDll 1ext。利用免疫磁性分离方法分离脐带血CD34+ 细胞。结果表明 ,RT PCR方法检测到脐带血CD34+ 细胞表达Notch 1受体。在含rhIL 3,rhSCF及rhVEGF的脐带血CD34+ 细胞无血清培养体系中 ,加入纯化的hDll 1ext,通过集落培养检测hDll 1ext对造血祖细胞的扩增作用。含hDll 1ext组中CFU Mix和HPP CFC数量是对照组的 1.5倍 ,结论 :重组的hDll 展开更多
关键词 Delta-like-1 NOTCH cho细胞 造血祖细胞
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重组CHO细胞培养过程中代谢产物对细胞分泌HBsAg的影响 被引量:6
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作者 李玉 姚伟 +2 位作者 张岩锐 吴玉梅 郑菊梅 《药物生物技术》 CAS CSCD 2002年第4期209-211,共3页
为了获得重组CHO细胞培养的最佳条件,使其能连续高效表达HBsAg,以含不同量谷氨酰胺的DMEM溶液培养重组CHO细胞,测定了不同阶段氨基酸、氨、乳酸含量及HBsAg滴度。结果表明谷氨酰胺的分解产物氨与乳酸均能抑制细胞的生长和分泌HBsAg,减... 为了获得重组CHO细胞培养的最佳条件,使其能连续高效表达HBsAg,以含不同量谷氨酰胺的DMEM溶液培养重组CHO细胞,测定了不同阶段氨基酸、氨、乳酸含量及HBsAg滴度。结果表明谷氨酰胺的分解产物氨与乳酸均能抑制细胞的生长和分泌HBsAg,减少细胞培养液中的谷氨酰用量可使HBsAg分泌量增加。 展开更多
关键词 重组cho细胞 代谢产物 细胞分泌 HBSAG 细胞培养 谷氨酰胺 乙肝疫苗
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狂犬病毒aG株糖蛋白在CHO细胞中的表达 被引量:4
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作者 钱源 孙明波 +5 位作者 张鸣 杨卉娟 蒋燕军 姜述德 廖国阳 李卫东 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第3期212-214,共3页
目的克隆狂犬病毒aG株糖蛋白(Glycoprotein)基因,构建重组真核表达载体,在CHO细胞中表达aG株糖蛋白。方法采用RTPCR,从狂犬病毒aG株基因组RNA中扩增GP基因,并将该基因克隆至真核表达载体pCIdhfr上,以脂质体介导法转染CHOdhfr-细胞。用MT... 目的克隆狂犬病毒aG株糖蛋白(Glycoprotein)基因,构建重组真核表达载体,在CHO细胞中表达aG株糖蛋白。方法采用RTPCR,从狂犬病毒aG株基因组RNA中扩增GP基因,并将该基因克隆至真核表达载体pCIdhfr上,以脂质体介导法转染CHOdhfr-细胞。用MTX筛选的抗性克隆经ELISA、免疫荧光及Westernblot检测GP蛋白的表达。结果克隆到狂犬病毒aG株糖蛋白全长基因,并在CHO细胞中进行表达。结论成功地在CHO细胞中表达了狂犬病毒aG株的糖蛋白,为进一步开发狂犬病毒基因工程疫苗打下基础。 展开更多
关键词 cho细胞 狂犬病毒 糖蛋白 AG WESTERN-BLOT 真核表达载体 RT-PCR 基因工程疫苗 基因克隆 免疫荧光 全长基因 RNA 基因组 介导法 脂质体 转染
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