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Role of endoscopic ultrasound/SpyScope in diagnosis and treatment of choledocholithiasis in pregnancy 被引量:11
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作者 Mohit Girotra Niraj Jani 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2010年第28期3601-3602,共2页
Cholelithiasis and choledocholithiasis occur frequently in pregnancy and their management can be complicated. Traditional endoscopic retrograde cholangiopancreatography(ERCP)is the first line treatment for choledochol... Cholelithiasis and choledocholithiasis occur frequently in pregnancy and their management can be complicated. Traditional endoscopic retrograde cholangiopancreatography(ERCP)is the first line treatment for choledocholithiasis,but in addition to its baseline risks,fluoroscopy poses an additional radiation risk to the fetus. Endoscopic ultrasound(EUS)is an accurate modality for detecting common bile duct stones,but its role has not been defined in pregnancy.We describe an alternative management strategy to conventional ERCP in a pregnant patient with choledocholithiasis and cholangitis detected using EUS and choledochoscopy. 展开更多
关键词 SpyScope Endoscopic ultrasound cho- ledocholithiasis MANAGEMENT PREGNANCY
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重组人糖蛋白激素β5/α2融合蛋白在CHO-S细胞中的表达纯化及功能活性分析 被引量:1
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作者 千爱君 萧耿苗 +4 位作者 李壮 梁志成 穆云萍 赵子建 李芳红 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期390-396,共7页
目的在悬浮中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO-S)中分泌表达、纯化重组hCGH-CTP融合蛋白,验证其对3T3-L1成熟脂肪细胞脂质积累的影响。方法构建CTP连接肽融合人糖蛋白激素β5/α2重组蛋白表达载体pcDNA3.1-rhCGH-CTP,... 目的在悬浮中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO-S)中分泌表达、纯化重组hCGH-CTP融合蛋白,验证其对3T3-L1成熟脂肪细胞脂质积累的影响。方法构建CTP连接肽融合人糖蛋白激素β5/α2重组蛋白表达载体pcDNA3.1-rhCGH-CTP,将其瞬时转染CHO-S悬浮细胞中,大量表达纯化并验证rhCGH-CTP蛋白生物学活性;通过干预3T3-L1成熟脂肪细胞24 h,观察细胞内甘油三酯(TG)水平的变化。结果Western blot结果显示,rhCGH-CTP蛋白在CHO-S细胞中成功表达,表达量可达715.4 mg·L^(-1);用AKTA pure蛋白纯化系统纯化蛋白,SDS-PAGE方法鉴定纯化出的蛋白纯度较高可达90%。此外,在高表达TSHR基因的成熟脂肪细胞3T3-L1中,利用ELISA试剂盒测定不同浓度rhCGH-CTP蛋白干预后胞内cAMP含量明显升高,说明rhCGH-CTP蛋白具有生物活性;油红O染色结果发现,与对照组相比,不同浓度rhCGH-CTP蛋白干预组的成熟脂肪细胞中TG含量明显降低(P<0.05)。结论成功表达并纯化了rhCGH-CTP融合蛋白,其具有良好的生物学活性并能有效降低TG,该研究为后续深入揭示CGH蛋白的生理作用及在临床实践中的潜在应用提供了重要基础。 展开更多
关键词 重组人糖蛋白激素β5/α2融合蛋白 真核表达 悬浮cho-S细胞 cAMP活性 基因工程 脂代谢
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CHO-1助辛烷值剂在催化裂化装置上的应用
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作者 俞华信 霍永清 《石油炼制》 CSCD 1990年第1期24-29,共6页
本文介绍CHO-1助辛烷值剂在120×1064t/a催化裂化装置上的使用结果。当系统藏是量中助辛烷值剂占13.4%时,加工石蜡基原料,汽油RON从88.6-89.1提高到91-91.3,MON从78.5-78.7提高到79.7-80。对于加工不同种类原油的... 本文介绍CHO-1助辛烷值剂在120×1064t/a催化裂化装置上的使用结果。当系统藏是量中助辛烷值剂占13.4%时,加工石蜡基原料,汽油RON从88.6-89.1提高到91-91.3,MON从78.5-78.7提高到79.7-80。对于加工不同种类原油的重馏分油或掺炼大庆减压渣油,采用不同回炼比或单程裂化,以及使用CO助燃剂或金属钝化剂,CHO-1助辛烷值剂均能适应。 展开更多
关键词 cho-1 助辛烷值剂 催化裂化装置 石油炼制
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重组人α-半乳糖苷酶在悬浮CHO-S细胞中的表达、纯化及功能活性鉴定 被引量:1
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作者 邓木兰 周泓宇 +7 位作者 郑可欣 李昭阳 郭婉怡 王艳苹 梁志成 李芳红 穆云萍 赵子建 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期774-781,共8页
目的 运用无血清可高密度悬浮培养的中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells, CHO-S)表达体系,分泌表达并纯化重组人α-半乳糖苷酶(recombinant human α-galactosidase A, rhα-Gal A),验证其对法布雷病贮积底物神经酰胺三己糖... 目的 运用无血清可高密度悬浮培养的中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells, CHO-S)表达体系,分泌表达并纯化重组人α-半乳糖苷酶(recombinant human α-galactosidase A, rhα-Gal A),验证其对法布雷病贮积底物神经酰胺三己糖苷(globotriaosylceramide, Gb3 or GL3)的清除效果。方法 构建人α-半乳糖苷酶基因gla融合6×His标签的表达载体pcDNA4-GLA,将其转染至悬浮CHO-S细胞中,表达纯化并检测rhα-Gal A糖基化形式、表达量及酶活性;通过与人皮肤成纤维细胞共孵育,观察rhα-Gal A是否能被摄取到胞内并有效清除Gb3。结果 研究结果显示,rhα-Gal A成功在CHO-S细胞中表达,表达量最高可达(100±20.6) mg·L^(-1),且rhα-Gal A被糖基化修饰,酶活与商品酶Fabrazyme酶活相近,为(59±9.1) kU·g^(-1);此外,rhα-Gal A能被有效摄取到人成纤维细胞胞内并靶向溶酶体进而有效清除Gb3。结论 利用瞬时转染技术在悬浮CHO-S细胞中成功表达并纯化出rhα-Gal A,具有良好的生物学活性且可有效清除Gb3,为我国法布雷病的酶替代疗法提供新的选择。 展开更多
关键词 重组人α-半乳糖苷酶 法布雷病 酶替代疗法 悬浮cho-S细胞 溶酶体贮积症 基因工程
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CHO-2辛烷值助剂的工业应用
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作者 吴永强 花小兵 +1 位作者 陈俊豪 任斌 《炼油设计》 1999年第9期28-29,共2页
关键词 催化裂化 辛烷值 助剂 cho-2 汽油 工业应用
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拟人参皂甙F11减轻吗啡引起的CHO—μ[^35S]GTPγS结合增强的作用 被引量:1
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作者 李竹 熊英 《中国药理学会通讯》 2000年第2期33-33,共1页
关键词 拟人参皂甙F11 吗啡 cho-μ细胞 [^35S]GTPγS 中药
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猪源IFN-λ3在CHO-S细胞中的表达及其抗口蹄疫病毒活性分析
7
作者 袁红 白兴文 +8 位作者 李坤 李平花 孙普 宋雅丽 焦云娟 刘在新 卢曾军 李冬 包慧芳 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期190-196,共7页
为了探究猪源IFN-λ3蛋白能否在CHO-S悬浮细胞中表达以及表达蛋白的抗口蹄疫病毒(FMDV)活性,根据NCBI上的猪源IFN-λ3序列,构建真核表达载体pcDNA3.4-IFNλ3-His,将其转染至CHO-K1贴壁细胞中,用间接免疫荧光试验和Western-blot验证重组... 为了探究猪源IFN-λ3蛋白能否在CHO-S悬浮细胞中表达以及表达蛋白的抗口蹄疫病毒(FMDV)活性,根据NCBI上的猪源IFN-λ3序列,构建真核表达载体pcDNA3.4-IFNλ3-His,将其转染至CHO-K1贴壁细胞中,用间接免疫荧光试验和Western-blot验证重组质粒是否表达IFN-λ3蛋白。将pcDNA3.4-IFNλ3-His转染至CHO-S悬浮细胞中大量制备IFN-λ3蛋白,用AKTA蛋白纯化系统纯化蛋白,用SDS-PAGE和Western-blot方法鉴定纯化出的蛋白,用细胞毒性试验分析纯化蛋白是否具有细胞毒性,用实时荧光定量PCR、Western-blot和空斑试验三种方法研究纯化蛋白的抗FMDV活性。结果显示,重组质粒pcDNA3.4-IFNλ3-His在CHO-K1细胞中瞬时表达IFN-λ3,在CHO-S细胞中以分泌形式表达IFN-λ3;用AKTA系统能够纯化出纯度较高的IFN-λ3蛋白;纯化出的IFN-λ3对PK-15细胞无明显毒性,能够抑制FMDV RNA的复制、减弱病毒蛋白翻译活动以及降低子代病毒的生成。本研究为发展新型FMDV防控策略提供了新方向。 展开更多
关键词 猪源IFN-λ3 表达 cho-S细胞 口蹄疫病毒 抗病毒活性
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人源化抗RSV病毒抗体在CHO-S细胞中的高效表达 被引量:1
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作者 刘春磊 陈习平 +2 位作者 李娜娜 黄琴蓉 寇天赐 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期184-186,共3页
为了有效预防及治疗呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染引起的疾病,在CHO-S细胞中表达了人源化抗RSV病毒抗体。以pCHO1.0为载体,分别通过Eco RⅤ(5')和PacⅠ(3')、AvrⅡ(5')和Bst Z17Ⅰ(3')双酶切,... 为了有效预防及治疗呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染引起的疾病,在CHO-S细胞中表达了人源化抗RSV病毒抗体。以pCHO1.0为载体,分别通过Eco RⅤ(5')和PacⅠ(3')、AvrⅡ(5')和Bst Z17Ⅰ(3')双酶切,将轻、重链克隆进载体,采用电转的方法,将构建好的质粒转染进CHO-S宿主细胞,通过嘌呤霉素和甲氨蝶呤压力筛选以及有限稀释法,获得能稳定表达抗体的单克隆细胞株。在摇瓶中进行仅补加葡萄糖的流加培养试验,CHO-S细胞在培养7 d时活细胞密度达到最大,为1.3×10~7 cells/ml,在培养12 d时细胞活性降低至80%以下,结束培养,最终抗体表达水平达到130 mg/L,上清液中抗体总活性达到2.90×10~5 IU/ml。经蛋白A亲和色谱纯化,抗体纯度达到98%以上。 展开更多
关键词 抗呼吸道合胞病毒抗体 cho-S细胞 表达
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十二指肠乳头切开联合腹腔镜胆囊切除术治疗老年性胆囊并胆总管结石 被引量:27
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作者 梁志坚 方永平 +2 位作者 李坤平 罗小仔 陈武业 《中华肝胆外科杂志》 CSCD 北大核心 2017年第8期521-525,共5页
目的观察内镜十二指肠乳头括约肌切开取石术后联合腹腔镜下胆囊切除术(EST+LC)与腹腔镜胆囊切除联合胆总管探查取石术(LC+LCBDE)治疗老年性胆囊并胆总管结石患者的临床疗效,探讨老年性胆囊结石并胆总管结石患者的治疗策略。方法... 目的观察内镜十二指肠乳头括约肌切开取石术后联合腹腔镜下胆囊切除术(EST+LC)与腹腔镜胆囊切除联合胆总管探查取石术(LC+LCBDE)治疗老年性胆囊并胆总管结石患者的临床疗效,探讨老年性胆囊结石并胆总管结石患者的治疗策略。方法回顾性分析我院2013年1月至2016年6月收治的符合入选标准的158例胆总管结石并胆囊结石患者临床资料。观察组82例患者于腹膜炎控制后行EST术,术后3天行LC术;对照组76例患者于腹膜炎控制后行LC+LCBDE术。比较两组患者术前血淀粉酶、手术时间、术中出血量、术后肛门排气时间、总住院时间、总住院费用和术后并发症总发生率。结果观察组与对照组患者的手术总时间分别为(95.0±7.0)min、(125.0±18.0)min,对照组明显延长(P〈0.05);总住院费用分别为(39515.0±4135.0)元、(28287.0±2254.0)元,观察组明显增多(P〈0.05);术后并发症分别为5例(6.1%)、10例(13.2%),对照组明显增多(P〈0.05)。两组患者术前血淀粉酶水平分别为(97.6±48.5)IU/L、(131.4±68.7)IU/L;术中出血量分别为(35.7±8.5)ml、(31.8±7.3)ml;术后肛门排气时间分别为(1.7±0.5)d、(1.9±0.4)d,总住院时间分别为(16.3±2.8)d、(15.2±3.7)d,差异均无统计学意义(均P〉0.05)。结论EST术后3天行LC术治疗老年性胆囊并胆总管结石患者是有效、安全的,具有创伤小、手术时间短、恢复快、并发症少等优点,是值得推广的临床治疗老年性患者胆囊并胆总管结石的手术方式。 展开更多
关键词 内镜括约肌切开取石术 腹腔镜胆囊切除术 胆囊结石 胆总管结石 疗效
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一种人内皮素受体B受体-配体结合检测体系的建立
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作者 时丽丽 潘晓菲 +2 位作者 谭初兵 刘亚晋 徐为人 《药物生物技术》 CAS 2014年第3期189-193,共5页
为寻找ETBR特异性激动剂/拮抗剂,需建立一种灵敏度高、操作简单的受体-配体结合检测体系。从人肺腺癌细胞系A549中克隆人ETBR基因,将其连接至pTag-liteTM-SNAP质粒内,成功构建真核表达载体pTagliteTM-SNAP-ETBR,并将其转染至CHO-K1细胞... 为寻找ETBR特异性激动剂/拮抗剂,需建立一种灵敏度高、操作简单的受体-配体结合检测体系。从人肺腺癌细胞系A549中克隆人ETBR基因,将其连接至pTag-liteTM-SNAP质粒内,成功构建真核表达载体pTagliteTM-SNAP-ETBR,并将其转染至CHO-K1细胞内,加入SNAP-tag荧光底物后,通过荧光显微镜检测发现SNAPETBR融合蛋白在细胞中有效表达,使得运用Tag-lite技术进行受体-配体结合检测并发现ETBR激动剂/拮抗剂得以实现,为后期研究奠定基础。 展开更多
关键词 内皮素受体B 内皮素受体A pTag-liteTM-SNAP载体 SNAP-tag荧光底物 cho-
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人CD123稳定表达细胞株的建立与鉴定
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作者 杨漾 黄亮 +1 位作者 王娜 周剑峰 《中华全科医学》 2011年第5期667-669,F0003,共4页
目的探索建立人CD123稳定表达细胞株的方法,为进一步实现人CD123的抗体规模化生产提供材料。方法构建人CD123 CDS区真核表达载体(hCD123 CDS-pEGFP-N1);经脂质体包裹转染中国仓鼠卵巢细胞CHO-S;经流式分选结合G418筛选,并用流式细胞术和... 目的探索建立人CD123稳定表达细胞株的方法,为进一步实现人CD123的抗体规模化生产提供材料。方法构建人CD123 CDS区真核表达载体(hCD123 CDS-pEGFP-N1);经脂质体包裹转染中国仓鼠卵巢细胞CHO-S;经流式分选结合G418筛选,并用流式细胞术和Western印迹法检测人CD123蛋白的表达情况,初步筛选出人CD123高表达的CHO-S细胞株;并进一步用经人CD123 Fc重组融合蛋白免疫的小鼠血清检测该细胞株hCD123表达情况。结果测序及GenBank中序列比较结果显示扩增到的人CD123基因序列是正确的,酶切结果表明表达质粒构建正确;流式分选结合G418筛选得到1个人CD123高表达的细胞株——克隆8G9 CHO-S,其CD123-APC阳性细胞百分数为92.07%,用融合蛋白免疫的血清检测各细胞株人CD123表达情况,结果显示克隆8G9 CHO-S细胞和对照CHO-S细胞的CD123阳性率分别为(97.94±1.93)%和(2.84±1.35)%,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论建立了人CD123抗原稳定高表达的细胞株克隆8G9 CHO-S,为进一步实现人CD123的抗体规模化生产及其导向治疗奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 人CD123 稳定表达 cho-S细胞株 细胞筛选
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HSV-IgM人-鼠嵌合抗体制备及稳定细胞株构建工艺开发 被引量:1
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作者 崔亚敏 田晓平 +3 位作者 孙静静 王志强 赵巧辉 李桂林 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期3887-3898,共12页
为实现体外大规模制备单纯疱疹病毒HSV-IgM(HSV1,HSV2)人鼠嵌合抗体,本研究通过RNA连接酶介导的cDNA末端快速扩增(RNA ligase-mediated rapid amplification of cDNA ends,RLM-RACE)技术获取其对应杂交瘤细胞基因序列,构建嵌合抗体至真... 为实现体外大规模制备单纯疱疹病毒HSV-IgM(HSV1,HSV2)人鼠嵌合抗体,本研究通过RNA连接酶介导的cDNA末端快速扩增(RNA ligase-mediated rapid amplification of cDNA ends,RLM-RACE)技术获取其对应杂交瘤细胞基因序列,构建嵌合抗体至真核表达载体,在CHO-S细胞中稳定表达所需目的蛋白。同时优化稳定细胞株筛选工艺,对细胞池构建阶段和单克隆筛选阶段的加压条件进行摸索与探究,最后目的抗体采用蛋白L亲和纯化法进行纯化并进行生物活性检测;最终成功制备899 kDa和909 kDa的稳定高表达重组IgM抗体(HSV1,HSV2)细胞株。结果表明,最适筛选压力为20P200M(一轮加压)和50P1000M(二轮加压);使用加压培养基进行单克隆筛选抗体表达量较高,HSV1-IgM和HSV2-IgM单克隆最终表达量分别为1620 mg/L和623 mg/L。本研究为HSV1和HSV2的IgM系列重组抗体质控品开发以及体外高表达分泌IgM亚型抗体提供理论与实践基础。 展开更多
关键词 人鼠嵌合IgM抗体 cho-S细胞 构建工艺 表达
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杆状病毒GP64蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:1
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作者 王妍 王娟 +6 位作者 邓跃 张超林 苏晓蕊 王同燕 李向东 谭菲菲 田克恭 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期576-581,共6页
为研究杆状病毒GP64蛋白在感染宿主过程中的表达情况,通过克隆构建含GP64基因的重组质粒,在CHO-S细胞表达重组GP64蛋白,利用野生型杆状病毒免疫BALB/c小鼠血清,筛选出重组GP64蛋白的单克隆抗体。结果表明,构建出正确的GP64重组质粒,成... 为研究杆状病毒GP64蛋白在感染宿主过程中的表达情况,通过克隆构建含GP64基因的重组质粒,在CHO-S细胞表达重组GP64蛋白,利用野生型杆状病毒免疫BALB/c小鼠血清,筛选出重组GP64蛋白的单克隆抗体。结果表明,构建出正确的GP64重组质粒,成功表达出GP64蛋白,筛选出1株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞5B1;单克隆抗体亚类鉴定结果显示,单抗亚类为IgG2b,轻链类型为κappa;IFA和Western-blot结果显示筛选出的GP64单克隆抗体可以与杆状病毒及GP64蛋白发生特异性结合。结论,GP64蛋白的单克隆抗体制备成功。 展开更多
关键词 杆状病毒 GP64蛋白 cho-S细胞 单克隆抗体
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阻断剂单克隆抗体制备及表达工艺优化
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作者 崔亚敏 李昕益 +5 位作者 田晓平 孙静静 宋子博 周雷鸣 赵巧辉 李桂林 《生物技术》 CAS 2023年第5期551-557,共7页
[目的]体外制备阻断剂单克隆抗体,并对表达工艺进行优化。[方法]通过RLM-RACE技术钓取杂交瘤细胞抗体基因序列,经分子克隆构建至真核表达载体pCHO1.0,在CHO-S细胞中构建稳定表达细胞株;运用DOE实验设计方法,筛选最佳培养基、培养温度及... [目的]体外制备阻断剂单克隆抗体,并对表达工艺进行优化。[方法]通过RLM-RACE技术钓取杂交瘤细胞抗体基因序列,经分子克隆构建至真核表达载体pCHO1.0,在CHO-S细胞中构建稳定表达细胞株;运用DOE实验设计方法,筛选最佳培养基、培养温度及补料方式;在5 L生物反应器进行工艺验证,蛋白A亲和纯化后用化学发光法进行阻断性能验证。[结果]目的基因序列钓取成功,稳定表达单克隆细胞株11H7表达量为2.90 g/L;使用CHO Max A培养基、梯度补料策略、32℃培养可将表达量提升至5.28 g/L,5 L生物反应器表达量为5.47 g/L,纯度均>95%,且在磁微粒G17和ProGRP项目异常样本中检测满足阻断性能需求。[结论]阻断剂单克隆抗体构建成功,通过表达工艺优化,表达量由2.90 g/L提升至5.28 g/L,且在生物反应器中得到初步验证。 展开更多
关键词 阻断剂单克隆抗体 cho-S细胞 稳定细胞株 DOE实验设计 生物反应器
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