植物抗旱和耐重金属基因工程研究进展

干旱和重金属污染严重影响植物的生长发育.植物耐逆相关基因的克隆和功能鉴定研究,为通过基因工程途径提高植物的抗逆性奠定了理论基础.水分亏缺、高盐、低温和重金属胁迫都能诱导LEA(late embryogenesis abundant protein)基因的表达.转基因研究表明,LEA蛋白具有抗旱保护作用、离子结合特性以及抗氧化活性;水孔蛋白存在于细胞膜和液泡膜上,在细胞乃至整个植物体水分吸收和运输过程中发挥重要作用.干旱和盐胁迫促进水孔蛋白基因转录物的积累.过量表达水孔蛋白可增强水分吸收和运输,提高植物的抗旱能力.金属转运蛋白参与重金属离子的吸收、运输和累积等过程.这些蛋白基因在改良草坪草植物的抗旱节水和耐重金属能力等方面具有潜在的应用价值.

鲍曼不动杆菌多重耐药与胞膜主动外排作用关系的研究

目的观察外排泵抑制剂对多重耐药不动杆菌耐药水平的降低作用,并扩增外排泵蛋白编码基因,以探讨不动杆菌多重耐药与细胞膜主动外排作用的关系。方法用琼脂稀释法测定30株鲍曼不动杆菌对环丙沙星、四环素、阿米卡星和亚胺培南的最小抑制浓度(MIC)值,并观察在含10μg/ml利血平或25μg/ml羰基氰氯苯腙(CCCP)条件下MIC值的变化。用PCR法扩增外排泵编码基因adeB。结果以环丙沙星、四环素、阿米卡星和亚胺培南作为底物,分别有12、5、6、6株菌在10μg/mlCCCP或含25μg/ml利血平的条件下MIC值降低4倍或4倍以上。6、11、17号菌都同时对3种药物有明显的外排作用。以利血平和CCCP作为抑制剂所得的结果一致。18株菌经PCR扩增得到与目的片段大小一致的阳性片段,经测序证实与GenBank登录号为AF370885的鲍曼不动杆菌RND族药物外排泵编码基因adeB的同源性达99%。该序列已在GenBank登录,登录号为DQ294294。结论主动外排作用是鲍曼不动杆菌多重耐药的重要原因之一。

高效液湘色谱检测高密度脂蛋白转运荷脂巨噬细胞内胆固醇的生物学活性

目的应用U937泡沫细胞模型建立一种新的检测高密度脂蛋白(HDL)外运细胞内胆固醇生物学活性的方法。方法将U937细胞与100μg/mL氧化低密度脂蛋白孵育36h后,分别用不同浓度高密度脂蛋白处理24h,应用高效液相色谱(HPLC)检测细胞内胆固醇和胆固醇酯含量。结果经氧化低密度脂蛋白处理后的U937细胞,HPLC检测细胞内总胆固醇增加,胆固醇酯含量大于胆固醇含量;经高密度脂蛋白处理后,细胞内胆固醇含量减少,不同厂家及不同批次的高密度脂蛋白外运胆固醇的生物学活性有所不同。结论经氧化低密度脂蛋白处理后的U937细胞可以作为检测高密度脂蛋白外运胆固醇生物学活性的方法。

苦瓜蛋白MD28对Caco-2细胞胆固醇排出及ABCG5和ABCG8表达的影响

目的探讨苦瓜蛋白MD28对Caco-2细胞胆固醇排出及其相关基因ABCG5和ABCG8表达的影响,明确苦瓜蛋白MD28的降胆固醇机制。方法Caco-2细胞分为四组:Caco-2细胞对照组、Caco-2细胞模型组、Caco-2细胞模型+苦瓜蛋白MD28处理组和Caco-2细胞+苦瓜蛋白MD28处理组。加相应的处理因素处理后,高效液相色谱法测量细胞内胆固醇含量,油红O染色观察细胞内脂滴,逆转录聚合酶链反应和Western blotting分别检测细胞中ABCG5和ABCG8的mRNA和蛋白表达。结果高效液相色谱测定结果显示,与Caco-2细胞模型组比较,苦瓜蛋白MD28处理的细胞中胆固醇含量明显降低(P<0.05或P<0.01)。油红O染色显示,加苦瓜蛋白MD28处理组脂质沉积均相应低于没有加苦瓜蛋白MD28处理组。Caco-2细胞模型组ABCG5和ABCG8的mRNA和蛋白水平均有轻微上调,但与Caco-2细胞对照组比较无显著性差异,而经苦瓜蛋白MD28处理后,ABCG5和ABCG8明显上调(P<0.01),且与Caco-2细胞模型组比较差异显著(P<0.05)。结论苦瓜蛋白MD28能够显著上调人结肠腺癌细胞Caco-2中ABCG5和ABCG8的表达,其降低胞内胆固醇作用与增强胞内胆固醇的排出有关。

核因子κB活化与THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达的关系

目的:探讨核因子κB活化对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1(ABCA1)基因表达的影响。方法:体外培养THP-1细胞并构建泡沫细胞模型,使用肿瘤坏死因子α(TNF-α)和NF-κB活化抑制剂对甲苯磺酰-L-苯丙氨酸甲基甲酮(N--αtosyl-L-phenylalan ine chlorom ethy ketone,TPCK)孵育细胞,以RT-PCR法和W estern b lot法测定THP-1源性泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达情况,借助Sandw ich ELISA法观察核因子κB活化/核易位情况。结果:TNF-α可即刻激活NF-κB,并导致干预24小时后泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达下调;若预先用TPCK孵育,则TPCK可抑制TNF-α对NF-κB的激活,且24小时后泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达下调幅度减小;TPCK延迟孵育则对TNF-α的效应抑制不显著。结论:炎症因子TNF-α可即刻激活NF-κB信号途径,早期活化的NF-κB可阻遏THP-1源泡沫细胞ABCA1基因和蛋白的表达,影响泡沫细胞内胆固醇的流出。

气固多相双通道同轴射流湍流场的数值模拟(1)

以气体湍流运动方程组、ｋε双方程湍流模型及颗粒群运动的轨道模型为基础，气体湍流场的计算采用ＳＩＭＰＬＥ数值计算方法，颗粒群的运动方程采用ＲｕｎｇｅＫｕｔａ方法求解，开发研制出相应的通用计算软件，可以理论模拟预测工程气固流动中的气体湍流场的速度分布、颗粒运动速度场及颗粒的空间运动轨迹等。

气固多相双通道同轴射流湍流场的数值模拟(2)

运用气固多相流数值模拟软件对双通道同轴气固射流湍流场进行了数值模拟研究，预测结果与ＬＤＶ激光测速仪测得的固体颗粒速度分布值进行了比较，结果表明，吻合较好，该软件为气固多相流工程设备的快速、经济的开发研究提供了相应的辅助工具，同时，也是理论研究气固多相化学反应流的基础。

射流元件平面喷嘴结构优化试验研究

液动式射流冲击器因其独特的优点,在石油、科学勘探等钻井中具有广泛的应用前景。其核心部件射流元件平面喷嘴结构好坏直接影响射流的能量利用率,因此在设计射流元件时,有必要设计出高效结构的喷嘴,以减少能量损失。本次试验中设计有"Y"形、椭圆形、双圆弧形、流线形、等变速形五种类型喷嘴,且在室内进行了试验。试验结果表明:流线形喷嘴的流量系数最大,而目前大量采用的"Y"形进口喷嘴流量系数几乎最小。建议在以后设计射流元件时采用流线形进口喷嘴,以使设计出的喷嘴能提高过流能力,从而提高冲击器的性能。

苦楝子中有效成分的提取分离及促进胆固醇流出作用研究

目的提取、分离苦楝子中的有效成分,并确定其促进胆固醇流出作用。方法依据中草药煎剂及天然药物化学的有关方法,用有机溶剂对苦楝子进行分离;观察提取分离后得到的各组分对氧化型低密度脂蛋白诱导的RAW264.7荷脂细胞的胆固醇流出的影响程度,将其作为筛选活性组分的指标,确定其降低细胞内胆固醇活性组分。结果水和乙醇作为溶剂提取,经丙酮沉淀得到的物质为降细胞内胆固醇的活性组分,其分离得到的组分B降细胞内胆固醇作用极显著。结论苦楝子中含有天然降细胞内胆固醇活性成分。

低HDL-C者外周血白细胞胆固醇流出调节基因表达及相关研究

目的 研究低HDL-C患者外周血白细胞ABCA1和ABCG1 mRNA的表达状态.方法 采用实时荧光定量PCR方法,测定外周血白细胞ABCA1和ABCG1 mRNA表达水平.结果 低HDL-C患者ABCA1表达水平较对照组显著降低（0.23±0.09比1.18±0.49,P=0.042）,ABCG1 mRNA表达差异无统计学意义（3.09±1.08比3.94±1.48,P=0.355）;低HDL-C者高敏CRP（hs-CR P）水平明显高于对照组（2.34±1.68比1.15±0.48,P=0.008）;血清hsCRP水平与ABCA1 mRNA表达呈负相关（r=-0.330,P=0.043）,与血清HDL-C水平无相关性（r=0.19,P=0.254）.多因素线性回归分析表明,ABCA1mRNA表达水平与血清hs-CRP水平呈边缘性相关（β=-0.330,P=0.079）.结论 低HDL-C患者外周血ABCA1 mRNA表达水平降低,炎症因素或许是其机制之一.这可能是低HDL-C者心血管病风险增高的一个因素.